ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਅਤੇ ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ: NOS, cGMP, ਅਤੇ ਰਕਤ-ਨਾੜੀ ਸੰਕੇਤਕਰਨ

ਸਵਾਲ ਸੌਖਾ ਲੱਗਦਾ ਹੈ: ਕੀ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ? ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਵਿੱਚ ਇਸ ਦਾ ਜਵਾਬ ਚਾਰ ਵੱਖਰੇ ਸਵਾਲਾਂ ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਹਰੇਕ ਲਈ ਵੱਖਰਾ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਟੈਸਟ ਹੈ। ਇਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਆਪਸ ਵਿੱਚ ਰਲਾਉਣਾ ਹੀ ਮੁੱਖ ਕਾਰਨ ਹੈ ਕਿ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਅਤੇ ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ ਬਾਰੇ ਲਿਖਤ ਭਰੋਸੇ ਨਾਲ ਕਹੀ ਗਈ, ਪਰ ਅਸਪਸ਼ਟ ਲੱਗਦੀ ਹੈ।

ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ ਦੇ ਸੰਕੇਤ ਨੂੰ ਚਾਰ ਕੜੀਆਂ ਵਾਲੀ ਲੜੀ ਵਾਂਗ ਸਮਝੋ। ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ ਸਿੰਥੇਜ਼ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਇੱਕ ਜੀਨ ਦਾ ਪ੍ਰਤਿਲੇਖਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਆਰਜੀਨੀਨ ਨੂੰ ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ ਵਿੱਚ ਬਦਲਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਗੈਸ ਕਿਸੇ ਹੋਰ ਪਦਾਰਥ ਨਾਲ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਕਰਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਵਿਸਰਣ ਰਾਹੀਂ ਆਪਣੇ ਟੀਚੇ ਤੱਕ ਪਹੁੰਚਦੀ ਹੈ। ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਗੁਆਨੀਲੇਟ ਸਾਈਕਲੇਜ਼ ਇਸ ਨੂੰ ਪਛਾਣਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਸਾਈਕਲਿਕ GMP ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਦੇ ਹਰ ਕੜੀ ਉੱਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ਿਤ ਹੋਏ ਹਨ, ਪਰ ਸਬੂਤ ਵੱਖਰੀਆਂ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਤਿਆਰੀਆਂ, ਵੱਖਰੀਆਂ ਸੰਘਣਤਾਵਾਂ ਅਤੇ ਵੱਖਰੇ ਆਈਸੋਫਾਰਮਾਂ ਤੋਂ ਆਉਂਦੇ ਹਨ। ਇੱਕ ਕੜੀ ਉੱਤੇ ਮਿਲਿਆ ਨਤੀਜਾ ਕਿਸੇ ਹੋਰ ਕੜੀ ਉੱਤੇ ਕਾਰਵਾਈ ਨੂੰ ਸਾਬਤ ਨਹੀਂ ਕਰਦਾ।

ਮਿਆਰੀ ਲੜੀ, ਸਿੱਧੇ ਸ਼ਬਦਾਂ ਵਿੱਚ

ਰਕਤ-ਨਾੜੀ ਦੀ ਕੰਧ ਵਿੱਚ ਆਮ ਕ੍ਰਮ ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਚੱਲਦਾ ਹੈ। ਇੱਕ ਉੱਤੇਜਕ ਐਂਡੋਥੀਲੀਅਲ ਕੋਸ਼ਿਕਾ ਉੱਤੇ ਅਸਰ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਐਂਡੋਥੀਲੀਅਲ ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ ਸਿੰਥੇਜ਼, ਜਿਸ ਨੂੰ eNOS ਜਾਂ NOS3 ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ ਦੀ ਇੱਕ ਛੋਟੀ ਲਹਿਰ ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਗੈਸ ਨੇੜਲੀ ਨਿਰਵਿਘਨ ਮਾਸਪੇਸ਼ੀ ਕੋਸ਼ਿਕਾ ਵਿੱਚ ਵਿਸਰਿਤ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਗੁਆਨੀਲੇਟ ਸਾਈਕਲੇਜ਼ ਦੇ ਰਿਡਿਊਸਡ ਲੋਹੇ ਵਾਲੇ ਹੀਮ ਨਾਲ ਜੁੜਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ GTP ਨੂੰ ਸਾਈਕਲਿਕ GMP ਵਿੱਚ ਬਦਲਣ ਦੀ ਗਤੀ ਵਧਾਉਂਦੀ ਹੈ। ਸਾਈਕਲਿਕ GMP ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਕਾਈਨੇਜ਼ G ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਕੈਲਸ਼ੀਅਮ ਦੇ ਸੰਭਾਲਣ ਦੇ ਢੰਗ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀ ਆਉਂਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਮਾਸਪੇਸ਼ੀ ਢਿੱਲੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।

