ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਅਤੇ ਰੈਟੀਕੁਲੋਸਾਈਟ ਰੰਗਾਈ: ਇੱਕ ਵੱਖਰਾ ਰੰਗਕ ਅਤੇ ਜੀਵਤ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਦੀ ਵਿਧੀ

ਇੱਕ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਰੈਟੀਕੁਲੋਸਾਈਟ ਗਿਣਤੀ ਲਈ ਤਿਆਰੀ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਮੰਗਵਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਨੂੰ ਖੂਨ ਨਾਲ ਮਿਲਾਉਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਉਸ ਨੂੰ ਲਗਭਗ ਕੁਝ ਵੀ ਨਹੀਂ ਦਿਸਦਾ। ਇੱਕ ਸਹਿਪਾਠੀ ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਦਾ ਲੇਬਲ ਲੱਗੀ ਬੋਤਲ ਵਰਤਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਕੁਝ ਲਾਲ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਦੇ ਅੰਦਰ ਸਪਸ਼ਟ ਨੀਲੇ ਤੰਤੂ ਵੇਖਦਾ ਹੈ। ਪਹਿਲਾ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਮੰਨ ਲੈਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਦੂਜੀ ਬੋਤਲ ਵਧੇਰੇ ਤਾਜ਼ੀ ਜਾਂ ਵਧੇਰੇ ਸੰਘਣੀ ਹੈ। ਦੋਵਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਕੋਈ ਗੱਲ ਸਹੀ ਨਹੀਂ। ਉਸ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਵੱਖਰਾ ਅਣੂ ਹੈ।

ਇਸ ਖੇਤਰ ਵਿੱਚ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਉਲਝਣ ਪਿੱਛੇ ਇਹੀ ਧਾਰਣਾਤਮਕ ਗ਼ਲਤੀ ਹੈ। ਨਾਮ ਤੋਂ ਲੱਗਦਾ ਹੈ ਕਿ ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ, ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਦਾ ਇੱਕ ਸੁਧਾਰਿਆ ਹੋਇਆ ਬੈਚ ਹੈ। ਰਸਾਇਣ ਵਿਗਿਆਨ ਕੁਝ ਹੋਰ ਦੱਸਦਾ ਹੈ। ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ N ਇੱਕ ਵੱਖਰਾ ਫੀਨੋਥਿਆਜ਼ੀਨ ਰੰਗਕ ਹੈ, ਜਿਸ ਦਾ ਆਪਣਾ ਕਲਰ ਇੰਡੈਕਸ ਨੰਬਰ, ਆਪਣਾ ਪ੍ਰਤਿਸਥਾਪਨ ਪੈਟਰਨ ਅਤੇ ਹੀਮੈਟੋਲੋਜੀ ਵਿੱਚ ਆਪਣੀ ਮਿਆਰੀ ਭੂਮਿਕਾ ਹੈ। ਜਦੋਂ ਇਹ ਫ਼ਰਕ ਸਪਸ਼ਟ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਵਿਧੀ ਦੇ ਬਾਕੀ ਪਹਿਲੂ ਵੀ ਸੌਖੇ ਹੋ ਜਾਂਦੇ ਹਨ: ਰੰਗਾਈ ਵੇਲੇ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਦਾ ਜੀਵਤ ਹੋਣਾ ਕਿਉਂ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ, ਕਿਸ ਨੂੰ ਰੈਟੀਕੁਲੋਸਾਈਟ ਗਿਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਹਾਈਂਜ਼ ਬਾਡੀਆਂ ਦੀ ਕੀ ਭੂਮਿਕਾ ਹੈ ਅਤੇ ਬ੍ਰਿਲੀਅੰਟ ਕ੍ਰੈਸਿਲ ਬਲੂ ਕਦੋਂ ਵਰਤੋਂ ਵਿੱਚ ਆਉਂਦਾ ਹੈ।

