G6PD جي ليبارٽري ٽيسٽن ۾ ميٿيلين بليو: رنگ اصل ۾ ڇا ڪري ٿو

هڪ شاگرد انڪيوبيشن کان پوءِ ٻن ٽيوبن کي ڏسي ٿو. هڪ جو رنگ توقع مطابق بدلجي ويو آهي. ٻيءَ جو نه. شاگرد نتيجو ڪڍي ٿو ته ٻئي مريض ۾ گلوڪوز-6-فاسفيٽ ڊي هائيڊروجنيز جي کوٽ آهي. اهو نتيجو صحيح ٿي سگهي ٿو، پر ان دليل ۾ اهو بنيادي تصور رهجي وڃي ٿو، جنهن تي ٽيسٽ ڪم ڪري ٿي. ٽيوب ۾ ڪا به شيءِ اينزائم کي سڌو سنئون نٿي ماپي. ٽيوب ان شيءِ کي ماپي ٿي، جيڪا اينزائم پيدا ڪري ٿو، ۽ ميٿيلين بليو وچولي طور ڪم ڪري ٿو.

جڏهن اها اڻسڌي ماپ سمجهه ۾ اچي ٿي، تڏهن طريقيڪار، ڪنٽرول نمونا ۽ غلط نتيجن جي ڊگهي فهرست من ماني نٿا لڳن.

مختصر جواب

G6PD جي جاچ ۾ ميٿيلين بليو هڪ ريڊاڪس اشارو آهي. G6PD اينزائم NADPH پيدا ڪري ٿو، ۽ NADPH تي دارومدار رکندڙ نظام نيري ميٿيلين بليو کي اختزال ذريعي ان جي بي رنگ ليوڪو صورت ۾ بدلائين ٿا، يا ان کي اليڪٽرانن جي منتقلي لاءِ استعمال ڪن ٿا. اينزائم جي معمولي سرگرمي سان اختزال مؤثر نموني ٿئي ٿو. گهٽ سرگرمي سان اختزال آهستي يا اڻپورو ٿئي ٿو. اهو ئي سمورو اشارو آهي.

ٻه تاريخي طريقا ساڳيو رنگ استعمال ڪن ٿا، پر انهن جا آخري مشاهدي وارا نتيجا مختلف آهن. انهن کي الڳ سمجهڻ سان گهڻي مونجهاري کان بچي سگهجي ٿو.

ٻه ٽيسٽون، هڪ رنگ، مختلف آخري نتيجا

پهريون طريقو ميٿيلين بليو جي سڌي اختزال واري ٽيسٽ آهي، جنهن کي Sass ۽ ساٿين بيان ڪيو ۽ پوءِ Gibbs ان جو جائزو ورتو. هتي آخري مشاهدو خود رنگ جو آهي: آڪسائيڊ ٿيل نيرو ميٿيلين بليو اختزال سان بي رنگ ليوڪوميٿيلين بليو ڏانهن بدلجي ٿو، ۽ ان تبديليءَ جي رفتار NADPH پيدا ڪرڻ جي صلاحيت کي ظاهر ڪري ٿي. بنيادي اسڪريننگ وارو مقالو PubMed تي Sass ۽ ساٿين (1966) جي نالي هيٺ درج آهي.

ٻيو طريقو Brewer جي ميٽهيموگلوبن اختزال واري ٽيسٽ آهي. سوڊيم نائٽرائٽ پهرين هيموگلوبن کي آڪسائيڊ ڪري ناسي ميٽهيموگلوبن ۾ بدلائي ٿو. پوءِ ميٿيلين بليو اليڪٽرانن جي منتقليءَ جي وچولي طور ڪم ڪري ٿو: اختزال ٿيل ميٿيلين بليو اختزالي برابر مقدار ميٽهيموگلوبن تائين منتقل ڪري ٿو، جنهن سان اهو واپس ڳاڙهي هيموگلوبن ۾ بدلجي ٿو. تنهنڪري ڏسڻ ۾ ايندڙ آخري فرق ناسي ۽ ڳاڙهي رنگ جي وچ ۾ آهي، نه نيري ۽ بي رنگ صورت جي وچ ۾. اصل طريقو عالمي صحت اداري جي بليٽن ۾ شايع ٿيو هو (Brewer ۽ ساٿي، 1960).

