Artikel
Saha nu ngamekarkeun pewarnaan getih wungu? Métilén biru, Malachowski, Romanowsky, jeung Giemsa
Éosin téh beureum. Métilén biru téh biru. Campurkeun duanana, terapkeun campuranna kana hapusan getih nu geus garing, tuluy sawatara bagian hapusan éta jadi wungu.
Teu kabéh bagian. Dina préparat nu alus, inti sél getih bodas jadi beureum-wungu, sarta di jero parasit malaria, kromatin jadi warna nu sarua, ari sél getih beureum di sakurilingna tetep kayas jeung sitoplasmana tetep kulawu-biru. Warna wungu ieu nu ngamungkinkeun rupa-rupa sél dibédakeun.
Duanana botol teu ngandung wungu. Warna éta ngan muncul nalika hiji produk panguraian métilén biru nu tangtu papanggih jeung éosin dina kaca objék, sarta dina taun 1880-an jeung 1890-an can aya nu nyaho yén produk éta aya, komo deui nyaho naon éta téh. Jalma-jalma nu ngudag warna éta digawé sorangan, maké zat warna nu teu murni, tanpa cara nu bisa diandelkeun pikeun nyaho naon eusi hiji botol sanggeus disimpen dina rak salila dua bulan.
Éta sababna patarosan dina judul boga leuwih ti hiji jawaban nu bisa dipertanggungjawabkeun, sarta sababna jawaban éta robah dina 2011.
Hasil pangamatan nu robah nurutkeun campuranna
Pewarnaan ieu lain hasil hiji panemuan tunggal. Éta mekar saeutik-saeutik. Unggal parobahan campuran nambahan persis hiji informasi anyar nu bisa katempo, sarta runtuyan informasi éta mangrupa cara pangjelasna pikeun maca sajarahna.
| Taun | Naon nu aya dina wadah | Naon nu bisa katempo |
|---|---|---|
| 1865 | Asam pikrat, zat warna sintétik munggaran nu diterapkeun kana getih, ku Wilhelm Erb | Pola kawas renda di jero sawatara sél getih beureum. |
| 1876 | Métilén biru, ku Heinrich Caro jeung Adolf von Baeyer di BASF | Basil tuberkulosis, dina panangan Robert Koch. Sél getih dina hiji rona biru. |
| 1880 | Métilén biru ditambah fuksin asam, pewarnaan nétral Ehrlich | Sél getih beureum jeung granula éosinofil jadi beureum, inti jadi biru kolot, sitoplasma limfosit jadi biru bulak, sarta granula vi olét poék nu nyerep duanana zat warna. Éta sababna sél ieu disebut néutrofil. Itungan diferensial sél getih bodas munggaran. |
| 1888 | Métilén biru ditambah éosin. Czesław Chęciński | Parasitna sorangan: wangun biru siga kembang daisy (Plasmodium malariae) jeung wangun siga arit (gamétosit P. falciparum). Lain intina. |
| 1890 | Leuwih loba métilén biru, leuwih saeutik alkohol, ditambah kalium hidroksida. Albert Plehn | Rentang warna nu leuwih lega jeung leuwih jero, kaasup sél getih beureum jeung granula éosinofil warna beureum mawar. Masih ukur beureum jeung biru. |
| 1890 | Éosin ditambah métilén biru nu dijieun basa ku boraks. Ernst Malachowski | Kromatin beureum-wungu di jero parasit, inti bisa dibédakeun tina sitoplasma. Dihaja, sarta nurutkeun kateranganana bisa dihasilkeun deui. |
| 1891 | Éosin ditambah métilén biru tina botol kapang nu umurna leuwih ti dua bulan. Dmitri Romanowsky | Wungu nu sarua, sakali, ku métode nu teu bisa diulang ku batur. |
| 1898 nepi ka 1902 | Zat warna polikrom nu diékstraksi ku kloroform (Nocht); métanol (Jenner); ngaleyurkeun deui éndapan dina alkohol (Leishman, Reuter, Wright); zat warna nu ditakar jeung gliserol (Giemsa) | Wungu iraha waé diperlukeun, dina produk nu méré hasil sarua di laboratorium séjén. Vérsi Jenner, tanpa zat warna nu geus dipolikromkeun, teu ngahasilkeun wungu. |
| 1940 nepi ka 1943 | Lillie, Roe jeung Wilcox misahkeun komponén-komponénna sarta nguji hiji-hiji | Azure B, lain campuranna, nyaéta bagian nu ngahasilkeun wungu. |
Pola dina kolom pamungkas téh nu penting. Unggal kamajuan ngalegaan rentang warna, sarta unggal pelebaran ngajadikeun hiji struktur deui katempo. Wungu lain hiasan dina téhnik ieu; éta nu ngabédakeun antara ningali yén aya parasit jeung ningali naon nu nyusun éta parasit. Kumaha zat warna ieu pindah ti pabrik zat warna BASF kana widang kadokteran mangrupa sajarah nu leuwih panjang kalayan dokuménna sorangan. Runtuyan lengkep di luhur, kalayan sumber pikeun unggal éntri, disimpen dina linimasa kontributor nu dipatalikeun jeung sumber.
