EMB اگر تي E. coli ۽ ٻين ڪالونين جي ظاهري شڪل پڙهڻ

هڪ شاگرد ايوسين ميٿيلين بلو اگر تي هڪ اڻڄاتل نموني جون لڪيرون لڳائي ٿو، ان کي سڄي رات انڪيوبيٽ ڪري ٿو، ۽ موٽي اچي ٿو ته پليٽ تي سائي چمڪ سان ڳاڙهيون ڪالونيون موجود آهن. نوٽ بڪ ۾ لکيل آهي: "E. coli، تصديق ٿيل." اهو اندراج پليٽ مان ملندڙ ثبوت کان وڌيڪ دعويٰ ڪري ٿو. پليٽ مخصوص حالتن ۾ واڌ ۽ تخمير جون ظاهري خاصيتون ڏيکاري ٿي. نوع جي سڃاڻپ هڪ الڳ دعويٰ آهي، جنهن لاءِ الڳ ثبوت گهرجي.

هي رهنمائي EMB اگر جي نتيجن کي تشريح جي ڪم طور ڏسي ٿي. اها بنيادي تصور سمجهائي ٿي، ڪنٽرولن سميت وضاحتي پليٽن جو ائٽلس پيش ڪري ٿي، ۽ اهي حالتون ٻڌائي ٿي جن ۾ درسي ڪتاب واري تصوير گمراهه ڪري ٿي.

پليٽ جي پويان تصور

EMB اگر چونڊ ڪندڙ به آهي ۽ فرق ظاهر ڪندڙ به. ايوسين Y ۽ ميٿيلين بلو رنگ ڪيترن گرام مثبت جاندارن کي دٻائين ٿا، تنهنڪري هي غذائي ميڊيم گرام منفي جاندارن جي واڌ کي هٿي ڏئي ٿو. ساڳيا رنگ اشارن طور به ڪم ڪن ٿا: جڏهن ڪو جاندار موجود شگر جي تخمير ڪري ٿو ۽ مقامي طور ڪافي تيزاب پيدا ڪري ٿو، تڏهن ڪالوني گهڻو رنگ جذب ڪري گهري واڱڻائي کان نيري ڪاري ٿي وڃي ٿي. تيزاب جي تيز پيداوار سان ڪالوني جي مٿاڇري تي ڌاتي سائي، زاويي سان بدلجندڙ چمڪ ظاهر ٿي سگهي ٿي. ايوسين ميٿيلين بلو اگر پليٽن لاءِ ASM جو پروٽوڪول چونڊ ۽ فرق ظاهر ڪرڻ جي هن گڏيل عمل کي بيان ڪري ٿو ۽ تدريس لاءِ حوالياتي تصويرون مهيا ڪري ٿو.

ڪنهن به نتيجي کي پڙهڻ کان اڳ هڪ تفصيل اهم آهي: ڏسو ته ڪهڙي ترڪيب استعمال ٿي رهي آهي. پراڻي Holt Harris Teague ترڪيب ۾ ليڪٽوز سان گڏ سڪروز به هوندو آهي، جڏهن ته Levine EMB ۾ رڳو ليڪٽوز هوندو آهي. جيڪو جاندار سڪروز جي تخمير ڪري پر ليڪٽوز جي نه، جهڙوڪ Serratia marcescens جا ڪيترائي الڳ ڪيل نمونا، اهو ٻنهي قسمن تي مختلف نظر اچي سگهي ٿو. EMB ميڊيا لاءِ ٺاهيندڙ جا دستاويز ترڪيب جو هي فرق چٽيءَ طرح بيان ڪن ٿا. نتيجي سان گڏ ٺاهيندڙ ۽ ترڪيب به نوٽ بڪ ۾ لکو.

تيار ڪيل EMB اگر، جنهن ۾ جراثيم نه وڌا ويا هجن، عام طور ڳاڙهي ناسي کان ڳاڙهسري واڱڻائي هوندو آهي، ڪڏهن ان ۾ سائي جهلڪ يا سنهو رسوب به هوندو آهي. اهو پسمنظر جو رنگ واڌ نه آهي. هر پڙهڻي کي اهڙي پليٽ سان ڀيٽيو جنهن ۾ جراثيم نه وڌا ويا هجن، يا دستاويز ڪيل بنيادي حالت سان ڀيٽيو. بنيادي پليٽ کي 35 کان 37 C تي هوا جي موجودگيءَ ۾ لڳ ڀڳ 18 کان 24 ڪلاڪ انڪيوبيشن کان پوءِ پڙهو، جيستائين تدريسي پروٽوڪول ڪا ٻي هدايت نه ڏئي. ڊگهي انڪيوبيشن تخمير جي ظاهري شڪل بدلائي سگهي ٿي.

