ميٿيلين بلو سان خمير جون جاچون: جيئرن خلين جي ڳڻپ ۽ تنفس جو وقت ماپڻ

ڪم واري ميز تي ٻه ٽيوبون رکيل آهن. ٻئي نيريون آهن. هڪ ۾، خوردبين هيٺ نيرا خليا مئل خمير کي ظاهر ڪن ٿا. ٻيءَ ۾، ٽيوب جو نيري مان بي رنگ ٿيڻ ٻڌائي ٿو ته خمير جيئرو آهي ۽ تنفس ڪري رهيو آهي. رنگ ساڳيو، پر نتيجن جي معنيٰ ابتڙ. ٻنهي جاچن کي هڪ سمجهڻ سان هر نتيجو ابتو ٿي وڃي ٿو.

اهو فرق ئي هن سڄي مضمون جو موضوع آهي. ميٿيلين بلو هڪ آڪسائيڊيشن-تخفيف وارو رنگ آهي: آڪسائيڊ ٿيل حالت ۾ نيرو هوندو آهي، ۽ تخفيف ٿيڻ تي بي رنگ ليوڪوميٿيلين بلو بڻجي ويندو آهي. جيئري هجڻ جي ڳڻپ هن ڪيميائي خاصيت کي خوردبين هيٺ ٿوري وقت جي مشاهدي لاءِ استعمال ڪري ٿي. تنفس جو تجربو ان کي گڏيل محلول ۾ وقت ماپي ويندڙ ردعمل لاءِ استعمال ڪري ٿو. هر جاچ کي پنهنجو طريقو، پنهنجا ڪنٽرول ۽ نتيجن بابت پنهنجي محتاط پرک گهرجي.

جيئري هجڻ جي ڳڻپ: ٿوري وقت لاءِ رنگيو، پوءِ ترت ڏسو

بيئر ٺاهڻ ۾ استعمال ٿيندڙ طريقو سڀ کان وڌيڪ معياري بڻايل صورت آهي. 2% سوڊيم سائٽريٽ ۾ 0.01% w/v ميٿيلين بلو تيار ڪريو، ان کي خمير جي معلق محلول سان 1:1 تناسب ۾ ملايو، ۽ هڪ مختصر مقرر وقفي کان پوءِ آميزش ڏسو. شايع ٿيل وقت Brewing Science Institute جي دستي ڪتاب ۾ 1 کان 2 منٽ، ۽ تحقيقي طريقن ۾ لڳ ڀڳ 5 منٽ آهن، جڏهن ته OIV جي شراب جي خرد حياتيات واري طريقي ۾ 10 منٽن اندر مشاهدو ڪرڻ ضروري آهي. ڳڻپ واري آميزش ۾ رنگ جي آخري ڪنسنٽريشن لڳ ڀڳ 0.005% ٿئي ٿي. بهتر ڪيل Neubauer چيمبر ڀريو، ۽ لڳ ڀڳ 400x تي گهري نيري رنگ وارن خلين کي غير جيئرو ۽ اڻ رنگيل خلين کي جيئرو شمار ڪريو. OIV طريقي ۾ هلڪي نيري رنگ وارا خليا جيئرا ڳڻيا وڃن ٿا، جيڪو اڳ ئي هيٺ بيان ڪيل ذاتي فيصلي واري مسئلي ڏانهن اشارو ڪري ٿو.

خلين جي ڪنسنٽريشن چيمبر جي هندسي ماپن مان نڪري ٿي. جڏهن وچ وارو پورو 1 mm چورس ڳڻيو وڃي، ته في mL خلين جو تعداد N ضرب پتلو ڪرڻ جو عامل ضرب 10^4 جي برابر ٿئي ٿو، جتي N ان ايراضيءَ ۾ ڳڻيل خلين جو تعداد آهي، جيئن ASBC جي خمير وارن طريقن ۾ بيان ٿيل آهي. جيئري هجڻ جو حساب وڌيڪ سادو آهي: اڻ رنگيل خليا ورهايو ڪل خلين تي، پوءِ 100 سان ضرب ڏيو. FEMS جي بيئر ٺاهڻ واري تقابلي مطالعي ۽ OIV جي عمل موجب، جيئري هجڻ جو اندازو لڳائڻ لاءِ لڳ ڀڳ 400 خليا ڳڻيو. حدن بابت هڪ ئي قاعدو مسلسل استعمال ڪريو؛ مثال طور، هيٺين ۽ کاٻي گرڊ لائينن تي موجود خليا شامل ڪريو، ۽ مٿين ۽ ساڄي لائينن تي موجود خليا خارج ڪريو.

