వ్యాసం
ఆసిడ్-ఫాస్ట్ కౌంటర్‌స్టెయిన్‌గా మిథిలీన్ బ్లూను ఎందుకు ఉపయోగిస్తారు
పూర్తి రంజన ప్రక్రియ తర్వాత ఒక సాంకేతిక నిపుణుడు కఫం స్మియర్‌ను పరిశీలిస్తాడు. నీలి నేపథ్యంలో ఎర్రటి దండాకార కణాలు స్పష్టంగా కనిపిస్తాయి; ఆసిడ్-ఫాస్ట్ బాసిల్లై కనిపించాయని నివేదిక పంపిస్తాడు. మరుసటి రోజు మరో స్లైడ్‌లో ఎర్రటి దండాకార కణాలు లేకుండా అంతటా ఒకేలా నీలి నేపథ్యం కనిపిస్తుంది; దాన్ని క్షయవ్యాధికి నెగటివ్‌గా నివేదిస్తాడు. ఈ రెండు నివేదికల్లో ఒకటి స్లైడ్ ఆధారంగా చెప్పగలిగిన దానికంటే ఎక్కువగా చెబుతోంది. అది మొదటి నివేదిక కాదు.
ఈ గందరగోళం అవగాహనలో ఉంది. మిథిలీన్ బ్లూ మైకోబ్యాక్టీరియాను కనుగొనడంలో సహాయపడుతున్నట్లుగా, నీలి రంగును గుర్తింపు ప్రక్రియలోని రసాయన చర్యలో భాగంగా ఆ సాంకేతిక నిపుణుడు భావించాడు. అది అలా సహాయపడలేదు. మిథిలీన్ బ్లూ స్లైడ్‌ను తాకే సమయానికి పరీక్ష ఇప్పటికే ముగిసిపోయింది. ఫలితం చదవగలిగేలా నేపథ్యానికి రంగు వేయడం మాత్రమే ఈ రంగు పదార్థం చేసే పని. ఆసిడ్-ఫాస్ట్ రంజనంలో మిథిలీన్ బ్లూ ప్రయోజనం ఏమిటో, మరే రంగుకు బదులుగా నీలాన్నే ఎందుకు ఉపయోగిస్తారో, నీలి నేపథ్యంపై ఎరుపు కనిపించినప్పుడు ఏ నిర్ధారణలకు రావచ్చో ఈ వ్యాసం వివరిస్తుంది.
సంక్షిప్త సమాధానం
ఆసిడ్-ఫాస్ట్ రంజనం మూడు భావనలపై ఆధారపడిన భేదీకరణ పరీక్ష. ప్రాథమిక రంగు పదార్థమైన కార్బాల్ ఫ్యూషిన్‌ను మైనపు స్వభావం ఉన్న మైకోబ్యాక్టీరియాతో సహా ప్రతి కణంలోకి బలవంతంగా ప్రవేశపెడతారు. రంగును తొలగించే ఆసిడ్-ఆల్కహాల్ సాధారణ కణాల నుంచి ఎర్రటి రంగును తొలగిస్తుంది, కానీ ఆసిడ్-ఫాస్ట్ కణాల నుంచి దాన్ని వెలికితీయలేకపోతుంది. ఆ తర్వాత కౌంటర్‌స్టెయిన్ అయిన మిథిలీన్ బ్లూ, రంగు తొలగిపోయిన అన్నింటికీ రంగు వేస్తుంది. అందువల్ల ఆసిడ్-ఫాస్ట్ కాని కణాలు, ఆతిథేయ కణాలు, అవశేషాలు నీలంగా కనిపిస్తాయి; ఆసిడ్-ఫాస్ట్ బాసిల్లై మాత్రం ఎర్రగా ఉంటాయి. కౌంటర్‌స్టెయిన్ రంగుల వ్యత్యాసాన్ని కల్పిస్తుంది. ఒక కణానికి ఆసిడ్-ఫాస్ట్ లక్షణాన్ని కలిగించే రసాయన స్వభావంలో దానికి ఎలాంటి పాత్ర లేదు.