ਇੱਕ ਦੂਜੀ ਲੜੀ ਵੀ ਹੈ ਜਿਸ ਨੂੰ ਵੱਖਰਾ ਰੱਖਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ। ਸੰਕਰਮਣ ਜਾਂ ਸਾਈਟੋਕਾਈਨ ਦੇ ਸੰਪਰਕ ਦੌਰਾਨ, ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਇੱਕ ਵੱਖਰੇ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦਾ ਪ੍ਰਤਿਲੇਖਨ ਕਰਦੀਆਂ ਹਨ: ਉੱਤੇਜਨਾ ਨਾਲ ਬਣਨ ਵਾਲਾ ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ ਸਿੰਥੇਜ਼ ਜਾਂ iNOS, ਜਿਸ ਨੂੰ NOS2 ਵੀ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਇਹ eNOS ਨਾਲੋਂ ਵੱਧ ਅਤੇ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਤੱਕ ਚੱਲਣ ਵਾਲੇ ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ ਪ੍ਰਵਾਹ ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਤੀਜਾ ਆਈਸੋਫਾਰਮ, ਨਿਊਰੋਨਲ NOS ਜਾਂ nNOS, ਇੱਕ ਹੋਰ ਹੀ ਸੰਦਰਭ ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਿਤ ਹੈ। ਜਦੋਂ ਕੋਈ ਖੋਜ-ਪੱਤਰ ਆਈਸੋਫਾਰਮ ਦੱਸੇ ਬਿਨਾਂ ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ ਸਿੰਥੇਜ਼ ਦਾ ਜ਼ਿਕਰ ਕਰੇ, ਤਾਂ ਰੁਕ ਕੇ ਜਾਂਚੋ ਕਿ ਕਿਹੜਾ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਇਲੈਕਟ੍ਰਾਨਾਂ ਨੂੰ ਕਿਵੇਂ ਅੱਗੇ ਪਹੁੰਚਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਦੀ ਸੰਖੇਪ ਵਿਆਖਿਆ ਆਮ ਤੌਰ ’ਤੇ ਰੀਡਾਕਸ ਟੀਚਿਆਂ ਲਈ ਵੀ ਇਹੀ ਗੱਲ ਦੱਸਦੀ ਹੈ: ਇਹ ਰੀਲੇ ਆਪਣੇ ਆਪ ਕੁਝ ਨਹੀਂ ਕਰਦੀ, ਅਤੇ ਹਰ ਸਿਰੇ ਉੱਤੇ ਮੌਜੂਦ ਸਾਥੀ ਨਤੀਜਾ ਤੈਅ ਕਰਦਾ ਹੈ।

ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸਾਈਕਲਿਕ GMP ਵੀ ਇੱਕ ਸੰਯੁਕਤ ਨਤੀਜਾ ਹੈ, ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਸਿੱਧੀ ਜਾਂਚ ਨਹੀਂ। ਇਸ ਦਾ ਪੱਧਰ ਸਾਈਕਲੇਜ਼ ਦੁਆਰਾ ਬਣਨ ਵਾਲੀ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚੋਂ ਫਾਸਫੋਡਾਈਐਸਟਰੇਜ਼ਾਂ ਦੁਆਰਾ ਟੁੱਟਣ ਵਾਲੀ ਮਾਤਰਾ ਘਟਾਉਣ ਦਾ ਨਤੀਜਾ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ; ਰਕਤ-ਨਾੜੀਆਂ ਦੀ ਨਿਰਵਿਘਨ ਮਾਸਪੇਸ਼ੀ ਵਿੱਚ ਖ਼ਾਸ ਤੌਰ ’ਤੇ PDE5 ਇਹ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ ਸਾਈਕਲਿਕ GMP ਵਿੱਚ ਕਮੀ ਦਾ ਮਤਲਬ ਹੈ ਕਿ ਘੱਟ ਸੰਕੇਤ ਪਛਾਣਨ ਵਾਲੇ ਤੰਤਰ ਤੱਕ ਪਹੁੰਚਿਆ। ਇਹ ਆਪਣੇ ਆਪ ਨਹੀਂ ਦੱਸਦਾ ਕਿ ਕਿਹੜੀ ਕੜੀ ਨਾਕਾਮ ਹੋਈ।

ਕੜੀ 1: ਘੱਟ iNOS ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਬਣਦਾ ਹੈ

ਬੈਕਟੀਰੀਆਈ ਲਿਪੋਪਾਲੀਸੈਕਰਾਈਡ, ਇੰਟਰਫੇਰੋਨ ਗਾਮਾ, ਜਾਂ ਦੋਵਾਂ ਨਾਲ ਉੱਤੇਜਿਤ ਚੂਹਿਆਂ ਦੇ ਮੈਕ੍ਰੋਫੇਜਾਂ ਵਿੱਚ, ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨੇ iNOS ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਵਿੱਚ ਉਮੀਦ ਕੀਤੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਰੋਕਿਆ ਅਤੇ ਮੈਕ੍ਰੋਫੇਜ ਪ੍ਰਤਿਲੇਖਨ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ iNOS ਮੈਸੇਂਜਰ RNA ਨੂੰ ਬਹੁਤ ਘਟਾਇਆ। ਜਾਣਕਾਰੀ ਦੇਣ ਵਾਲੀ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਕੀ ਨਹੀਂ ਬਦਲਿਆ। ਅਵਰੋਧਕ I ਕੱਪਾ B ਅਲਫ਼ਾ ਦਾ ਟੁੱਟਣਾ, NF ਕੱਪਾ B ਅਤੇ STAT1 ਦਾ ਫਾਸਫੋਰੀਲੇਸ਼ਨ, ਅਤੇ ਇਨ੍ਹਾਂ ਕਾਰਕਾਂ ਦਾ ਨਿਊਕਲੀਅਸ ਵਿੱਚ ਜਾਣਾ ਵੱਡੇ ਪੱਧਰ ’ਤੇ ਬਰਕਰਾਰ ਰਿਹਾ। ਜੋ ਘਟਿਆ, ਉਹ ਸੀ ਇਨ੍ਹਾਂ ਦਾ DNA ਨਾਲ ਜੁੜਨਾ। ਕ੍ਰੋਮੈਟਿਨ ਇਮਿਊਨੋਪ੍ਰੈਸਿਪਿਟੇਸ਼ਨ ਨੇ iNOS ਪ੍ਰੋਮੋਟਰ ਉੱਤੇ ਇਨ੍ਹਾਂ ਦੀ ਘੱਟ ਮੌਜੂਦਗੀ ਦਿਖਾ ਕੇ ਇਸ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕੀਤੀ।