ਸੰਖੇਪ ਜਵਾਬ

ਹੀਮੈਟੋਲੋਜੀ ਅਭਿਕਰਮਕ ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ N ਨੂੰ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਦੇ PubChem ਰਿਕਾਰਡ ਵਿੱਚ ਬੇਸਿਕ ਬਲੂ 24, C.I. 52030, CAS 1934-16-3, ਫਾਰਮੂਲਾ C18H22ClN3S ਵਜੋਂ ਪਛਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਆਮ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਇਸ ਦੇ PubChem ਰਿਕਾਰਡ ਵਿੱਚ ਮੈਥਿਲਥਿਓਨੀਨੀਅਮ ਕਲੋਰਾਈਡ, ਬੇਸਿਕ ਬਲੂ 9, C.I. 52015, CAS 61-73-4, ਫਾਰਮੂਲਾ C16H18ClN3S ਹੈ। ਬਣਤਰ ਦੇ ਪੱਖੋਂ, ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਵਿੱਚ ਰਿੰਗ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਦੋ ਮੈਥਿਲ ਸਮੂਹ ਅਤੇ ਐਥਿਲਅਮੀਨੋ ਪਾਰਸ਼ਵ ਲੜੀਆਂ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ, ਜਦਕਿ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਵਿੱਚ ਡਾਈਮੈਥਿਲਅਮੀਨੋ ਸਮੂਹ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਇਹ ਫ਼ਰਕ ਰੰਗਾਈ ਦੇ ਵਿਹਾਰ ਨੂੰ ਬਦਲਦਾ ਹੈ। ਹੀਮੈਟੋਲੋਜੀ ਦੀਆਂ ਪੁਸਤਕਾਂ ਆਮ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨੂੰ ਰੈਟੀਕੁਲੋਸਾਈਟ ਲਈ ਤੁਲਨਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਕਮਜ਼ੋਰ ਰੰਗਕ ਅਤੇ ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨੂੰ ਵਧੇਰੇ ਗੂੜ੍ਹਾ ਅਤੇ ਇਕਸਾਰ ਰੰਗਣ ਵਾਲਾ ਦੱਸਦੀਆਂ ਹਨ। ਇਸ ਤੁਲਨਾ ਦਾ ਸਾਰ ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਬਾਰੇ ScienceDirect ਦੇ ਵਿਸ਼ਾ ਪੰਨੇ ਵਿੱਚ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।

ਹਾਂ, ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਇੱਕ ਸੁਪ੍ਰਾਵਾਈਟਲ ਰੰਗਕ ਹੈ। ਸੁਪ੍ਰਾਵਾਈਟਲ ਰੰਗਾਈ ਦਾ ਅਰਥ ਸਰੀਰ ਵਿੱਚੋਂ ਕੱਢਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਅਤੇ ਫਿਕਸੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਜੀਵਤ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਨੂੰ ਰੰਗਣਾ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਸੁਪ੍ਰਾਵਾਈਟਲ ਰੰਗਾਈ ਦੇ ਸਿਧਾਂਤਾਂ ਦੀ NCBI ਸਮੀਖਿਆ ਵਿੱਚ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਅਤੇ ਬ੍ਰਿਲੀਅੰਟ ਕ੍ਰੈਸਿਲ ਬਲੂ ਦੋਵੇਂ ਇਸ ਸ਼੍ਰੇਣੀ ਵਿੱਚ ਆਉਂਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ CLSI ਰੈਟੀਕੁਲੋਸਾਈਟ ਮਿਆਰ ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨੂੰ ਸਪਸ਼ਟ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੁਪ੍ਰਾਵਾਈਟਲ ਰੰਗਕ ਵਜੋਂ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਕਈ ਵਾਰ ਇਸ ਨੂੰ ਫਿਕਸ ਕੀਤੀਆਂ ਫ਼ਿਲਮਾਂ ਦੀ ਰੋਮਾਨੋਵਸਕੀ ਰੰਗਾਈ ਨਾਲ ਇੱਕੋ ਸ਼੍ਰੇਣੀ ਵਿੱਚ ਰੱਖ ਲੈਂਦੇ ਹਨ। ਇੱਥੇ ਉਹ ਧਾਰਣਾ ਕੰਮ ਨਹੀਂ ਕਰਦੀ। ਪਹਿਲਾਂ ਫਿਕਸ ਕਰ ਦਿੱਤਾ ਜਾਵੇ ਤਾਂ ਵਿਧੀ ਕੰਮ ਕਰਨਾ ਬੰਦ ਕਰ ਦਿੰਦੀ ਹੈ।

