Maca tampilan koloni E. coli jeung koloni séjén dina agar EMB

Saurang mahasiswa ngaguratkeun sampel anu can dipikanyaho kana agar eosin biru metilén, ngainkubasikeunana sapeuting, tuluy manggihan cawan anu eusina koloni poék kalayan hérang héjo. Catetanana nyebutkeun "E. coli, geus dikonfirmasi." Éta catetan nyieun klaim anu ngaleuwihan bukti tina cawan. Cawan éta némbongkeun fénotipe pertumbuhan jeung fermentasi dina kaayaan husus. Idéntitas spésiés mangrupa klaim anu béda sarta merlukeun bukti séjén.

Pituduh ieu nganggap hasil agar EMB minangka pancén interpretasi. Eusina ngajelaskeun gagasan dasarna, nungtun maca atlas ilustrasi cawan katut kontrolna, sarta nyebutkeun kaayaan nalika gambaran dina buku ajar bisa nyasabkeun.

Gagasan dasar di balik cawan

Agar EMB téh selektif sakaligus diferensial. Zat warna eosin Y jeung biru metilén neken loba organisme Gram positif, ku kituna médium ieu leuwih ngarojong pertumbuhan organisme Gram négatif. Zat warna anu sarua ogé jadi indikator: nalika hiji organisme ngaférméntasi gula anu aya sarta ngahasilkeun asam lokal anu cukup, koloni nyerep loba zat warna tuluy robah jadi wungu poék nepi ka hideung kabiruan. Lamun produksi asamna kuat, beungeut koloni bisa némbongkeun hérang héjo métal anu robah nurutkeun sudut panénjo. Protokol ASM pikeun cawan agar eosin biru metilén ngajelaskeun gabungan seleksi jeung diferensiasi ieu sarta nyadiakeun poto rujukan pikeun pangajaran.

Aya hiji rinci anu penting saméméh maca hasil naon waé: pariksa formulasi anu dipaké. Formulasi Holt Harris Teague anu leuwih heubeul ngandung laktosa ditambah sukrosa, sedengkeun Levine EMB ngan ngandung laktosa. Organisme anu ngaférméntasi sukrosa tapi henteu laktosa, saperti loba isolat Serratia marcescens, bisa béda tampilanna dina dua vérsi éta. Dokuméntasi produsén pikeun média EMB nétélakeun bédana formulasi ieu sacara écés. Catet produsén jeung formulasina dina buku catetan babarengan jeung hasilna.

Agar EMB anu geus disiapkeun tapi can diinokulasi biasana warnana coklat kamérang nepi ka wungu kamérang, sakapeung rada héjo atawa ngandung éndapan lemes. Warna latar éta lain pertumbuhan. Bandingkeun unggal hasil bacaan jeung cawan anu can diinokulasi atawa kaayaan dasar anu geus didokuméntasikeun, sarta baca cawan primér sanggeus kira-kira 18 nepi ka 24 jam inkubasi aérobik dina 35 nepi ka 37 C, iwal lamun protokol pangajaran nangtukeun hal séjén. Inkubasi anu leuwih lila bisa ngarobah tampilan fermentasi.

Cara niténan cawan

Paké dua rupa cahaya. Mimitina pariksa cawan dina cahaya pantulan atawa cahaya miring, tuluy déngdékkeun: hérang métal téh robah nurutkeun sudut panénjo sarta bisa muncul atawa leungit. Tuluy pariksa ku cahaya anu nembus cawan pikeun meunteun warna koloni jeung puseur anu poék. Paké koloni anu papisah kalayan hadé, sabab koloni anu padet jeung koloni tatanggana ngarobah akumulasi asam lokal sarta bisa ngurangan atawa nguatkeun warna. Kumpulan gambar ASM némbongkeun ieu sacara langsung: E. coli dina kultur campuran bisa leungit hérang anu diarepkeun lantaran organisme di sabudeureunana ngarobah lingkungan asam.