ਇਹ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਤੈਅ ਹੋਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਵਾਲੇ ਪੜਾਅ ਵਿੱਚ ਜੀਨ-ਨਿਯੰਤਰਣ ਦਾ ਪ੍ਰਭਾਵ ਹੈ, ਨਾ ਕਿ ਪਹਿਲਾਂ ਤੋਂ ਮੌਜੂਦ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦਾ ਤੁਰੰਤ ਅਵਰੋਧ। ਇਹ ਸੋਜ-ਸੰਬੰਧੀ ਸੰਕੇਤਕਰਨ ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਿਤ ਹੈ, ਜਿੱਥੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਬਣਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਪ੍ਰਤਿਲੇਖਨ ਕਾਰਕਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰੋਮੋਟਰ ਨਾਲ ਜੁੜਨਾ ਪੈਂਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਆਰਾਮ ਦੀ ਅਵਸਥਾ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਰਕਤ-ਨਾੜੀ ਦੇ ਨਿਰੰਤਰ ਮੌਜੂਦ eNOS ਬਾਰੇ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ ’ਤੇ ਕੁਝ ਨਹੀਂ ਦੱਸਦਾ, ਅਤੇ ਇਸ ਨੂੰ ਇਸੇ ਹੱਦ ਤੱਕ ਵਰਣਨ ਕਰਨਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।

ਕੜੀ 2: ਮੌਜੂਦਾ NOS ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਹੌਲੀ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ

ਚੂਹਿਆਂ ਉੱਤੇ ਕੀਤੇ ਇੱਕ ਅਧਿਐਨ ਨੇ ਇੱਕ ਵੱਖਰੇ ਪੱਧਰ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ। ਹੋਸ਼ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਨਰ ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ ਨਸ ਰਾਹੀਂ ਲਿਪੋਪਾਲੀਸੈਕਰਾਈਡ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ, ਫਿਰ ਤਿੰਨ ਘੰਟੇ ਬਾਅਦ ਨਸ ਰਾਹੀਂ ਜਾਂ ਤਾਂ ਸੈਲਾਈਨ ਜਾਂ 3 mg per kg ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ। ਹਾਈਪੋਥੈਲਾਮਿਕ NOS ਸਰਗਰਮੀ ਦੇ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਮੀਡੀਅਲ ਬੇਸਲ ਹਾਈਪੋਥੈਲਾਮਸ ਦੀ ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ ਸਿੰਥੇਜ਼ ਸਰਗਰਮੀ ਨੂੰ ਚਿੰਨ੍ਹਿਤ ਆਰਜੀਨੀਨ ਦੇ ਸਿਟਰੁਲੀਨ ਵਿੱਚ ਬਦਲਣ ਰਾਹੀਂ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ। ਸਿਰਫ਼ ਤਣਾਅ ਅਤੇ ਸੈਲਾਈਨ ਨੇ ਕੁਝ ਕੈਲਸ਼ੀਅਮ-ਸੁਤੰਤਰ ਸਰਗਰਮੀ ਪੈਦਾ ਕੀਤੀ, ਅਤੇ ਲਿਪੋਪਾਲੀਸੈਕਰਾਈਡ ਨੇ ਇਸ ਨੂੰ ਕੰਟਰੋਲ ਪੱਧਰ ਤੋਂ ਲਗਭਗ ਦਸ ਗੁਣਾ ਕਰ ਦਿੱਤਾ। ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨੇ ਉੱਤੇਜਨਾ ਨਾਲ ਪੈਦਾ ਹੋਏ ਦੋਵੇਂ ਹਿੱਸੇ ਖ਼ਤਮ ਕਰ ਦਿੱਤੇ। ਉਸ ਮਾਤਰਾ ਅਤੇ ਸਮੇਂ ਉੱਤੇ ਉਸ ਟਿਸ਼ੂ ਵਿੱਚ ਕੈਲਸ਼ੀਅਮ-ਨਿਰਭਰ, ਨਿਰੰਤਰ ਮੌਜੂਦ ਸਰਗਰਮੀ ਨਹੀਂ ਬਦਲੀ।