ਮਿਲਦੇ-ਜੁਲਦੇ ਰੰਗਕਾਂ ਦੇ ਨਾਮ ਸਮਝਣ ਵਾਲੇ ਪਾਠਕਾਂ ਲਈ, ਮੈਥਿਲ ਬਲੂ ਬਨਾਮ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਇੱਕ ਐਨਾਇਨਿਕ ਟ੍ਰਾਈਐਰਿਲਮੀਥੇਨ ਰੰਗਕ ਅਤੇ ਕੈਟਾਇਨਿਕ ਫੀਨੋਥਿਆਜ਼ੀਨ ਪਰਿਵਾਰ ਵਿਚਕਾਰ ਦੀ ਇੱਕ ਵੱਖਰੀ ਅਤੇ ਵੱਡੀ ਉਲਝਣ ਨੂੰ ਸਮਝਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਰੰਗਾਈ ਦੀ ਸੰਖੇਪ ਜਾਣਕਾਰੀ ਸੁਪ੍ਰਾਵਾਈਟਲ ਕੰਮ ਨੂੰ ਫਿਕਸ ਕੀਤੀਆਂ ਫ਼ਿਲਮਾਂ ਵਾਲੀਆਂ ਵਿਧੀਆਂ ਦੇ ਸੰਦਰਭ ਵਿੱਚ ਰੱਖਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਖੂਨ ਦੀਆਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਦੀ ਆਕਾਰ-ਰਚਨਾ ਬਾਰੇ ਗਾਈਡ ਦੱਸਦੀ ਹੈ ਕਿ ਵਿਆਪਕ ਵਿਭੇਦੀ ਗਿਣਤੀ ਵਿੱਚ ਰੈਟੀਕੁਲੋਸਾਈਟ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਿੱਥੇ ਆਉਂਦਾ ਹੈ।

ਕੈਟਾਲਾਗ ਸੰਬੰਧੀ ਇੱਕ ਸਾਵਧਾਨੀ: ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਦਾ ਇੱਕ ਵੱਖਰਾ ਜ਼ਿੰਕ ਕਲੋਰਾਈਡ ਦੁਹਰੇ ਲਵਣ ਵਾਲਾ ਰੂਪ CAS 6586-05-6 ਅਧੀਨ ਮਿਲਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ ਵਿਧੀਆਂ ਵਾਲੇ ਭਾਗ ਵਿੱਚ ਸਿਰਫ਼ ਆਮ ਨਾਮ ਨਹੀਂ, ਸਗੋਂ ਲਵਣ ਦਾ ਰੂਪ ਅਤੇ ਸਪਲਾਇਰ ਵੀ ਦੱਸਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।

ਸੁਪ੍ਰਾਵਾਈਟਲ ਰੰਗਾਈ ਅਸਲ ਵਿੱਚ ਕੀ ਕਰਦੀ ਹੈ

ਰੈਟੀਕੁਲੋਸਾਈਟ ਇੱਕ ਨਵੀਂ ਲਾਲ ਕੋਸ਼ਿਕਾ ਹੈ ਜਿਸ ਦਾ ਕੇਂਦਰਕ ਖਤਮ ਹੋ ਚੁੱਕਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਬਚਿਆ ਹੋਇਆ ਰਾਈਬੋਸੋਮਲ RNA ਅਜੇ ਵੀ ਮੌਜੂਦ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਬਿਨਾਂ ਰੰਗੇ ਗਿੱਲੇ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਉਹ RNA ਦਿਖਾਈ ਨਹੀਂ ਦਿੰਦਾ। ਸੁਪ੍ਰਾਵਾਈਟਲ ਰੰਗਕ ਜੀਵਤ ਕੋਸ਼ਿਕਾ ਵਿੱਚ ਦਾਖ਼ਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਉਸ RNA ਨੂੰ ਅਵਕਸ਼ੇਪਿਤ ਕਰਦਾ ਜਾਂ ਇਕੱਠਾ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਨੀਲੇ ਕਣ ਅਤੇ ਤੰਤੂ ਬਣਦੇ ਹਨ। ਤੇਲ-ਇਮਰਸ਼ਨ ਹੇਠ ਦਿਖਣ ਵਾਲਾ ਇਹੀ ਜਾਲੀਦਾਰ-ਤੰਤੂਮਈ ਪਦਾਰਥ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ ਇਹ ਜਾਲ ਰੰਗਾਈ ਨਾਲ ਬਣਿਆ ਉਤਪਾਦ ਹੈ, ਨਾ ਕਿ ਪਹਿਲਾਂ ਤੋਂ ਬਣਿਆ ਢਾਂਚਾ ਜੋ ਰੰਗ ਦੀ ਉਡੀਕ ਕਰ ਰਿਹਾ ਹੋਵੇ। ਇਸੇ ਕਰਕੇ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਦੇ ਕਾਰਕਾਂ—ਰੰਗਕ ਦੀ ਸੰਘਣਤਾ, ਬਫ਼ਰ, ਖੂਨ ਅਤੇ ਰੰਗਕ ਦਾ ਅਨੁਪਾਤ, ਤਾਪਮਾਨ ਅਤੇ ਸਮਾਂ—ਦੀ ਅਹਿਮੀਅਤ ਰੰਗਕ ਦੇ ਨਾਮ ਜਿੰਨੀ ਹੀ ਹੈ।

ਅਮਲੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇਸ ਦਾ ਮਤਲਬ ਕੰਮ ਦਾ ਇੱਕ ਸਖ਼ਤ ਕ੍ਰਮ ਹੈ: ਪਹਿਲਾਂ ਐਂਟੀਕੋਐਗੂਲੈਂਟ ਮਿਲੇ ਖੂਨ ਨੂੰ ਰੰਗਕ ਨਾਲ ਮਿਲਾਓ, ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕਰੋ, ਫਿਰ ਫ਼ਿਲਮਾਂ ਬਣਾਓ ਅਤੇ ਬਿਨਾਂ ਫਿਕਸੇਸ਼ਨ ਤੇ ਬਿਨਾਂ ਕਾਊਂਟਰਸਟੇਨ ਦੇ ਉਨ੍ਹਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰੋ। ਰੰਗਾਈ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਫਿਕਸੇਸ਼ਨ, ਜਾਂ ਅਜਿਹਾ ਕਾਊਂਟਰਸਟੇਨ ਜੋ ਹਲਕੇ ਤੰਤੂਆਂ ਨੂੰ ਢੱਕ ਦੇਵੇ, ਉਸ ਜਾਣਕਾਰੀ ਨੂੰ ਨਸ਼ਟ ਕਰ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਜਿਸ 'ਤੇ ਗਿਣਤੀ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੀ ਹੈ।

ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨਾਲ ਰੈਟੀਕੁਲੋਸਾਈਟ ਦਾ ਇੱਕ ਕਾਰਜਯੋਗ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ

ਕੋਈ ਇੱਕ ਸਰਬਵਿਆਪੀ ਫਾਰਮੂਲੇਸ਼ਨ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਇਸ ਲਈ ਵਰਤੀ ਗਈ ਫਾਰਮੂਲੇਸ਼ਨ ਦਰਜ ਕਰੋ। ਦਸਤਾਵੇਜ਼ਾਂ ਵਿੱਚ ਦਿੱਤੇ ਤਿੰਨ ਰੂਪ ਇਸ ਦੀ ਵਿਭਿੰਨਤਾ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹਨ।

ਰਵਾਇਤੀ ਬ੍ਰੇਖਰ ਕਿਸਮ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਪੋਟੈਸ਼ੀਅਮ ਆਕਸਾਲੇਟ ਨਾਲ ਲਗਭਗ 0.5 ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਨੂੰ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਏ ਹੋਏ EDTA ਖੂਨ ਨਾਲ ਬਰਾਬਰ ਆਇਤਨਾਂ ਵਿੱਚ ਮਿਲਾ ਕੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਲਗਭਗ 10 ਤੋਂ 15 ਮਿੰਟ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਹੌਲੀ ਜਿਹੀ ਮੁੜ ਮਿਲਾਉਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਪਤਲੀਆਂ ਪਾੜੇ-ਆਕਾਰ ਦੀਆਂ ਫ਼ਿਲਮਾਂ ਬਣਾਈਆਂ ਜਾਂਦੀਆਂ ਹਨ, ਹਵਾ ਵਿੱਚ ਸੁਕਾਈਆਂ ਜਾਂਦੀਆਂ ਹਨ ਅਤੇ ਬਿਨਾਂ ਫਿਕਸੇਸ਼ਨ ਦੇ 100x ਤੇਲ-ਇਮਰਸ਼ਨ ਆਬਜੈਕਟਿਵ ਹੇਠ ਜਾਂਚੀਆਂ ਜਾਂਦੀਆਂ ਹਨ। ਰੈਟੀਕੁਲੋਸਾਈਟ ਗਿਣਤੀ ਦੀ NCBI ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਇਸ ਕਾਰਜ-ਪ੍ਰਵਾਹ ਅਤੇ ਇਸ ਨਾਲ ਵਰਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਗਿਣਤੀ ਫਰੇਮ ਦਾ ਵਰਣਨ ਕਰਦੀ ਹੈ।

