ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਦੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਦਾ ਮਾਪ: ਆਕਸੀਜਨ, ATP ਅਤੇ ਝਿੱਲੀ ਵਿਭਵ

ਮੰਨ ਲਓ ਕਿ ਇੱਕ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਸ਼ਵਸਨ ਵਿੱਚ ਰੁਕਾਵਟ ਵਾਲੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਵਿੱਚ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਪਾਉਂਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਆਕਸੀਜਨ ਦੀ ਖਪਤ ਵਧਦੀ ਵੇਖਦੀ ਹੈ। ਸੁਭਾਵਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇਹ ਲਿਖਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਕਿ ਰੰਗ ਨੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਦਾ ਕੰਮ ਮੁੜ ਬਹਾਲ ਕਰ ਦਿੱਤਾ। ਇਹ ਵਾਕ ਗਲਤ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਆਕਸੀਜਨ ਫਲਕਸ, ATP ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਅਤੇ ਝਿੱਲੀ ਵਿਭਵ ਤਿੰਨ ਵੱਖਰੀਆਂ ਧਾਰਨਾਵਾਂ ਹਨ। ਇਹ ਇੱਕੋ ਅੰਗਕ ਨਾਲ ਉਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ ਜੁੜੀਆਂ ਹਨ ਜਿਵੇਂ ਬੈਕਅੱਪ, ਸਿੰਕ ਅਤੇ ਸਾਂਝਾਕਰਨ ਇੱਕੋ ਕਲਾਊਡ ਫੋਲਡਰ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ: ਆਪਸ ਵਿੱਚ ਸੰਬੰਧਿਤ, ਪਰ ਵੱਖਰੇ ਨਿਯਮਾਂ ਅਧੀਨ। ਇੱਕ ਨੂੰ ਦੂਜਾ ਸਮਝਣ ਨਾਲ ਵਿਆਖਿਆ ਗਲਤ ਹੋ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਭਾਵੇਂ ਹਰ ਮਾਪ ਤਕਨੀਕੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸਹੀ ਹੋਵੇ।

ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨਾਲ ਇਹ ਉਲਝਣ ਹੋਣ ਦੀ ਸੰਭਾਵਨਾ ਵੱਧ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਇਹ ਉਸ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ ਆਪ ਹਿੱਸਾ ਲੈਂਦਾ ਹੈ ਜਿਸ ਨੂੰ ਮਾਪਿਆ ਜਾ ਰਿਹਾ ਹੈ। ਇਹ ਇੱਕ ਰੈਡੌਕਸ ਚੱਕਰਕਾਰੀ ਪਦਾਰਥ ਹੈ ਜੋ ਮਾਰਗ ਦੇ ਪਹਿਲੇ ਹਿੱਸੇ ਤੋਂ ਇਲੈਕਟ੍ਰਾਨ ਲੈਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਅਗਲੇ ਹਿੱਸੇ ਨੂੰ ਦਿੰਦਾ ਹੈ; ਇੱਕ ਲਿਪਿਡ-ਆਕਰਸ਼ੀ ਧਨਾਯਨ ਹੈ ਜੋ ਊਰਜਿਤ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਵਿੱਚ ਇਕੱਠਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ; ਅਤੇ ਗੂੜ੍ਹੇ ਨੀਲੇ ਰੰਗ ਦਾ ਯੋਗਿਕ ਹੈ ਜੋ ਆਮ ਪ੍ਰੋਬਾਂ ਵਾਲੇ ਹੀ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ ਬੈਂਡਾਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ ਸੋਖਦਾ ਅਤੇ ਉਤਸਰਜਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇੱਕੋ ਮਾਪ ਇਨ੍ਹਾਂ ਸਾਰੀਆਂ ਗੱਲਾਂ ਦਾ ਹਿਸਾਬ ਨਹੀਂ ਦੇ ਸਕਦਾ। ਬੁਡਾਪੈਸਟ ਦੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਅਧਿਐਨਾਂ ਵਿੱਚ ਸਾਹਮਣੇ ਆਇਆ ਭਰੋਸੇਯੋਗ ਤਰੀਕਾ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਆਕਸੀਜਨ ਫਲਕਸ ਦੇ ਨਾਲ ATP ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦਰ, ਝਿੱਲੀ ਵਿਭਵ ਅਤੇ ਹਾਈਡ੍ਰੋਜਨ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਦੀ ਰਿਹਾਈ ਮਾਪੀ ਜਾਵੇ, ਅਤੇ ਹਰ ਪੜਾਅ 'ਤੇ ਰੰਗ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਕੰਟਰੋਲ ਵਰਤੇ ਜਾਣ।

ਰੈਸਪਿਰੋਮੈਟਰੀ ਆਕਸੀਜਨ ਫਲਕਸ ਮਾਪਦੀ ਹੈ, ਊਰਜਾ ਉਤਪਾਦਨ ਨਹੀਂ

ਉੱਚ-ਰੈਜ਼ੋਲਿਊਸ਼ਨ ਰੈਸਪਿਰੋਮੈਟਰੀ, ਭਾਵੇਂ Oroboros Oxygraph ਨਾਲ ਹੋਵੇ ਜਾਂ Seahorse ਬਾਹਰਕੋਸ਼ਿਕੀ ਫਲਕਸ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਕ ਨਾਲ, ਇੱਕੋ ਗੱਲ ਦੱਸਦੀ ਹੈ: ਆਕਸੀਜਨ ਦਾ ਅਪਚਯ ਕਿੰਨੀ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਹੋ ਰਿਹਾ ਹੈ। ਇਹ ਨਹੀਂ ਦੱਸਦੀ ਕਿ ਪ੍ਰਤੀ ਇਲੈਕਟ੍ਰਾਨ ਕਿੰਨੇ ਪ੍ਰੋਟੋਨ ਪੰਪ ਕੀਤੇ ਗਏ, ਕਿੰਨੀ ਪ੍ਰਵਣਤਾ ਸੰਭਾਲੀ ਗਈ ਜਾਂ ATP ਸਿੰਥੇਜ਼ ਨੇ ਉਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂ ਨਹੀਂ।