ڳڻپ شروع ڪرڻ کان اڳ ڪلين بابت قاعدو مقرر ڪرڻ ضروري آهي. هڪ عام رواج موجب، ڪلي جڏهن ماءُ خليي جي سائيز جي لڳ ڀڳ اڌ جيتري ٿئي ته ان کي الڳ خليه ڳڻيو وڃي ٿو؛ ان کان ننڍي هجي ته ماءُ خليي سان گڏ ڳڻيو وڃي ٿو. جيڪو به قاعدو چونڊيو، اهو هر چورس تي لاڳو ڪريو ۽ ورڪ شيٽ تي لکو ته جيئن ايندڙ ماڻهو به ساڳيو طريقو ورجائي.

ڳڻپ جي ورڪ شيٽ (هي ڇاپيو)

هي ورڪ شيٽ هن مضمون لاءِ تيار ڪيل اصل مواد آهي. ان کي نوٽ بڪ ۾ نقل ڪريو يا هر نموني لاءِ هڪ ڪاپي ڇاپيو.

جيئري هجڻ (%) = 100 x اڻ رنگيل / (اڻ رنگيل + گهرا نيرا). في mL ڪل خليا = N x پتلو ڪرڻ جو عامل x 10^4، جتي N مقرر ڪيل چيمبر ايراضيءَ مان حاصل ٿئي ٿو. نتيجي جي ڀرسان رنگڻ جو وقفو لکو، ڇاڪاڻ ته وقت کان سواءِ جيئري هجڻ جو انگ ورجائي ساڳئي نموني حاصل نٿو ڪري سگهجي.

جيئري هجڻ جا انگ ڇو بدلجن ٿا

وقت پهرين مداخلت آهي، ۽ ان جو اثر ٻنهي طرفن کان ٿئي ٿو. تحول جي لحاظ کان سرگرم خليا رنگ کي تخفيف ڪن ٿا، تنهنڪري جلد مشاهدو ڪرڻ سان جيئرا خليا رنگ جي تخفيف مڪمل ڪرڻ کان اڳ نظر اچي سگهن ٿا ۽ غلطيءَ سان مئل شمار ٿي سگهن ٿا. پر گهڻي وقت تائين رنگ سان رابطي ۾ رهڻ پاڻ به زهريلو اثر رکي ٿو ۽ واقعي خراب ٿيل نيرا خليا پيدا ڪري ٿو، جنهن سان مئل هجڻ جا گمراهه ڪندڙ رنگيل نتيجا ملن ٿا. تنهنڪري هڪ ليبارٽري تدريسي طريقو 5 منٽن اندر ڳڻپ ڪرڻ جي هدايت ڏئي ٿو، جيئن Wisconsin جي خمير بابت تدريسي طريقي ۾ لکيل آهي. محتاط بيان اهو آهي ته ميٿيلين بلو سان درجابندي وقت تي دارومدار رکي ٿي، تنهنڪري هڪ مختصر وقفو مقرر ڪريو ۽ سلسلي جي هر نموني ۾ ان کي ساڳيو رکو.

گهٽ جيئري هجڻ وارن نمونن ۾ ٻيو تعصب به هوندو آهي. معياري طريقو خبردار ڪري ٿو ته لڳ ڀڳ 80% کان هيٺ ميٿيلين بلو حقيقي جيئري هجڻ کي وڌائي ڏيکاري سگهي ٿو، ڇاڪاڻ ته جيڪي خليا اڃا رنگ جي تخفيف ڪن ٿا، ضروري ناهي ته انهن ۾ افزائش جي صلاحيت به باقي هجي. بيئر ٺاهڻ بابت ادب ۾ به جيئري هجڻ تمام گهڻو گهٽجڻ تي اهڙي ئي بي اعتباري بيان ٿيل آهي. ميٿيلين بلو کي هڪ تڪڙو، لڳ ڀڳ اندازو سمجهو، ۽ گهٽ جيئري هجڻ بابت اهم فيصلا، جهڙوڪ ڪلچر کي ٻيهر خمير وجهڻ لاءِ استعمال ڪرڻ، پليٽ ڳڻپ يا ڪنهن ٻئي مڪمل ڪندڙ رنگ سان تصديق ڪريو.