ప్రతి దశ చేసే పని
కింద ఉన్న రేఖాచిత్రం పనుల విభజనను చూపిస్తుంది. ప్రక్రియను అర్థం చేసుకోవడానికి దాన్ని ఎడమ నుంచి కుడికి చదవండి. ప్రతి రంజన విధాన సమూహం వేర్వేరు ప్రశ్నలకు సమాధానం ఇస్తుందని గుర్తుచేసుకోవడానికి కింద ఉన్న పట్టీని చదవండి.
మొదట రంగు లోపలికి ప్రవేశించాలి. మైకోబ్యాక్టీరియా ఆవరణకు అసాధారణంగా ఎక్కువ జలవికర్షక స్వభావం ఉండటం వల్ల అవి సాధారణ జలీయ రంగు పదార్థాల ప్రవేశాన్ని నిరోధిస్తాయి. అందుకే విధానం రంగును బలవంతంగా లోపలికి ప్రవేశపెడుతుంది. జీల్-నీల్సెన్ పద్ధతిలో, ఆవిరి వచ్చేలా వేడి చేయడం ద్వారా ఫీనాల్ ఉన్న కార్బాల్ ఫ్యూషిన్‌ను మైనపు స్వభావం ఉన్న గోడ గుండా లోపలికి పంపిస్తారు. కిన్యౌన్ శీతల పద్ధతిలో వేడికి బదులుగా చాలా ఎక్కువ గాఢత కలిగిన ప్రాథమిక రంగు మిశ్రమాన్ని ఉపయోగిస్తారు; వేడి అవసరం లేని కొన్ని సవరించిన పద్ధతుల్లో సర్ఫాక్టెంట్లను కూడా కలుపుతారు. అమెరికన్ సొసైటీ ఫర్ మైక్రోబయాలజీ ఆసిడ్-ఫాస్ట్ రంజన విధానాలు ఈ రెండు మిశ్రమాలను పక్కపక్కన వివరిస్తాయి. వాటి గాఢతల మధ్య తేడా గణనీయంగా ఉంది: వేడి చేసే పద్ధతిలో ప్రతి 100 mLకు సుమారు 0.3 g బేసిక్ ఫ్యూషిన్ ఉంటే, శీతల పద్ధతిలో సుమారు 4 g ఉంటుంది.
రెండవది భేదీకరణ. సాధారణంగా 97 mL 95 శాతం ఇథనాల్‌లో 3 mL గాఢ హైడ్రోక్లోరిక్ ఆమ్లం కలిపి తయారుచేసే ఆసిడ్-ఆల్కహాల్, గోడలో ప్రత్యేక నిరోధకత లేని ప్రతి కణం నుంచి ఎర్రటి రంగును కడిగి తొలగిస్తుంది. చెక్కుచెదరని మైకోబ్యాక్టీరియల్ లిపిడ్ ఆవరణ ఉన్న కణాలు రంగును నిలుపుకుంటాయి. మొత్తం పద్ధతి ఆధారపడేది ఈ దశపైనే. కింద వివరించినట్లుగా, అనుసరించే పనితీరుకు అత్యంత సున్నితంగా స్పందించే దశ కూడా ఇదే.
చివరిది రంగుల వ్యత్యాసం. ఇప్పుడు స్లైడ్‌పై, రంగు తొలగిపోయిన కణాలతో కూడిన దాదాపు రంగులేని నేపథ్యంలో ఎర్రటి ఆసిడ్-ఫాస్ట్ కణాలు ఉంటాయి. 0.3 శాతం w/v మిథిలీన్ బ్లూ, ఎరుపుకు అత్యంత భిన్నంగా ఉండే రంగుతో ఆ నేపథ్యాన్ని తిరిగి కనిపించేలా చేస్తుంది. కౌంటర్‌స్టెయిన్‌ను కొద్దిసేపే వేస్తారు. సాధారణంగా వేడి చేసే పద్ధతిలో 20 నుంచి 30 సెకన్లు, కొన్ని శీతల పద్ధతి రూపాల్లో కొన్ని నిమిషాల వరకు వేస్తారు. ఈ సమయం అనుసరించే విధానంపై ఆధారపడుతుంది; అది రంగు పదార్థానికి స్వతహాగా ఉన్న లక్షణం కాదు.