ਸ਼ਬਦਾਵਲੀ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ। ਅਲੱਗ ਕੀਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਵਿੱਚ ADP ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਬਸਟ੍ਰੇਟ ਲੀਕ ਸ਼ਵਸਨ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਸੰਤ੍ਰਿਪਤ ਕਰਨ ਵਾਲੀ ADP ਮਾਤਰਾ ਨਾਲ ਸਬਸਟ੍ਰੇਟ ਆਕਸੀਕਾਰੀ ਫਾਸਫੋਰਿਲੇਸ਼ਨ ਦੀ ਸਮਰੱਥਾ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਅਨਕਪਲਰ ਟਾਈਟ੍ਰੇਸ਼ਨ ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਇਲੈਕਟ੍ਰਾਨ ਤਬਾਦਲਾ ਸਮਰੱਥਾ ਦਿੰਦੀ ਹੈ। ਅਖੰਡ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਵਿੱਚ Seahorse ਦੇ ਸਮਤੁੱਲ ਮਾਪ ਹਨ: ਮੂਲ ਸ਼ਵਸਨ, ਓਲਿਗੋਮਾਈਸਿਨ-ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ATP-ਸੰਬੰਧਿਤ ਸ਼ਵਸਨ, ਪ੍ਰੋਟੋਨ ਲੀਕ, FCCP ਨਾਲ ਨਿਰਧਾਰਤ ਅਧਿਕਤਮ ਸ਼ਵਸਨ, ਅਤੇ ਰੋਟੇਨੋਨ ਤੇ ਐਂਟੀਮਾਈਸਿਨ ਦੇ ਬਾਵਜੂਦ ਜਾਰੀ ਰਹਿਣ ਵਾਲੀ ਗੈਰ-ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਆਕਸੀਜਨ ਖਪਤ। Seahorse ਦੇ ਨਤੀਜਿਆਂ ਨੂੰ ਸਟੇਟ 3 ਅਤੇ ਸਟੇਟ 4 ਕਹਿਣਾ ਅਜਿਹੀ ਸਟੀਕਤਾ ਦਾ ਦਾਅਵਾ ਕਰਦਾ ਹੈ ਜਿਸ ਨੂੰ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਤਿਆਰੀ ਸਮਰਥਨ ਨਹੀਂ ਦਿੰਦੀ, ਜਿਵੇਂ Agilent Mito Stress Test ਦਾ ਢਾਂਚਾ ਸਪਸ਼ਟ ਕਰਦਾ ਹੈ।

ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਵੱਧ ਆਕਸੀਜਨ ਅਤੇ ਵੱਧ ਊਰਜਾ ਵਿਚਕਾਰ ਸੁਭਾਵਿਕ ਮੰਨੇ ਜਾਂਦੇ ਸੰਬੰਧ ਨੂੰ ਤੋੜ ਦਿੰਦਾ ਹੈ। ਅਲੱਗ ਕੀਤੇ ਦਿਮਾਗੀ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਦੇ ਅਧਿਐਨ ਅਨੁਸਾਰ, ਗਿਨੀ ਪਿਗ ਦੇ ਦਿਮਾਗ ਤੋਂ ਅਲੱਗ ਕੀਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਵਿੱਚ 100 nM ਤੋਂ 1 uM ਰੰਗ ਨੇ ਗਲੂਟਾਮੇਟ ਅਤੇ ਮੈਲੇਟ, ਸਕਸੀਨੇਟ, ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-ਗਲਿਸਰੋਫਾਸਫੇਟ ਸਬਸਟ੍ਰੇਟਾਂ ਨਾਲ ਵਿਸ਼ਰਾਮ ਅਵਸਥਾ ਦੀ ਆਕਸੀਜਨ ਖਪਤ ਵਧਾਈ। ਅਲਫ਼ਾ-ਗਲਿਸਰੋਫਾਸਫੇਟ ਨਾਲ ਇਹ ਵਾਧਾ ਲਗਭਗ 64 ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਸੀ, ਪਰ ਸਿਹਤਮੰਦ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਵਿੱਚ ADP-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਸ਼ਵਸਨ ਲਗਭਗ ਬਦਲਿਆ ਹੀ ਨਹੀਂ। ਕਿਉਂਕਿ ਲੀਕ ਵਧੀ ਜਦਕਿ ADP-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਫਲਕਸ ਸਥਿਰ ਰਹੀ, ਇਸ ਲਈ ਗਣਨਾ ਕੀਤਾ ਸ਼ਵਸਨ ਕੰਟਰੋਲ ਅਨੁਪਾਤ ਘਟਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਘਾਟ ਦਾ ਮਤਲਬ ਇਹ ਨਹੀਂ ਕਿ ਰੰਗ ਨੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਨੂੰ ਨੁਕਸਾਨ ਪਹੁੰਚਾਇਆ। ਇਸ ਦਾ ਮਤਲਬ ਹੈ ਕਿ ਰੰਗ ਨੇ ਆਮ ਸ਼ਵਸਨ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ ਆਕਸੀਜਨ ਖਪਤ ਕਰਨ ਵਾਲਾ ਇੱਕ ਰੈਡੌਕਸ ਚੱਕਰ ਜੋੜ ਦਿੱਤਾ। ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਦੀ ਆਕਸੀਜਨ ਖਪਤ ਦਾ ਉਹ ਅਸੇ ਜੋ ਸਿਰਫ਼ ਵਾਧਾ ਦਰਜ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਸਲ ਰਸਾਇਣਕ ਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਤਾਂ ਮਾਪਦਾ ਹੈ ਪਰ ਊਰਜਾ ਸੰਭਾਲ ਬਾਰੇ ਕੁਝ ਨਹੀਂ ਦੱਸਦਾ।

