Beddelka Methylene Blue ee Mikroskoobka

Muunad bakteeriyo oo fudud, crystal violet ayaa beddeli karta methylene blue marka ujeeddadu tahay in la arko qaabka unugga. Unugyada nool, beddelka ka habboon wuxuu noqon karaa phase contrast iyada oo aan wax midabayn ah la isticmaalin. Doorashadu waxay ku xidhan tahay waxa aad u baahan tahay inaad fiiriso.

Ka soo qaad laba qof inay baarayaan isla dhaqanka bakteeriyada. Mid wuxuu doonayaa inuu kala saaro bakteeriyada ulaha u eg iyo unugyada wareegsan. Kan kale wuxuu doonayaa inuu ogaado in daaweyn ay dishay bakteeriyada iyo in kale. Midab siinaya qofka koowaad sawir cad ayaa laga yaabaa inuusan qofka labaad siin jawaab la adeegsan karo.

Ka hor intaadan dooran beddel, dhammaystir weedhan: “Waxaan u baahanahay inaan ku fiiriyo ___ gudaha ___, unugyaduna waa inay / uma baahna inay sii noolaadaan.” Weedhani waxay qeexaysaa hawsha uu midabku qabanayo.

Ka bilow muunadda iyo su'aasha

Marka hore go'aami haddii unugyadu ay tahay inay sii noolaadaan, ka dibna aqoonso astaanta aad u baahan tahay inaad fiiriso:

Unugyadu waa inay sii noolaadaan: dhaqdhaqaaq ama qaab, tixgeli phase contrast ama DIC aan midabayn lahayn; DNA-ga nukliyeerka, tixgeli Hoechst 33342 oo leh fluorescence; daacadnimada xuubka, dooro tijaabo la xaqiijiyey sida SYTO 9 oo ay weheliso propidium iodide.
Unugyadu uma baahna inay sii noolaadaan: qaab-dhismeedka bakteeriyada, tixgeli midabayn fudud oo crystal-violet ah ama midabayn taban oo nigrosin ah; falcelinta Gram, isticmaal habka dhammaystiran ee Gram-stain; DNA-ga nukliyeerka ee unugyada la sugay, tixgeli DAPI fluorescence.

Isticmaal jadwalkan si aad u barbar dhigto xaddidaadaha laan kasta. Kuwani waa doorashooyin hab-raac, mana aha tilmaamo dhalooyinka lagu kala beddelanayo hab-raac hore u jiray.

Waxa aad u baahan tahay inaad fiiriso	Muunadda iyo qalabka	Beddelka la tixgelin karo	Xaddidaadda ugu weyn
Qaabka iyo habaynta bakteeriyada	Smear bakteeriyo oo la diyaariyey; brightfield	Crystal violet simple stain	Waxay muujisaa morphology; ma xaqiijiso falcelinta Gram ama noolaanshaha.
Xuduudaha unugyada oo ka muuqda asal madow	Diyaarinta bakteeriyoolojiga; brightfield	Nigrosin negative stain	Diyaarinta iyo formulation-ku waa muhiim; unug aan midabaysnayn khasab ma aha inuu nool yahay.
Falcelinta Gram	Smear bakteeriyo oo la diyaariyey; brightfield	Complete Gram-stain method	Waxay u baahan tahay taxanaha reagents-ka oo dhammaystiran iyo controls.
Dhaqdhaqaaq ama isbeddello ku dhaca unugyada nool	Diyaarin qoyan oo ku habboon; phase contrast ama DIC	No stain	Waxay u baahan tahay optics ku habboon; contrast-ku ma aqoonsado molecule.
DNA-ga nukliyeerka	Unugyo la sugay; fluorescence	DAPI	Waxay u baahan tahay excitation iyo emission filters ku habboon.
DNA-ga nukliyeerka ee unugyada nool	Unugyo nool; fluorescence	Hoechst 33342	Gelitaanka unugga ma xaqiijiyo in xaaladaha sawir-qaadistu aanay waxyeello lahayn.
Daacadnimada xuubka bakteeriyada	Bakteeriyo aan la sugin; fluorescence	SYTO 9 with propidium iodide	Midabaynta xuubku waa cabbir aan toos ahayn oo noolaanshaha ah.

