Artikulo
Pagsusuri ng reduksiyon ng methylene blue sa gatas: prinsipyo at mga limitasyon
Itinaas ng isang estudyante ang dalawang tubong may gatas. Pumuti ang isa sa loob ng isang oras. Nanatiling asul ang isa sa loob ng limang oras. Itinuro niya ang asul at sinabing ligtas itong inumin.
Ipinapakita ng konklusyong iyon ang maling pagkaunawa sa pagsusuri. Hindi natutukoy ng pagsusuri ng gatas gamit ang methylene blue kung ligtas ito. Ipinapakita nito kung gaano kabilis pinabababa ng populasyon ng mikrobyo sa tubong iyon ang potensiyal na redox sa ilalim ng mga itinakdang kondisyon. Ang mabagal na resulta ay nangangahulugan ng mababang pangkalahatang aktibidad ng metabolismo sa sample. Wala itong sinasabi tungkol sa kung aling mga organismo ang naroon, kung may patoheno sa mga ito, o kung tama ang pagkakapasteurisa sa gatas.
Mahalaga ang pagkakaibang ito dahil mukhang kapani-paniwala ang pagsusuri. Nawawala ang asul na kulay. Nagbibigay ng numero ang orasan. Madaling bigyan ng labis na kahulugan ang mga numero. Pinananatili ng artikulong ito ang kapaki-pakinabang na interpretasyon at nililinaw kung alin ang hindi ligtas na interpretasyon.
Ano talaga ang sinusukat ng reduksiyon
Asul ang methylene blue kapag naoksida at halos walang kulay kapag sumailalim sa reduksiyon at naging leucomethylene blue. May natunaw na oksiheno ang sariwang gatas, na nagpapanatiling asul sa tina. Kinokonsumo ng mga bakteryang nagsasagawa ng respirasyon at permentasyon ang oksihenong iyon at naglalabas ng mga tambalang nagdudulot ng reduksiyon. Kapag sapat na ang ibinaba ng potensiyal na redox, tumatanggap ng mga elektron ang tina at nawawala ang kulay nito. Inilalarawan ng teksto sa mikrobyolohiya ng gatas ng University of Guelph ang parehong pagkakasunod-sunod: pag-alis ng oksiheno, kasunod ang pagbuo ng mga sangkap na nagdudulot ng reduksiyon habang nagaganap ang metabolismo ng bakterya.
Inilalarawan ito ng klasikong pag-aaral sa Journal of Dairy Science bilang prosesong may dalawang yugto: inuubos muna ng flora ang oksiheno, saka mabilis na sumasailalim sa reduksiyon ang tina dahil sa mga sangkap ng gatas. Kaya pinakamainam na unawain ang pagsusuri ng reduksiyon ng methylene blue sa gatas bilang pagsusuri sa pinagsamang aktibidad ng metabolismo, hindi bilang tagabilang ng selula. Ipinapaliwanag ng pag-uugali ng methylene blue sa redox ang kimika sa likod ng pagbabagong iyon.
Binabaligtad ng oksiheno ang huling pagbabago ng kulay. Muling nao-oksida at nagiging asul ang tina sa anyong leuco kapag nalantad sa hangin. Kaya naaantala ang resulta dahil sa pag-alog, pagbuhos, malalapad na tubo, at malaking puwang na may hangin sa ibabaw ng likido. Madalas na nananatili ang manipis na asul na singsing sa ibabaw na nakadikit sa hangin matapos mawala ang kulay sa pangunahing laman ng tubo. Tinatanggap ng mga pamantayang pamamaraan ang singsing na iyon sa halip na hintaying mawala ito.
Nagdaragdag ng isa pang paglihis sa resulta ang uri ng organismo. Mabilis magdulot ng reduksiyon ng tina ang mga coliform at maraming organismong gumagawa ng asidong laktiko. Mabagal naman o halos hindi ito nagagawa ng maraming organismong psychrotroph at thermoduric. Maaaring mawala ang asul na kulay sa dalawang sample ng gatas na may parehong bilang sa plate nang may pagitan na ilang oras. Sapat na ang katotohanang iyon upang hindi direktang gawing bilang ng colony ang oras.