ਇਸ ਨਤੀਜੇ ਨੂੰ ਬਿਲਕੁਲ ਉਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸਮਝੋ ਜਿਵੇਂ ਲਿਖਿਆ ਗਿਆ ਹੈ: ਉਨ੍ਹਾਂ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਮਾਪੀ ਗਈ iNOS-ਕਿਸਮ ਦੀ ਸਰਗਰਮੀ ਘਟੀ। ਇਹ ਜੀਨ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦਾ ਮਾਪ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹ ਇਸ ਗੱਲ ਦਾ ਸਬੂਤ ਨਹੀਂ ਕਿ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਹਮੇਸ਼ਾ eNOS ਜਾਂ nNOS ਦੀ ਬਜਾਏ ਸਿਰਫ਼ iNOS ਨੂੰ ਹੀ ਚੁਣ ਕੇ ਰੋਕਦਾ ਹੈ। ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤੇ ਐਂਜ਼ਾਈਮਾਂ ਉੱਤੇ ਕੀਤਾ ਕੰਮ ਇਸ ਸਾਵਧਾਨੀ ਨੂੰ ਹੋਰ ਮਜ਼ਬੂਤ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤੇ ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ ਸਿੰਥੇਜ਼ ਦੀਆਂ ਸਿੱਧੀਆਂ ਜਾਂਚਾਂ ਵਿੱਚ, ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨੇ 30 micromolar ਉੱਤੇ ਸਿਟਰੁਲੀਨ ਬਣਨ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਰੋਕ ਦਿੱਤਾ। ਅੱਧਾ ਅਵਰੋਧ ਕਰਨ ਵਾਲੀ ਸੰਘਣਤਾ ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਡਿਸਮਿਊਟੇਜ਼ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਲਗਭਗ 5.3 micromolar ਅਤੇ ਇਸ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ 9.2 micromolar ਸੀ, ਜਿਵੇਂ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤੇ NOS ਅਤੇ ਗੁਆਨੀਲੇਟ ਸਾਈਕਲੇਜ਼ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤੇ nNOS ਦੇ ਇੱਕ ਵੱਖਰੇ ਅਧਿਐਨ ਨੇ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਹੀਮ ਦੇ ਆਕਸੀਕਰਨ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਵੱਲ ਇਸ਼ਾਰਾ ਕੀਤਾ। ਵਿਹਾਰਕ ਸਿੱਖਿਆ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਵੱਖ ਕੀਤੇ ਤੰਤਰਾਂ ਵਿੱਚ NOS ਦਾ ਸਿੱਧਾ ਅਵਰੋਧ ਅਸਲ ਹੈ, ਪਰ ਹਾਈਪੋਥੈਲਾਮਸ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਨੂੰ ਖਿੱਚ ਕੇ ਇਹ ਆਮ ਦਾਅਵਾ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਕਿ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਹਰ ਥਾਂ ਸਾਰੇ ਨਿਰੰਤਰ ਮੌਜੂਦ NOS ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਤੋਂ ਬਚਾ ਕੇ ਰੱਖਦਾ ਹੈ।

ਕੜੀ 3: ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ ਪਹੁੰਚਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਹੀ ਖ਼ਤਮ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ

ਸਾਈਕਲਿਕ GMP ਵਿੱਚ ਕਮੀ ਨੂੰ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੇ ਅਵਰੋਧ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ ਕੋਈ ਹੋਰ ਕਾਰਨ ਵੀ ਸਮਝਾ ਸਕਦਾ ਹੈ—ਇਸ ਦਾ ਸਭ ਤੋਂ ਸਪਸ਼ਟ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ ਕਲਚਰ ਵਿੱਚ ਉਗਾਈਆਂ ਖ਼ਰਗੋਸ਼ ਦੀਆਂ ਫੇਫੜਿਆਂ ਦੀ ਧਮਨੀ ਦੀਆਂ ਨਿਰਵਿਘਨ ਮਾਸਪੇਸ਼ੀ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਤੋਂ ਮਿਲਦਾ ਹੈ। ਪ੍ਰਯੋਗ ਦੀ ਬਣਤਰ ਵਿੱਚ ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ ਦਾਤਾ ਸਿੱਧੇ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਕੇ ਅੰਦਰੂਨੀ NOS ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਬਾਈਪਾਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਫਿਰ ਰਕਤ-ਨਾੜੀ ਦੀ ਨਿਰਵਿਘਨ ਮਾਸਪੇਸ਼ੀ ਵਿੱਚ ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਦੇ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਜਾਂਚਿਆ ਗਿਆ ਕਿ ਕੀ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਫਿਰ ਵੀ ਸਾਈਕਲਿਕ GMP ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ।