نموني جي ميٽرڪس جا اثر ٽئين نمبر تي اچن ٿا. OIV طريقو لڳ ڀڳ pH 4.6 تي هلي ٿو ۽ خبردار ڪري ٿو ته گهٽ pH وارا، مضبوط بفر ٿيل نمونا رنگ جي صحيح عمل کي روڪين ٿا. اهو 100 g/L کان وڌيڪ شگر واري حالت ۾ به هن جاچ کان پاسو ڪرڻ جي صلاح ڏئي ٿو، ڇاڪاڻ ته خليا گمراهه ڪندڙ هلڪي نيري رنگ ۾ نظر اچن ٿا. رنگڻ واري pH جي تجرباتي ڀيٽ ۾ آزمائشي حد اندر حساسيت ۾ نمايان تبديلي ملي، جيڪا pH تي دارومدار رکندڙ ميٿيلين بلو طريقي جي مطالعي سان مطابقت رکي ٿي. ڪچرو هڪ الڳ مسئلو آهي: گندي ماش ۾ رنگيل ذرڙا مئل خلين جهڙا لڳن ٿا ۽ مختلف ڳڻپ ڪندڙن جي نتيجن ۾ فرق وڌائين ٿا.

اهو فرق ماپيل آهي، رڳو ٻڌل ڳالهه ناهي. FEMS جي خمير واري ڀيٽ ۾ ٻڌايل ڇهن مهينن جي بيئر ٺاهڻ واري آزمائش ۾، ميٿيلين بلو جون ٻه ڀيرا ڪيل ماپون سراسري 6.1% معياري انحراف رکنديون هيون، جڏهن ته آڪسونول فلو سائٽوميٽري لاءِ اهو 0.2% هو؛ ساڳئي نموني تي ٻن ڳڻپ ڪندڙن جا نتيجا 13 سيڪڙو پوائنٽن تائين مختلف هئا. 2023 ۾ جيئري هجڻ جي طريقن جي مقداري ڀيٽ ۾ فلوريسينس خوردبيني ۽ فلو سائٽوميٽري گهڻو وڌيڪ درست مليا، ۽ اهو به ڏيکاريو ويو ته ڪارڪردگي نوع ۽ ميٽرڪس تي دارومدار رکي ٿي. Painting ۽ Kirsop (PMID 24430080) جي روايتي طريقي جي وضاحت اڃا به بنيادي حوالو آهي، ۽ خمير جي جيئري هجڻ ۽ حياتياتي سرگرمي جي جاچن جو وسيع جائزو (PMID 25154541) ميٿيلين بلو کي حتمي بدران مڪمل ڪندڙ جاچن ۾ رکي ٿو. ٽرائپن بلو هتي پاڻمرادو بهتر متبادل ناهي: اهو جھلي جي سالميت وڃائڻ کي ظاهر ڪري ٿو، جڏهن ته ميٿيلين بلو رنگ جي جذب ٿيڻ سان گڏ تخفيفي سرگرمي کي ظاهر ڪري ٿو؛ تنهنڪري دٻاءَ هيٺ آيل خلين جي درجابندي ٻنهي رنگن سان مختلف ٿي سگهي ٿي.