Gambar: genep campuran nu sarua digambarkeun dumasar kana naon nu aya dina wadah jeung naon nu dihasilkeunana. Bunderan némbongkeun zat warna; balok di handapeunana némbongkeun warna nu bisa dihasilkeun ku éta zat warna dina hapusan getih. Saméméh 1890 teu aya balok beureum-wungu, sarta sanggeus éta taya nu teu nyertakeunana.
Lalaki nu ngahaja maké boraks
Ernst Malachowski nyaéta dokter di Breslau, ayeuna Wrocław, nu sapanjang karirna muka prakték pribadi jeung ngajalankeun klinik leutik bareng jeung batur sapagawéan, bari ngalakukeun pagawéan laboratorium dina waktu luangna. Anjeunna lahir di Strzelno dina 12 Maret 1857, diajar kadokteran di Universitas Breslau, sarta digawé ti 1882 nepi ka 1887 minangka asistén dina kadokteran internal di Rumah Sakit All Saints, nu harita mangrupa rumah sakit kadua panggedéna di Jérman.
Anjeunna ngamimitian dina 1888 ku pewarnaan ganda Chęciński jeung Plehn. Dina préparat nu dijieun dina 1889, anjeunna ningali kromatin inti plasmodium kawarnaan béda ti sitoplasma, tapi tuluy manggihan yén hasil éta teu bisa dihasilkeun deui. Anjeunna nyobaan ngajadikeun métilén biru leuwih asam, tapi hasilna malah leuwih goréng. Anjeunna nyobaan ngajadikeunana basa ku boraks, nu hasilna unggal kali. Anjeunna némbongkeun métode éta ka umum dina 15 Juni 1890 sarta medalkeun pedaran nu leuwih lengkep dina Agustus 1891, kaasup pituduh maké boraks. Anjeunna nyatet yén pewarnaan éta merlukeun dua puluh opat jam sarta hasilna gampang dihasilkeun deui.
Dua puluh opat jam téh lila pikeun laboratorium diagnostik, sarta makalahna henteu loba ngabahas warna wungu-beureum inti parasit. Naon waé alesanana, taya nu nerapkeun pangbasaan métilén biru sacara ngahaja nepi ka Nocht ngalakukeunana deui dina 1898. Malachowski teu kungsi nulis deui ngeunaan pewarnaan getih.
Alesan naha ngan saeutik pisan nu dipikanyaho ngeunaan anjeunna nepi ka anyar-anyar ieu patali jeung arsip, lain hal nu misterius. Ampir taya tapak hirupna nu nyésa dina pustaka médis, sarta nu nyésa ngan ngaliwatan hiji jalur. Putrina, Marie, ninggalkeun Jérman ka London dina 1939, ngawula di Angkatan Darat Britania, tuluy cicing di Kanada, sarta kumpulan dokumén kulawargana ahirna disimpen di Leo Baeck Institute di New York. Lanceukna, Leo, tiwas dina Perang Dunya Kahiji. Dulurna, Eva, didéportasi ti Breslau ka kamp transit Izbica dina April 1942 sarta teu kungsi balik deui. Indungna, Hedwig, mungkas hirupna sorangan dina 22 April 1942 batan nungguan déportasi nu sarua. Malachowski geus pupus dina 1934, saméméh sakabéh éta kajadian.
Sajarah kulawarga nu ditungtungan ku cara kitu jadi sajarah kulawarga nu teu dicutat deui. Dua makalah nu mulangkeun Malachowski kana sajarah pamekaran pewarnaan ieu, duanana medal dina 2011, disusun tina dokumén arsip di Poznań jeung Wrocław sarta tina dokumén Marie di New York.
Botol kapang jeung urang Rusia nu kabeneran untung
Dmitri Romanowsky diajar kadokteran di Akademi Médis Militér di St Petersburg sarta ngulik malaria salila kalolobaan karirna. Dina 1890 anjeunna medalkeun métode nu, dina tulisan, ampir sarua jeung métode Chęciński: métilén biru nu teu dirobah jeung éosin, kalayan éosin rada leuwih loba.