ఈ రంగు పదార్థాన్నే ఎందుకు, నీలం రంగే ఎందుకు
మిథిలీన్ బ్లూ ధనావేశిత బేసిక్ రంగు పదార్థం. అంటే దాని రంగు అయాన్‌కు ధనావేశం ఉంటుంది; అది రంగు తొలగించిన బ్యాక్టీరియా, ఆతిథేయ కణాలు, అవశేషాల రుణావేశిత ఉపరితలాలకు బంధిస్తుంది. బేసిక్ రంగు పదార్థాల వెనుక ఉన్న సాధారణ సూత్రంగా ఈ ఆవేశాల సంబంధాన్ని OpenStax సూక్ష్మజీవశాస్త్రం వివరిస్తుంది. అయితే ఇక్కడ మిథిలీన్ బ్లూకు ప్రత్యేకమైన రసాయన స్వభావమేమీ లేదు. క్రిస్టల్ వైలెట్, సాఫ్రనిన్ కూడా బేసిక్ రంగు పదార్థాలే. ఈ ఎంపిక దృశ్యపరమైనది, రసాయనపరమైనది కాదు.
ఎర్రటి దండాకార కణాలకు భిన్నమైన వర్ణంలో నేపథ్యం అవసరం. బ్రైట్-ఫీల్డ్ సూక్ష్మదర్శినిలో ఉపయోగకరమైన వ్యత్యాసాన్ని ఇచ్చే విధంగా నీలం ఎరుపుకు విరుద్ధంగా ఉంటుంది. సాఫ్రనిన్ సరైన కౌంటర్‌స్టెయిన్ కాదు. ఎందుకంటే చివరికి అది ఇచ్చే గులాబీ-ఎరుపు రంగు, కణాల్లో నిలిచిన కార్బాల్ ఫ్యూషిన్ రంగుకు చాలా దగ్గరగా ఉంటుంది. దాంతో ప్రక్రియ సృష్టించిన భేదం కనుమరుగవుతుంది. క్రిస్టల్ వైలెట్ ముదురు ఊదా నేపథ్యాన్ని ఇస్తుంది; సన్నని ఎర్రటి బాసిల్లైతో పాటు అది కూడా దృష్టిని ఆకర్షిస్తుంది. ఈ పని రసాయన చర్య కంటే రంగుల వ్యత్యాసానికి సంబంధించినదని చూపించే బలమైన ఆధారం ప్రత్యామ్నాయ రంగుల వినియోగం: మలకైట్ గ్రీన్, బ్రిలియంట్ గ్రీన్ వంటి ఆకుపచ్చ కౌంటర్‌స్టెయిన్‌లను కొన్ని పశువైద్య, సవరించిన విధానాల్లో ఉపయోగిస్తారు. అయినా పరీక్ష పనిచేస్తుంది, ఎందుకంటే స్పష్టంగా భిన్నమైన ఏ వర్ణమైనా అదే పని చేస్తుంది.
దీని నుంచి రెండు ఆచరణాత్మక విషయాలు తెలుస్తాయి. మొదటిది, ప్రామాణిక తయారీ విధానంలో pH సర్దుబాటును పేర్కొనరు. ఈ సాధారణ జలీయ 0.3 శాతం ద్రావణాన్ని లోఫ్లర్ మిథిలీన్ బ్లూ వంటి క్షార మిశ్రమాలతో గందరగోళం చేయవద్దు. అవి వేరే రంజన భావనకు చెందినవి. రెండవది, అతిగా వేయడం హానికరం. మరీ గాఢమైన నీలి నేపథ్యం కొద్దిగా ఉన్న బాసిల్లైను కప్పివేయవచ్చని కణజాలశాస్త్ర సాహిత్యం ప్రత్యేకంగా హెచ్చరిస్తుంది. అందువల్ల విధానం అనుమతించే సమయానికి మించి స్లైడ్‌పై రంగు ద్రావణాన్ని ఉంచడం వల్ల చదవగలిగే స్పష్టత తగ్గుతుంది తప్ప ప్రయోజనం ఉండదు.