Brewer جي جاچ کي رنگ بي رنگ ڪرڻ واري ٽيسٽ چوڻ ڪيميائي لحاظ کان درست ناهي. رنگ بار بار پنهنجي ڪيميائي حالت بدلائي ٿو؛ رنگ جي تبديلي هيموگلوبن ۾ ٿئي ٿي. هيٺ ڏنل خاڪو ٻنهي رستن کي ڏيکاري ٿو.

بنيادي ردعمل

G6PD، پينٽوز فاسفيٽ واري رستي جي پهرين آڪسائيڊ ٿيندڙ مرحلي کي تيز ڪري ٿو:

Glucose-6-phosphate + NADP+ becomes 6-phosphogluconolactone + NADPH + H+

پختا ڳاڙها رت جا خليا NADPH لاءِ هن رستي تي گهڻو دارومدار رکن ٿا، جيئن Blood ۾ Luzzatto ۽ ساٿين جي جائزي (2020) ۾ بيان ٿيل آهي. NADPH، گلوٽاٿائون کي اختزال ٿيل حالت ۾ رکي ٿو ۽ خليي کي آڪسائيڊي نقصان کان بچائي ٿو. ميٿيلين بليو هن نظام ۾ اليڪٽران قبول ڪندڙ طور شامل ٿئي ٿو. مناسب G6PD سان مناسب NADPH ملي ٿو، جنهن سان مؤثر اختزال ٿئي ٿو. گهٽ G6PD هن زنجير کي ان جي پهرين ڪڙيءَ تي ٽوڙي ٿو.

رنگ کي انجڻ بدران ٻارڻ جي ماپ ڪندڙ ميٽر سمجهو. اهو NADPH جي فراهميءَ بابت ٻڌائي ٿو. ڪا ٻي شيءِ جيڪا ان فراهمي يا نتيجي جي پڙهڻ کي بدلائي ٿي، سا جين ۾ ڪا تبديلي اچڻ کان سواءِ به ميٽر جي سُئي کي هلائي سگهي ٿي.

Brewer قسم جو طريقيڪار ڪيئن هلندو آهي

ڏهاڪن دوران ريجنٽن جون ترڪيبون مختلف رهيون آهن، تنهنڪري سکيا لاءِ ڏنل وضاحت کي ڪلينڪي پروٽوڪول نه سمجهڻ گهرجي. هر ليبارٽري پنهنجي تصديق ٿيل معياري عملي طريقيڪار تي هلي ٿي. اها احتياط ذهن ۾ رکندي، روايتي ٽيوبن وارو بندوبست هيئن ڪم ڪري ٿو؛ هن شايع ٿيل عملدرآمد ۾ ان کي ٽن ٽيوبن ۽ 3 ڪلاڪن جي انڪيوبيشن سان بيان ڪيو ويو آهي:

1. مريض جي ٽيوب: سڄو رت، گلوڪوز، سوڊيم نائٽرائٽ ۽ ميٿيلين بليو. نائٽرائٽ ميٽهيموگلوبن ٺاهي ٿو، گلوڪوز ڳاڙهن خلين جي ميٽابولزم لاءِ ٻارڻ فراهم ڪري ٿو، ۽ رنگ NADPH تي دارومدار رکندڙ منتقليءَ جو وسيلي طور ڪم ڪري ٿو.
2. آڪسائيڊ ٿيل ڪنٽرول: رت، نائٽرائٽ ۽ گلوڪوز، پر ميٿيلين بليو نه. اهو ناسي ميٽهيموگلوبن وارو آخري رنگ ڏيکاري ٿو، جيڪو کوٽ واري نموني جي نمائندگي ڪري ٿو.
3. هيموگلوبن ڪنٽرول: رت ۽ پاڻي. اهو ڳاڙهي هيموگلوبن وارو آخري رنگ ڏيکاري ٿو، جيڪو معمولي نموني جي نمائندگي ڪري ٿو.
4. سڀني ٽيوبن کي 37 C جي ويجهو، عام طور 3 ڪلاڪن لاءِ، هلڪي نموني ملائيندي انڪيوبيٽ ڪريو.
5. هر ٽيوب مان ٿوري ماپيل مقدار وٺي مقطر پاڻيءَ ۾ پتلو ڪريو، ته جيئن خليا ٽٽن ۽ رنگن جو ڀيٽ ڪرڻ واضح ٿئي.
6. مريض جي ٽيوب کي ٻنهي ڪنٽرولن سان ڀيٽيو. ڳاڙهي رنگ ڏانهن واپسي ڪافي اختزالي صلاحيت ڏيکاري ٿي. ناسي رنگ برقرار رهڻ نمايان کوٽ ڏانهن اشارو ڪري ٿو.