ਡੇਸੀ ਅਤੇ ਲੂਇਸ ਵਾਲੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਸਿਟਰੇਟ ਸੈਲਾਈਨ ਵਿੱਚ 1.0 ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਨੂੰ ਖੂਨ ਦੇ 2 ਤੋਂ 4 ਗੁਣਾ ਆਇਤਨ ਨਾਲ ਮਿਲਾ ਕੇ ਫ਼ਿਲਮ ਬਣਾਉਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ 37 C 'ਤੇ 15 ਤੋਂ 20 ਮਿੰਟ ਰੱਖਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। CLSI H44 ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਸਮਰੂਪ ਬਣਾਉਣ ਦੇ ਹਾਲੀਆ ਅਮਲ ਵਿੱਚ pH 7.4 ਵਾਲੇ ਫਾਸਫੇਟ-ਬਫ਼ਰਡ ਸੈਲਾਈਨ ਵਿੱਚ ਵਧੇਰੇ ਪਤਲਾ 0.1 ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਘੋਲ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ, 20 C 'ਤੇ 10 ਮਿੰਟ ਇਨਕਿਊਬੇਸ਼ਨ ਕੀਤੀ ਗਈ ਅਤੇ ਕੋਈ ਫਿਕਸੇਸ਼ਨ ਨਹੀਂ ਕੀਤੀ ਗਈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ 2026 ਦੇ NMB ਸਮਰੂਪੀਕਰਨ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਦਰਜ ਹੈ।

ਗਿਣਤੀ ਦੇ ਨਿਯਮ ਸਾਰੇ ਰੂਪਾਂ ਵਿੱਚ ਸਾਂਝੇ ਹਨ। ਕਿਸੇ ਕੋਸ਼ਿਕਾ ਨੂੰ ਰੈਟੀਕੁਲੋਸਾਈਟ ਉਦੋਂ ਗਿਣੋ ਜਦੋਂ ਉਸ ਵਿੱਚ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ ਦੋ ਵੱਖਰੇ ਨੀਲੇ ਰੰਗੇ ਕਣ ਜਾਂ ਤੰਤੂਆਂ ਦੇ ਹਿੱਸੇ ਹੋਣ; ਇਸ ਨਾਲ ਰੰਗਕ ਦਾ ਇਕੱਲਾ ਜਮਾਵ ਗਿਣਤੀ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦਾ। ਰੁਟੀਨ ਕੰਮ ਵਿੱਚ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ 1,000 ਲਾਲ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਗਿਣੋ ਅਤੇ ਰੈਟੀਕੁਲੋਸਾਈਟਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਵਜੋਂ ਦਰਜ ਕਰੋ। ਘੱਟ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤਾਂ 'ਤੇ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਲੋੜਾਂ ਅਨੁਸਾਰ ਹੋਰ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਗਿਣਣੀਆਂ ਪੈਂਦੀਆਂ ਹਨ। CLSI H44 ਵਿਧੀ ਦੀ ਇੱਕ ਸਮੀਖਿਆ ਦੱਸਦੀ ਹੈ ਕਿ ਲਗਭਗ 1 ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਰੈਟੀਕੁਲੋਸਾਈਟਾਂ ਦੇ ਪੱਧਰ 'ਤੇ ਗਿਣਤੀ ਦੀ ਭਿੰਨਤਾ ਨੂੰ 5 ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਤੱਕ ਲਿਆਉਣ ਲਈ ਲਗਭਗ 4,400 ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ; ਇਹ De Gruyter ਵਿੱਚ CLSI H44 ਦੀ ਸਮੀਖਿਆ ਵਿੱਚ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। ਮਿੱਲਰ ਆਕਿਊਲਰ ਡਿਸਕ ਵੱਡੀਆਂ ਗਿਣਤੀਆਂ ਨੂੰ ਅਮਲੀ ਬਣਾਉਂਦੀ ਹੈ। ਰੰਗਕ ਨੂੰ ਛਾਣੋ ਜਾਂ ਤਾਜ਼ਾ ਤਿਆਰ ਕਰੋ, ਕਿਉਂਕਿ ਅਵਕਸ਼ੇਪ ਦਾਣੇਦਾਰ ਅੰਤਰਕੋਸ਼ਿਕੀ ਸਮਾਵੇਸ਼ਾਂ ਵਰਗਾ ਦਿਸਦਾ ਹੈ।