ఈ పరీక్షను సాధ్యం చేసే కణగోడ రసాయన స్వభావం
ఆసిడ్-ఆల్కహాల్ భేదీకరణ చేయగలగడానికి కారణం మైకోబ్యాక్టీరియల్ ఆవరణలో ఉంది. దాని నిర్మాణాత్మక కేంద్రం మైకోలిల్-అరబినోగాలాక్టాన్-పెప్టిడోగ్లైకాన్ సంక్లిష్టం: పెప్టిడోగ్లైకాన్ అరబినోగాలాక్టాన్‌తో అనుసంధానమై ఉంటుంది; అరబినోగాలాక్టాన్ బాహ్య చివరలకు చాలా పొడవైన గొలుసులు ఉన్న మైకోలిక్ ఆమ్లాలు అనుసంధానమై ఉంటాయి. ఇవి లిపిడ్‌లు సమృద్ధిగా ఉండే, అసాధారణంగా తక్కువ పారగమ్యత కలిగిన బాహ్య మైకోమెంబ్రేన్‌ను ఏర్పరుస్తాయి. మైకోబ్యాక్టీరియల్ బాహ్య పొరపై సమీక్ష ఈ నిర్మాణాన్ని వివరంగా వివరిస్తుంది. ఈ అవరోధం రెండు దిశల్లోనూ పనిచేస్తుంది. ఇది రంగు లోపలికి ప్రవేశించడాన్ని నిరోధిస్తుంది. అందుకే ప్రవేశానికి వేడి లేదా ఎక్కువ గాఢత కలిగిన ప్రాథమిక రంగు అవసరం. రంగును బయటకు వెలికితీయడాన్ని కూడా ఇది నిరోధిస్తుంది. అందుకే ఒకసారి లోపలికి వెళ్లిన కార్బాల్ ఫ్యూషిన్‌ను ఆసిడ్-ఆల్కహాల్ తొలగించలేకపోతుంది. సాధారణ బ్యాక్టీరియాలో ఈ ఆవరణ ఉండదు; అందువల్ల అవి రంగును కోల్పోతాయి. కాబట్టి ఆసిడ్-ఫాస్ట్ లక్షణాన్ని, ఫ్యూషిన్ మైకోలిక్ ఆమ్లంతో రసాయనపరంగా బంధించడం కంటే లిపిడ్ అవరోధం వల్ల ఏర్పడే లక్షణంగా అర్థం చేసుకోవడం సరైనది.
ఈ రసాయన స్వభావం ఒక సాధారణ సందేహాన్ని కూడా వివరిస్తుంది: గ్రామ్ పద్ధతిలో మైకోబ్యాక్టీరియాకు రంగు సరిగా పట్టదు, ఫలితం స్థిరంగా ఉండదు. కొన్నిసార్లు అవి లేతగా, పూసల వరుసలాంటి రూపాల్లో లేదా రంగు పట్టని అస్పష్ట ఆకారాలుగా కనిపిస్తాయి. వాటి జలవికర్షక గోడ క్రిస్టల్ వైలెట్ ప్రవేశాన్ని పరిమితం చేస్తుంది. ఆసిడ్-ఫాస్ట్ రంజనం సవరించిన గ్రామ్ రంజనం కాదు. అది వేరొక కణగోడ లక్షణంపై ఆధారపడిన భిన్నమైన భేదీకరణ సూత్రం. మిగతా రెండు పద్ధతుల గురించి సరళ రంజనం, గ్రామ్ రంజనం మధ్య పోలిక చూపించినట్లుగా, వాటి సూత్రాలు వేరు.