Sertakeun kontrol iraha waé latihanana ngamungkinkeun. Susunan kontrol anu ilahar dipaké dina pangajaran nyaéta E. coli ATCC 25922 pikeun fénotipe hideung kabiruan jeung hérang métal, nonfermenter saperti Salmonella Typhimurium ATCC 14028 atawa Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 pikeun fénotipe teu warnaan, sarta organisme Gram positif saperti Enterococcus faecalis atawa Staphylococcus aureus minangka kontrol inhibisi, sakumaha didaptarkeun dina tabél QC baku pikeun média EMB. Lamun kontrol positif henteu némbongkeun hérang, curigaan heula inkubasi, kapadetan koloni, atawa formulasi saméméh curiga kana sampel anu can dipikanyaho.

Atlas ilustrasi cawan

Cawan di handap mangrupa ilustrasi anu dijieun, lain poto kultur nyata. Ieu némbongkeun pola anu kudu ditéangan, lain warna persis tina hiji galur nu tangtu. Bandingkeun jeung poto rujukan ASM sarta jeung cawan nyata ti laboratorium pangajaran.

Cawan 1: Escherichia coli dina agar EMB, fermenter laktosa anu kuat

E. coli dina agar EMB biasana warnana wungu poék nepi ka hideung kabiruan, mindeng kalayan puseur poék sarta hérang héjo métal tina produksi asam anu kuat. Hérang téh ciri anu kasohor anu ditéangan ku mahasiswa, tapi anggap éta minangka bukti pangrojong, lain définisi. Kakuatan hérangna rupa-rupa gumantung kana galur, lilana inkubasi, kapadetan koloni, jeung sudut panénjo. Henteuna hérang henteu ngaluarkeun kamungkinan E. coli, sarta koloni poék tanpa hérang ogé bisa nunjukkeun sababaraha fermenter séjén. Pilih koloni anu papisah kalayan hadé pikeun sagala pagawéan lanjutan, ulah maca tina séktor anu koloni-kolonina padet.

Cawan 2: Klebsiella pneumoniae dina agar EMB, fermenter mukoid

Klebsiella pneumoniae dina agar EMB biasana ngabentuk koloni gedé, ngagurilap, jeung mukoid dina warna pink-wungu nepi ka coklat-wungu, mindeng kalayan puseur poék tapi biasana tanpa hérang métal anu kuat. Morfologi sarupa aya dina fermenter anu patali, saperti Enterobacter. Tékstur mukoid jeung ukuran koloni mangrupa bagian tina bacaan: koloni pink anu leutik jeung datar boga bobot interpretasi anu béda jeung koloni mukoid gedé anu ngagunduk. Saperti dina E. coli, cawan ngan méré indikasi fénotipe fermentasi, sarta panamaan nepi ka tingkat spésiés merlukeun konfirmasi biokimia anu dijelaskeun di handap.

Cawan 3: Salmonella dina agar EMB jeung nonfermenter séjén, koloni teu warnaan

Salmonella dina agar EMB jeung organisme patali anu henteu ngaférméntasi laktosa, kaasup Shigella jeung loba isolat Pseudomonas, biasana tumuwuh minangka koloni teu warnaan nepi ka rada tembus cahaya atawa konéng ambar pucet. Sababaraha formulasi jeung kaayaan méré nuansa pink samar, jadi koloni pink pucet henteu otomatis mangrupa fermenter. EMB henteu ngabédakeun Salmonella ti Shigella atawa ti nonfermenter séjén; éta bédana kudu ditangtukeun ku tés salajengna. Perhatikeun ogé yén galur Salmonella positif laktosa kalayan koloni métal siga E. coli geus didokuméntasikeun, anu jadi alesan tambahan naha hiji cawan wungkul henteu bisa ngaréngsékeun identifikasi.

Cawan 4: Serratia marcescens jeung jebakan formulasi

Serratia marcescens dibéré bagian sorangan lantaran mahasiswa mindeng ngarepkeun koloni beureum tuluy salah maca cawan. Kalolobaan isolat klinis henteu ngaférméntasi laktosa, jadi dina Levine EMB biasana tampil pucet nepi ka warnana samar. Lantaran loba isolat ngaférméntasi sukrosa, formulasi anu ngandung sukrosa bisa ngahasilkeun réaksi anu leuwih poék atawa leuwih patali jeung asam. Ulah ogé ngarepkeun pigmén prodigiosin beureum anu klasik dina 35 nepi ka 37 C; produksi pigmén henteu bisa diandelkeun dina suhu inkubator. Lamun protokol nyebut Serratia marcescens dina agar EMB, pariksa formulasi mana anu dijadikeun dasar éta pernyataan. Hiji tinjauan métabolisme Serratia nyimpulkeun pola négatif laktosa jeung fermentasi sukrosa anu rupa-rupa di balik jebakan ieu.