پليٽ کي ڪيئن ڏسجي

ٻن قسمن جي روشني استعمال ڪريو. پهرين پليٽ کي موٽندڙ يا پاسيري روشنيءَ ۾ ڏسو ۽ ان کي جهڪايو: ڌاتي چمڪ زاويي سان بدلجي ٿي ۽ ڏسڻ جي زاويي موجب ظاهر يا غائب ٿي سگهي ٿي. پوءِ ان مان گذرندڙ روشنيءَ ۾ ڏسو ته ڪالونين جو رنگ ۽ گهرا مرڪز پرکي سگهجن. چڱيءَ طرح الڳ ٿيل ڪالونين تي ڪم ڪريو، ڇاڪاڻ ته گهاٽائي ۽ پاڙيسري ڪالونيون مقامي تيزاب جي گڏ ٿيڻ کي بدلائين ٿيون ۽ رنگ کي گهٽائي يا وڌائي سگهن ٿيون. ASM جي تصويرن جو مجموعو اهو سڌو ڏيکاري ٿو: گڏيل ڪلچر ۾ E. coli پنهنجي متوقع چمڪ وڃائي سگهي ٿو، ڇاڪاڻ ته چوڌاري موجود جاندار تيزابي ماحول بدلائين ٿا.

جڏهن به مشق اجازت ڏئي، ڪنٽرول شامل ڪريو. هڪ عام تدريسي مجموعي ۾ نيري ڪاري رنگ ۽ ڌاتي چمڪ واري ظاهري خاصيت لاءِ E. coli ATCC 25922، بي رنگ ظاهري خاصيت لاءِ تخمير نه ڪندڙ جاندار جهڙوڪ Salmonella Typhimurium ATCC 14028 يا Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853، ۽ واڌ روڪجڻ جي ڪنٽرول طور گرام مثبت جاندار جهڙوڪ Enterococcus faecalis يا Staphylococcus aureus شامل هوندو آهي، جيئن EMB ميڊيا لاءِ معياري QC جدولن ۾ ڄاڻايل آهي. جيڪڏهن مثبت ڪنٽرول ۾ چمڪ نه هجي، ته اڻڄاتل نموني تي شڪ ڪرڻ کان اڳ انڪيوبيشن، گهاٽائي يا ترڪيب تي شڪ ڪريو.

وضاحتي پليٽن جو ائٽلس

هيٺ ڏنل پليٽون ٺاهيل وضاحتي تصويرون آهن، حقيقي ڪلچرن جون تصويرون نه آهن. اهي ڏسڻ وارو نمونو ڏيکارين ٿيون، ڪنهن هڪ اسٽرين جي رنگ جو بلڪل درست ڇانورو نه. انهن کي ASM جي حوالياتي تصويرن ۽ تدريسي ليبارٽري جي حقيقي پليٽن سان ڀيٽيو.

پليٽ 1: EMB اگر تي Escherichia coli، ليڪٽوز جي تيز تخمير ڪندڙ

EMB اگر تي E. coli عام طور گهري واڱڻائي کان نيري ڪاري هوندي آهي، اڪثر گهري مرڪز ۽ تيزاب جي تيز پيداوار مان پيدا ٿيندڙ ڌاتي سائي چمڪ سان. اها چمڪ ئي مشهور نشاني آهي جيڪا شاگرد ڳولين ٿا، پر ان کي سڃاڻپ جي تعريف بدران مددگار ثبوت سمجهو. چمڪ جي شدت اسٽرين، انڪيوبيشن جي وقت، ڪالونين جي گهاٽائي ۽ ڏسڻ جي زاويي سان بدلجي ٿي. چمڪ جي غيرموجودگي E. coli کي رد نٿي ڪري، ۽ چمڪ کان سواءِ گهري رنگ واري ڪالوني ڪيترن ٻين تخمير ڪندڙ جاندارن ڏانهن اشارو ڪري ٿي. وڌيڪ ڪم لاءِ گهاٽي حصي مان پڙهڻ بدران چڱيءَ طرح الڳ ٿيل ڪالوني چونڊيو.

پليٽ 2: EMB اگر تي Klebsiella pneumoniae، لعاب جهڙي تخمير ڪندڙ

EMB اگر تي Klebsiella pneumoniae عام طور وڏيون، چمڪندڙ، لعاب جهڙيون ڪالونيون ٺاهيندي آهي، جن جو رنگ گلابي واڱڻائي کان ناسي واڱڻائي تائين هوندو آهي. انهن جا مرڪز اڪثر گهرا هوندا آهن، پر عام طور تيز ڌاتي چمڪ نه هوندي آهي. لاڳاپيل تخمير ڪندڙ جاندارن، جهڙوڪ Enterobacter، ۾ به ساڳي ظاهري بناوت ڏسڻ ۾ اچي ٿي. لعاب جهڙي بناوت ۽ ڪالوني جي ماپ به پڙهڻي جو حصو آهن: هڪ ننڍڙي ۽ هموار گلابي ڪالوني جي تشريحي اهميت، وڏي گنبذ نما لعاب جهڙي ڪالوني کان مختلف آهي. E. coli وانگر، پليٽ تخمير جي ظاهري خاصيت جو اشارو ڏئي ٿي، ۽ نوع جي سطح تي نالو ڏيڻ لاءِ هيٺ بيان ڪيل حيات ڪيميائي تصديق گهرجي.