మూడు పద్ధతులు, మూడు ప్రశ్నలు
| పద్ధతి | చేసే పరీక్ష | పాజిటివ్ ఫలితంలో కనిపించేది | ఫలితం నిరూపించేది |
|---|---|---|---|
| సరళ రంజనం (ఉదా. మిథిలీన్ బ్లూ మాత్రమే) | ఏదీ లేదు; ఒకే రంగు పదార్థం అన్ని కణాలకు రంగు వేస్తుంది | ఒక నిర్దిష్ట ఆకారం ఉన్న నీలి కణాలు | ఆకృతిశాస్త్ర సమాచారం మాత్రమే: ఆకారం, అమరిక; వర్గీకరణ ఉండదు |
| గ్రామ్ రంజనం | క్రిస్టల్ వైలెట్ అయోడిన్ సంక్లిష్టాన్ని ఆల్కహాల్ లేదా అసిటోన్‌కు గురిచేయడం | ఊదా (పాజిటివ్) లేదా గులాబీ (నెగటివ్) | ద్రావకంతో రంగును వెలికితీసేటప్పుడు ఆవరణ ప్రవర్తన; రెండు కణగోడ రకాలుగా వర్గీకరణ |
| ఆసిడ్-ఫాస్ట్ రంజనం | మైనపు స్వభావం ఉన్న గోడల్లోకి బలవంతంగా ప్రవేశపెట్టిన కార్బాల్ ఫ్యూషిన్‌ను ఆసిడ్-ఆల్కహాల్‌కు గురిచేయడం | ఎరుపు (ఆసిడ్-ఫాస్ట్) లేదా నీలం (ఆసిడ్-ఫాస్ట్ కానివి) | ఆసిడ్-ఆల్కహాల్‌కు గురైనప్పటికీ రంగును నిలుపుకోవడం; మైకోబ్యాక్టీరియాతో సరిపోలే ఆసిడ్-ఫాస్ట్ లక్షణం, కానీ ఇది జాతిని గుర్తించడం కాదు |
ఒకే రంగు పదార్థాన్ని ఉపయోగించే విస్తృతమైన బ్యాక్టీరియా రంజన పద్ధతుల సమూహం కోసం సూక్ష్మదర్శిని రంజన అట్లాస్ చూడండి.
నీలి నేపథ్యంపై ఎరుపు కనిపించడం దేన్ని నిరూపించలేదు
ఎర్రటి దండాకార కణాలు కనిపించాయంటే, ఆసిడ్-ఆల్కహాల్‌కు గురైన తర్వాత కూడా ఆ జీవులు కార్బాల్ ఫ్యూషిన్‌ను నిలుపుకున్నాయని అర్థం. ఈ ఫలితం మైకోబ్యాక్టీరియమ్ ట్యూబర్‌క్యులోసిస్‌తో సరిపోలుతుంది. అయితే ఇతర మైకోబ్యాక్టీరియా కూడా ఆసిడ్-ఫాస్ట్ అని CDC క్షయవ్యాధి నిర్ధారణ మార్గదర్శకాలు స్పష్టంగా పేర్కొంటాయి. కాబట్టి జాతిని గుర్తించడానికి కల్చర్, న్యూక్లియిక్ ఆమ్ల పరీక్షలు అవసరం; రంగు సరిపోదు.
సాంకేతిక లోపాలు ప్రధానంగా రెండు కడిగే దశల చుట్టూ ఉంటాయి. రంగును తగినంతగా తొలగించకపోతే నేపథ్య పదార్థం ఎర్రగా మిగిలి, తప్పుడు పాజిటివ్ ఫలితాలకు దారితీస్తుంది. రంగును అతిగా తొలగిస్తే బలహీనంగా నిలిచిన ప్రాథమిక రంగు కూడా తొలగిపోయి, తప్పుడు నెగటివ్ ఫలితాలకు దోహదపడుతుంది. కౌంటర్‌స్టెయిన్‌ను మరీ ఎక్కువగా వేస్తే కొద్దిగా ఉన్న బాసిల్లై నీలంలో కప్పబడిపోతాయి. మందమైన స్మియర్‌లు, అవక్షేపించిన కారకాలు, కలుషితమైన కడిగే నీరు కూడా తమవైన కృత్రిమ రూపాలను సృష్టిస్తాయి.
