Kutafsiri mwonekano wa koloni za E. coli na nyingine kwenye agari ya EMB

Mwanafunzi hupaka sampuli isiyojulikana kwa mistari kwenye agari ya eosini na bluu ya methilini, huiotesha usiku kucha, kisha hurudi na kukuta sahani yenye koloni za rangi iliyokolea zenye mng'ao wa kijani. Anaandika kwenye daftari "E. coli, imethibitishwa." Maandishi hayo yanadai zaidi ya kile ambacho sahani inaweza kuthibitisha. Sahani inaonyesha fenotipu ya ukuaji na uchachushaji chini ya hali maalumu. Utambulisho wa spishi ni dai tofauti linalohitaji ushahidi tofauti.

Mwongozo huu unachukulia matokeo ya agari ya EMB kama kazi ya kutafsiri. Unaeleza kanuni yake ya msingi, unapitia atlasi ya sahani za mfano pamoja na vidhibiti, na unataja hali ambazo mwonekano ulioelezwa kwenye vitabu unaweza kupotosha.

Kanuni ya sahani

Agari ya EMB ni kioteshi teule na pia hutofautisha viumbe. Rangi za eosini Y na bluu ya methilini hukandamiza viumbe wengi wa Gram chanya, hivyo kioteshi hupendelea ukuaji wa viumbe wa Gram hasi. Rangi hizo hizo hufanya kazi kama viashiria: kiumbe anapochachusha sukari iliyopo na kuzalisha asidi ya kutosha katika eneo la koloni, koloni hufyonza rangi kwa wingi na kuwa ya zambarau iliyokolea hadi bluu-nyeusi. Asidi inapozalishwa kwa wingi, uso wa koloni unaweza kuonyesha mng'ao wa kijani unaofanana na wa metali na unaobadilika kulingana na pembe ya kutazama. Itifaki ya ASM ya sahani za agari ya eosini na bluu ya methilini inaeleza mchanganyiko huu wa uteuzi na utofautishaji na kutoa picha za marejeleo kwa ajili ya kufundishia.

Jambo moja ni muhimu kabla ya kutafsiri matokeo yoyote: hakikisha fomula inayotumika. Fomula ya zamani ya Holt Harris Teague ina laktosi pamoja na sukrosi, ilhali Levine EMB ina laktosi pekee. Kiumbe anayechachusha sukrosi lakini si laktosi, kama vile sampuli nyingi za Serratia marcescens zilizotengwa, anaweza kuonekana tofauti kwenye aina hizi mbili. Nyaraka za mtengenezaji kuhusu vioteshi vya EMB zinataja tofauti hii ya fomula waziwazi. Andika mtengenezaji na fomula kwenye daftari pamoja na matokeo.

Agari ya EMB iliyoandaliwa lakini ambayo haijawekewa vijidudu kwa kawaida huwa nyekundu-kahawia hadi nyekundu yenye zambarau, wakati mwingine ikiwa na rangi hafifu ya kijani au mashapo madogo madogo. Rangi hiyo ya kioteshi si ukuaji. Linganisha kila matokeo na sahani ambayo haijawekewa vijidudu au mwonekano wa awali uliorekodiwa, na soma sahani ya kwanza baada ya takribani saa 18 hadi 24 za uoteshaji wenye oksijeni katika 35 hadi 37 C, isipokuwa itifaki ya kufundishia inaelekeza vinginevyo. Uoteshaji wa muda mrefu unaweza kubadilisha mwonekano wa uchachushaji.

Jinsi ya kutazama sahani

Tumia aina mbili za mwanga. Kwanza kagua sahani kwa mwanga unaoakisiwa au unaotoka pembeni na uiinamishe: mng'ao unaofanana na wa metali hubadilika kulingana na pembe ya kutazama na unaweza kuonekana au kutoweka. Kisha ichunguze kwa mwanga unaopita ndani yake ili kutathmini rangi ya koloni na sehemu za katikati zenye rangi iliyokolea. Tumia koloni zilizotengana vizuri, kwa sababu msongamano na koloni jirani hubadilisha mkusanyiko wa asidi katika eneo husika na zinaweza kupunguza au kuzidisha rangi. Mkusanyiko wa picha za ASM unaonyesha hili moja kwa moja: E. coli katika mchanganyiko wa viumbe inaweza kupoteza mng'ao wake unaotarajiwa kwa sababu viumbe wanaoizunguka hubadilisha hali ya asidi.

Jumuisha vidhibiti kila zoezi linaporuhusu. Mkusanyiko unaotumika mara nyingi kufundishia ni E. coli ATCC 25922 kwa fenotipu ya bluu-nyeusi na mng'ao unaofanana na wa metali, kiumbe asiyechachusha kama Salmonella Typhimurium ATCC 14028 au Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 kwa fenotipu isiyo na rangi, na kiumbe wa Gram chanya kama Enterococcus faecalis au Staphylococcus aureus kama kidhibiti cha uzuiaji, kama ilivyoorodheshwa katika majedwali ya kawaida ya udhibiti wa ubora kwa vioteshi vya EMB. Kidhibiti chanya kisipokuwa na mng'ao, tilia shaka hali ya uoteshaji, msongamano, au fomula kabla ya kutilia shaka sampuli isiyojulikana.