Smear fudud, habka si taxaddar leh u beddel

Crystal violet waa musharrax wax-ku-ool ah marka hawshu tahay aragti hal-midab ah oo ku saabsan morphology-ga bakteeriyada. Buugga Bacteriological Analytical Manual ee FDA wuxuu taxayaa laba formulation oo crystal-violet ah oo ku habboon midabayn fudud. Isticmaal formulation la diiwaangeliyey iyo habka diyaarintiisa; magaca dye-ga oo keliya ma qeexayo reagent shaqaynaya.

Crystal violet sidoo kale waxay ka muuqataa Gram staining, laakiin taasi kama dhigeyso crystal-violet simple stain mid ah Gram stain. Gudaha hab-raaca ASM Gram-stain, natiijada kala-soocidda waxay ku xidhan tahay crystal violet, iodine, decolorization, iyo counterstaining oo si taxane ah u shaqeeya. Ka tagista tallaabooyinkaas waxay beddeshaa waxa sawirku xaqiijin karo. Eeg midabaynta fudud marka loo eego Gram staining si aad u aragto farqigaas.

Nigrosin waxay bixisaa hab kale oo lagu muujiyo xuduudaha: waxay madoobaysaa asalka iyadoo unugyada bakteeriyadu ay ahaanayaan kuwo marka la barbar dhigo iftiin leh. Waxaa jira faahfaahin waxtar leh oo ku jirta tilmaamaha nigrosin ee Merck oo liis guud oo beddello ahi seegi karo. Formulation-ka shaqaynaya ee la cayimay wuxuu ka kooban yahay formaldehyde. Sidaas darteed, kuma soo gunaanadi kartid ku-habboonaanta unugyada nool ereyada “negative stain,” inkasta oo unugyada laftoodu ay u muuqdaan kuwo aan midabaysnayn. Hubi formulation-ka oo dhan iyo diyaarinta muunadda.

Muunadaha nool, tixgeli inaad beddesho optics-ka

Haddii aad rabto inaad daawato unugyada oo dhaqaaqaya ama kala qaybsamaya, ku darista dye kale waxay adkayn kartaa fiirinta. Sida Nikon ku sharxayo hagihiisa contrast-ka muunadaha hufan, phase contrast iyo differential interference contrast, ama DIC, waxay muunadaha ka dhigaan kuwo muuqda iyadoo laga faa'iidaysanayo kala duwanaanshaha sifooyinkooda indhaha. Waxay muujin karaan unugyo nool oo aan midabaysnayn, haddii mikroskoobku leeyahay qaybaha loo baahan yahay.

Doorashadani waxay ilaalisaa diyaarinta aan midabaysnayn, laakiin waxay beddeshaa macluumaadka la heli karo. Waxaad raaci kartaa xuduud ama dhaqdhaqaaq adigoon garanayn molecule-ka sameeyey contrast-ka. Haddii su'aashu tahay meesha molecule-ku ku yaal, dooro hab calaamadayn ku habboon.

DNA-ga nukliyeerka, isbarbardhigga DAPI iyo Hoechst stains ee Invitrogen wuxuu kala saaraa isticmaalka caadiga ah ee DAPI ee unugyada la sugay iyo Hoechst 33342 oo si fiican unugga u dhex geli karta, taas oo loo doorbido calaamadeynta unugyada nool. Labaduba waxay u baahan yihiin qalab fluorescence ah. Midkoodna ma aha beddel toos ah oo loogu talagalay midab brightfield ah.

Ula dhaqan soo-gaadhista dye-ga iyo iftiiminta sidii xaalado tijaabo. Isbarbar dhig diyaarinta midabaysan iyo tan aan midabaysnayn marka dabeecadda unugyadu tahay waxa aad cabbirayso.