ਤਿੰਨ ਦਾਤਿਆਂ ਨੂੰ 1 ਤੋਂ 100 micromolar ਤੱਕ ਪਰਖਿਆ ਗਿਆ: S ਨਾਈਟ੍ਰੋਸੋ L ਸਿਸਟੀਨ, ਸੋਡੀਅਮ ਨਾਈਟ੍ਰੋਪਰੂਸਾਈਡ, ਅਤੇ MPANO ਨਾਮ ਦਾ ਇੱਕ ਸਥਿਰ ਡੀਐਮੀਨੇਟਡ ਸਮਰੂਪ। ਸਭ ਨੇ ਸਾਈਕਲਿਕ GMP ਨੂੰ ਲਗਭਗ 1.5 ਗੁਣਾ ਤੋਂ 12 ਗੁਣਾ ਤੱਕ ਵਧਾਇਆ। 10 micromolar ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨੇ ਪਹਿਲੇ ਦੋ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਨੂੰ 51 ਤੋਂ 100 ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਤੱਕ ਰੋਕਿਆ ਅਤੇ MPANO ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਬਿਨਾਂ ਬਦਲਾਅ ਦੇ ਛੱਡ ਦਿੱਤਾ। ਜੇ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਸਿਰਫ਼ ਸਾਈਕਲੇਜ਼ ਦੇ ਉਤਪ੍ਰੇਰਕ ਸਥਾਨ ਨੂੰ ਰੋਕ ਰਿਹਾ ਹੁੰਦਾ, ਤਾਂ ਦਾਤਿਆਂ ਵਿਚਕਾਰ ਇਸ ਚੋਣਵੀਂ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਸਮਝਾਉਣਾ ਔਖਾ ਹੁੰਦਾ, ਕਿਉਂਕਿ ਤਿੰਨੋਂ ਅੱਗੇ ਜਾ ਕੇ ਇੱਕੋ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਉੱਤੇ ਅਸਰ ਕਰਦੇ ਹਨ।

ਫਿਰ ਤਿੰਨ ਕੰਟਰੋਲਾਂ ਨੇ ਤੰਤਰ ਨੂੰ ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਨਾਲ ਜੋੜ ਕੇ ਸਪਸ਼ਟ ਕੀਤਾ। ਪਹਿਲਾਂ, ਜ਼ੈਂਥੀਨ ਅਤੇ ਜ਼ੈਂਥੀਨ ਆਕਸੀਡੇਜ਼ ਨਾਲ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਤੋਂ ਬਾਹਰ ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਬਣਾਉਣ ਨੇ ਉਹੀ ਪੈਟਰਨ ਦੁਹਰਾਇਆ: CYSNO ਅਤੇ ਨਾਈਟ੍ਰੋਪਰੂਸਾਈਡ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਰੁਕੀ, ਪਰ MPANO ਦੀ ਨਹੀਂ। ਦੂਜਾ, ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨੇ ਨਿਰਵਿਘਨ ਮਾਸਪੇਸ਼ੀ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਮਾਤਰਾ ਅਤੇ ਸਮੇਂ ਉੱਤੇ ਨਿਰਭਰ ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਉਤਪਾਦਨ ਕਰਵਾਇਆ, ਜਿਸ ਨੂੰ ਸਾਈਟੋਕ੍ਰੋਮ c ਦੇ ਰਿਡਕਸ਼ਨ ਰਾਹੀਂ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ। ਤੀਜਾ, ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਡਿਸਮਿਊਟੇਜ਼ ਨੇ ਅਵਰੋਧ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਰੋਕ ਦਿੱਤਾ, ਜਦਕਿ ਕੈਟਲੇਜ਼ ਨੇ ਨਹੀਂ। ਇਹ ਉਸ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਤਿਆਰੀ ਵਿੱਚ ਹਾਈਡ੍ਰੋਜਨ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਦੀ ਬਜਾਏ ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਨੂੰ ਤੁਰੰਤ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਰਸਾਇਣਕ ਰੂਪ ਵਜੋਂ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।

ਪ੍ਰਯੋਗ ਦੇ ਸਹਿ-ਕਲਚਰ ਰੂਪ ਦਾ ਜ਼ਿਕਰ ਕਰਨਾ ਲਾਭਦਾਇਕ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਇਹ ਦੱਸਦਾ ਹੈ ਕਿ ਪ੍ਰਭਾਵ ਕਿੱਥੇ ਵਾਪਰਦਾ ਹੈ। ਕਵਰਸਲਿਪਾਂ ਉੱਤੇ ਮੌਜੂਦ ਐਂਡੋਥੀਲੀਅਲ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਨੂੰ ਥੋੜ੍ਹੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਨਿਰਵਿਘਨ ਮਾਸਪੇਸ਼ੀ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਨਾਲ ਸਹਿ-ਕਲਚਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਮੂਲ ਅਵਸਥਾ ਵਿੱਚ ਛੱਡੇ ਗਏ ਐਂਡੋਥੀਲੀਅਲ ਕਾਰਕ ਨੇ ਨਿਰਵਿਘਨ ਮਾਸਪੇਸ਼ੀ ਦਾ ਸਾਈਕਲਿਕ GMP ਤਿੰਨ ਤੋਂ ਅੱਠ ਗੁਣਾ ਵਧਾਇਆ। ਕਿਸੇ ਵੀ ਕੋਸ਼ਿਕਾਈ ਹਿੱਸੇ ਨੂੰ ਪਹਿਲਾਂ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨਾਲ ਸੰਪਰਕ ਵਿੱਚ ਲਿਆਉਣ ਨਾਲ ਉਹ ਸੰਕੇਤ ਘਟਿਆ, ਅਤੇ ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਡਿਸਮਿਊਟੇਜ਼ ਨੇ ਐਂਡੋਥੀਲੀਅਲ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਦੇ ਪੂਰਵ-ਸੰਪਰਕ ਵਾਲੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਕੁਝ ਹੱਦ ਤੱਕ ਵਾਪਸ ਪਲਟਿਆ। ਦੂਜੇ ਸ਼ਬਦਾਂ ਵਿੱਚ, ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨੂੰ ਨਿਰਵਿਘਨ ਮਾਸਪੇਸ਼ੀ ਦੀ ਸੰਕੇਤ ਪਛਾਣਨ ਵਾਲੀ ਕੋਸ਼ਿਕਾ ਦੇ ਅੰਦਰ ਕੰਮ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੀ ਨਹੀਂ ਹੈ। ਇਹ ਰਸਤੇ ਵਿੱਚ ਸੁਨੇਹਾਬਰ ਨੂੰ ਹਟਾ ਕੇ ਸੰਕੇਤ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਖੋਜ ਨੂੰ ਪੜ੍ਹਨ ਦੀ ਮਾਰਗਦਰਸ਼ਿਕਾ ਇਸ ਨੂੰ ਇੱਕ ਆਮ ਨਿਯਮ ਵਜੋਂ ਲੈਂਦੀ ਹੈ: ਕਿਸੇ ਅਣੂ-ਪੱਧਰੀ ਟੀਚੇ ਦਾ ਨਾਮ ਦੇਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਉਹ ਕੋਸ਼ਿਕਾਈ ਹਿੱਸਾ ਦੱਸੋ ਜਿੱਥੇ ਦਖ਼ਲ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।

