ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਅਤੇ ਆਟੋਫੈਜੀ: AMPK, mTOR ਅਤੇ ਨਿਊਰੋਨਾਂ ਸੰਬੰਧੀ ਪ੍ਰਯੋਗ

ਕਲਪਨਾ ਕਰੋ ਕਿ ਤੁਸੀਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਉੱਤੇ ਇੱਕ ਪ੍ਰਯੋਗ ਕਰਦੇ ਹੋ, ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਪਾਉਂਦੇ ਹੋ ਅਤੇ ਆਪਣੇ ਬਲਾਟ ਉੱਤੇ LC3-II ਨਾਮਕ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਪੱਟੀ ਹੋਰ ਗੂੜ੍ਹੀ ਹੁੰਦੀ ਵੇਖਦੇ ਹੋ। ਇਹ ਐਲਾਨ ਕਰ ਦੇਣਾ ਕਿ ਇਹ ਯੋਗਿਕ “ਆਟੋਫੈਜੀ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ” ਅਤੇ ਅੱਗੇ ਵਧ ਜਾਣਾ ਲੁਭਾਉਣਾ ਲੱਗ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਪਰ ਇਹ ਨਤੀਜਾ ਕੱਢਣਾ ਜਲਦਬਾਜ਼ੀ ਹੈ। LC3-II ਦੀ ਗੂੜ੍ਹੀ ਪੱਟੀ ਦਾ ਅਰਥ ਇਹ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ ਕਿ ਕੋਸ਼ਿਕਾ ਸਫ਼ਾਈ ਲਈ ਹੋਰ ਪਟਿਕਾਵਾਂ ਬਣਾ ਰਹੀ ਹੈ, ਜਾਂ ਇਹ ਵੀ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ ਕਿ ਨਿਪਟਾਰੇ ਦਾ ਪੜਾਅ ਰੁਕਿਆ ਹੋਣ ਕਾਰਨ ਪਟਿਕਾਵਾਂ ਇਕੱਠੀਆਂ ਹੋ ਰਹੀਆਂ ਹਨ। ਇਹ ਦੋਵੇਂ ਵਿਆਖਿਆਵਾਂ ਉਲਟ ਦਿਸ਼ਾਵਾਂ ਵੱਲ ਇਸ਼ਾਰਾ ਕਰਦੀਆਂ ਹਨ, ਅਤੇ ਨਿਊਰੋਨਾਂ ਵਿੱਚ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਬਾਰੇ ਖੋਜ-ਸਾਹਿਤ ਵਿੱਚ ਦੋਹਾਂ ਕਿਸਮਾਂ ਦੇ ਸਬੂਤਾਂ ਦੀਆਂ ਉਦਾਹਰਨਾਂ ਹਨ। ਇਹ ਲੇਖ ਹਰ ਟੈਸਟ ਨੂੰ ਵੱਖਰੇ ਤੌਰ ਉੱਤੇ ਵੇਖਦਿਆਂ ਦੱਸਦਾ ਹੈ ਕਿ ਅਸਲ ਵਿੱਚ ਕੀ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।

ਮੈਕਰੋਆਟੋਫੈਜੀ, ਜਿਸ ਰੂਪ ਦਾ ਇੱਥੇ ਅਧਿਐਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ, ਕੋਸ਼ਿਕਾ ਵਿੱਚ ਸਮੱਗਰੀ ਨੂੰ ਵੱਡੇ ਪੱਧਰ ਉੱਤੇ ਮੁੜ ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਹੈ। ਫੈਗੋਫੋਰ ਨਾਮਕ ਝਿੱਲੀਦਾਰ ਥੈਲੀ ਘਿਸੇ-ਪੁਰਾਣੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨਾਂ ਅਤੇ ਕੋਸ਼ਿਕਾ-ਅੰਗਕਾਂ ਦੇ ਦੁਆਲੇ ਵਧਦੀ ਹੈ, ਬੰਦ ਹੋ ਕੇ ਆਟੋਫੈਗੋਸੋਮ ਬਣ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਲਾਇਸੋਸੋਮ ਨਾਲ ਮਿਲਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਸ ਦੇ ਅੰਦਰਲੀ ਸਮੱਗਰੀ ਟੁੱਟ ਕੇ ਮੁੜ ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਛੱਡ ਦਿੱਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਨਿਊਰੋਨ ਇਸ ਨਿਯਮਤ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਉੱਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੇ ਹਨ ਕਿਉਂਕਿ ਉਹ ਵੰਡਦੇ ਨਹੀਂ ਅਤੇ ਵੰਡ ਰਾਹੀਂ ਨੁਕਸਾਨੇ ਹਿੱਸਿਆਂ ਦੀ ਸੰਘਣਤਾ ਘਟਾ ਨਹੀਂ ਸਕਦੇ। ਜਦੋਂ ਮੁੜ ਵਰਤੋਂ ਦੀ ਇਹ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਰੁਕਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਕਚਰਾ ਇਕੱਠਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਜਦੋਂ ਇਹ ਚੱਲਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਤਣਾਅ ਹੇਠ ਕੋਸ਼ਿਕਾ ਨੂੰ ਉਸਾਰੀ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਅੰਸ਼ ਮੁੜ ਮਿਲ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।