تنفس جو تجربو: نيري رنگ جي غائب ٿيڻ جو وقت ماپيو

ٻي جاچ ۾ خوردبين استعمال ئي نه ٿي ٿئي. خمير، گلوڪوز ۽ پتلو ميٿيلين بلو بند ٽيوب ۾ وڌا وڃن ٿا، ۽ گهڙي ماپي ٿي ته نيرو رنگ ختم ٿيڻ ۾ ڪيترو وقت لڳي ٿو. جڏهن خليا تحولي عمل ڪن ٿا، ته اهي تخفيفي قوت مهيا ڪندڙ جزا پيدا ڪن ٿا، جيڪي نيري رنگ کي ان جي بي رنگ صورت ۾ بدلائين ٿا، جڏهن ته حل ٿيل آڪسيجن ان کي ٻيهر آڪسائيڊ ڪري نيرو بڻائي ٿي. جڏهن خليا آڪسيجن گهٽائي ڇڏين ٿا، ته مجموعي طور تخفيف غالب اچي ٿي ۽ ٽيوب بي رنگ ٿي وڃي ٿي. تنهنڪري آخري نقطو تنفس، رنگ جي ڪنسنٽريشن ۽ آڪسيجن جي دستيابي جي توازن کي ظاهر ڪري ٿو؛ ان کي ميٿيلين بلو جي تخفيف يا رنگ ختم ٿيڻ جي وقت طور رپورٽ ڪرڻ گهرجي، نه ته ماليڪيولي آڪسيجن جي استعمال جي سڌي شرح طور.

جيئري هجڻ جي ڳڻپ جي ڀيٽ ۾ گهڻو وڌيڪ پتلو رنگ استعمال ڪريو ته جيئن ماپيل وقت مناسب حد ۾ اچي. AQA جي A level لاءِ لازمي عملي ڪم جي دستي ڪتاب ۾ اهو چڱيءَ طرح معياري بڻايل آهي: لڳ ڀڳ 30 C تائين گرم ڪيل هر 100 mL پاڻيءَ ۾ 1 g گلوڪوز، استعمال کان بلڪل اڳ شامل ڪيل 5 g سڪل خمير، ۽ لڳ ڀڳ 0.001% ڪم وارو رنگ، جيڪو 1% اسٽاڪ محلول جي 0.1 mL کي پتلو ڪري 100 mL ڪرڻ سان تيار ٿئي ٿو. خمير ۽ گلوڪوز جي معلق محلول جا 2 mL، ڪم واري رنگ جي 2 mL سان ملايو، آزمائشي گرمي پد تي توازن ۾ آڻيو، هڪ ڀيرو 10 سيڪنڊن لاءِ لوڏيو، ٽائمر شروع ڪريو، ۽ ٻيهر نه لوڏيو. لوڏڻ سان آڪسيجن ٻيهر داخل ٿئي ٿي ۽ ٽيوب وري نيري ٿي وڃي ٿي؛ اهو طريقيڪار سبب پيدا ٿيندڙ سڀ کان وڏو مصنوعي اثر آهي. AQA موجب، تياري عام طور 35 C تي لڳ ڀڳ 5 منٽن اندر بي رنگ ٿيڻ گهرجي، ۽ آزمائشن جا سراسري وقت 20 C تي 275 s، 35 C تي 128 s ۽ 45 C تي 145 s هئا. اهي هڪ بندوبست جا مثال آهن، عالمي معيار ناهن. ڪنٽرول ٿيل حالتن ۾ تخفيف جي شرح ۽ تحولي لحاظ کان سرگرم خمير جي وچ ۾ مقداري لاڳاپي جي حمايت مخصوص تخفيفي مطالعا ڪن ٿا، جن ۾ PMID 25773544 طور فهرست ٿيل ڪم ۽ Yeast (2014) ۾ عمل جي ميڪانيزم بابت مطالعو شامل آهن.

وقت سان تبديليءَ جو مظاهرو (اصل مواد)

هيٺ ڏنل جدول هن مضمون لاءِ تيار ڪيل هڪ اصل مظاهرو آهي، جنهن ۾ مٿي بيان ڪيل AQA طرز جو بندوبست استعمال ڪيو ويو آهي: خمير ۽ گلوڪوز جي آميزش جا 2 mL، لڳ ڀڳ 0.001% ڪم واري رنگ جا 2 mL، هڪ ڀيرو 10 سيڪنڊن لاءِ لوڏڻ، پوءِ بنا ڇيڙڇاڙ جي انڪيوبيشن. داخلاون مثالي پڙهڻيون آهن، انهيءَ شڪل ۾ جنهن ۾ شاگردن جي گروهه کي رڪارڊ ڪرڻ گهرجن؛ شرح جو انڊيڪس، سيڪنڊن ۾ رنگ ختم ٿيڻ جي وقت سان 1 کي ورهائڻ طور بيان ڪيو ويو آهي. ساڳين ٽيوبن سان تجربو ڪريو ۽ انهن داخلائن جي جاءِ تي پنهنجون ماپيل قيمتون لکو.