Isang kontroladong pamamaraan sa laboratoryo
Magkakaiba sa detalye ang mga bersiyon para sa pagsusuri sa labas ng laboratoryo at sa mga aklat-aralin, kaya may bisa lamang ang resulta sa loob ng pamamaraang ginamit upang makuha ito. Ganito ang isang karaniwang bersiyon sa laboratoryo ng pagkain:
- Kumuha ng hilaw na gatas nang may pinakamaliit na posibleng paghalo ng hangin at palamigin agad ito. Haluin sa pamamagitan ng marahang pagbaligtad bago kumuha ng sample.
- Maglagay ng 10 mL na gatas sa isang isterilisadong tubo kasama ang 1 mL na solusyon ng tina para sa pagsusuri. Isang malawakang ginagamit na konsentrasyon ang 0.005 porsiyentong tina, na may proporsiyong 10 sa 1 ng gatas at tina.
- Takpan ang tubo gamit ang pantakip, marahang baligtarin nang dalawang beses, at ilagay sa paliguang tubig sa loob ng ilang minuto. Karaniwang ginagawa ang inkubasyon sa 35 hanggang 38 degrees Celsius depende sa tinukoy na pamantayan. Itala kung aling pamantayan ang sinusunod.
- Protektahan ang mga tubo mula sa liwanag habang iniinkuba, dahil pinabibilis ng liwanag ang reduksiyon.
- Basahin ang resulta sa 30 minuto, pagkatapos ay sa mga takdang pagitan. Ang puntong pagtatapusan ay ang oras kung kailan tumutugma ang kulay ng tubo sa pinakuluang gatas na sanggunian o umabot sa pagkawala ng kulay na itinakda ng pamamaraan.
- Magtabi ng tubong may parehong gatas na hindi nilagyan ng tina bilang biswal na kontrol kung hinihingi ito ng pamamaraan.
Nagbibigay ang manwal ng FAO sa pagsusuri ng gatas ng malinaw na bersiyon para sa pagsusuri sa labas ng laboratoryo: 10 mL na gatas kasama ang 1 mL na tina, pagtakip, marahang pagbaligtad, inkubasyon sa humigit-kumulang 37 hanggang 38 degrees, at pagbasa bawat 30 minuto. Gumagamit ang mga tubong kontrol nito ng pinakuluang gatas upang sirain ang likas na sistemang nagdudulot ng reduksiyon at magsilbing batayan ng paghahambing ng kulay.
Ipinapakita ng eskema sa itaas ang mga kondisyong kailangang kontrolado. Parehong dami, parehong tina, parehong temperatura, parehong paghahalo, parehong proteksiyon mula sa liwanag, at parehong tuntunin sa puntong pagtatapusan. Kapag binago ang alinman, nagbabago rin ang oras. Kaya hindi maihahambing sa mga grado sa laboratoryo ang mga bersiyon sa bahay na gumagamit ng basta piniling konsentrasyon ng tina.
Ano ang ipinahihiwatig ng oras ng reduksiyon
Ang mas mahabang oras ay nangangahulugan ng mas mababang pangkalahatang aktibidad sa ilalim ng mga nakasaad na kondisyon. Ang mas maikling oras ay nangangahulugan ng mas mataas na pangkalahatang aktibidad. Nag-uugnay ang mga talahanayan sa pagtuturo tungkol sa gatas ng mga tinatayang grado sa mga oras na iyon, halimbawa, napakahusay para sa 5 o higit pang oras at mahina para sa wala pang 30 minuto sa isang sistema ng pag-uuri na hango sa BIS.