ਇਸ ਨੂੰ NOS ਦਾ ਅਵਰੋਧ ਕਹਿਣਾ ਗ਼ਲਤ ਹੋਵੇਗਾ। ਦਾਤਿਆਂ ਦੇ ਕੰਮ ਕਰਨ ਲਈ ਸਿੰਥੇਜ਼ ਵਾਲੇ ਕਿਸੇ ਪੜਾਅ ਦੀ ਲੋੜ ਨਹੀਂ ਸੀ, ਫਿਰ ਵੀ ਸੰਕੇਤ ਘਟਿਆ।

ਕੜੀ 4: ਸੰਕੇਤ ਪਛਾਣਨ ਵਾਲਾ ਤੰਤਰ ਖ਼ੁਦ ਘੱਟ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਕਰਦਾ ਹੈ

ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਗੁਆਨੀਲੇਟ ਸਾਈਕਲੇਜ਼ ਉੱਤੇ ਸਿੱਧੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਮੌਜੂਦ ਹਨ, ਪਰ ਸੰਘਣਤਾਵਾਂ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹਨ। ਉੱਪਰ ਦਿੱਤੀ ਸ਼ੁੱਧ ਐਂਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ, ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ ਨਾਲ ਉੱਤੇਜਿਤ ਸਾਈਕਲੇਜ਼ ਨੂੰ ਅੱਧਾ ਰੋਕਣ ਲਈ ਲਗਭਗ 60 micromolar ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਦੀ ਲੋੜ ਸੀ, ਜਦਕਿ NOS ਦਾ ਅੱਧਾ ਅਵਰੋਧ ਲਗਭਗ 5 ਤੋਂ 9 micromolar ਉੱਤੇ ਹੋਇਆ। ਇੱਥੋਂ ਤੱਕ ਕਿ 1 millimolar ਨੇ ਵੀ ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਅਵਰੋਧ ਸਿਰਫ਼ ਅੰਸ਼ਕ ਹੀ ਪੈਦਾ ਕੀਤਾ। ਇਹ ਲਗਭਗ ਛੇ ਤੋਂ ਗਿਆਰਾਂ ਗੁਣਾ ਦਾ ਫ਼ਰਕ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ ਘੱਟ micromolar ਸੰਘਣਤਾ ਉੱਤੇ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਦੇ ਕਿਸੇ ਪ੍ਰਯੋਗ ਵਿੱਚ ਸਾਈਕਲਿਕ GMP ਘਟਣ ਨੂੰ ਸਿਰਫ਼ ਉਸ ਦੇ ਮਾਪ ਦੇ ਆਧਾਰ ਉੱਤੇ ਚੋਣਵਾਂ ਸਾਈਕਲੇਜ਼ ਅਵਰੋਧ ਨਹੀਂ ਕਿਹਾ ਜਾ ਸਕਦਾ।