ਹਿਪੋਕੈਂਪਸ ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਿਤ ਇੱਕ ਪ੍ਰਯੋਗ ਨੇ ਕੀ ਦਿਖਾਇਆ

ਆਟੋਫੈਜੀ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਬਾਰੇ ਮੁੱਖ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਚੂਹੇ ਦੇ ਹਿਪੋਕੈਂਪਸ ਦੀਆਂ HT22 ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਵਰਤੀਆਂ ਗਈਆਂ, ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਸੀਰਮ ਤੋਂ ਵੰਚਿਤ ਰੱਖ ਕੇ ਤਣਾਅ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਹ ਹਾਲਤ ਵਾਧੇ ਦੇ ਕਾਰਕਾਂ ਅਤੇ ਪੋਸ਼ਣ-ਸਹਾਇਕ ਸੰਕੇਤਾਂ ਨੂੰ ਹਟਾਉਂਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਤੇ ਆਟੋਫੈਜੀ ਦੋਹਾਂ ਨੂੰ ਸ਼ੁਰੂ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਖੋਜਕਰਤਾਵਾਂ ਨੇ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤਾ ਕਿ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨੇ ਖੁਰਾਕ ਉੱਤੇ ਨਿਰਭਰ ਢੰਗ ਨਾਲ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਦੀ ਮੌਤ ਘਟਾਈ, ਅਤੇ ਇਸ ਸੁਰੱਖਿਆ ਦੇ ਨਾਲ ਮੈਕਰੋਆਟੋਫੈਜੀ ਦੇ ਸੰਕੇਤ ਵੀ ਮਿਲੇ।

ਮਾਰਕਰਾਂ ਤੋਂ ਮਿਲੇ ਸਬੂਤ ਖ਼ਾਸ ਸਨ। ਲਗਭਗ 20 nM ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਤੋਂ ਸ਼ੁਰੂ ਕਰਕੇ, ਫੈਲਿਆ ਹੋਇਆ LC3B ਰੰਗਨ ਕੇਂਦਰਕ ਦੇ ਆਲੇ-ਦੁਆਲੇ ਬਿੰਦੂਨੁਮਾ ਇਕੱਠਾਂ ਵਿੱਚ ਮੁੜ ਵੰਡਿਆ ਗਿਆ, ਜਦਕਿ LC3-I ਅਤੇ LC3-II ਦੀ ਸਭ ਤੋਂ ਮਜ਼ਬੂਤ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਲਗਭਗ 1 μM ਉੱਤੇ ਮਿਲੀ। LC3B-I ਅਤੇ LC3B-II ਦੋਵੇਂ ਖੁਰਾਕ ਅਤੇ ਸਮੇਂ ਉੱਤੇ ਨਿਰਭਰ ਢੰਗ ਨਾਲ ਵਧੇ। ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਗੱਲ ਇਹ ਸੀ ਕਿ ਟੀਮ ਇੱਕ ਸਥਿਰ LC3 ਬਲਾਟ ਤੋਂ ਇੱਕ ਕਦਮ ਅੱਗੇ ਗਈ। ਉਨ੍ਹਾਂ ਨੇ 10 μM ਕਲੋਰੋਕੁਇਨ ਪਾਇਆ, ਜੋ ਲਾਇਸੋਸੋਮ ਰਾਹੀਂ ਸਮੱਗਰੀ ਦੇ ਨਿਪਟਾਰੇ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੀਆਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਵੱਧ LC3-II ਦੇ ਨਾਲ ਸਥਿਰ ਹੋਇਆ p62 ਵੀ ਵੇਖਿਆ। ਇਹ ਰੁਝਾਨ ਸਿਰਫ਼ ਸਮੱਗਰੀ ਦੇ ਢੇਰ ਲੱਗਣ ਦੀ ਬਜਾਏ ਲਾਇਸੋਸੋਮ-ਨਿਰਭਰ ਟਰਨਓਵਰ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਉਨ੍ਹਾਂ ਨੇ ਇਹ ਵੀ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਕਲੋਰੋਕੁਇਨ ਨੇ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ-ਰੋਧੀ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਅੰਸ਼ਕ ਤੌਰ ਉੱਤੇ ਉਲਟ ਦਿੱਤਾ, ਜੋ ਇਸ ਮਾਡਲ ਵਿੱਚ ਸੁਰੱਖਿਆ ਨੂੰ ਆਟੋਫੈਜੀ ਅਤੇ ਲਾਇਸੋਸੋਮ ਦੇ ਮਾਰਗ ਨਾਲ ਜੋੜਦਾ ਹੈ।

ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਦਾ ਨਤੀਜਾ ਉਹ ਹਿੱਸਾ ਹੈ ਜਿਸ ਨੂੰ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਗਲਤ ਢੰਗ ਨਾਲ ਦੱਸਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਫਾਸਫੋਰੀਲੇਟਿਡ AMPK ਅਤੇ ਇਸ ਦੇ ਅਗਲੇ ਪੜਾਅ ਦੇ ਟਾਰਗੇਟ, ਫਾਸਫੋਰੀਲੇਟਿਡ ACC, ਰਾਹੀਂ ਮਾਪੀ ਗਈ AMPK ਸਿਗਨਲਿੰਗ 12 ਅਤੇ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਉੱਤੇ ਖੁਰਾਕ-ਨਿਰਭਰ ਢੰਗ ਨਾਲ ਵਧੀ। ਆਖ਼ਰੀ 4 ਘੰਟਿਆਂ ਦੌਰਾਨ 20 μM ਦੀ ਸੰਘਣਤਾ ਉੱਤੇ ਵਰਤੇ ਗਏ AMPK ਅਵਰੋਧਕ Compound C ਨੇ ACC ਦੇ ਫਾਸਫੋਰੀਲੇਸ਼ਨ ਅਤੇ LC3 ਦੀ ਸਰਗਰਮੀ ਦੋਹਾਂ ਨੂੰ ਘਟਾਇਆ। ਇਸ ਦੇ ਉਲਟ, ਫਾਸਫੋਰੀਲੇਟਿਡ mTOR ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਮਾਪਣਯੋਗ ਦਮਨ ਨਹੀਂ ਮਿਲਿਆ। ਇਸ ਲਈ ਤਣਾਅ ਹੇਠ ਹਿਪੋਕੈਂਪਸ ਦੀਆਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਨਤੀਜਾ AMPK ਨਾਲ ਜੁੜੀ ਆਟੋਫੈਜੀ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਸੀ, ਜੋ ਜ਼ਾਹਰ ਤੌਰ ਉੱਤੇ mTOR ਤੋਂ ਸੁਤੰਤਰ ਮਾਰਗ ਰਾਹੀਂ ਹੋਈ। ਇਹੀ ਰੁਝਾਨ ਜੀਵਤ ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ ਵੀ ਮਿਲਿਆ, ਜਿੱਥੇ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਦੇ ਇਲਾਜ ਨੇ ਕੋਰਟੈਕਸ ਅਤੇ ਹਿਪੋਕੈਂਪਸ ਵਿੱਚ ਮੈਕਰੋਆਟੋਫੈਜੀ ਦੇ ਮਾਰਕਰ ਵਧਾਏ।

ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਪੂਰਾ ਹੋਇਆ ਫਲਕਸ ਨਹੀਂ ਹੈ

ਇੱਥੇ ਧਾਰਨਾਵਾਂ ਵਿਚਲਾ ਫ਼ਰਕ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ। ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਦਾ ਅਰਥ ਹੈ ਕਿ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਤੰਤਰ ਹੋਰ ਆਟੋਫੈਗੋਸੋਮ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਫਲਕਸ ਦਾ ਅਰਥ ਹੈ ਕਿ ਸਮੱਗਰੀ ਪੂਰਾ ਮਾਰਗ ਤੈਅ ਕਰਦੀ ਹੈ: ਘੇਰ ਕੇ ਵੱਖ ਕਰਨਾ, ਪਰਿਪੱਕਤਾ, ਲਾਇਸੋਸੋਮ ਨਾਲ ਮਿਲਾਪ, ਵਿਘਟਨ ਅਤੇ ਮੁੜ ਵਰਤੋਂ। LC3-II ਵਿੱਚ ਹਰ ਵਾਧਾ ਕੇਵਲ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਦਾ ਦਾਅਵਾ ਹੈ, ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਫਲਕਸ ਟੈਸਟ ਬਾਕੀ ਸਫ਼ਰ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਨਹੀਂ ਕਰ ਦਿੰਦਾ।