هڪ تاريخي ترڪيب ۾ لڳ ڀڳ 1 mL رت سان ريجنٽن جون مقدارون لڳ ڀڳ 180 mM سوڊيم نائٽرائٽ، 280 mM ڊيڪسٽروز ۽ 0.4 mM ميٿيلين بليو هيون. انهن انگن کي تحقيقي ادب مان ورتل مثال سمجهو، نه هر هنڌ لاڳو ٿيندڙ معيار.

نتيجو پڙهڻ

ڪيفيتي اسڪريننگ معمولي سرگرميءَ جي لڳ ڀڳ 30 کان 40 سيڪڙو جي حد وٽ بهترين فرق سڃاڻي ٿي، جيئن G6PD جي سڃاڻپ ۾ رهجي ويل کوٽن بابت Malaria Journal جي هن جائزي ۾ بحث ٿيل آهي. تنهنڪري معمولي اسڪريننگ نتيجي جو مطلب آهي ته جاچ شديد کوٽ نه سڃاتي. اهو مڪمل طور معمولي سرگرميءَ جي تصديق نٿو ڪري.

اسڪريننگ ڇو گمراهه ڪري ٿي

هيمولائسز کان پوءِ ريٽيڪيولوسائٽس جو وڌڻ غلط معمولي نتيجي جو روايتي سبب آهي. نوجوان ڳاڙهن خلين ۽ ريٽيڪيولوسائٽس ۾ پراڻن خلين جي ڀيٽ ۾ وڌيڪ G6PD هوندو آهي. هيمولائسز جي اوچتي واقعي دوران سڀ کان پراڻا ۽ سڀ کان وڌيڪ کوٽ وارا خليا اڳ ئي تباهه ٿي چڪا ٿي سگهن ٿا، ۽ باقي نوجوان خلين جي آباديءَ جي سرگرمي جاچ ۾ معمولي اچي سگهي ٿي. اهو ئي حياتياتي عمل مقداري جاچن کي به گمراهه ڪري ٿو، رڳو رنگ تي ٻڌل اسڪريننگ کي نه.

تازو رت چاڙهڻ کوٽ کي لڪائي ٿو، ڇاڪاڻ ته عطيو ڏيندڙ جا ڳاڙها خليا نموني ۾ پنهنجو اينزائم شامل ڪن ٿا. Mayo Clinic Laboratories رت چاڙهڻ کي اينزائم جي ناقابل ڀروسي نتيجن جي سببن ۾ شامل ڪري ٿي، گڏوگڏ ريٽيڪيولوسائٽس جي واڌ ۽ اڇن رت جي خلين جي مداخلت کي به.

هيٽروزائگس عورتون سڀ کان ڏکيو معاملو آهن. X ڪروموسوم جي بي ترتيب غيرفعال ٿيڻ سان معمولي ۽ کوٽ وارن ڳاڙهن خلين جو گڏيل ميلاپ ٺهي ٿو، ۽ مجموعي سرگرمي شديد کوٽ کان وٺي ظاهري طور معمولي حد تائين ڪٿي به ٿي سگهي ٿي. ڪيفيتي اسڪريننگ اڪثر وچولن فينوٽائپن کي سڃاڻي نٿي سگهي. G6PD جي جاچ بابت WHO جا دستاويز هن حد تي تفصيل سان بحث ڪن ٿا.

نموني جي عمر، محفوظ رکڻ جو گرمي پد، آخري رنگ جي بصري تشريح ۾ شخصي فرق، هيميٽوڪريٽ ۽ ريجنٽن جو معيار، انهن حياتياتي اثرن کان علاوه تجزياتي نتيجن ۾ وڌيڪ غيريقيني پيدا ڪن ٿا.