ਉਸੇ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਹਾਈਂਜ਼ ਬਾਡੀਆਂ

ਉਹੀ ਸੁਪ੍ਰਾਵਾਈਟਲ ਫ਼ਿਲਮ ਹਾਈਂਜ਼ ਬਾਡੀਆਂ ਵੀ ਦਿਖਾ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਬਚੇ ਹੋਏ RNA ਦੀ ਬਜਾਏ ਆਕਸੀਕ੍ਰਿਤ ਅਤੇ ਵਿਕ੍ਰਿਤ ਹੀਮੋਗਲੋਬਿਨ ਦੇ ਸਮੂਹ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਵਾਲੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ ਇਹ ਗੋਲ ਕਣਾਂ ਵਜੋਂ ਦਿਸਦੀਆਂ ਹਨ, ਅਕਸਰ ਇੱਕੋ ਕਣ ਵਜੋਂ ਅਤੇ ਝਿੱਲੀ ਦੇ ਨੇੜੇ, ਅਤੇ ਜਾਲੀਦਾਰ-ਤੰਤੂਮਈ ਪਦਾਰਥ ਨਾਲੋਂ ਹਲਕੇ ਨੀਲੇ ਰੰਗ ਵਿੱਚ ਰੰਗੀਆਂ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ। ਫਿਕਸੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਕਾਊਂਟਰਸਟੇਨਿੰਗ ਦੌਰਾਨ ਇਹ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਨਹੀਂ ਬਚਦੀਆਂ, ਇਸ ਲਈ ਬਿਨਾਂ ਫਿਕਸ ਕੀਤੀ ਫ਼ਿਲਮ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰੋ। ਇੱਕ ਹਾਲੀਆ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਵਿੱਚ 20 ਮਾਈਕ੍ਰੋਲਿਟਰ EDTA ਖੂਨ ਨਾਲ 20 ਮਾਈਕ੍ਰੋਲਿਟਰ 1 ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਅਤੇ 15 ਮਿੰਟ ਇਨਕਿਊਬੇਸ਼ਨ ਵਰਤ ਕੇ 250 ਐਰਿਥਰੋਸਾਈਟਾਂ ਵਿੱਚ ਹਾਈਂਜ਼ ਬਾਡੀ ਵਾਲੀਆਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ; ਇਹ ਉਸ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਦਰਜ ਕਰਨ ਵਾਲੇ PMC ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਦਿੱਤੀ ਗਈ ਹੈ।

ਦੋ ਫ਼ਰਕ ਗ਼ਲਤ ਵਿਆਖਿਆ ਤੋਂ ਬਚਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਪਹਿਲਾ, ਮੈਥਿਲ ਵਾਇਲਟ ਅਤੇ ਕ੍ਰਿਸਟਲ ਵਾਇਲਟ ਹਾਈਂਜ਼ ਬਾਡੀਆਂ ਨੂੰ ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨਾਲੋਂ ਵਧੇਰੇ ਗੂੜ੍ਹਾ ਰੰਗਦੇ ਹਨ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ScienceDirect ਦੇ ਹਾਈਂਜ਼ ਬਾਡੀ ਵਿਸ਼ਾ ਪੰਨੇ ਵਿੱਚ ਦਰਜ ਹੈ। ਜਦੋਂ ਰੈਟੀਕੁਲੋਸਾਈਟਾਂ ਅਤੇ ਹਾਈਂਜ਼ ਬਾਡੀਆਂ ਦਾ ਇਕੱਠੇ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨਾ ਹੋਵੇ ਤਾਂ ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਸੁਵਿਧਾਜਨਕ ਚੋਣ ਹੈ, ਪਰ ਇਹ ਖ਼ਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਹਾਈਂਜ਼ ਬਾਡੀਆਂ ਲਈ ਸਭ ਤੋਂ ਗੂੜ੍ਹਾ ਰੰਗਣ ਵਾਲਾ ਰੰਗਕ ਨਹੀਂ ਹੈ। ਦੂਜਾ, ਅਲਫ਼ਾ ਥੈਲੇਸੀਮੀਆ ਟ੍ਰੇਟ ਵਿੱਚ HbH ਸਮਾਵੇਸ਼ ਸੁਪ੍ਰਾਵਾਈਟਲ ਰੰਗਾਈ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਪੂਰੀ ਕੋਸ਼ਿਕਾ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਬਾਰੀਕ ਬਿੰਦੂ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ, ਜਦਕਿ ਰਵਾਇਤੀ ਹਾਈਂਜ਼ ਬਾਡੀਆਂ ਗਿਣਤੀ ਵਿੱਚ ਘੱਟ, ਆਕਾਰ ਵਿੱਚ ਵੱਡੀਆਂ ਅਤੇ ਅਕਸਰ ਝਿੱਲੀ ਨਾਲ ਜੁੜੀਆਂ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ। ਰੰਗਕ ਦਾ ਜਮਾਵ ਤੀਜੀ ਮਿਲਦੀ-ਜੁਲਦੀ ਚੀਜ਼ ਹੈ: ਇਹ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਦੇ ਫੋਕਸ ਵਾਲੇ ਤਲ ਤੋਂ ਬਾਹਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਦ੍ਰਿਸ਼-ਖੇਤਰਾਂ ਵਿੱਚ ਬਦਲਦਾ ਹੈ।