ਮਿਆਰੀ ਫਲਕਸ ਟੈਸਟ ਵਿੱਚ ਲਾਇਸੋਸੋਮ ਦੀ ਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਥੋੜ੍ਹੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਰੋਕਣ ਵਾਲੇ ਪਦਾਰਥ, ਜਿਵੇਂ ਬੈਫਿਲੋਮਾਇਸਿਨ A1 ਜਾਂ ਕਲੋਰੋਕੁਇਨ, ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਅਤੇ ਗੈਰਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ LC3-II ਮਾਪਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਜੇ ਇਲਾਜ ਸੱਚਮੁੱਚ ਬਣਨ ਦੀ ਰਫ਼ਤਾਰ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਵਿਘਟਨ ਰੋਕਣ ਨਾਲ LC3-II ਹੋਰ ਵੀ ਵਧਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ। ਟੈਂਡਮ mCherry-GFP-LC3 ਰਿਪੋਰਟਰ ਇੱਕ ਹੋਰ ਦ੍ਰਿਸ਼ਟੀਕੋਣ ਦਿੰਦਾ ਹੈ: ਬਣਤਰਾਂ ਲਾਇਸੋਸੋਮ ਨਾਲ ਮਿਲਾਪ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਪੀਲੀਆਂ ਚਮਕਦੀਆਂ ਹਨ ਅਤੇ ਅਮਲਤਾ ਵੱਲੋਂ GFP ਸੰਕੇਤ ਬੁਝਾਏ ਜਾਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸਿਰਫ਼ ਲਾਲ ਚਮਕਦੀਆਂ ਹਨ। ਇਸ ਲਈ ਸਿਰਫ਼ ਲਾਲ ਚਮਕਣ ਵਾਲੇ ਬਿੰਦੂਨੁਮਾ ਇਕੱਠਾਂ ਦਾ ਵਧਣਾ ਅਮਲੀ ਆਟੋਲਾਇਸੋਸੋਮਾਂ ਤੱਕ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੇ ਅੱਗੇ ਵਧਣ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਕਰਦਾ ਹੈ। p62 ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦਾ ਘਟਣਾ ਸਮੱਗਰੀ ਦੇ ਟਰਨਓਵਰ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਇਹ ਧਿਆਨ ਰਹੇ ਕਿ p62 ਦਾ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਖ਼ੁਦ ਵੀ ਤਣਾਅ ਪ੍ਰਤੀ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸ ਨੂੰ mRNA ਪੱਧਰ ਉੱਤੇ ਜਾਂਚਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।

ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੀ ਜਾਂਚ-ਸੂਚੀ ਇਸ ਖੋਜ-ਸਾਹਿਤ ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਗਏ ਹਰ ਟੈਸਟ ਨੂੰ ਉਸ ਚੀਜ਼ ਨਾਲ ਜੋੜਦੀ ਹੈ ਜੋ ਉਹ ਮਾਪਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਉਸ ਚੀਜ਼ ਨਾਲ ਵੀ ਜੋ ਉਹ ਇਕੱਲਾ ਸਾਬਤ ਨਹੀਂ ਕਰ ਸਕਦਾ। ਪਾਠਕ ਇਸ ਨੂੰ ਮੈਕਰੋਆਟੋਫੈਜੀ ਬਾਰੇ ਕਿਸੇ ਵੀ ਭਵਿੱਖੀ ਦਾਅਵੇ ਉੱਤੇ ਵਰਤ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਇਨ੍ਹਾਂ ਮਾਰਕਰਾਂ ਨੂੰ ਆਧਾਰ ਬਣਾਉਣ ਵਾਲੀਆਂ ਉਪਵਾਸ ਅਤੇ ਲੰਬੀ ਉਮਰ ਸੰਬੰਧੀ ਦਲੀਲਾਂ ਵੀ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।

