ମିଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ପରୀକ୍ଷଣରେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଶୀଳ ଅମ୍ଳଜାନ ପ୍ରଜାତିର ମାପନ

ଦୁଇଟି ପରୀକ୍ଷାଗାର ଏପରି ପରୀକ୍ଷଣ କରନ୍ତି, ଯାହାକୁ ପ୍ରତ୍ୟେକ ମିଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁର ପ୍ରତିଅକ୍ସିକାରକ ପରୀକ୍ଷଣ ବୋଲି କହନ୍ତି। ଗୋଟିଏ ଜଣାଏ ଯେ ରଞ୍ଜକଟି ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଶୀଳ ଅମ୍ଳଜାନ ପ୍ରଜାତିକୁ ଦମନ କରେ। ଅନ୍ୟଟି ଜଣାଏ ଯେ ଏହା ସେଗୁଡ଼ିକୁ ସୃଷ୍ଟି କରେ। ଉଭୟ ସ୍ପଷ୍ଟ ମାତ୍ରା–ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ବକ୍ରରେଖା ଦେଖାନ୍ତି। ଉଭୟ ଆନ୍ତରିକ। ଏହି ପାର୍ଥକ୍ୟର କାରଣ ଠକେଇ କିମ୍ବା ଅଦକ୍ଷତା ନୁହେଁ। କାରଣ ହେଉଛି, ଦୁଇ ଦଳ ଭିନ୍ନ ଆଲୋକରେ ଭିନ୍ନ ଜିନିଷ ମାପିଥିଲେ, ଭିନ୍ନ ପ୍ରଶ୍ନର ଉତ୍ତର ଦେଉଥିବା ପ୍ରୋବ୍ ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲେ, ଏବଂ ପରେ ଉଭୟ ଉତ୍ତରକୁ ଏକେ ଶବ୍ଦରେ ବର୍ଣ୍ଣନା କରିଥିଲେ: ROS।

ମିଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁକୁ ସଠିକ୍ ଭାବେ ମାପିବା କଷ୍ଟକର, କାରଣ ଏହା ଯେଉଁ ରାସାୟନିକ ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ କରିବା କଥା, ସେଥିରେ ନିଜେ ଅଂଶଗ୍ରହଣ କରେ। ଅନ୍ଧାରରେ ଏହା ଦାତା ଓ ଗ୍ରହୀତାଙ୍କ ମଧ୍ୟରେ ଇଲେକ୍ଟ୍ରନ୍ ବହନ କରେ ଏବଂ ପୁଣି ଏକ ଚକ୍ର ପାଇଁ ପ୍ରସ୍ତୁତ ହୋଇ ନିଜର ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ରୂପକୁ ଫେରେ। ଆଲୋକରେ ଏହା ଏକ ଆଲୋକ-ସଂବେଦକ ହୋଇଯାଏ ଏବଂ ଉତ୍ତେଜିତ ଟ୍ରିପ୍ଲେଟ୍ ଅବସ୍ଥାରେ ପହଞ୍ଚେ। ସେହି ଅବସ୍ଥାରୁ ଏହା ଅମ୍ଳଜାନକୁ ଶକ୍ତି ଦେଇ ସିଙ୍ଗଲେଟ୍ ଅମ୍ଳଜାନ ସୃଷ୍ଟି କରିପାରେ, କିମ୍ବା ଇଲେକ୍ଟ୍ରନ୍ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରି ମୁକ୍ତମୂଳକ ଓ ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ପେରକ୍ସାଇଡ୍ ସୃଷ୍ଟି କରିପାରେ। ସେହି ପ୍ରଣାଳୀରେ ରଖାଯାଇଥିବା ଯେକୌଣସି ପ୍ରୋବ୍ ରଞ୍ଜକ ଦ୍ୱାରା ନିଜେ ଜାରିତ, ବିଜାରିତ, ବର୍ଣ୍ଣହୀନ କିମ୍ବା ଆଲୋକୀୟ ଭାବେ ଆଚ୍ଛାଦିତ ହୋଇପାରେ। ତେଣୁ ଯେକୌଣସି ROS ମାପନ ଫଳର ପ୍ରଥମ ପ୍ରଶ୍ନ କେବେ ହେଲେ ମଧ୍ୟ ସଂଖ୍ୟାଟି କେତେ ନୁହେଁ। ପ୍ରଶ୍ନ ହେଉଛି, ପରୀକ୍ଷାଟି ପ୍ରକୃତରେ କ’ଣ ଚିହ୍ନଟ କରେ ଏବଂ ରଞ୍ଜକଟି ପରୀକ୍ଷା ଉପରେ କ’ଣ ପ୍ରଭାବ ପକାଏ।

Amplex Red: ଏକ କ୍ୟାଲିବ୍ରେଟ୍ କରାଯାଇଥିବା ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ପେରକ୍ସାଇଡ୍ ପରୀକ୍ଷା