اسڪريننگ تشخيص ناهي

اسڪريننگ جو کوٽ وارو، وچولو يا ڪلينڪي صورتحال سان نه ٺهڪندڙ نتيجو G6PD اينزائم جي مقداري جاچ جي ضرورت ڏيکاري ٿو. WHO، گرمي پد تي ضابطو رکندڙ مقداري اسپيڪٽروفوٽوميٽري کي حوالو ڏيڻ جو معياري طريقو سمجهي ٿو. ان جاچ ۾ ڳاڙهن خلين جي هيمولائسيٽ ۾ گلوڪوز-6-فاسفيٽ ۽ NADP+ شامل ڪيا وڃن ٿا، ۽ ٺهندڙ NADPH کي 340 nm تي وڌندڙ جذب ذريعي ماپيو وڃي ٿو. تبديليءَ جي رفتار اينزائم جي سرگرميءَ سان متناسب هوندي آهي، ۽ عام طور هيموگلوبن جي مقدار جي نسبت سان في گرام يونٽن ۾ ظاهر ڪئي ويندي آهي. موجوده ڪلينڪي ليبارٽري عمل جو خلاصو G6PD سرگرميءَ بابت Mayo جي ٽيسٽ ڪيٽلاگ جي داخلا ۾ ڏنل آهي.

تشريح لاءِ ليبارٽري جي تصديق ٿيل حوالاتي حد استعمال ڪئي وڃي ٿي، جنهن کي اڪثر آباديءَ جي معمولي سرگرميءَ جي نسبت سان بيان ڪيو وڃي ٿو؛ کوٽ بابت عام طور 30 سيڪڙو جي حد ويجهو، ۽ وچولي سرگرميءَ بابت ان کان مٿي بحث ڪيو وڃي ٿو. G6PD ٽيسٽن لاءِ WHO جا هدف واري پيداوار جا پروفائيل (2022) اهو تشخيصي ڍانچو بيان ڪن ٿا. جيڪڏهن تازو هيمولائسز يا رت چاڙهڻ سبب فينوٽائپ طئي ڪرڻ ناقابل ڀروسو ٿئي، ته ڳاڙهن خلين جي آبادي ٻيهر متوازن ٿيڻ کان پوءِ جاچ ورجايو؛ ماليڪيولي جاچ اينزائم جي ماپ جي جاءِ وٺڻ کان سواءِ اضافي ڄاڻ ڏئي سگهي ٿي.

هڪ حد جنهن کي برقرار رکڻ گهرجي

انهن جاچن ۾ ميٿيلين بليو جسم کان ٻاهر استعمال ٿيندڙ ليبارٽري ريجنٽ آهي. اها ڳالهه مريض کي ميٿيلين بليو ڏيڻ جي حفاظت بابت بحث کان الڳ آهي، جنهن تي ميٿيلين بليو جي استعمال جي ممانعتن بابت رهنمائي ۾ بحث ٿيل آهي. حياتياتي ڪيميا انهن کي ڳنڍي ٿي، ڇاڪاڻ ته دوا به NADPH تي دارومدار رکندڙ اختزال تي ڀاڙي ٿي، پر ٽيسٽ ٽيوب ۾ موجود رنگ رت جي وهڪري ۾ ڏنل مقدار ناهي. ٻئي ماحول ۾ رنگڻ واري مادّي طور هن رنگ جي روَيّي بابت ڄاڻ لاءِ ميٿيلين بليو سان رنگڻ جا اصول ڏسو، ۽ ان جي ڪيميائي خاندان بابت ڄاڻ لاءِ ليبارٽري ۾ ريڊاڪس رنگن جو موضوع ڏسو.

اسڪريننگ اهو پڇي ٿي ته ڇا اختزالي صلاحيت برقرار نظر اچي ٿي. تصديقي جاچ اهو پڇي ٿي ته اينزائم اصل ۾ ڪيترو موجود آهي. رنگ پهرئين سوال جو سٺو جواب ڏئي ٿو، بشرطيڪ ڪو ان کان ٻئي سوال جو جواب نه گهري.