ਸ਼ਬਦਾਵਲੀ ਦੀ ਇੱਕ ਭੁੱਲ ਵੱਲ ਧਿਆਨ ਦਿਓ ਜਿਸ ਤੋਂ ਇਹ ਸਾਰਣੀ ਬਚਾਉਂਦੀ ਹੈ। ਫਾਸਫੋਰੀਲੇਟਿਡ ACC ਉਹ ਰੂਪ ਹੈ ਜਿਸ ਦੀ ਐਂਜ਼ਾਈਮਿਕ ਕਿਰਿਆ ਰੋਕੀ ਹੋਈ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਇਸ ਦਾ ਵਧਣਾ AMPK ਦੇ ਅਗਲੇ ਸੰਕੇਤ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ, ACC ਦੀ ਸਰਗਰਮੀ ਨੂੰ ਨਹੀਂ।

“ਮੈਕਰੋਆਟੋਫੈਜੀ ਦੇ ਅਵਰੋਧ ਨੇ ਨਿਊਰੋਨਾਂ ਦੀ ਸੁਰੱਖਿਆ ਖ਼ਤਮ ਕਰ ਦਿੱਤੀ” ਵਾਲੇ ਵਾਕ ਨੂੰ ਵੀ ਇਸੇ ਸਟੀਕਤਾ ਨਾਲ ਸਮਝਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ। HT22 ਮਾਡਲ ਵਿੱਚ ਇਸ ਦਾ ਅਰਥ ਹੈ ਕਿ ਆਟੋਫੈਜੀ ਅਤੇ ਲਾਇਸੋਸੋਮ ਦੇ ਮਾਰਗ ਵਿੱਚ ਦਖ਼ਲ ਦੇਣ ਨਾਲ ਸੀਰਮ ਤੋਂ ਵੰਚਿਤ ਹਾਲਤ ਵਿੱਚ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਤੋਂ ਮਿਲਿਆ ਜੀਵਿਤ ਰਹਿਣ ਦਾ ਲਾਭ ਖ਼ਤਮ ਹੋ ਗਿਆ। ਇਹ ਉਸ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਦੀ ਡਿਸ਼ ਵਿੱਚ ਆਟੋਫੈਜੀ ਦੀ ਲਾਜ਼ਮੀ ਜਾਂ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾਉਣ ਵਾਲੀ ਭੂਮਿਕਾ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਆਟੋਫੈਜੀ ਨੂੰ ਯੋਗਿਕ ਦਾ ਇਕੱਲਾ ਸੁਰੱਖਿਆਤਮਕ ਤੰਤਰ ਸਥਾਪਿਤ ਨਹੀਂ ਕਰਦਾ, ਨਾ ਹੀ ਇਹ ਸਾਬਤ ਕਰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਕਲੋਰੋਕੁਇਨ ਸਿਰਫ਼ ਆਟੋਫੈਜੀ ਰਾਹੀਂ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਕਾਰਣ-ਸੰਬੰਧੀ ਦਾਅਵੇ ਨੂੰ ਹੋਰ ਮਜ਼ਬੂਤ ਕਰਨ ਲਈ ATG5, ATG7 ਜਾਂ ULK1 ਵਿੱਚ ਜੈਨੇਟਿਕ ਦਖ਼ਲ ਦੀ ਲੋੜ ਹੋਵੇਗੀ।

ਇੱਕੋ ਤੰਤਰ ਤੱਕ ਪਹੁੰਚਣ ਦੇ ਦੋ ਮਾਰਗ

ਇੱਕ ਸਰਲ ਨਕਸ਼ਾ ਮਦਦ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਊਰਜਾ ਦਾ ਤਣਾਅ AMPK ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ, AMPK, ULK1 ਕੰਪਲੈਕਸ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਆਟੋਫੈਜੀ ਸ਼ੁਰੂ ਹੋ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਵਾਧੇ ਦੇ ਕਾਰਕ ਅਤੇ ਪੋਸ਼ਕ ਤੱਤ mTORC1 ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦੇ ਹਨ, mTORC1, ULK1 ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਆਟੋਫੈਜੀ ਬੰਦ ਰਹਿੰਦੀ ਹੈ। ULK1 ਤੋਂ ਅਗਲੇ ਪੜਾਅ ਵਿੱਚ Beclin-1 ਅਤੇ VPS34 ਕੰਪਲੈਕਸ ਫੈਗੋਫੋਰ ਦੇ ਬਣਨ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, LC3-I ਦਾ ਲਿਪਿਡੇਸ਼ਨ ਹੋ ਕੇ LC3-II ਬਣਦਾ ਹੈ, ਆਟੋਫੈਗੋਸੋਮ ਬੰਦ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਲਾਇਸੋਸੋਮ ਨਾਲ ਮਿਲਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ p62 ਦੇ ਟਰਨਓਵਰ ਦੇ ਨਾਲ ਅੰਦਰਲੀ ਸਮੱਗਰੀ ਦਾ ਵਿਘਟਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।