ਬਾਅਦ ਦੇ ਇੱਕ ਰੀਡਾਕਸ ਅਧਿਐਨ ਨੇ ਇੱਕ ਦੂਜੀ ਸਾਵਧਾਨੀ ਜੋੜੀ: ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨੇ ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ ਨਾਲ ਸਰਗਰਮ ਹੋਏ ਸਾਈਕਲੇਜ਼ ਨੂੰ ਅਜਿਹੇ ਤੰਤਰ ਰਾਹੀਂ ਨਿਸ਼ਕ੍ਰਿਆ ਕੀਤਾ ਜੋ ਹੀਮ ਦੇ ਲੋਹੇ ਦੇ ਹਵਾ ਨਾਲ ਹੋਣ ਵਾਲੇ ਸਧਾਰਨ ਆਕਸੀਕਰਨ ਤੋਂ ਵੱਖਰਾ ਸੀ। ਇਸ ਲਈ ਸੰਕੇਤ ਪਛਾਣਨ ਵਾਲਾ ਤੰਤਰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਰਸਾਇਣਕ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਬਾਰੇ ਹਾਲੇ ਪੱਕਾ ਨਤੀਜਾ ਨਹੀਂ ਹੈ। ਸੰਘਣਤਾਵਾਂ ਦਾ ਫ਼ਰਕ ਇਹ ਵੀ ਦੱਸਦਾ ਹੈ ਕਿ ਘੱਟ micromolar ਸੰਪਰਕ ਉੱਤੇ ਪਹਿਲਾਂ ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਅਤੇ NOS ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਨੂੰ ਰੱਦ ਕਰਕੇ ਦੇਖਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ। ਫਾਸਫੋਡਾਈਐਸਟਰੇਜ਼ ਕੰਟਰੋਲ ਦੀ ਥਾਂ ਵੀ ਇੱਥੇ ਹੀ ਹੈ। ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਟੁੱਟਣ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਮਾਪਿਆ ਜਾਂ ਰੋਕਿਆ ਨਾ ਗਿਆ ਹੋਵੇ, ਸਾਈਕਲਿਕ GMP ਦਾ ਘੱਟ ਇਕੱਠਾ ਹੋਣਾ ਘੱਟ ਬਣਨ, ਤੇਜ਼ ਟੁੱਟਣ, ਜਾਂ ਦੋਵਾਂ ਨਾਲ ਮੇਲ ਖਾਂਦਾ ਹੈ।

ਇਸ ਨੂੰ ਬਲੱਡ ਪ੍ਰੈਸ਼ਰ ਬਾਰੇ ਇੱਕੋ ਦਾਅਵੇ ਤੱਕ ਕਿਉਂ ਨਹੀਂ ਘਟਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ

ਹਰ ਕੜੀ ਨੂੰ ਇੱਕ ਵੱਖਰੇ ਤੰਤਰ ਵਿੱਚ ਸਥਾਪਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਮੈਕ੍ਰੋਫੇਜ ਪ੍ਰਤਿਲੇਖਨ ਹਾਈਪੋਥੈਲਾਮਿਕ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਸਰਗਰਮੀ ਨਹੀਂ ਹੈ। ਲਿਪੋਪਾਲੀਸੈਕਰਾਈਡ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਦੀ ਹਾਈਪੋਥੈਲਾਮਿਕ ਸਰਗਰਮੀ ਆਰਾਮ ਦੀ ਅਵਸਥਾ ਵਾਲਾ ਐਂਡੋਥੀਲੀਅਲ ਟੋਨ ਨਹੀਂ ਹੈ। ਸਹਿ-ਕਲਚਰ ਵਿੱਚ ਮੂਲ ਅਵਸਥਾ ਦੌਰਾਨ ਛੱਡਿਆ ਗਿਆ ਐਂਡੋਥੀਲੀਅਲ ਕਾਰਕ ਐਗੋਨਿਸਟ ਨਾਲ ਉੱਤੇਜਿਤ ਰਕਤ-ਨਾੜੀ ਫੈਲਾਅ ਨਹੀਂ ਹੈ। 10 micromolar ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਦੇ ਸੰਪਰਕ ਵਿੱਚ ਕਲਚਰ ਕੀਤੀਆਂ ਫੇਫੜਿਆਂ ਦੀ ਧਮਨੀ ਦੀਆਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਮਨੁੱਖੀ ਖ਼ੂਨ-ਸੰਚਾਰ ਤੰਤਰ ਨਹੀਂ ਹਨ। ਇਨ੍ਹਾਂ ਸਭ ਨੂੰ ਸਮੇਟ ਕੇ ਇਹ ਕਹਿਣਾ ਕਿ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ ਨੂੰ ਰੋਕ ਕੇ ਬਲੱਡ ਪ੍ਰੈਸ਼ਰ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਠੀਕ ਉਨ੍ਹਾਂ ਫ਼ਰਕਾਂ ਨੂੰ ਮਿਟਾ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਕਾਇਮ ਰੱਖਣ ਲਈ ਕੰਟਰੋਲ ਬਣਾਏ ਗਏ ਸਨ।