ਬਹਾਲੀ ਦੇ ਪ੍ਰਯੋਗ ਇਹੀ ਅੰਤਰ ਵੱਡੇ ਪੱਧਰ 'ਤੇ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਕੰਪਲੈਕਸ I ਰੋਕਣ 'ਤੇ ਆਕਸੀਜਨ ਫਲਕਸ ਲਗਭਗ ਤਿੰਨ ਗੁਣਾ ਬਹਾਲ ਹੋਈ, ਜਦਕਿ ATP ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਸਿਰਫ਼ ਲਗਭਗ 1.5 ਗੁਣਾ ਬਹਾਲ ਹੋਇਆ। ਵੱਧ ਆਕਸੀਜਨ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਡ ਤੱਕ ਪਹੁੰਚੀ। ਉਸ ਦਾ ਘੱਟ ਹਿੱਸਾ ATP ਬਣਾਉਣ ਦੇ ਕੰਮ ਆਇਆ। ਆਕਸੀਕਾਰੀ ਫਾਸਫੋਰਿਲੇਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਦੇ ਕਿਸੇ ਵੀ ਦਾਅਵੇ ਲਈ ATP ਵਾਲੇ ਪੱਖ ਦਾ ਹਿਸਾਬ ਲੋੜੀਂਦਾ ਹੈ। ਆਦਰਸ਼ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇਸ ਨੂੰ ਪ੍ਰਤੀ ਆਕਸੀਜਨ ATP ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ ਵਜੋਂ ਦਰਸਾਇਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਹਰ ਦੀ ਪਰਿਭਾਸ਼ਾ ਸਪਸ਼ਟ ਕੀਤੀ ਜਾਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ।

ATP ਅਸੇ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦਰ ਮਾਪਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਦੀ ਥਾਂ ਕੁੱਲ ਮਾਤਰਾ ਨਹੀਂ ਲੈ ਸਕਦੀ

ATP ਅਸੇ ਇੱਕ ਵੱਖਰੇ ਸਵਾਲ ਦਾ ਜਵਾਬ ਦਿੰਦਾ ਹੈ: ਪ੍ਰਤੀ ਸਮਾਂ ਇਕਾਈ ਕਿੰਨਾ ATP ਬਣਦਾ ਹੈ। ਗਤੀਕੀ ਮਾਪ, ਭਾਵੇਂ ਮਿੰਟਾਂ ਤੱਕ ਜੁਗਨੂੰ ਲੂਸੀਫਰੇਜ਼ ਦੀ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ ਉਤਸਰਜਨ ਨੂੰ ਟਰੈਕ ਕਰਕੇ ਲਿਆ ਜਾਵੇ ਜਾਂ 340 nm 'ਤੇ ਪੜ੍ਹੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਜੁੜੇ ਹੋਏ ਹੈਕਸੋਕਾਈਨੇਜ਼ ਅਤੇ ਗਲੂਕੋਜ਼-6-ਫਾਸਫੇਟ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੋਜਨੇਜ਼ ਅਸੇ ਨਾਲ, ਇੱਕ ਦਰ ਦਿੰਦਾ ਹੈ। ਇੱਕੋ ਅੰਤਿਮ ਬਿੰਦੂ 'ਤੇ ਕੁੱਲ ATP ਦਾ ਮਾਪ ਮਾਤਰਾ ਦਿੰਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਮਾਤਰਾ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵਿੱਚੋਂ ਖਪਤ ਘਟਾਉਣ ਦਾ ਨਤੀਜਾ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਆਪਣੇ ਆਪ ਵਿੱਚ ਆਕਸੀਕਾਰੀ ਫਾਸਫੋਰਿਲੇਸ਼ਨ ਬਾਰੇ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਦੱਸਦੀ ਹੈ।

ਬੁਡਾਪੈਸਟ ਸਮੂਹ ਨੇ ਐਡੇਨੀਲੇਟ ਕਾਈਨੇਜ਼ ਨੂੰ ਦਬਾ ਕੇ ਜੁੜੀ ਹੋਈ ਐਂਜ਼ਾਈਮਿਕ ਵਿਧੀ ਵਰਤੀ ਅਤੇ ਪਾਇਆ ਕਿ 1 ਤੋਂ 2 uM ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨੇ ਰੋਟੇਨੋਨ ਅਤੇ ਐਂਟੀਮਾਈਸਿਨ ਨਾਲ ਟ੍ਰੀਟ ਕੀਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਵਿੱਚ ATP ਉਤਪਾਦਨ ਥੋੜ੍ਹਾ, ਪਰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਧਾਇਆ। ਇਹ ਅਸਲ ਬਹਾਲੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਅੰਸ਼ਕ ਹੈ। TEGDMA ਦੀ ਵਿਸ਼ਾਕਤਤਾ ਦੇ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਵੱਖਰੇ ਮਾਡਲ ਨਾਲ ਇਸੇ ਕਿਸਮ ਦਾ ਜਵਾਬ ਮਿਲਿਆ: 5 mM ਦੰਦ-ਸੰਬੰਧੀ ਮੋਨੋਮਰ TEGDMA ਨੇ ਕੰਪਲੈਕਸ I ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਸ਼ਵਸਨ ਲਗਭਗ 286 ਤੋਂ ਘਟਾ ਕੇ 28 ਫਲਕਸ ਇਕਾਈਆਂ ਕਰ ਦਿੱਤਾ, ਅਤੇ 2 uM ਰੰਗ ਨੇ ਇਸ ਨੂੰ ਲਗਭਗ 86 ਤੱਕ ਬਹਾਲ ਕੀਤਾ।