پليٽ 3: EMB اگر تي Salmonella ۽ ٻيا تخمير نه ڪندڙ جاندار، بي رنگ ڪالونيون

EMB اگر تي Salmonella ۽ ليڪٽوز جي تخمير نه ڪندڙ لاڳاپيل جاندار، جن ۾ Shigella ۽ Pseudomonas جا ڪيترائي الڳ ڪيل نمونا شامل آهن، عام طور بي رنگ کان نيم شفاف يا هلڪي عنبري ڪالونين طور وڌن ٿا. ڪجهه ترڪيبون ۽ حالتون هلڪي گلابي جهلڪ ڏين ٿيون، تنهنڪري هلڪي گلابي ڪالوني پاڻمرادو تخمير ڪندڙ نه آهي. EMB، Salmonella کي Shigella يا ٻين تخمير نه ڪندڙ جاندارن کان الڳ نٿو سڃاڻي؛ اهو فرق پوءِ ٿيندڙ جاچن سان معلوم ٿئي ٿو. اهو به ياد رکو ته ليڪٽوز مثبت Salmonella جا اهڙا اسٽرين دستاويز ڪيا ويا آهن، جن جون ڌاتي چمڪ واريون ڪالونيون E. coli جهڙيون آهن. هي هڪ ٻيو سبب آهي ته هڪ پليٽ اڪيلي حتمي نتيجو نٿي ڏئي سگهي.

پليٽ 4: Serratia marcescens ۽ ترڪيب جي گمراهه ڪندڙ اثر جو مسئلو

Serratia marcescens لاءِ الڳ حصو ضروري آهي، ڇاڪاڻ ته شاگرد اڪثر ڳاڙهين ڪالونين جي اميد رکندا آهن ۽ پوءِ پليٽ کي غلط پڙهندا آهن. گهڻا ڪلينڪي الڳ ڪيل نمونا ليڪٽوز جي تخمير نٿا ڪن، تنهنڪري Levine EMB تي اهي عام طور هلڪا يا ٿوري رنگ وارا نظر اچن ٿا. ڪيترائي الڳ ڪيل نمونا سڪروز جي تخمير ڪن ٿا، تنهنڪري سڪروز واري ترڪيب وڌيڪ گهرو رنگ يا تيزاب سان وڌيڪ لاڳاپيل ردعمل ڏئي سگهي ٿي. 35 کان 37 C تي روايتي ڳاڙهي پروڊيگيوسين رنگدار مادي جي به اميد نه رکو؛ انڪيوبيٽر جي گرمي پد تي رنگدار مادي جي پيداوار ڀروسي جوڳي نه آهي. جڏهن پروٽوڪول EMB اگر تي Serratia marcescens جو ذڪر ڪري، ته ڏسو اهو بيان ڪهڙي ترڪيب کي فرض ڪري ٿو. Serratia جي ميٽابولزم جو هڪ جائزو هن گمراهه ڪندڙ اثر جي پويان ليڪٽوز منفي ۽ سڪروز بابت بدلجندڙ نموني جو خلاصو پيش ڪري ٿو.

پليٽ 5: ڪنٽرول ۽ واڌ روڪيل جاندار

گرام مثبت جاندار، جهڙوڪ Staphylococcus، Enterococcus، Streptococcus ۽ Bacillus، عام طور EMB اگر تي واڌ کان روڪيا وڃن ٿا يا انهن جي واڌ نمايان طور دٻجي ٿي، جيتوڻيڪ هر اسٽرين لاءِ روڪ مڪمل نه آهي. ڪنٽرولن جو مجموعو پڙهڻي کي معتبر بڻائي ٿو: E. coli ڪنٽرول کي نيري ڪاري رنگ ۽ چمڪ سان سٺي واڌ ڏيکارڻ گهرجي، تخمير نه ڪندڙ ڪنٽرول کي بي رنگ واڌ ڏيکارڻ گهرجي، ۽ واڌ روڪجڻ واري ڪنٽرول کي ٿوري يا ڪا به واڌ نه ڏيکارڻ گهرجي. جيڪڏهن واڌ روڪجڻ وارو ڪنٽرول چڱيءَ طرح وڌي ٿو، ته چونڊ وارو مرحلو ناڪام ٿيو ۽ ان بيچ جي هر ٻي پڙهڻي شڪي آهي. رنگ لڳائڻ جا طريقا، ڪلچر ميڊيا کان مختلف سوال جو جواب ڏين ٿا؛ ليبارٽري ۾ سلائيڊ تي رنگ لڳائڻ بابت ميٿيلين بلو رنگ لڳائڻ جو ائٽلس ڏسو.