ਬ੍ਰਿਲੀਅੰਟ ਕ੍ਰੈਸਿਲ ਬਲੂ ਬਨਾਮ ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ

ਦੋਵੇਂ ਰੰਗਕ ਰੈਟੀਕੁਲੋਸਾਈਟਾਂ ਲਈ ਸੁਪ੍ਰਾਵਾਈਟਲ ਰੰਗਕ ਹਨ, ਪਰ ਮਿਆਰੀਕਰਨ ਉਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਨੂੰ ਤਰਜੀਹ ਦਿੰਦਾ ਹੈ। ਹੀਮੈਟੋਲੋਜੀ ਵਿੱਚ ਮਿਆਰੀਕਰਨ ਲਈ ਅੰਤਰਰਾਸ਼ਟਰੀ ਕੌਂਸਲ ਨਾਲ ਮਿਲ ਕੇ ਵਿਕਸਿਤ ਕੀਤੀ ਗਈ ਅਤੇ CLSI H44 ਮਿਆਰ ਪੰਨੇ 'ਤੇ ਦਰਜ CLSI H44-A2 ਰੈਟੀਕੁਲੋਸਾਈਟ ਵਿਧੀ, EDTA ਖੂਨ ਦੀ ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਰੰਗਾਈ ਨੂੰ ਹੱਥੀਂ ਤੁਲਨਾਤਮਕ ਵਿਧੀ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਰਵਾਇਤੀ ਹੀਮੈਟੋਲੋਜੀ ਸਿੱਖਿਆ ਵੀ ਦਿੱਖ ਦੇ ਮਾਮਲੇ ਵਿੱਚ ਇਸ ਨਾਲ ਸਹਿਮਤ ਹੈ: ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਤੰਤੂਆਂ ਨੂੰ ਵਧੇਰੇ ਗੂੜ੍ਹਾ ਅਤੇ ਇਕਸਾਰ ਰੰਗਦਾ ਹੈ, ਜਦਕਿ ਬ੍ਰਿਲੀਅੰਟ ਕ੍ਰੈਸਿਲ ਬਲੂ ਵਿੱਚ ਬੈਚਾਂ ਅਤੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿਚਕਾਰ ਵਧੇਰੇ ਭਿੰਨਤਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।

ਇਸ ਦਰਜੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਸ਼ਰਤ ਵੀ ਜੁੜੀ ਹੈ। ICSH ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਕ ਮੁਲਾਂਕਣ ਦਿਸ਼ਾ-ਨਿਰਦੇਸ਼ ਹੱਥੀਂ ਕੀਤੀ ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ ਨੂੰ ਸੰਦਰਭ ਤੁਲਨਾ ਦੀ ਪਹੁੰਚ ਵਜੋਂ ਸਵੀਕਾਰ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਪਰ ਇਸ ਨੂੰ ਵਿਅਕਤੀਗਤ ਨਿਰਣੇ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਅਤੇ ਤੁਲਨਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਘੱਟ ਪਰਿਸ਼ੁੱਧ ਦੱਸਦੇ ਹਨ। ਜਿੱਥੇ ਉਪਲਬਧ ਹੋਣ, ਉੱਥੇ ਫਲੋ ਸਾਈਟੋਮੈਟ੍ਰਿਕ ਸੰਦਰਭ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਤਰਜੀਹ ਦਿੱਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। 2022 ਵਿੱਚ 100 ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ ਉਸ ਅਧਿਐਨ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਕ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨਾਲੋਂ ਬ੍ਰਿਲੀਅੰਟ ਕ੍ਰੈਸਿਲ ਬਲੂ ਵਿੱਚ ਘੱਟ ਵਿਵਸਥਿਤ ਝੁਕਾਅ ਮਿਲਿਆ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਰੰਗਾਈ ਵਿਧੀਆਂ ਦੀ PMC ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ ਦਰਜ ਹੈ। ਵਿਦਿਆਰਥੀਆਂ ਲਈ ਤਰਕਸੰਗਤ ਸਾਰ ਇਹ ਹੈ: ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨੂੰ ਮਿਆਰੀਕ੍ਰਿਤ ਹੱਥੀਂ ਤੁਲਨਾਤਮਕ ਮਿਆਰ ਵਜੋਂ ਵਰਤੋ, ਕਿਸੇ ਵੀ ਸਥਾਨਕ ਬ੍ਰਿਲੀਅੰਟ ਕ੍ਰੈਸਿਲ ਬਲੂ ਵਿਧੀ ਦੀ ਤਸਦੀਕ ਇਸ ਨਾਲ ਜਾਂ ਸਵੈਚਾਲਿਤ ਵਿਧੀ ਨਾਲ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਦੋਵਾਂ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਹੱਥੀਂ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ ਤੋਂ ਨਤੀਜਿਆਂ ਵਿੱਚ ਵਧੇਰੇ ਫੈਲਾਅ ਦੀ ਉਮੀਦ ਰੱਖੋ। ਮਿਆਰੀਕਰਨ ਬਾਰੇ ਪੁਰਾਣੇ ਸਾਹਿਤ ਨੇ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤੇ Azure B ਨੂੰ ਰਸਾਇਣਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਧੇਰੇ ਸ਼ੁੱਧ ਬਦਲ ਵਜੋਂ ਵੀ ਸਮਰਥਨ ਦਿੱਤਾ ਸੀ, ਕਿਉਂਕਿ ਵਪਾਰਕ ਰੰਗਕਾਂ ਦੇ ਬੈਚ ਵੱਖਰੇ ਹੁੰਦੇ ਸਨ। ਇਹ Azure B ਬਾਰੇ ਮਾਰਸ਼ਲ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸ ਤੋਂ ਸਮਝ ਆਉਂਦੀ ਹੈ ਕਿ ਵਿਧੀਆਂ ਦੀ ਚਰਚਾ ਵਿੱਚ ਅਭਿਕਰਮਕ ਦਾ ਗ੍ਰੇਡ ਅਜੇ ਵੀ ਕਿਉਂ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।