ਰੰਗਦਾਰ ਰੈਡੌਕਸ ਯੋਗਿਕ ਨਾਲ ਦੋ ਕੰਟਰੋਲ ਲਾਜ਼ਮੀ ਹਨ। ਪਹਿਲਾਂ, ਓਲਿਗੋਮਾਈਸਿਨ ਵਰਤ ਕੇ ਪਤਾ ਕਰੋ ਕਿ ਮਾਪੇ ਗਏ ATP ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦਾ ਕਿੰਨਾ ਹਿੱਸਾ ATP ਸਿੰਥੇਜ਼ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਹੈ। ਦੂਜਾ, ਜਾਣੀ ਮਾਤਰਾ ਵਾਲੇ ATP, ਪੂਰੇ ਰੀਏਜੈਂਟ ਅਤੇ ਵਰਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਰੰਗ ਦੀਆਂ ਬਿਲਕੁਲ ਉਹੀ ਸੰਘਣਤਾਵਾਂ ਨਾਲ ਕੋਸ਼ਿਕਾ-ਰਹਿਤ ਸਪਾਈਕ ਰਿਕਵਰੀ ਟੈਸਟ ਕਰੋ; ਘੱਟੋ-ਘੱਟ 0, 100 nM, 300 nM, 1 uM ਅਤੇ 2 uM 'ਤੇ। ਰੰਗ ਉਤਸਰਜਿਤ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ ਸੋਖ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਰਿਪੋਰਟਰ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਨੂੰ ਰੋਕ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜਾਂ ਰੀਏਜੈਂਟ ਦੀ ਰੈਡੌਕਸ ਰਸਾਇਣਕ ਕਿਰਿਆ ਬਦਲ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਆਮ ਲੂਸੀਫਰੇਜ਼ ਅਸੇ ਮਾਰਗਦਰਸ਼ਨ ਇਸੇ ਕਿਸਮ ਦੇ ਦਖ਼ਲ ਲਈ ਜੈਵ-ਰਸਾਇਣਕ ਵਿਰੋਧੀ ਜਾਂਚਾਂ ਦੀ ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਨਾ ਮੰਨੋ ਕਿ 1 uM 'ਤੇ ਮਾਪੀ ਗੜਬੜ ਨਹੀਂ ਹੋਵੇਗੀ, ਸਿਰਫ਼ ਇਸ ਲਈ ਕਿ ਫਲੂਓਰੇਸੈਂਸ ਦਾ ਦਮਨ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵੱਧ ਸੰਘਣਤਾਵਾਂ 'ਤੇ ਜ਼ਿਆਦਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।

ਝਿੱਲੀ-ਵਿਭਵ ਪ੍ਰੋਬ ਰੰਗ ਦੀ ਵੰਡ ਮਾਪਦੇ ਹਨ, ਫਲਕਸ ਨਹੀਂ

Safranine O, TMRM ਅਤੇ TMRE, rhodamine 123 ਅਤੇ JC-1 ਸਾਰੇ ਝਿੱਲੀ ਵਿੱਚੋਂ ਲੰਘ ਸਕਣ ਵਾਲੇ ਧਨਾਯਨ ਹਨ। ਇਹ ਬਿਜਲਈ-ਰਸਾਇਣਕ ਸੰਤੁਲਨ ਅਨੁਸਾਰ ਰਿਣਾਤਮਕ ਚਾਰਜ ਵਾਲੇ ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ ਵਿੱਚ ਇਕੱਠੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਇਸ ਲਈ ਸਮੁੱਚੀ ਫਲੂਓਰੇਸੈਂਸ ਪ੍ਰੋਬ ਦੀ ਸਥਿਤੀ ਰਾਹੀਂ ਅਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਿਭਵ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਹੈ। ਇਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਕੋਈ ਵੀ ATP ਜਾਂ ਇਲੈਕਟ੍ਰਾਨ ਫਲਕਸ ਨਹੀਂ ਮਾਪਦਾ।