పనితీరు ఎంత సరిగ్గా ఉన్నప్పటికీ, పరీక్ష సున్నితత్వానికి జీవుల సంఖ్య పరిమితి విధిస్తుంది. సంప్రదాయ స్మియర్ సూక్ష్మదర్శిని పరీక్షకు ప్రతి మిల్లీలీటరు కఫంలో సుమారు 5,000 నుంచి 10,000 బాసిల్లై అవసరం. పాత CDC ఆధారాల సమీక్షల ప్రకారం, కల్చర్‌తో నిర్ధారించిన ఊపిరితిత్తుల క్షయవ్యాధి కేసుల్లో స్మియర్ సున్నితత్వం సుమారు 45 నుంచి 80 శాతం ఉంది. కాబట్టి నెగటివ్ స్మియర్ ఆధారంగా క్షయవ్యాధి లేదని ఎప్పుడూ తేల్చలేరు. ప్రస్తుత CDC మార్గదర్శకాలు ప్రతి స్మియర్‌తో పాటు కల్చర్ చేయాలని సూచిస్తాయి. ఊపిరితిత్తుల క్షయవ్యాధిని అనుమానిస్తున్నప్పుడు, ఫలితం వైద్య నిర్వహణను మార్చగలిగితే, కనీసం ఒక శ్వాసకోశ నమూనాపై న్యూక్లియిక్ ఆమ్ల యాంప్లిఫికేషన్ పరీక్ష చేయాలని సిఫార్సు చేస్తాయి.
ఆచరణాత్మక పని అధీకృత విధానాల ప్రకారం జరగాలి
ఈ వ్యాసంతో సహా బోధనా వివరణలు క్లినికల్ పని చేయడానికి అనుమతిని ఇవ్వవు. ప్రయోగశాలలో పని చేసేటప్పుడు, ప్రస్తుత CDC, APHL లేదా CLSI పత్రాలకు అనుగుణంగా ఉండే, ప్రయోగశాల ధ్రువీకరించిన ప్రామాణిక నిర్వహణ విధానాన్ని అనుసరించండి. CDC Stacks ఆర్కైవ్‌లో ఉన్న ఆసిడ్-ఫాస్ట్ రంజన సూచన పత్రం ఇటువంటి విధానాలు కారకాలు, ఫలితాల పఠనాన్ని ఎలా నిర్దేశిస్తాయో చూపిస్తుంది. క్షయవ్యాధి నమూనాలతో పనిచేయడానికి జీవభద్రతా నిర్బంధ ఏర్పాట్లు అవసరం: తయారీ సమయంలో ఏరోసాల్స్, చిమ్మిన బిందువులు ఏర్పడతాయి కాబట్టి స్మియర్‌లను బయోలాజికల్ సేఫ్టీ క్యాబినెట్‌లో తయారుచేస్తారు. వేడితో స్థిరీకరించిన స్మియర్‌లలో కూడా జీవించి ఉన్న క్షయ బాసిల్లై ఉండవచ్చని, వాటిని కలుషితమైనవిగానే పరిగణించి నిర్వహించాలని CDC ప్రయోగశాల భద్రతా మార్గదర్శకాలు పేర్కొంటాయి. ఎం. లెప్రే కోసం పరిశీలించిన కార్బాల్-ఫ్యూషిన్, మిథిలీన్ బ్లూ స్మియర్‌కు సంబంధించిన CDC పబ్లిక్ హెల్త్ ఇమేజ్ లైబ్రరీ నమోదు, ఈ పద్ధతి వినియోగం క్షయవ్యాధికే పరిమితం కాదని గుర్తుచేస్తుంది. ఆసిడ్-ఫాస్ట్ జీవుల కోసం చూసే ప్రతి సందర్భంలోనూ నీలి నేపథ్యంపై ఎరుపు రంగు ఇచ్చే అదే వ్యత్యాసం ఉపయోగపడుతుంది. జాగ్రత్తగా పరిశీలించి నమోదు చేసిన నెగటివ్ ఫలితం కూడా విలువైన ఫలితమే.