ਇਹ ਚਿੱਤਰ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਦੇ ਹਰ ਨਤੀਜੇ ਨੂੰ ਇਸ ਨਕਸ਼ੇ ਉੱਤੇ ਰੱਖਦਾ ਹੈ: ਹਿਪੋਕੈਂਪਸ ਦਾ ਨਤੀਜਾ AMPK ਸ਼ਾਖਾ ਦੇ ਕੋਲ ਅਤੇ ਪੂਰਵਜ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਦਾ ਨਤੀਜਾ mTOR ਸ਼ਾਖਾ ਦੇ ਕੋਲ।

ਇਹ ਢਾਂਚਾ ਦੂਜੇ Xie ਅਧਿਐਨ ਨਾਲ ਦਿਸਦੇ ਵਿਰੋਧ ਨੂੰ ਸੁਲਝਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਵੰਡ ਰਾਹੀਂ ਵਧ ਰਹੀਆਂ ਚੂਹੇ ਦੀਆਂ ਨਰਵ-ਪੂਰਵਜ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਵੱਖਰੇ ਪ੍ਰਯੋਗ ਨੇ ਪਾਇਆ ਕਿ 5 μM ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨੇ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਰੋਕਿਆ ਅਤੇ ਸ਼ਾਂਤ ਅਵਸਥਾ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕੀਤਾ। Ki67-ਪਾਜ਼ਿਟਿਵ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਦਿਨ 1 ਅਤੇ 3 ਉੱਤੇ ਘਟੀਆਂ, ਜਦਕਿ ਨਿਊਰੋਨ ਬਣਨ ਲਈ ਨਿਰਧਾਰਤ ਵਿਭੇਦਨ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਬਰਕਰਾਰ ਰਹੀ। ਉੱਥੇ ਤੰਤਰ mTOR ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਦੇ ਦਮਨ ਰਾਹੀਂ ਚੱਲਿਆ: ਕੁੱਲ mTOR ਅਤੇ ਫਾਸਫੋਰੀਲੇਟਿਡ mTOR ਘਟੇ, ਨਾਲ ਹੀ p70S6K ਅਤੇ 4EBP1 ਦੀ ਅਭਿਵਿਅਕਤੀ ਘਟੀ ਅਤੇ ਸਾਇਕਲਿਨ E1, B1, D1 ਅਤੇ D2 ਦੀ ਅਭਿਵਿਅਕਤੀ ਵੀ ਘੱਟ ਹੋਈ। ਮੁੱਖ ਦਿਖਾਈ ਦੇਣ ਵਾਲਾ ਲੱਛਣ ਪੂਰਵਜ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਦੀ ਸ਼ਾਂਤ ਅਵਸਥਾ ਸੀ, ਜਿਸ ਨੂੰ ਲੇਖਕਾਂ ਨੇ ਕੋਸ਼ਿਕੀ ਬੁਢਾਪੇ ਵਿੱਚ ਦੇਰੀ ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ, ਨਾ ਕਿ ਤਣਾਅ ਹੇਠ ਹਿਪੋਕੈਂਪਸ ਦੀਆਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਨੂੰ ਬਚਾਉਣ ਨਾਲ।