ਹਰ ਪ੍ਰੋਬ ਲਈ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਇੱਕ ਵੱਧ ਢੁਕਵੀਂ ਤਿਆਰੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। Safranine O ਅਲੱਗ ਕੀਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਅਤੇ ਪਾਰਗਮ ਬਣਾਈਆਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਲਈ ਢੁਕਵਾਂ ਹੈ। ਇਹ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਲਗਭਗ 2 uM 'ਤੇ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਉਤੇਜਨ ਲਗਭਗ 495 nm ਅਤੇ ਉਤਸਰਜਨ ਲਗਭਗ 585 nm 'ਤੇ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਦਮਨ ਵਾਲੀ ਅਵਸਥਾ ਵਿੱਚ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜਿੱਥੇ ਇਸ ਦਾ ਅੰਦਰ ਜਾਣਾ ਸਮੁੱਚੀ ਫਲੂਓਰੇਸੈਂਸ ਨੂੰ ਬਦਲਦਾ ਹੈ। TMRM ਅਤੇ TMRE ਅਖੰਡ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਘੱਟ ਨੈਨੋਮੋਲਰ ਲੋਡਿੰਗ ਨਾਲ ਗੈਰ-ਦਮਨ ਮੋਡ ਵਿੱਚ ਢੁਕਵੇਂ ਹਨ। ਇਸ ਮੋਡ ਵਿੱਚ ਵਿਧਰੁਵੀਕਰਨ ਰੰਗ ਨੂੰ ਬਾਹਰ ਕੱਢਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਫਲੂਓਰੇਸੈਂਸ ਘਟਦੀ ਹੈ; ਵੱਧ ਲੋਡਿੰਗ 'ਤੇ ਸਵੈ-ਦਮਨ ਕਾਰਨ ਸੰਕੇਤ ਦੀ ਦਿਸ਼ਾ ਉਲਟ ਸਕਦੀ ਹੈ। JC-1 ਇੱਕ ਸੁਵਿਧਾਜਨਕ ਹਰਾ-ਤੋਂ-ਲਾਲ ਅਨੁਪਾਤ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਇਹ ਲੋਡਿੰਗ ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਪੁੰਜ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਕਰਕੇ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਕੰਮ ਲਈ ਇਹ ਧਿਆਨ ਨਾਲ ਕੰਟਰੋਲ ਕੀਤੇ TMRM ਨਾਲੋਂ ਕਮਜ਼ੋਰ ਹੈ। ਇਨ੍ਹਾਂ ਲਾਭਾਂ ਅਤੇ ਸੀਮਾਵਾਂ ਦਾ ਸਾਰ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਝਿੱਲੀ ਵਿਭਵ ਪ੍ਰੋਬਾਂ ਦੀ ਸਮੀਖਿਆ ਵਿੱਚ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।

ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਠੀਕ ਵਰਤੋਂ ਵਾਲੀਆਂ ਸੰਘਣਤਾਵਾਂ 'ਤੇ ਹੀ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ੀ ਦਖ਼ਲ ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ। 600 ਤੋਂ 665 nm ਦੇ ਨੇੜੇ ਇਸ ਦੇ ਸੋਖਣ ਬੈਂਡ ਲਾਲ ਪ੍ਰੋਬ ਉਤਸਰਜਨ ਨਾਲ ਓਵਰਲੈਪ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਇਸ ਲਈ ਅੰਦਰੂਨੀ ਫਿਲਟਰ ਪ੍ਰਭਾਵ, ਫਲੂਓਰੇਸੈਂਸ ਦਮਨ ਅਤੇ ਉਤੇਜਨ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ ਦਾ ਸੋਖਣ—ਸਾਰੇ ਸੰਭਵ ਹਨ। ਇਹ ਰੰਗ ਇੱਕ ਦੂਜਾ ਲਿਪਿਡ-ਆਕਰਸ਼ੀ ਧਨਾਯਨ ਵੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਦੀ ਆਪਣੀ ਵੰਡ ਮਾਪੇ ਜਾ ਰਹੇ ਵਿਭਵ ਨਾਲ ਬਦਲਦੀ ਹੈ। ਬਚਾਅ ਦਾ ਤਰੀਕਾ ਹੈ ਇੱਕ ਤੋਂ ਵੱਧ ਮਾਪ ਅਤੇ ਬਲੈਂਕ ਕੰਟਰੋਲ: ਇਕੱਲਾ ਪ੍ਰੋਬ, ਇਕੱਲਾ ਰੰਗ, ਪ੍ਰੋਬ ਨਾਲ ਰੰਗ ਦੀ ਹਰ ਸੰਘਣਤਾ, ਸਿਫ਼ਰ ਸੰਦਰਭ ਵਜੋਂ FCCP ਨਾਲ ਪੂਰਾ ਵਿਧਰੁਵੀਕਰਨ, ਅਤੇ ਆਦਰਸ਼ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵੱਖਰਾ ਦੂਜਾ ਪ੍ਰੋਬ। ਕੰਪਲੈਕਸ III ਬਾਈਪਾਸ ਅਧਿਐਨ ਨੇ ਇਹ ਮਿਸਾਲ ਕਾਇਮ ਕੀਤੀ: ਐਂਟੀਮਾਈਸਿਨ ਅਤੇ ਮਿਕਸੋਥਿਆਜ਼ੋਲ ਨਾਲ ਰੋਕਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ safranine O ਅਤੇ TMRM ਦੋਵਾਂ ਨਾਲ ਝਿੱਲੀ ਵਿਭਵ ਦੀ ਬਹਾਲੀ ਮੁੜ ਮਾਪੀ ਗਈ ਅਤੇ ਇੱਕੋ ਜਿਹੀ ਗੁਣਾਤਮਕ ਬਹਾਲੀ ਮਿਲੀ। ਇੱਕ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ੀ ਰਿਪੋਰਟਰ ਇੱਕ ਇਸ਼ਾਰਾ ਹੈ। ਦੋ ਸੁਤੰਤਰ ਰਿਪੋਰਟਰ ਸਬੂਤ ਹਨ।

ਤਿੰਨ ਤਿਆਰੀਆਂ, ਤਿੰਨ ਵੱਖਰੇ ਸਵਾਲ

ਅਲੱਗ ਕੀਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ, ਪਾਰਗਮ ਬਣਾਈਆਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਅਤੇ ਅਖੰਡ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਇੱਕੋ ਅਸੇ ਦੀਆਂ ਆਪਸ ਵਿੱਚ ਬਦਲੀਆਂ ਜਾ ਸਕਣ ਵਾਲੀਆਂ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਸੈਟਿੰਗਾਂ ਨਹੀਂ ਹਨ। ਇਹ ਵੱਖਰੇ ਕਾਰਜਕਾਰੀ ਸਿਧਾਂਤਾਂ ਵਾਲੀਆਂ ਵੱਖਰੀਆਂ ਧਾਰਨਾਵਾਂ ਹਨ।