Unug cas si toos ah uma aha unug dhintay

SYTO 9 iyo propidium iodide badanaa waa la isku daraa si loo qiimeeyo daacadnimada xuubka bakteeriyada. Buugga BacLight wuxuu xuubabka aan dhaawacmin la xidhiidhiyaa midabayn cagaaran, halka xuubabka dhaawacmay lala xidhiidhiyo midabayn cas. Fasiraaddaas waxay u baahan tahay in lagu xaqiijiyo muunadda.

Daraasad 2019 ah oo ay sameeyeen Rosenberg iyo asxaabtiisu ayaa tusaale u ah dhibaatada. Biofilms-ka 24-hour ee E. coli ee saarnaa muraayad kuna jiray phosphate-buffered saline, qiyaastii 96% unugyada ayaa in situ u muuqday propidium-iodide-positive. Hase yeeshee, qorayaashu waxay qiyaaseen in 82% ay ahaayeen kuwo la kori karo ka dib goosashada. Sawirrada confocal-ka waxay muujiyeen unugyo leh gudaha cagaaran oo hoos yaalla walxo casaan loo midabeeyey, taasoo tilmaamaysa in extracellular nucleic acids ay qayb ka ahaayeen calaamadda marin-habaabinta ah.

Boqolleydaasi waxay sharxayaan cabbirro kala duwan oo laga sameeyey diyaarinta daraasadda, mana aha correction factor guud. Casharka waxtarka leh waa in la hubiyo waxa calaamadda dhaliyey. Biofilm gudaheeda, nucleic-acid dye wuxuu ogaan karaa walxo ka baxsan unugyada iyo sidoo kale gudaha unugyada dhaawacmay. Gunaanad ku saabsan noolaanshaha, cilmi-baarayaashu waxay ku talinayaan cabbirro is-dhammaystiraya, sida cultivation ama metabolic activity, iyagoo qiraya in mid kasta leeyahay xaddidaado.

Hubi waxa beddelku dhab ahaan ka kooban yahay

Hab kale oo midabayn ah weli wuxuu ka koobnaan karaa methylene blue. Giemsa waa tusaale: Merck wuxuu alaabtiisa ku tilmaamaa azure-eosin-methylene-blue solution, oo loogu talagalay adeegyo ay ka mid yihiin blood iyo bone-marrow smears. Waxay noqon kartaa hab ka duwan oo loogu talagalay muunad ka duwan, laakiin ma buuxinayso shuruud ah in methylene blue laga reebo.

Haddii ka saarista compound gaar ahi qayb ka tahay tijaabada, hubi aqoonsiga reagent-ka iyo formulation-ka ka hor intaadan isbarbar dhigin sawirrada. Hagaha methyl blue, methylene blue, iyo dyes magacyadoodu isu egyihiin wuxuu sharxayaa kala duwanaanshaha magacyada.

Xaqiiji beddelka ka hor intaadan isticmaalin natiijada

Hab cusub, samee isbarbardhig yar adigoo adeegsanaya muunado matala iyo control ku habboon. Meelaha ay suurtagal tahay, dejimaha mikroskoobka ka dhig kuwo la barbar dhigi karo. Diiwaangeli formulation-ka reagent-ka, diyaarinta muunadda, exposure-ka, iyo xaaladaha sawir-qaadista si sawir u muuqda mid ka wanaagsan loo baaro sababta uu u wanaagsan yahay halkii si keliya loo dooran lahaa.

Guusha ku qiimee su'aashii asalka ahayd. Morphology-ga, qiimee in xuduudaha iyo habaynta unugyadu weli si cad loo fasiri karo. Calaamadeynta nukliyeerka, qiimee meesha signal-ku yaal iyo background-ka. Noolaanshaha, dalbo caddayn ka badan kala-sooc midab oo soo jiidasho leh. Hagaha ballaadhan ee midabaynta methylene blue iyo adeegsiyada shaybaadhka wuxuu sharxayaa sida fiirinta iyo diyaarintu isugu xidhan yihiin.

Dooro beddelka ilaalinaya cabbirka aad u baahan tahay. Midabku waa hal sifo oo keliya oo sawirka natiijada ah.