Dina Séptémber 1891 anjeunna medalkeun métode nu ngangkat ngaranna, sarta rincian nu penting téh nyumput dina pituduhna. Hasil pangalusna asalna tina larutan métilén nu disimpen, larutan stok métilén biru nu geus diantep leuwih ti dua bulan bari ditumbu ku kapang. Kapang jeung lilana waktu neundeun geus ngadémétilasi sabagian zat warna éta. Romanowsky teu nyaho éta sarta teu bisa ngadalikeunana, jeung panalungtik séjén nu nyobaan métodena teu bisa ngahasilkeun wungu. Tésisna geus diajukeun di St Petersburg dina Juni 1891, nu jadi sabab katerangan umum nganggap 1891 minangka taun panemuanna.
Démonstrasi Malachowski geus lumangsung dina Juni 1890, leuwih ti sataun saméméhna, sarta métodena jalan lantaran dirarancang kitu.
Naha ngaran pewarnaan dicokot tina jalma nu salah
Argumén pikeun Malachowski disusun ku Kristine Krafts, Ernst Hempelmann jeung Barbara Oleksyn, sarta dumasar kana opat hal. Tanggal démonstrasi ka umum, Juni 1890 dibandingkeun jeung Séptémber 1891. Kecap dihaja dibandingkeun jeung kecap kabeneran. Kanyataan yén Malachowski medalkeun métodena, kaasup boraks jeung sakabéhna, ari métode Romanowsky gumantung kana variabel nu teu dikadalikeun. Sarta pangamatan yén pedaran inti plasmodium, babarengan jeung wungu nu nembongkeunana, praktis leungit tina pustaka salila tujuh taun, lantaran taya nu bisa ngahasilkeun deui vérsi nu teu kahaja éta.
Maranéhna teges dina kacindekanana. Dina makalah biografi, maranéhna nyebut atribusi éta minangka "panyimpangan nu kacida", sarta nyutat Ralph Lillie, nu dina 1978 nulis yén "meureun urang kudu nyebut kulawarga pewarnaan ieu minangka pewarnaan Malachowski".
Klaim éta dibantah, sakumaha ilaharna klaim ngeunaan saha nu pangheulana, sarta wangun perdebatanana leuwih hadé dijelaskeun batan diputuskeun. Argumén ngeunaan saha nu pangheulana kudu netepkeun heula naon nu dianggap panemuan. Lamun panemuanna téh warna wungu, Malachowski boga démonstrasi nu didokuméntasikeun leuwih ti heula. Lamun panemuanna téh métode nu dipedalkeun, duanana medalkeun dina 1891 sarta ngaran pewarnaanna dicokot tina Romanowsky. Lamun panemuanna téh kateranganana, taya saurang ogé nu boga hak ngaku, lantaran duanana teu nyaho yén prosés ngamatangkeun téh démétilasi sarta duanana teu bisa ngajelaskeun naha warna éta muncul. Ieu titik pamungkas téh nu sok diliwatan ku tulisan populér. Bahan aktifna mangrupa pangotor nu can diidéntifikasi ku saha waé, sarta jalma munggaran nu ngahaja ngahasilkeun warna éta ngalakukeunana tina resep émpiris nu bisa diulang, lain tina pamahaman ngeunaan naon nu dilakukeun ku éta resep.
Dua makalah taun 2011 téh mangrupa pedaran panglengkepna nu geus dipedalkeun ngeunaan argumén pikeun Malachowski, sarta duanana bisa dibaca haratis di PubMed: ulasan panjang di PMID 21235291 jeung makalah biografi di PMID 21660627. Catetan PubMed pikeun ulasan éta ogé ngadaptarkeun koméntar ngeunaan éta tulisan, nu medal dina jurnal nu sarua engké dina taun éta di 86(5):366, minangka pangéling yén argumén éta langsung dibantah dina publikasi sanggeus medal.
Sengketa ieu lain ngeunaan kimia. Sakabéh pihak satuju ngeunaan naon éta wungu jeung komponén mana nu ngahasilkeunana. Nu jadi pasualan nyaéta saha nu pangheulana ngahasilkeun éta, sarta naha hasil teu kahaja nu teu bisa diulang ku saha waé bisa dianggap geus ngahontalna.
Naon nu dihontal ku tokoh-tokoh saterusna
Lamun Malachowski nu pangheulana ngahasilkeun wungu, naha pewarnaan éta maké ngaran Romanowsky, Wright jeung Giemsa?
Lantaran pewarnaan nu hasil sakali dina panangan nu manggihanana can bisa disebut réagén. Pagawéan saterusna ngarobah campuran nu teu ajeg jadi hiji hal nu bisa dipaké ku teknisi di nagara séjén dina poé Salasa.