ਅਲੱਗ ਕੀਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਇਲੈਕਟ੍ਰਾਨ ਟਰਾਂਸਪੋਰਟ ਲੜੀ, ਅੰਦਰੂਨੀ ਝਿੱਲੀ ਅਤੇ ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ ਦੀ ਕਾਰਜ-ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਨੂੰ ਕਾਇਮ ਰੱਖਦੇ ਹਨ, ਜਦਕਿ ਪਲਾਜ਼ਮਾ ਝਿੱਲੀ, ਸਾਇਟੋਸੋਲ ਅਤੇ ਨੈੱਟਵਰਕ ਬਣਤਰ ਨੂੰ ਹਟਾ ਦਿੰਦੇ ਹਨ। ਇਹ ਹਟਾਉਣਾ ਹੀ ਉਦੇਸ਼ ਹੈ: ਸਬਸਟ੍ਰੇਟ, ADP, ਅਵਰੋਧਕ ਅਤੇ ਰੰਗ ਦੀਆਂ ਸੰਘਣਤਾਵਾਂ ਸਟੀਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਨਿਰਧਾਰਤ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ, ਇਸ ਲਈ ਕਿਸੇ ਮਾਰਗ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ। ਇਸ ਦੀ ਕੀਮਤ ਕੁਦਰਤੀ ਸਬਸਟ੍ਰੇਟ ਸਪਲਾਈ, ਸੰਕੇਤ-ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਅਤੇ ਮੰਗ ਦਾ ਖਤਮ ਹੋਣਾ ਹੈ।

ਪਾਰਗਮ ਬਣਾਈਆਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਨੂੰ ਕੋਸ਼ਿਕਾ ਦੀ ਕਾਫ਼ੀ ਹੱਦ ਤੱਕ ਬਰਕਰਾਰ ਬਣਤਰ ਦੇ ਅੰਦਰ ਰੱਖਦੀਆਂ ਹਨ, ਜਦਕਿ ਬਾਹਰੋਂ ਦਿੱਤੇ ਸਬਸਟ੍ਰੇਟ ਅਤੇ ADP ਨੂੰ ਖੋਲ੍ਹੀ ਗਈ ਪਲਾਜ਼ਮਾ ਝਿੱਲੀ ਵਿੱਚੋਂ ਲੰਘਣ ਦਿੰਦੀਆਂ ਹਨ। ਕੋਸ਼ਿਕਾਈ ਸੰਦਰਭ ਦੇ ਅੰਦਰ ਸਬਸਟ੍ਰੇਟ-ਮਾਰਗ ਦੀ ਖ਼ਰਾਬੀ ਪਛਾਣਨ ਲਈ ਇਹ ਢੁਕਵਾਂ ਸਾਧਨ ਹਨ। ਹੱਦ ਤੋਂ ਵੱਧ ਪਾਰਗਮ ਬਣਾਉਣਾ ਬਾਹਰੀ ਝਿੱਲੀ ਨੂੰ ਨੁਕਸਾਨ ਪਹੁੰਚਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਸਾਇਟੋਸੋਲ ਦੀ ਨਿਯੰਤਰਕ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਧੁਲ ਕੇ ਨਿਕਲ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।

ਅਖੰਡ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਸਭ ਕੁਝ ਕਾਇਮ ਰੱਖਦੀਆਂ ਹਨ: ਪਲਾਜ਼ਮਾ ਝਿੱਲੀ ਦੀ ਰੁਕਾਵਟ, ਸਾਇਟੋਸੋਲ ਦੇ ਅਪਚਾਇਕ ਪਦਾਰਥ, ਅੰਦਰੂਨੀ ਸਬਸਟ੍ਰੇਟ ਆਵਾਜਾਈ, ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਨੈੱਟਵਰਕ ਅਤੇ ATP ਦੀ ਮੰਗ। ਇਹ ਸਰੀਰਕ ਕਿਰਿਆਵਾਂ ਦੇ ਸਭ ਤੋਂ ਨੇੜੇ ਅਤੇ ਕਿਰਿਆ-ਵਿਧੀ ਦੀ ਪਛਾਣ ਤੋਂ ਸਭ ਤੋਂ ਦੂਰ ਹਨ, ਕਿਉਂਕਿ ਰੰਗ ਦਾ ਅੰਦਰ ਜਾਣਾ, ਅਪਚਯ ਅਤੇ ਵੱਖਰੇ ਖਾਨਿਆਂ ਵਿੱਚ ਰੁਕਣਾ—ਸਾਰੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਤੱਕ ਪਹੁੰਚਣ ਵਾਲੀ ਇਸ ਦੀ ਪ੍ਰਭਾਵੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਦੇ ਹਨ।