ਤਿੰਨ ਜਾਂਚਾਂ ਵਿਆਖਿਆ ਨੂੰ ਸਬੂਤਾਂ ਦੇ ਅਨੁਕੂਲ ਰੱਖਦੀਆਂ ਹਨ। ਪਹਿਲਾਂ, ਆਈਸੋਫਾਰਮ ਦਾ ਨਾਮ ਦੱਸੋ: ਆਰਾਮ ਦੀ ਅਵਸਥਾ ਵਾਲੇ ਰਕਤ-ਨਾੜੀ ਟੋਨ ਲਈ eNOS, ਉੱਤੇਜਿਤ ਸੋਜ-ਸੰਬੰਧੀ ਪ੍ਰਵਾਹ ਲਈ iNOS, ਅਤੇ ਨਿਊਰੋਨਲ ਤੇ ਸ਼ੁੱਧ ਐਂਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੇ ਕੁਝ ਸੰਦਰਭਾਂ ਲਈ nNOS। ਦੂਜਾ, ਦੱਸੋ ਕਿ ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ ਸੰਕੇਤ ਕਿਵੇਂ ਪਹੁੰਚਾਇਆ ਗਿਆ: ਅੰਦਰੂਨੀ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਣ, ਮੂਲ ਅਵਸਥਾ ਵਿੱਚ ਐਂਡੋਥੀਲੀਅਲ ਰਿਹਾਈ, ਜਾਂ ਕੋਈ ਖ਼ਾਸ ਦਾਤਾ ਜਿਵੇਂ CYSNO, ਨਾਈਟ੍ਰੋਪਰੂਸਾਈਡ, ਜਾਂ MPANO। ਇਹ ਇਸ ਲਈ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ ਕਿ ਸਥਿਰ ਦਾਤੇ ਨੇ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦਾ ਰੋਧ ਕੀਤਾ, ਜਦਕਿ ਅਸਥਿਰ ਦਾਤਿਆਂ ਨੇ ਨਹੀਂ। ਤੀਜਾ, ਸੰਘਣਤਾ ਅਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਵਾਪਸ ਪਲਟਣ ਵਾਲੇ ਕੰਟਰੋਲ ਦਾ ਨਾਮ ਦੱਸੋ: ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਡਿਸਮਿਊਟੇਜ਼ ਨਾਲ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੀ ਵਾਪਸੀ ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਹੈ, ਕੈਟਲੇਜ਼ ਦੀ ਨਾਕਾਮੀ ਉਸ ਤਿਆਰੀ ਵਿੱਚ ਹਾਈਡ੍ਰੋਜਨ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਜ਼ੈਂਥੀਨ ਆਕਸੀਡੇਜ਼ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੀ ਨਕਲ ਦਿਖਾਉਂਦੀ ਹੈ ਕਿ ਇਹ ਤੰਤਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਕਾਫ਼ੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧ ਐਂਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੀਆਂ ਜਾਂਚਾਂ ਸਿੱਧੇ ਉਤਪ੍ਰੇਰਕ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਨੂੰ ਰਸਤੇ ਵਿੱਚ ਹੋਣ ਵਾਲੀ ਹਾਨੀ ਤੋਂ ਵੱਖ ਕਰਦੀਆਂ ਹਨ।

ਸੰਖੇਪ ਨਿਸ਼ਕਰਸ਼ ਇਹ ਹੈ। ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨੂੰ ਚੋਣਵੇਂ ਸਾਈਕਲੇਜ਼ ਅਵਰੋਧਕ ਦੀ ਬਜਾਏ ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ ਤੋਂ ਸਾਈਕਲਿਕ GMP ਤੱਕ ਦੇ ਸੰਕੇਤਕਰਨ ਨੂੰ ਕਈ ਥਾਵਾਂ ਉੱਤੇ ਬਦਲਣ ਵਾਲੇ ਪਦਾਰਥ ਵਜੋਂ ਸਮਝਣਾ ਵਧੀਆ ਹੈ। ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਤਿਆਰੀ ਅਤੇ ਸੰਘਣਤਾ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, ਇਹ iNOS ਦੇ ਪ੍ਰਤਿਲੇਖਨ ਕਾਰਕਾਂ ਦਾ ਜੁੜਨਾ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, NOS ਐਂਜ਼ਾਈਮਾਂ ਨੂੰ ਸਿੱਧੇ ਰੋਕ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਬਣਾਕੇ ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ ਦੀ ਉਪਲਬਧਤਾ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ ਨਾਲ ਸਰਗਰਮ ਹੋਏ ਸਾਈਕਲੇਜ਼ ਦੀ ਕਾਰਗੁਜ਼ਾਰੀ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਰਕਤ-ਨਾੜੀ ਅਧਿਐਨਾਂ ਵਿੱਚ ਸਾਈਕਲਿਕ GMP ਸੰਕੇਤਕਰਨ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਅਤੇ ਕੋਸ਼ਿਕਾਈ ਜਾਂਚਾਂ ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ ਦਾਤਿਆਂ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਇਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ-ਇੱਕ ਸ਼ਾਖਾ ਨੂੰ ਹੋਰ ਵਿਸਥਾਰ ਨਾਲ ਸਮਝਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਰੀਡਾਕਸ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਨੂੰ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਤੋਂ ਵੱਖ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤੀਆਂ ਜਾਂਦੀਆਂ ਵਿਧੀਆਂ ਦੱਸਦੀਆਂ ਹਨ ਕਿ ਇਸ ਖੋਜ ਸਾਹਿਤ ਵਿੱਚ ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਡਿਸਮਿਊਟੇਜ਼, ਕੈਟਲੇਜ਼ ਅਤੇ ਇੱਕ ਸਥਿਰ ਦਾਤੇ ਦਾ ਕੰਟਰੋਲ ਇਕੱਠੇ ਇੰਨੀ ਵਾਰ ਕਿਉਂ ਨਜ਼ਰ ਆਉਂਦੇ ਹਨ।

ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸਾਈਕਲਿਕ GMP ਦਾ ਘੱਟ ਮੁੱਲ ਇੱਕ ਟੁੱਟੀ ਹੋਈ ਲੜੀ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਸਿਰਫ਼ ਕੰਟਰੋਲ ਹੀ ਦੱਸਦੇ ਹਨ ਕਿ ਕਿਹੜੀ ਕੜੀ ਟੁੱਟੀ।