ਆਮ ਗ਼ਲਤੀਆਂ ਤੋਂ ਬਚਣਾ

ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਅਸਫਲ ਤਿਆਰੀਆਂ ਲਈ ਚਾਰ ਗ਼ਲਤੀਆਂ ਜ਼ਿੰਮੇਵਾਰ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ। ਨਿਊ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ N ਦੀ ਬਜਾਏ ਆਮ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਮੰਗਵਾਉਣ ਨਾਲ ਕਮਜ਼ੋਰ ਰੰਗਾਈ ਹੁੰਦੀ ਹੈ; ਇਸ ਦਾ ਕਾਰਨ ਰਸਾਇਣਕ ਫ਼ਰਕ ਹੈ, ਤਕਨੀਕ ਨਹੀਂ। ਨਿਰੀਖਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਫਿਕਸ ਕਰਨਾ ਜਾਂ ਕਾਊਂਟਰਸਟੇਨ ਲਗਾਉਣਾ ਸੁਪ੍ਰਾਵਾਈਟਲ ਸੰਕੇਤ ਨੂੰ ਮਿਟਾ ਦਿੰਦਾ ਹੈ। ਰੰਗਕ ਦੇ ਅਵਕਸ਼ੇਪ ਨੂੰ ਕਣਾਂ ਵਜੋਂ ਗਿਣਨ ਨਾਲ ਨਤੀਜਾ ਵੱਧ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨੂੰ ਦੋ-ਕਣਾਂ ਵਾਲਾ ਨਿਯਮ ਅਤੇ ਛਾਣਿਆ ਹੋਇਆ ਰੰਗਕ ਰੋਕਦੇ ਹਨ। ਰੈਟੀਕੁਲੋਸਾਈਟ ਦੀ ਘੱਟ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ 'ਤੇ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਗਿਣਨ ਨਾਲ ਅਜਿਹਾ ਅੰਕ ਮਿਲਦਾ ਹੈ ਜੋ ਸਟੀਕ ਦਿਸਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਜਿਸ ਦੀਆਂ ਭਰੋਸੇ ਦੀਆਂ ਹੱਦਾਂ ਬਹੁਤ ਚੌੜੀਆਂ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ। ਹਰ ਗ਼ਲਤੀ ਦਾ ਇੱਕੋ ਲੱਛਣ ਹੁੰਦਾ ਹੈ: ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ ਕਰਨ ਵਾਲਾ ਉਸ ਨਤੀਜੇ ਲਈ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ ਨੂੰ ਦੋਸ਼ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਜੋ ਅਭਿਕਰਮਕ ਵਾਲੇ ਪੜਾਅ ਵਿੱਚ ਹੀ ਤੈਅ ਹੋ ਚੁੱਕਾ ਸੀ।