TEGDMA ਅਧਿਐਨ ਨੇ ਜਾਣ-ਬੁੱਝ ਕੇ ਤਿੰਨੇ ਪੱਧਰ ਵਰਤੇ: ਆਕਸੀਕਰਨ ਅਤੇ ਵਿਭਵ ਦੀ ਰੰਗ ਰਾਹੀਂ ਬਹਾਲੀ ਲਈ ਅਲੱਗ ਕੀਤੇ ਦਿਮਾਗੀ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ; ਖ਼ਰਾਬੀ ਨੂੰ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਕੰਪਲੈਕਸ I ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਸਬਸਟ੍ਰੇਟ ਆਕਸੀਕਰਨ ਤੱਕ ਸਥਾਨਕ ਕਰਨ ਲਈ ਪਾਰਗਮ ਬਣਾਈਆਂ ਡੈਂਟਲ ਪਲਪ ਸਟੈਮ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ; ਅਤੇ ਦਬੀ ਹੋਈ ਆਕਸੀਜਨ ਖਪਤ 'ਤੇ 2 uM ਰੰਗ ਦੇ ਸਰੀਰਕ ਕਿਰਿਆਵਾਂ ਸੰਬੰਧੀ ਕੁੱਲ ਪ੍ਰਭਾਵ ਲਈ ਅਖੰਡ ਸਟੈਮ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ। ਵੱਖਰੀਆਂ ਤਿਆਰੀਆਂ ਵਿੱਚ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਮਾਪਾਂ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਪਾਠਕਾਂ ਲਈ, ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਸ਼ਵਸਨ ਲੜੀ ਰਾਹੀਂ ਇਲੈਕਟ੍ਰਾਨ ਕਿਵੇਂ ਲਿਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਬਾਰੇ ਸਾਥੀ ਵਿਆਖਿਆਤਮਕ ਲੇਖ ਮਾਰਗ ਦੀ ਪਿਛੋਕੜ ਦਿੰਦਾ ਹੈ। ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਦੇ ਸ਼ਵਸਨ ਅਧਿਐਨ ਪੜ੍ਹਨ ਦਾ ਮਾਰਗਦਰਸ਼ਕ ਮਾਤਰਾ ਅਤੇ ਅਵਰੋਧਕਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਦੇ ਤਰਕ ਨੂੰ ਸਮਝਾਉਂਦਾ ਹੈ।

ਰੈਡੌਕਸ-ਸਰਗਰਮ ਰੰਗ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਕੰਟਰੋਲ

ਰੈਡੌਕਸ ਚੱਕਰਕਾਰੀ ਪਦਾਰਥ ਲਈ ਆਮ ਅਵਰੋਧਕ ਨਾਲੋਂ ਲੰਬੀ ਕੰਟਰੋਲ ਸੂਚੀ ਲੋੜੀਂਦੀ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਸਿਰਫ਼ ਰੰਗ ਦੀ ਰਸਾਇਣਕ ਕਿਰਿਆ ਜੈਵਿਕ ਕਿਰਿਆ ਵਰਗਾ ਨਤੀਜਾ ਦਿਖਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।

ਰੈਸਪਿਰੋਮੈਟਰੀ ਲਈ, ਮਾਪ ਦੇ ਖਿਸਕਾਅ ਦੀ ਜਾਂਚ ਵਾਸਤੇ ਸਿਰਫ਼ ਬਫ਼ਰ ਵਾਲਾ ਚੈਂਬਰ ਚਲਾਓ; ਜੈਵਿਕ ਸਮੱਗਰੀ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਬਫ਼ਰ ਅਤੇ ਰੰਗ ਵਾਲਾ ਚੈਂਬਰ; ਰੰਗ ਨਾਲ ਅਸੇ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਕੋਈ ਵੀ ਬਾਹਰਕੋਸ਼ਿਕੀ ਅਪਚਾਇਕ ਪਦਾਰਥ; ਅਤੇ ਅਖੰਡ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਗੈਰ-ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਆਕਸੀਜਨ ਖਪਤ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਅੰਤ ਵਿੱਚ ਰੋਟੇਨੋਨ ਅਤੇ ਐਂਟੀਮਾਈਸਿਨ। ਧਿਆਨ ਦਿਓ ਕਿ ਅਪਚਯਿਤ ਰੰਗ ਆਕਸੀਜਨ ਨੂੰ ਇਲੈਕਟ੍ਰਾਨ ਦੇ ਕੇ ਮੁੜ ਆਕਸੀਕ੍ਰਿਤ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਹਾਈਡ੍ਰੋਜਨ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ ਇਲੈਕਟ੍ਰਾਨ ਦਾਤਾ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਿਰਫ਼ ਰੰਗ ਵਾਲਾ ਬਲੈਂਕ ਉਸ ਕੋਸ਼ਿਕਾ-ਰਹਿਤ ਆਕਸੀਜਨ ਖਪਤ ਨੂੰ ਘੱਟ ਅੰਕਦਾ ਹੈ ਜੋ NADH ਜਾਂ NADPH ਉਪਲਬਧ ਹੋਣ 'ਤੇ ਦਿਖਾਈ ਦਿੰਦੀ ਹੈ।

ਹਾਈਡ੍ਰੋਜਨ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਲਈ, ਗੈਰ-ਚੋਣਵੀਂ DCFDA ਰੰਗਾਂ ਦੀ ਥਾਂ ਕੈਲੀਬਰੇਟ ਕੀਤਾ Amplex UltraRed ਅਤੇ horseradish peroxidase ਨੂੰ ਤਰਜੀਹ ਦਿਓ, ਕੈਟਲੇਜ਼ ਨਾਲ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰੋ ਅਤੇ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰਤਾ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰੋ, ਕਿਉਂਕਿ ਇਹ ਰੰਗ ਪ੍ਰਕਾਸ਼-ਸੰਵੇਦਕ ਹੈ। ਦਿਮਾਗੀ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਦੇ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਪਾਇਆ ਗਿਆ ਕਿ ਸਿਰਫ਼ 100 nM ਰੰਗ 'ਤੇ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਦਾ ਬੋਝ ਚਾਰ ਗੁਣਾ ਤੋਂ ਵੱਧ ਵਧਿਆ, ਜਦਕਿ ਇਸ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਦੀ ਦਰ ਘਟ ਗਈ। ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਵਿਚਕਾਰਲੇ ਪਦਾਰਥ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਿੱਧੀ ਅਪਚਯਿਤ ਰੰਗ ਤੋਂ ਬਣੀ। ਪ੍ਰੋਬ ਦੀ ਚੋਣ ਅਤੇ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ ਕੰਟਰੋਲਾਂ ਦੇ ਵੇਰਵੇ ਰੰਗ ਵਾਲੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਆਕਸੀਜਨ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ ਮਾਪਣ ਬਾਰੇ ਸਾਥੀ ਲੇਖ ਵਿੱਚ ਹਨ। ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਕਦੋਂ ਸੰਕੇਤ ਅਤੇ ਕਦੋਂ ਬੋਝ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਇਸ ਵਿਆਪਕ ਸਵਾਲ ਨੂੰ ਕੋਸ਼ਿਕਾਈ ਰੈਡੌਕਸ ਸੰਤੁਲਨ ਅਤੇ ਐਂਟੀਆਕਸੀਡੈਂਟ ਦਾਅਵਿਆਂ ਦੇ ਨਾਲ ਸਮਝਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ।