ٽيوبن A، B ۽ C لاءِ شرح جي انڊيڪس کي گرمي پد جي مقابلي ۾ گراف تي ڏيکاريو. وکر پهرين مٿي وڃي ٿو، پوءِ هموار ٿئي ٿو يا هيٺ اچي ٿو؛ اهو اينزائم سان هلندڙ عمل جو متوقع نمونو آهي، سڌي لڪير ناهي. ٽيوبون D، E ۽ F ان وکر جا ڊيٽا نقطا ناهن. اهي ڪنٽرول آهن، جيڪي وکر جي معنيٰ سمجهڻ ممڪن بڻائين ٿا.

اهي ڪنٽرول جيڪي هر جاچ کي بامعنيٰ بڻائين ٿا

تنفس جي هر تجربي سان ٽي گڏيل ڪنٽرول گهرجن. اُٻاريل يا ماريل خمير، گلوڪوز ۽ رنگ واري آميزش نيري رهڻ گهرجي، جنهن مان ثابت ٿئي ٿو ته تيز تخفيف جيئري تحولي سرگرمي تي دارومدار رکي ٿي. جيئرو خمير ۽ رنگ، اضافي گلوڪوز کان سواءِ، سبسٽريٽ ڪنٽرول آهي؛ پر پوءِ به آهستي رنگ ختم ٿيڻ جي توقع رکو، ڇاڪاڻ ته خمير پنهنجي اندروني ذخيرن کي استعمال ڪري ٿو. خمير کان سواءِ گلوڪوز ۽ رنگ ڪيميائي بلينڪ آهن، جيڪو ضروري آهي، ڇاڪاڻ ته الڪلائن حالتن ۾ گلوڪوز، ڪنهن به خليي جي موجودگيءَ کان سواءِ ميٿيلين بلو جي تخفيف ڪري سگهي ٿو.

جيئري هجڻ جي ڳڻپ لاءِ مختلف قسم جو ڪنٽرول گهرجي: طريقيڪار جي هڪجهڙائي. ساڳيو رنگ جو اسٽاڪ محلول، ساڳيو ملائڻ جو تناسب، ساڳيو رنگڻ جو وقفو، ساڳي چيمبر ايراضي، ڪلين ۽ حدن جا ساڳيا قاعدا، ۽ جتي ممڪن هجي نموني جي سڃاڻپ کان اڻڄاڻ رهي ڳڻپ. جڏهن ٻن ڳڻپ ڪندڙن جا نتيجا ڏهن پوائنٽن جو فرق ڏيکارين، ته ورڪ شيٽ عام طور سبب پڌرو ڪري ٿي: مختلف وقت، نيري رنگ جي مختلف حد، يا ڪلين جا مختلف قاعدا. رنگيل خليا تيار ڪرڻ ۽ ڏسڻ جون ٽيڪنيڪون بيڪٽيريا کي سادي نموني رنگڻ جي طريقن سان لاڳاپيل آهن، جڏهن ته مختلف نمونن ۾ هي رنگ ڇا نمايان ڪري ٿو، ان جو وسيع جائزو خوردبيني رنگڻ جي ائٽلس ۾ آهي. نيري رنگ جي ڪنهن به شدت کي مقداري نموني پڙهڻ پٺيان موجود طبعيات لاءِ، جذب جو حالتن سان سڃاڻپ ڏنل حوالو وضاحت ڪري ٿو ته هر ضريب سان ان جي محلل، pH ۽ ڪنسنٽريشن جون حالتون ڇو گڏ هجڻ گهرجن.

سوال موجب جاچ چونڊيو. هن وقت ڪيترا خليا جيئرا آهن، اهو ڳڻپ جو سوال آهي، جنهن جو جواب خوردبين وٽ ورڪ شيٽ سان ملي ٿو. هي ڪلچر ڪيتري سرگرميءَ سان تنفس ڪري رهيو آهي، اهو ردعمل جي رفتار بابت سوال آهي، جنهن جو جواب اسٽاپ واچ ۽ ڪنٽرول ٿيل ٽيوبن سان ملي ٿو. ميٿيلين بلو ٻنهي لاءِ ڪم اچي ٿو، پر ڪڏهن به ساڳئي ٽيوب ۾ ساڳئي وقت نه.