Atlasi ya sahani za mfano

Sahani zilizo hapa chini ni vielelezo vilivyotengenezwa, si picha za viumbe halisi vilivyooteshwa. Zinaonyesha muundo wa kutafuta, si kivuli halisi cha rangi ya aina yoyote moja ya bakteria. Zilinganishe na picha za marejeleo za ASM na sahani halisi kutoka maabara ya kufundishia.

Sahani 1: Escherichia coli kwenye agari ya EMB, mchachushaji mkubwa wa laktosi

E. coli kwenye agari ya EMB kwa kawaida huwa ya zambarau iliyokolea hadi bluu-nyeusi, mara nyingi ikiwa na sehemu ya katikati yenye rangi iliyokolea na mng'ao wa kijani unaofanana na wa metali unaotokana na uzalishaji mwingi wa asidi. Mng'ao huo ndio sifa maarufu ambayo wanafunzi hutafuta, lakini uchukulie kama ushahidi wa kuunga mkono badala ya kuwa kigezo kinachoitambulisha. Ukali wa mng'ao hutofautiana kulingana na aina ya bakteria, muda wa uoteshaji, msongamano wa koloni, na pembe ya kutazama. Kutokuwepo kwa mng'ao hakuondoi uwezekano wa E. coli, na koloni yenye rangi iliyokolea bila mng'ao inaweza kuashiria viumbe wengine kadhaa wanaochachusha. Chagua koloni iliyotengana vizuri kwa kazi yoyote ya ufuatiliaji badala ya kusoma kutoka eneo lenye msongamano.

Sahani 2: Klebsiella pneumoniae kwenye agari ya EMB, mchachushaji mwenye ute

Klebsiella pneumoniae kwenye agari ya EMB kwa kawaida hutengeneza koloni kubwa, zinazong'aa, zenye ute, zenye vivuli vya waridi-zambarau hadi kahawia-zambarau, mara nyingi zikiwa na sehemu za katikati zenye rangi iliyokolea lakini kwa kawaida bila mng'ao mkali unaofanana na wa metali. Mwonekano kama huu hutokea kwa viumbe wanaochachusha walio karibu nayo, kama Enterobacter. Umbile lenye ute na ukubwa wa koloni ni sehemu ya tafsiri: koloni ya waridi iliyo ndogo na tambarare ina umuhimu tofauti katika tafsiri na koloni kubwa iliyovimba na yenye ute. Kama ilivyo kwa E. coli, sahani inapendekeza fenotipu ya uchachushaji, na kuitaja spishi kunahitaji uthibitishaji wa kibayokemia ulioelezwa hapa chini.

Sahani 3: Salmonella kwenye agari ya EMB na viumbe wengine wasiochachusha, koloni zisizo na rangi

Salmonella kwenye agari ya EMB na viumbe wanaohusiana nayo ambao hawachachushi laktosi, wakiwemo Shigella na sampuli nyingi za Pseudomonas zilizotengwa, kwa kawaida hukua kama koloni zisizo na rangi, zinazopitisha mwanga kwa kiasi, au za kaharabu hafifu. Baadhi ya fomula na hali hutoa rangi hafifu ya waridi, hivyo koloni ya waridi hafifu si lazima iwe ya kiumbe anayechachusha. EMB haitofautishi Salmonella na Shigella au viumbe wengine wasiochachusha; tofauti hiyo hubainishwa na vipimo vya baadaye. Kumbuka pia kwamba aina za Salmonella zinazochachusha laktosi na zenye koloni zinazong'aa kama metali zinazofanana na za E. coli zimerekodiwa, jambo ambalo ni sababu nyingine ya kutotegemea sahani moja kuhitimisha utambulisho.

Sahani 4: Serratia marcescens na mtego wa fomula

Serratia marcescens ina sehemu yake yenyewe kwa sababu wanafunzi mara nyingi hutarajia koloni nyekundu na kisha hutafsiri sahani kimakosa. Sampuli nyingi zilizotengwa katika mazingira ya kliniki hazichachushi laktosi, hivyo kwenye Levine EMB kwa kawaida huonekana zenye rangi hafifu au iliyofifia sana. Kwa sababu sampuli nyingi zilizotengwa huchachusha sukrosi, fomula yenye sukrosi inaweza kutoa rangi iliyokolea zaidi au mwitikio unaohusishwa zaidi na asidi. Pia usitarajie rangi nyekundu maarufu ya prodigiosini katika 35 hadi 37 C; uzalishaji wa rangi hiyo si wa kutegemewa katika halijoto ya kioteshaji. Itifaki inapozungumzia Serratia marcescens kwenye agari ya EMB, hakikisha fomula ambayo maelezo hayo yanadhania inatumika. Mapitio ya umetaboli wa Serratia yanafupisha tabia ya kutochachusha laktosi na utofauti wa uchachushaji wa sukrosi unaosababisha mtego huu.