Ang pagkakaiba-iba ang mahalagang aral. Walang unibersal na grado ang resultang 5 oras. Nakaugnay ito sa pamamaraang nagtakda ng kahulugan nito. Kaya ang format ng ulat na may sapat na batayan ay:
Ang MBRT ay X oras sa ilalim ng tinukoy na pamamaraan, na tumutugma sa grado ng pamamaraang iyon.
Hindi ito kailanman nangangahulugang ang MBRT ay X yunit na bumubuo ng colony bawat mL. Nakasaad sa gabay na hango sa Standard Methods na hindi dapat iulat ang mga resulta ng reduksiyon ng tina bilang bilang ng bakterya. Ibang tanong din ang sinasagot ng simpleng pamamaraan ng paglamlam gamit ang methylene blue, dahil ipinapakita nito ang hugis ng selula sa mikroskopyo sa halip na ang pangkalahatang aktibidad sa isang tubo.
Talahanayan ng interpretasyon at mga limitasyon
Ang talahanayang ito ang orihinal na sanggunian para sa artikulo. Basahin ang buong hanay mula kaliwa pakanan. Walang isang selda na dapat unawain nang hiwalay.
| Obserbasyon o pahayag | Ano ang ipinahihiwatig nito | Ano ang hindi nito mapatutunayan | Pangunahing mga salik na nakaaapekto sa resulta |
|---|---|---|---|
| Mabilis na pagkawala ng asul, wala pang 2 oras sa isang sistema para sa hilaw na gatas | Mataas na aktibidad ng reduksiyon, na naaayon sa maraming mikrobyo o mababang kakayahang manatiling maayos habang nakaimbak | Uri ng organismo, eksaktong bilang, mga lason, o kabiguan ng pasteurisasyon | Mainit na pag-iimbak, flora na maraming coliform, liwanag, mababang dami ng tina |
| Katamtamang oras, 2 hanggang 4 oras | Katamtamang aktibidad; may bisa lamang ang grado sa loob ng tinukoy na sistema | Kaligtasan o kawalan ng mga organismong mabagal magdulot ng reduksiyon | Mataas na temperatura ng inkubasyon, pagkakaiba sa paghalo ng hangin, paghihiwalay ng taba |
| Mabagal na reduksiyon, 5 o higit pang oras | Mababang pangkalahatang aktibidad sa sistemang iyon | Kawalan ng mga patoheno, pasteurisasyon, o kaligtasan mula sa mga kemikal | Mga nalalabing antibiyotiko, mga preserbatibo, dagdag na natunaw na oksiheno, mataas na dami ng tina |
| Nananatili ang asul na singsing sa ibabaw habang nawawala ang kulay sa pangunahing laman | Muling oksidasyon sa hangganan ng hangin at likido, isang normal na epekto sa gilid | Nabigong pagsusuri o hindi kumpletong reaksiyon | Malapad na tubo, maluwag na pantakip, paulit-ulit na pagbubukas para sa inspeksiyon |
| Puting tubo matapos ang inkubasyon ng pinainit na gatas | Nabagong sistemang nagdudulot ng reduksiyon kasama ang aktibidad ng mga nakaligtas na organismo | Na ang pag-init ay katumbas ng pasteurisasyong napatunayang mabisa | Pinsalang dulot ng init, pag-aayos ng pinsala habang iniinkuba, kontaminasyon pagkaraan |
| Anumang iisang halaga ng MBRT na binanggit nang walang pamamaraan | Hindi alam ang mga kondisyon ng pagsusuri | Anumang grado o bilang | Hindi naiulat ang pormulasyon ng tina, proporsiyon, temperatura, paghahalo, at tuntunin sa puntong pagtatapusan |
Nananatiling paraan para sa pagbibilang at paghihiwalay ng mga organismo ang mga pagsusuring batay sa paglago, gaya ng paggamit ng mga medyum para sa pagpapalago ng bakterya. Para sa paunang pagsusuri ang tubong pangreduksiyon. Sa plate ginagawa ang pagtukoy at pagbibilang.