حدن اندر ڀيٽ

ٽي جملا گمراهه ڪندڙ ظاهري شڪلين جو خلاصو ڪن ٿا. گهرو رنگ E. coli جي برابر نه آهي، ڇاڪاڻ ته Klebsiella، Enterobacter ۽ ٻيا تخمير ڪندڙ چمڪ کان سواءِ گهرا مرڪز ٺاهين ٿا. گلابي رنگ Klebsiella جي برابر نه آهي، ڇاڪاڻ ته وچولي يا سست رفتار سان تخمير ڪندڙ ۽ ڪجهه عام طور تخمير نه ڪندڙ سمجهيا ويندڙ جاندار گلابي يا هلڪي واڱڻائي نظر اچن ٿا. چمڪ حتمي E. coli جي برابر نه آهي، ڇاڪاڻ ته ٻيا تيز تخمير ڪندڙ به اها پيدا ڪري سگهن ٿا. تدريسي پروٽوڪول ۽ ان جون گڏيل ڪلچر جون تصويرون انهن مان هر غلط نتيجي کي واضح ڪن ٿيون.

تصديق جون حدون

EMB اگر ظاهري خاصيت ٻڌائي ٿو، نوع نه. مختلف جاندارن جي ڪالونين جي ظاهري شڪل هڪ جهڙي ٿي سگهي ٿي، ۽ هڪ ئي جاندار اسٽرين، عمر، گهاٽائي، ترڪيب ۽ انڪيوبيشن سبب پنهنجي درسي ڪتاب واري تصوير کان مختلف ٿي سگهي ٿو. انهيءَ ڪري تدريسي ۽ ڪلينڪي ڪم جا طريقا EMB جي ظاهري بناوت کي ابتدائي اشارو سمجهن ٿا.

شاگرد لاءِ ثبوت سان دفاع ڪري سگهڻ جوڳو ڪم جو طريقو هي آهي: الڳ ٿيل ڪالوني کي بيان ڪريو (ماپ، رنگ، مرڪز، پاسيري روشنيءَ ۾ چمڪ، لعاب جهڙي خاصيت)، ترڪيب، انڪيوبيشن جو وقت ۽ گرمي پد، ۽ ڪنٽرول درج ڪريو؛ پوءِ ڪنهن به تصديقي جاچ کان اڳ چڱيءَ طرح الڳ ٿيل ڪالوني جو ذيلي ڪلچر ڪري خالص ڪلچر حاصل ڪريو. عام ايندڙ جاچن ۾ ابتدائي طور E. coli ۽ ڪوليفارم جي سڃاڻپ لاءِ گرام رنگ لڳائڻ سان گڏ IMViC ردعمل، آنڊي سان لاڳاپيل جاندارن لاءِ TSI يا KIA ۽ جاندار مخصوص حيات ڪيميائي جاچن جا مجموعا شامل آهن. جتي ڪم جي گهرج هجي، اتي سيرولوجي، MALDI TOF يا ٻيا تصديق ٿيل سڃاڻپ جا طريقا به استعمال ٿين ٿا. آنڊي سان لاڳاپيل چونڊ ڪندڙ ۽ فرق ظاهر ڪندڙ ميڊيا ۾ EMB جي جاءِ بابت پسمنظر لاءِ، آنڊي سان لاڳاپيل ڪلچر ميڊيا جا تعارف ۽ گرام رنگ لڳائڻ کان پوءِ جون جاچون ڏسو. نيري سلائيڊ رنگ سان ڇا ثابت ٿي سگهي ٿو ۽ ڇا نه، ان لاڳاپيل سوال لاءِ ميٿيلين بلو رنگ لڳائڻ جو ائٽلس به ساڳئي اصول تحت مشاهدي ۽ نتيجي کي الڳ رکي ٿو.

نتيجي کان اڳ مشاهدو لکو. "24 ڪلاڪن تي Levine EMB تي گهريون نيريون ڪاريون ڪالونيون، جن ۾ زاويي سان بدلجندڙ سائي چمڪ آهي، ليڪٽوز جي تيز تخمير سان ٺهڪندڙ" هڪ ثبوت سان دفاع ڪري سگهڻ جوڳو بيان آهي. "E. coli، تصديق ٿيل" لاءِ اهو تصديقي مرحلو ضروري آهي، جيڪو پليٽ اڪيلي مهيا نٿي ڪري سگهي.