Nocht ngahontal éta ngaliwatan nalar. Sanggeus gagal meunang hasil nu bisa diandelkeun tina zat warna nétral basajan, anjeunna nyimpulkeun yén wungu pasti asalna tina hiji hal dina métilén biru nu lain métilén biru, tuluy néangan éta hal. Unna geus niténan yén larutan métilén biru nu geus lila disimpen ngawarnaan granula sél mast jadi beureum, sarta ngusulkeun yén zat anyar kabentuk nalika zat warna éta beuki asak. Bernthsen geus némbongkeun dina 1885 yén kaayaan basa miceun gugus métil tina métilén biru, sarta produk-produk éta ayeuna disebut azure. Nocht ngékstraksi fraksi aktif ku kloroform sarta ngan bisa nyebut éta beureum tina métilén biru; Michaelis méré ngaran azure I dina 1901. Jenner ngaréngsékeun masalah logistikna. Ngaleyurkeun deui éndapan métilén biru jeung éosin dina métanol absolut ngahasilkeun hiji larutan stabil nu sakaligus ngafiksasi hapusan nalika ngawarnaanana, sahingga fiksasi ku panas teu diperlukeun deui. Leishman jeung Reuter ngagabungkeun zat warna nu geus dipolikromkeun jeung pangleyur alkohol sarta meunangkeun stabilitas jeung wungu sakaligus. Wright ngaganti inkubasi dua belas jam dina 65 °C jeung neundeun salila sapuluh poé ku sajam dina aliran uap. Giemsa eureun ngandelkeun larutan nu asak sacara acak, maké jumlah zat warna nu geus dipikawanoh sarta ditakar, kalayan gliserol dina métanol sangkan produkna tahan kana panas tropis. Anjeunna teu kungsi medalkeun kumaha anjeunna nyieun métilén azure murni. Anjeunna ngajual éta ka laboratorium Dr Grübler di Leipzig, nu masarkeunana minangka azure I sarta ngaku yén ngan vérsi maranéhna nu mangrupa pewarna Giemsa asli.
Idéntitas azure éta masih dipadungdengkeun. Sabagian nganggap yén éta ngan métilén biru nu geus dipolikromkeun, nu séjén nganggap yén éta beunghar ku azure B. Jawabanana muncul alatan perang. Nalika zat warna Jérman teu bisa diala, tim United States Public Health Service, Ralph Lillie bareng jeung Maurice Roe sarta Aimee Wilcox, manggihan yén pewarnaan pangalusna asalna tina tilu komponén nu dipisahkeun: métilén biru nu teu dirobah, produk panguraianana nu geus didémétilasi nyaéta azure B, jeung éosin. Azure B ngagantikeun azure I nu teu sadia, sarta tilu komponén éta masih jadi dasar pewarnaan nu dipaké pikeun ngadiagnosis malaria kiwari.
Kimia ngeunaan kumaha tilu komponén éta silih interaksi dina kaca objék mangrupa patarosan séjén jeung kaca nu béda. Peran zat warna jeung kimia pewarnaan jinis Romanowsky ngabahas naon nu dilakukeun ku azure B jeung éosin masing-masing sarta naha pasangan éta ngahasilkeun warna nu teu bisa dihasilkeun ku salah sahijina nyalira. Ari kaca mikroskopi jeung aplikasi laboratorium ngabahas sisi praktisna: naon nu ditémbongkeun ku hiji préparat, sarta kumaha meunteun naha hiji produk cocog pikeun métode nu rék dipaké.
Bagian sajarah nu masih lumaku kiwari
Hiji rincian dina carita ieu henteu eureun jadi kanyataan dina 1902. Salila kira-kira lima puluh taun, komponén pangpentingna dina pewarna malaria standar dunya téh mangrupa pangotor nu teu boga ngaran. Éta aya sacara teu kahaja, jumlahna béda-béda antara botol, idéntitasna jadi rusiah dagang salila sabagian mangsa éta, sarta proporsina dipadungdengkeun nepi ka taun 1940-an. Jalma-jalma nu maké pewarna éta lain teu ati-ati. Maranéhna teu boga cara pikeun nyaho naon nu aya dina botol.
Vérsi modéren tina masalah nu sarua nyaéta spésifikasi nu ngan ngajelaskeun sabagian tina bahan. Kasaluyuan jeung USP mangrupa jalan pikeun ngahontal kamurnian pangluhurna nu ditawarkeun ku pasar, lantaran éta standar lengkep nu dipedalkeun, lain ngan hiji pangukuran: idéntitas, kamurnian, pangotor organik kaasup zat warna azure, sésa pangleyur, pangotor unsur, résidu sanggeus dipijarkeun, wates mikroba jeung éndotoksin baktéri. Blupreme meunangkeun métilén biruna ti produsén farmasi sarta medalkeun sertipikat analisis lengkep, sangkan unggal butir dina daptar éta bisa dipariksa, lain saukur diklaim. Sertipikat nu ngalaporkeun hasil logam beurat sarta nyebut éta patuh kana USP sarua jeung botol jaman baheula nu dilabélan "métilén biru nu geus asak": bisa waé mangrupa réagén nu alus, tapi labélna teu ngajelaskeun naon nu aya di jerona.