Cawan 5: kontrol jeung organisme anu dihambat

Organisme Gram positif saperti Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus, jeung Bacillus umumna dihambat atawa pertumbuhanana diteken pisan dina agar EMB, sanajan inhibisi henteu mutlak pikeun unggal galur. Sakumpulan kontrol ngajadikeun bacaan bisa dipertanggungjawabkeun: kontrol E. coli kuduna némbongkeun pertumbuhan anu hadé kalayan warna hideung kabiruan jeung hérang, kontrol nonfermenter kuduna némbongkeun pertumbuhan teu warnaan, sarta kontrol inhibisi kuduna némbongkeun saeutik atawa euweuh pertumbuhan. Lamun kontrol inhibisi tumuwuh kalayan hadé, léngkah selektif geus gagal sarta unggal bacaan séjén dina bets éta kudu dicurigaan. Métode ngawarnaan ngajawab patarosan anu béda ti média kultur; pikeun bagian laboratorium anu patali jeung ngawarnaan kaca objék, tingali atlas ngawarnaan ku biru metilén.

Babandingan anu aya watesna

Tilu kalimah nyimpulkeun tampilan anu nyasabkeun. Poék henteu sarua jeung E. coli, sabab Klebsiella, Enterobacter, jeung fermenter séjén ngabentuk puseur poék tanpa hérang. Pink henteu sarua jeung Klebsiella, sabab fermenter sedeng atawa laun sarta sababaraha organisme anu biasana dianggap nonfermenter bisa tampil pink atawa wungu lavender. Hérang henteu sarua jeung E. coli anu geus pasti, sabab fermenter kuat séjén bisa ngahasilkeunana. Protokol pangajaran jeung gambar kultur campuranana ngagambarkeun unggal kasalahan ieu.

Wates konfirmasi

Agar EMB ngalaporkeun fénotipe, lain spésiés. Organisme anu béda bisa boga tampilan koloni anu sarua, sarta hiji organisme bisa nyimpang tina gambaran buku ajarna lantaran galur, umur, kapadetan koloni, formulasi, jeung inkubasi. Ku sabab éta, alur kerja pangajaran jeung klinis nganggap morfologi EMB minangka indikasi samentara.

Alur kerja mahasiswa anu bisa dipertanggungjawabkeun nyaéta: jelaskeun koloni anu papisah (ukuran, warna, puseur, hérang dina cahaya miring, ciri mukoid), catet formulasi, lilana jeung suhu inkubasi, sarta kontrol; tuluy subkulturkeun koloni anu papisah kalayan hadé nepi ka murni saméméh ngalakukeun tés konfirmasi naon waé. Tindak lanjut anu ilahar ngawengku ngawarnaan Gram ditambah réaksi IMViC pikeun idéntifikasi samentara E. coli jeung koliform, TSI atawa KIA sarta panel biokimia husus organisme pikeun organisme enterik, katut idéntifikasi sérologis, MALDI TOF, atawa idéntifikasi séjén anu geus divalidasi lamun pancénna merlukeun. Pikeun latar ngeunaan posisi EMB di antara média enterik selektif jeung diferensial, tingali bubuka média kultur enterik jeung tindak lanjut ngawarnaan Gram. Pikeun patarosan patali ngeunaan naon anu bisa jeung henteu bisa dibuktikeun ku pewarnaan biru dina kaca objék, atlas ngawarnaan ku biru metilén misahkeun pangamatan jeung kacindekan kalayan prinsip anu sarua.

Tulis pangamatan saméméh kacindekan. "Koloni hideung kabiruan poék kalayan hérang héjo anu gumantung kana sudut panénjo dina Levine EMB dina 24 jam, saluyu jeung fermentasi laktosa anu kuat" bisa dipertanggungjawabkeun. "E. coli, geus dikonfirmasi" merlukeun léngkah konfirmasi anu teu bisa disadiakeun ku cawan wungkul.