సిద్ధమైన స్లైడ్‌ను పరిశీలించడం
ప్రాథమిక పరిశీలన సమయంలో కౌంటర్‌స్టెయిన్ ఉపయోగపడుతుంది. తక్కువ వర్ధన శక్తితో పరిశీలించే సూక్ష్మదర్శిని నిపుణుడు మొదట నీలి నేపథ్యాన్ని ఉపయోగించి స్మియర్ నాణ్యతను అంచనా వేస్తాడు: కణాలు సమానంగా విస్తరించి ఉన్నాయా, ఫోకస్ చేయడానికి చెక్కుచెదరని ఆతిథేయ కణాలు ఉన్నాయా, భారీ అవక్షేపం లేకుండా ఉందా అని చూస్తాడు. స్లైడ్‌పై మరేదీ ఎర్రగా ఉండదు కాబట్టి అనుమానిత ఎర్రటి ఆకారాలు వెంటనే దృష్టిని ఆకర్షిస్తాయి. ఆయిల్ ఇమ్మర్షన్‌లో నిర్ధారణ చేస్తారు. అక్కడ నిజమైన బాసిల్లై, ఒకేలా కనిపించే రంగు అవశేషాలుగా కాకుండా, ఆశించిన విధంగా సన్నని, కొన్నిసార్లు కొద్దిగా వంగిన లేదా పూసల వరుసలాంటి దండాకార రూపాల్లో కనిపిస్తాయి.
నేపథ్య రంజనం నివేదికలో ఉపయోగించే పదజాలాన్ని కూడా నిర్ణయిస్తుంది. ఎర్రటి బాసిల్లై ఉన్న స్లైడ్‌ను ఆసిడ్-ఫాస్ట్ బాసిల్లై కనిపించాయని నివేదిస్తారు. తరచుగా ప్రయోగశాల స్థాయి ప్రమాణం ప్రకారం అర్ధపరిమాణాత్మక గ్రేడ్‌ను కూడా ఇస్తారు. ఎర్రటి జీవులు కనిపించని స్లైడ్‌ను ఆసిడ్-ఫాస్ట్ బాసిల్లై కనిపించలేదని నివేదిస్తారు; క్షయవ్యాధికి నెగటివ్ అని ఎప్పుడూ నివేదించరు. ఈ తేడా ముఖ్యం. ఎందుకంటే నీలి నేపథ్యం రంజనం పనిచేసిందని, కణాలకు కౌంటర్‌స్టెయిన్ పట్టిందని, దృశ్య వ్యవస్థ తగినంతగా పనిచేసిందని చూపిస్తుంది. కానీ గుర్తింపు పరిమితి కంటే తక్కువ సంఖ్యలో ఉన్న జీవుల గురించి అది ఏమీ చెప్పదు. ఎర్రటి జీవులు కనిపించని నీలి దృశ్యక్షేత్రం స్లైడ్‌కు సంబంధించిన చెల్లుబాటు అయ్యే ఫలితం; రోగి గురించి తుది తీర్పు కాదు.
పనుల విభజనను గుర్తుంచుకుంటే నివేదికలో ఏమి రాయాలో స్పష్టమవుతుంది. కార్బాల్ ఫ్యూషిన్ అనుమానిత జీవులను కనిపించేలా చేస్తుంది. ఆసిడ్-ఆల్కహాల్ పరీక్షను నిర్వహిస్తుంది. మిథిలీన్ బ్లూ సమాధానాన్ని చదవగలిగేలా మాత్రమే చేస్తుంది: ఎర్రగా ఉన్నవి ఆమ్లానికి గురైనప్పటికీ రంగును నిలుపుకున్నాయి; నీలంగా ఉన్నవి ఆ రంగును కోల్పోయాయి. మిగతా విషయాలన్నీ, అంటే జాతి, జీవుల సంఖ్య, క్లినికల్ అర్థం, స్లైడ్‌కు మించి చేసే పని ద్వారా తెలుస్తాయి.