ਮਾਰਗ ਸੰਬੰਧੀ ਦਾਅਵਿਆਂ ਲਈ, ਕੰਪਲੈਕਸ III ਦੇ ਦੋਵੇਂ ਅਵਰੋਧਕ ਸਥਾਨਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰੋ: Qi ਸਥਾਨ 'ਤੇ ਐਂਟੀਮਾਈਸਿਨ A ਅਤੇ Qo ਸਥਾਨ 'ਤੇ ਮਿਕਸੋਥਿਆਜ਼ੋਲ, ਨਾਲ ਹੀ ਸਾਇਨਾਈਡ ਨਾਲ ਕੰਪਲੈਕਸ IV ਦਾ ਅੰਤਿਮ ਬਿੰਦੂ। ਚੂਹੇ ਦੇ ਦਿਮਾਗ ਦੇ ਇੱਕ ਪਹਿਲੇ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਰੰਗ ਨਾਲ ਰੋਟੇਨੋਨ-ਰੁਕੇ ਸ਼ਵਸਨ ਦੀ ਬਹਾਲੀ ਦਰਜ ਹੋਈ ਸੀ, ਪਰ ਐਂਟੀਮਾਈਸਿਨ-ਰੁਕੇ ਸ਼ਵਸਨ ਦੀ ਨਹੀਂ। ਬਾਅਦ ਦੇ ਤਿੰਨ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ ਵਾਲੇ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਦੋਵੇਂ ਅਵਰੋਧਕਾਂ ਨਾਲ ਅੰਸ਼ਕ ਬਹਾਲੀ ਅਤੇ ਸਾਇਟੋਕ੍ਰੋਮ c ਦੇ ਸਿੱਧੇ ਅਪਚਯ ਦਾ ਸਬੂਤ ਮਿਲਿਆ। ਬਾਈਪਾਸ ਨੂੰ ਨਵੇਂ ਡੇਟਾ ਨਾਲ ਮੇਲ ਖਾਂਦਾ ਮੰਨੋ, ਨਾ ਕਿ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸਥਾਪਿਤ, ਕਿਉਂਕਿ ਰੰਗ ਦੀ ਸੰਘਣਤਾ, ਅਵਰੋਧਕ ਦਾ ਸਥਾਨ, ਸਬਸਟ੍ਰੇਟ ਦੀ ਅਵਸਥਾ ਅਤੇ ਰੰਗ ਦੀ ਵੰਡ—ਸਾਰੇ ਵੇਖੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਮਾਰਗ ਨੂੰ ਬਦਲਦੇ ਹਨ।

ਅਸੇ-ਚੋਣ ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ

ਇਸ ਸਾਰਣੀ ਨਾਲ ਸਵਾਲ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਮਾਪ ਚੁਣੋ, ਨਾ ਕਿ ਮਾਪ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਸਵਾਲ।

ਘੱਟੋ-ਘੱਟ ਭਰੋਸੇਯੋਗ ਦਾਅਵੇ ਲਈ ਰੰਗ ਦੀਆਂ ਇੱਕੋ ਸੰਘਣਤਾਵਾਂ—100 nM, 300 nM, 1 uM ਅਤੇ 2 uM—ਨਾਲ ਲੀਕ, ADP, ਓਲਿਗੋਮਾਈਸਿਨ ਅਤੇ ਅਨਕਪਲਰ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਆਕਸੀਜਨ ਫਲਕਸ, ATP ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦਰ, ਤਰਜੀਹੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਦੋ ਪ੍ਰੋਬਾਂ ਨਾਲ ਝਿੱਲੀ ਵਿਭਵ, ਅਤੇ ਕੈਟਲੇਜ਼ ਤੇ ਕੋਸ਼ਿਕਾ-ਰਹਿਤ ਕੰਟਰੋਲਾਂ ਸਮੇਤ ਕੈਲੀਬਰੇਟ ਕੀਤੀ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਰਿਹਾਈ ਮਾਪਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ। ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਪੂਰਾ ਸਮੂਹ ਦਰਜ ਕਰੋ: ਆਕਸੀਜਨ ਫਲਕਸ, ATP ਦਰ, ਪ੍ਰਤੀ ਆਕਸੀਜਨ ATP, ਵਿਭਵ ਅਤੇ ਪਰਆਕਸਾਈਡ। ਇਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਕੋਈ ਵੀ ਇੱਕ ਅੰਕ ਇਕੱਲਾ ਅਜਿਹਾ ਮਾਪ ਹੈ ਜਿਸ ਦਾ ਅਰਥ ਅਜੇ ਲੱਭਣਾ ਬਾਕੀ ਹੈ।