Sahani 5: vidhibiti na viumbe waliozuiwa

Viumbe wa Gram chanya kama Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus, na Bacillus kwa ujumla huzuiwa au ukuaji wao hukandamizwa sana kwenye agari ya EMB, ingawa uzuiaji si kamili kwa kila aina ya bakteria. Mkusanyiko wa vidhibiti hufanya tafsiri iwe ya kuaminika: kidhibiti cha E. coli kinapaswa kuonyesha ukuaji mzuri wenye rangi ya bluu-nyeusi na mng'ao, kidhibiti cha kiumbe asiyechachusha kinapaswa kuonyesha ukuaji usio na rangi, na kidhibiti cha uzuiaji kinapaswa kuonyesha ukuaji mdogo au kutokuwepo kwa ukuaji. Kidhibiti cha uzuiaji kikikua vizuri, hatua ya uteuzi imeshindwa na tafsiri nyingine zote za kundi hilo la vioteshi zinatia shaka. Mbinu za kutia rangi hujibu swali tofauti na vioteshi; kwa upande wa kutia rangi kwenye slaidi maabarani, angalia atlasi ya utiaji rangi kwa bluu ya methilini.

Ulinganisho wenye mipaka

Sentensi tatu zinafupisha miwonekano inayopotosha. Rangi iliyokolea haimaanishi E. coli, kwa sababu Klebsiella, Enterobacter, na viumbe wengine wanaochachusha hutengeneza sehemu za katikati zenye rangi iliyokolea bila mng'ao. Waridi haimaanishi Klebsiella, kwa sababu viumbe wanaochachusha kwa kiwango cha wastani au polepole na baadhi ya viumbe wanaochukuliwa kuwa wasiochachusha huonekana waridi au zambarau hafifu. Mng'ao haumaanishi E. coli iliyothibitishwa, kwa sababu viumbe wengine wenye uchachushaji mkubwa wanaweza kuuzalisha. Itifaki ya kufundishia na vielelezo vyake vya mchanganyiko wa viumbe vilivyooteshwa vinaonyesha kila moja ya mapungufu haya.

Mipaka ya uthibitishaji

Agari ya EMB huonyesha fenotipu, si spishi. Viumbe tofauti wanaweza kuwa na mwonekano mmoja wa koloni, na kiumbe mmoja anaweza kutofautiana na mwonekano wake wa kitabuni kulingana na aina, umri, msongamano, fomula, na hali ya uoteshaji. Ndiyo maana taratibu za kufundishia na za kliniki huchukulia mwonekano wa EMB kama dalili ya awali tu.

Utaratibu wa mwanafunzi unaoweza kutetewa ni: eleza koloni iliyotengwa (ukubwa, rangi, sehemu ya katikati, mng'ao katika mwanga wa pembeni, sifa ya ute), rekodi fomula, muda na halijoto ya uoteshaji, na vidhibiti; kisha hamisha koloni iliyotengana vizuri kwenye kioteshi kingine ili kupata ukuaji safi kabla ya kipimo chochote cha uthibitishaji. Ufuatiliaji wa kawaida unajumuisha utiaji rangi wa Gram pamoja na miitikio ya IMViC kwa utambuzi wa awali wa E. coli na kolifomu, TSI au KIA na mikusanyiko ya vipimo vya kibayokemia maalumu kwa viumbe wa utumbo, pamoja na utambuzi wa kiserolojia, MALDI TOF, au mbinu nyingine iliyothibitishwa pale kazi inapohitaji. Kwa maelezo ya msingi kuhusu nafasi ya EMB miongoni mwa vioteshi teule na vinavyotofautisha viumbe wa utumbo, angalia utangulizi wa vioteshi vya viumbe wa utumbo na ufuatiliaji kwa utiaji rangi wa Gram. Kwa swali linalohusiana kuhusu kile ambacho utiaji rangi ya bluu kwenye slaidi unaweza na usichoweza kuthibitisha, atlasi ya utiaji rangi kwa bluu ya methilini hutenganisha uchunguzi na hitimisho kwa mtazamo huohuo.

Andika ulichoona kabla ya hitimisho. "Koloni za bluu-nyeusi iliyokolea zenye mng'ao wa kijani unaotegemea pembe ya kutazama kwenye Levine EMB baada ya saa 24, zinazolingana na uchachushaji mkubwa wa laktosi" ni maelezo yanayoweza kutetewa. "E. coli, imethibitishwa" inahitaji hatua ya uthibitishaji ambayo sahani pekee haiwezi kutoa.