ਦੋਹਾਂ ਖੋਜ-ਲੇਖਾਂ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਵਿਰੋਧ ਨਹੀਂ ਹੈ। AMPK ਅਤੇ mTOR ਹਾਲਾਤਾਂ ਅਨੁਸਾਰ ਸੰਕੇਤਾਂ ਨੂੰ ਇਕੱਠਾ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਤੰਤਰ ਹਨ, ਨਿਸ਼ਚਿਤ ਸਵਿੱਚ ਨਹੀਂ। ਤਣਾਅ ਹੇਠ ਇੱਕ ਨਿਊਰੋਨ-ਵਰਗੀ ਕੋਸ਼ਿਕਾ ਮਾਪਣਯੋਗ mTOR ਅਵਰੋਧ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ AMPK ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਜਦਕਿ ਮਾਇਟੋਜਨ ਨਾਲ ਵਾਧੇ ਵੱਲ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਪੂਰਵਜ ਕੋਸ਼ਿਕਾ ਉਸੇ ਯੋਗਿਕ ਦੇ ਜਵਾਬ ਵਿੱਚ mTOR-ਨਿਰਭਰ ਵਾਧਾ-ਤੰਤਰ ਨੂੰ ਹੌਲਾ ਕਰ ਸਕਦੀ ਹੈ। ਕੋਸ਼ਿਕਾ ਦੀ ਕਿਸਮ, ਤਣਾਅ ਦੇ ਹਾਲਾਤ, ਸੰਘਣਤਾ ਅਤੇ ਮਾਪਣ ਦਾ ਸਮਾਂ ਤੈਅ ਕਰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਕਿਹੜੀ ਸ਼ਾਖਾ ਹਾਵੀ ਹੋਵੇਗੀ। ਇਸੇ ਕਾਰਨ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਦੇ ਮਾਇਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਦੀ ਊਰਜਾ ਅਤੇ ਰੈਡੌਕਸ ਉੱਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਵੀ ਇਸੇ ਤਸਵੀਰ ਦਾ ਹਿੱਸਾ ਹਨ: ਜਿਵੇਂ ਨਿਊਰੋਨਾਂ ਦੀ ਸੁਰੱਖਿਆ ਬਾਰੇ ਤੰਤਰ-ਆਧਾਰਿਤ ਸਮੀਖਿਆ ਦੱਸਦੀ ਹੈ, ਇਹ ਯੋਗਿਕ ਇੱਕ ਵਿਕਲਪਕ ਇਲੈਕਟ੍ਰਾਨ ਵਾਹਕ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਐਂਟੀਆਕਸੀਡੈਂਟ ਅਤੇ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ-ਰੋਧੀ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ, MAO ਅਤੇ NOS ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਬਾਇਓਜੈਨੇਸਿਸ ਤੇ ਆਟੋਫੈਜੀ ਰਾਹੀਂ ਮਾਇਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਦੇ ਨਵੀਨੀਕਰਨ ਨਾਲ ਜੁੜਦਾ ਹੈ। ਆਟੋਫੈਜੀ ਇਸ ਦੇ ਬਹੁਪੱਖੀ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਦੀ ਇੱਕ ਸ਼ਾਖਾ ਹੈ, ਪੂਰੀ ਕਹਾਣੀ ਨਹੀਂ।

ਇਹ ਪ੍ਰਯੋਗ ਕੀ ਨਹੀਂ ਦਿਖਾਉਂਦੇ

ਸੀਰਮ ਤੋਂ ਵੰਚਿਤ ਰੱਖਣਾ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਦੀ ਡਿਸ਼ ਵਿੱਚ ਪੋਸ਼ਣ-ਸਹਾਇਕ ਅਤੇ ਚਯਾਪਚਯ ਤਣਾਅ ਦਾ ਮਾਡਲ ਹੈ। ਇਹ ਪੂਰੇ ਜੀਵ ਦੇ ਉਪਵਾਸ ਦਾ ਮਾਡਲ ਨਹੀਂ ਹੈ: ਮੂਲ ਕਲਚਰ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਗਲੂਕੋਜ਼, ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ ਅਤੇ ਲੂਣ ਰਹਿੰਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਖੁਰਾਕ ਲੈਣ ਵਾਲਾ ਕੋਈ ਵਿਹਾਰ ਮੌਜੂਦ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦਾ। ਕਲਚਰ ਵਿੱਚ ਵਰਤੀਆਂ ਗਈਆਂ 20 nM ਤੋਂ 5 μM ਤੱਕ ਦੀਆਂ ਸੰਘਣਤਾਵਾਂ ਨੂੰ ਹਿਸਾਬ ਲਾ ਕੇ ਮਨੁੱਖੀ ਖੁਰਾਕਾਂ ਵਿੱਚ ਨਹੀਂ ਬਦਲਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ, ਕਿਉਂਕਿ ਸੋਖਣ, ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨਾਲ ਬੱਝਣ, ਰੈਡੌਕਸ ਅਵਸਥਾ, ਚਯਾਪਚਯ, ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ ਇਕੱਠਾ ਹੋਣ ਅਤੇ ਸੰਪਰਕ ਦੇ ਸਮੇਂ ਵਿੱਚ ਫ਼ਰਕ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।