Ano ang hindi mapatutunayan ng pagsusuri tungkol sa kaligtasan
Hindi mapatutunayan ng mabagal na resulta na walang mga patoheno. Ang isang patohenong naroroon sa daming may klinikal na kahalagahan ay maaaring maliit lamang ang ambag sa pangkalahatang pagkonsumo ng oksiheno. Nangangailangan ang pagtukoy ng patoheno ng mga pamamaraang partikular sa organismo, na itinuturing ng kasalukuyang Standard Methods na hiwalay na larangan sa pangkalahatang paunang pagsusuri ng kalidad.
Hindi nito mabeberipika ang pasteurisasyon. Gumagamit ang beripikasyon ng paggamot gamit ang init ng pagsusuri ng alkaline phosphatase o ibang pamamaraang napatunayang mabisa alinsunod sa gabay ng Codex sa kalinisan ng mga produktong gatas. Walang sinasabi ang puti o asul na tubo tungkol sa tagal at temperatura na pinagdaanan ng pangkat ng gatas.
Hindi nito mapatutunayang ligtas ang pagkain. Nakadepende ang kaligtasan sa mga patoheno, mga lasong nabuo na, mga nalalabing gamot, mga kontaminanteng kemikal, kasaysayan ng pagpapanatiling malamig, at kontaminasyon matapos ang pagkuha ng sample. Itinuturing ng Codex ang kaligtasan ng mga produktong gatas bilang magkakaugnay na mga hakbang sa pagkontrol sa halip na isang resulta ng paunang pagsusuri.
Iba ang konteksto ng laboratoryo ng pagkain sa pagsusuri sa bahay
Sa isang laboratoryo ng gatas, ginagamit ang pagsusuri upang paunang suriin ang tinatanggap na gatas, ihambing ang mga tagapagtustos sa paglipas ng panahon, o ituro ang mikrobyolohiyang redox sa ilalim ng pangangasiwa. Natutunton ang pinagmulan ng mga sample. Nakaayon sa pamantayan ang mga reagent. Naitatala ang mga temperatura. Dinadala ang basura sa sistema ng pagtatapon ng laboratoryo.
Wala ng mga ito sa pagsusuri sa bahay. Tinatantiya lamang ang mga dami sa kusina. Malaki ang pagkakaiba-iba ng konsentrasyon ng mga tinang ibinebenta online. Madalas na nasa mainit na silid ang inkubasyon sa halip na sa isang kalibradong paliguang tubig. Nagbabago pa rin ang kulay, kaya tila maaasahan ang resulta kahit wala ang lahat ng kontrol na nagbibigay rito ng kahulugan.
Mas seryoso ang panganib na kaugnay ng kilos ng tao. Maaaring mahikayat ng asul na tubo sa bahay ang pag-inom ng hilaw na gatas na ipapadala pa rin ng laboratoryo para sa pagbibilang sa plate, pagsusuri ng mga patoheno, at pagsusuri ng mga nalalabing sangkap. Dinisenyo ang pagsusuri ng gatas gamit ang methylene blue upang uriin ang kalidad ng hilaw na gatas sa pagtanggap nito, hindi upang pahintulutan ang pag-inom ng gatas. Pareho ang limitasyon ng mas mabilis na paunang pagsusuri gamit ang resazurin: mas mabilis ang pagbasa ng kulay, ngunit wala pa ring sagot tungkol sa mga patoheno.
Isang maikling tuntunin para sa mesa ng laboratoryo
Gawing pare-pareho ang tina, proporsiyon, temperatura, paghahalo, liwanag, at puntong pagtatapusan. Iulat ang oras kasama ang pangalan ng pamamaraan at grado. Unawain ang mga minuto kasabay ng kasaysayan ng pag-iimbak, uri ng flora, mga nalalabing sangkap, at kalidad ng pagkuha ng sample. Ang maikling oras ay nagpapahiwatig ng aktibidad na dapat siyasatin. Ang mahabang oras ay hindi kailanman nagpapatunay ng kaligtasan.