ਕੋਈ ਮਨੁੱਖੀ ਟ੍ਰਾਇਲ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਵਿੱਚ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨਾਲ ਪੈਦਾ ਹੋਇਆ ਆਟੋਫੈਜਿਕ ਫਲਕਸ ਦਿਖਾਉਣ ਲਈ ਤਿਆਰ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। ਤੰਤਰ-ਸੰਬੰਧੀ ਸਬੂਤ ਅਜੇ ਵੀ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ, ਜੀਵ ਤੋਂ ਬਾਹਰ ਰੱਖੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਅਤੇ ਜਾਨਵਰਾਂ ਉੱਤੇ ਕੰਮ ਤੱਕ ਸੀਮਿਤ ਹਨ, ਅਤੇ ਸਮੀਖਿਆਵਾਂ ਅਜੇ ਵੀ ਇਨ੍ਹਾਂ ਨਤੀਜਿਆਂ ਨੂੰ ਮਨੁੱਖਾਂ ਉੱਤੇ ਲਾਗੂ ਕਰਨ ਦੇ ਸਬੂਤਾਂ ਨੂੰ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਦੱਸਦੀਆਂ ਹਨ। ਇਸ ਲਈ ਇਹ ਅਧਿਐਨ ਨਹੀਂ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਕਿ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਉਪਵਾਸ ਵਾਲੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੁਹਰਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਆਟੋਫੈਜੀ ਰਾਹੀਂ ਮਨੁੱਖੀ ਜੀਵਨਕਾਲ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਜਾਂ ਮਨੁੱਖੀ ਦਿਮਾਗ ਵਿੱਚ ਆਟੋਫੈਜਿਕ ਫਲਕਸ ਨੂੰ ਪੂਰਾ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਉਪਵਾਸ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਨ ਅਤੇ ਲੰਬੀ ਉਮਰ ਦੇ ਦਾਅਵਿਆਂ ਲਈ ਆਪਣੇ ਵੱਖਰੇ ਕਲੀਨੀਕਲ ਸਬੂਤਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ, ਅਤੇ ਹੋਰ ਉਦੇਸ਼ਾਂ ਲਈ ਕੀਤੇ ਗਏ ਮਨੁੱਖੀ ਮੈਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਟ੍ਰਾਇਲ ਸਿਰਫ਼ ਸੰਬੰਧ ਹੋਣ ਕਰਕੇ ਆਟੋਫੈਜੀ ਟ੍ਰਾਇਲ ਨਹੀਂ ਬਣ ਜਾਂਦੇ। ਪੋਸ਼ਕ-ਤੱਤਾਂ ਦੀ ਘਾਟ ਦੇ ਤਣਾਅ ਅਤੇ ਲੰਬੀ ਉਮਰ ਦੇ ਮਾਡਲਾਂ ਉੱਤੇ ਖੋਜ ਨੂੰ ਇਸ ਹੱਦ ਨੂੰ ਧਿਆਨ ਵਿੱਚ ਰੱਖ ਕੇ ਪੜ੍ਹਨਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।

ਅਗਲਾ ਖੋਜ-ਲੇਖ ਪੜ੍ਹਦਿਆਂ ਜਾਂਚ-ਸੂਚੀ ਨੂੰ ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਲਾਗੂ ਕਰੋ। ਪਹਿਲਾਂ ਪੁੱਛੋ ਕਿ ਕਿਹੜੀ ਸ਼ਾਖਾ ਬਦਲੀ: AMPK, mTOR ਜਾਂ ਕੋਈ ਵੀ ਨਹੀਂ। ਫਿਰ ਪੁੱਛੋ ਕਿ LC3 ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਨਾਲ ਫਲਕਸ ਟੈਸਟ ਵੀ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਾਂ ਉਹ ਇਕੱਲਾ ਹੀ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। ਫਿਰ ਜਾਂਚੋ ਕਿ ਮਾਰਗ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਨਾਲ ਲਾਭ ਖ਼ਤਮ ਹੋਇਆ ਸੀ ਜਾਂ ਨਹੀਂ, ਅਤੇ ਕਿਸ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ। ਜਿਹੜਾ ਅਧਿਐਨ ਤਿੰਨਾਂ ਸਵਾਲਾਂ ਦੇ ਜਵਾਬ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਉਹ ਮਜ਼ਬੂਤ ਤੰਤਰ-ਸੰਬੰਧੀ ਦਾਅਵੇ ਦਾ ਹੱਕਦਾਰ ਹੈ। ਜਿਹੜਾ ਸਿਰਫ਼ ਪਹਿਲੇ ਦਾ ਜਵਾਬ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਉਸ ਨੇ ਕੇਵਲ ਇਜਾਜ਼ਤ-ਸੰਕੇਤ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ, ਅਤੇ ਬਾਕੀ ਸਫ਼ਰ ਅਜੇ ਵੀ ਅਣਜਾਣ ਹੈ।