ଠିକ୍ ଭାବେ ସଜାଯାଇଥିଲେ, ମିଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ଓ Amplex Red ସଂଯୋଗ ଏହି ଗବେଷଣା ସାହିତ୍ୟରେ ସବୁଠାରୁ ଯୁକ୍ତିସମର୍ଥିତ ଯୋଡ଼ି। ଏହାର ରାସାୟନିକ ପ୍ରକ୍ରିୟା ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ: ହର୍ସରାଡିଶ୍ ପେରକ୍ସିଡେଜ୍ ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ପେରକ୍ସାଇଡ୍ ବ୍ୟବହାର କରି Amplex ସବ୍‌ଷ୍ଟ୍ରେଟ୍‌କୁ ଏକ ପ୍ରତିଦୀପ୍ତ ଉତ୍ପାଦ, ରେସୋରୁଫିନ୍‌ରେ, ପ୍ରାୟ ଏକରୁ ଏକ ଷ୍ଟୋଇକିଓମେଟ୍ରିକ୍ ଅନୁପାତରେ ଜାରିତ କରେ। ନମୁନାର ପେରକ୍ସାଇଡ୍ ଡିଟେକ୍ଟରରେ ପ୍ରତିଦୀପ୍ତିରେ ପରିଣତ ହୁଏ। ପାରମ୍ପରିକ ROS ପରିବାରର ଅନ୍ୟ କୌଣସି ସଦସ୍ୟ ସେହି ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ସିଧାସଳଖ ଚଳାଏ ନାହିଁ।

ଏହାର ନିର୍ଣ୍ଣାୟକ ସୁବିଧା ହେଉଛି କ୍ୟାଲିବ୍ରେସନ୍। ଜଣେ ସତର୍କ ଗବେଷକ ସମାନ ବଫର୍‌ରେ, ସମାନ ପେରକ୍ସିଡେଜ୍ ଓ ସବ୍‌ଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ସାନ୍ଦ୍ରତା, ସମାନ ଇନ୍‌କ୍ୟୁବେସନ୍ ସମୟ ଏବଂ ସମାନ ଆଲୋକୀୟ ସେଟିଂ ସହିତ ଜଣାଶୁଣା ପେରକ୍ସାଇଡ୍ ମାନକ ପରୀକ୍ଷା କରନ୍ତି, ତା’ପରେ ସେହି ବକ୍ରରେଖା ସହିତ ନମୁନାଗୁଡ଼ିକର ମାପ ତୁଳନା କରନ୍ତି। ଏହି ପଦ୍ଧତିର ଆଧାର ହୋଇଥିବା ପୃଥକ୍ କରାଯାଇଥିବା ମସ୍ତିଷ୍କ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆ ଅଧ୍ୟୟନରେ ଲେଖକମାନେ ଠିକ୍ ଏହା ହିଁ କରିଥିଲେ। ପ୍ରତ୍ୟେକ ପରୀକ୍ଷା ଶେଷରେ ସେମାନେ ଜଣାଶୁଣା ପରିମାଣର ପେରକ୍ସାଇଡ୍ ଯୋଗ କରିଥିଲେ, ଏବଂ ଫଳାଫଳକୁ ମନଇଚ୍ଛା ପ୍ରତିଦୀପ୍ତି ଏକକ ପରିବର୍ତ୍ତେ ପ୍ରତି ମିଲିଗ୍ରାମ୍ ପ୍ରୋଟିନ୍ ପାଇଁ ପ୍ରତି ମିନିଟ୍‌ରେ ପିକୋମୋଲ୍ ହାରରେ ଦିଆଯାଇଛି। ଏହା ହିଁ ଏକ ଦୀପ୍ତିକୁ ମାପନରେ ପରିଣତ କରେ।

ସେହି ଅଧ୍ୟୟନର ତିନୋଟି ବିବରଣୀ ଅନୁସରଣ କରିବା ଯୋଗ୍ୟ। ପ୍ରଥମେ, ଲେଖକମାନେ ପେରକ୍ସାଇଡ୍‌କୁ ନଷ୍ଟ କରୁଥିବା କ୍ୟାଟାଲେଜ୍ ସାହାଯ୍ୟରେ ସଙ୍କେତକୁ ଯାଞ୍ଚ କରିଥିଲେ। କ୍ୟାଟାଲେଜ୍ ଯୋଗ କରାଯିବା ପରେ ମିଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ଦ୍ୱାରା ସୃଷ୍ଟ ପ୍ରତିଦୀପ୍ତି ବୃଦ୍ଧି ବନ୍ଦ ହୋଇଗଲା, ଯାହା ନିଶ୍ଚିତ କଲା ଯେ ସଙ୍କେତଟି ପେରକ୍ସାଇଡ୍‌ର ଥିଲା, କୌଣସି ଆଲୋକୀୟ ଆର୍ଟିଫ୍ୟାକ୍ଟ ନୁହେଁ। ଦ୍ୱିତୀୟରେ, ସେମାନେ ଉତ୍ତେଜନାକାରୀ ଆଲୋକ କିରଣକୁ ଶଟର୍ ଦ୍ୱାରା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରି ଆଲୋକ ପ୍ରଭାବକୁ ସିଧାସଳଖ ପରୀକ୍ଷା କରିଥିଲେ, ଯାହାଦ୍ୱାରା ନମୁନାଗୁଡ଼ିକ ସାଧାରଣ ଆଲୋକ ମାତ୍ରାର ଏକ ଅଷ୍ଟମାଂଶ ପାଇଥିଲେ; ସଙ୍କେତ ମାତ୍ର ନଅ ପ୍ରତିଶତ କମିଥିଲା। ସେମାନେ ରିପୋର୍ଟ କରିଥିବା ପେରକ୍ସାଇଡ୍‌ର ନବେ ପ୍ରତିଶତରୁ ଅଧିକ ମାପନ ଆଲୋକଠାରୁ ସ୍ୱାଧୀନ ଥିଲା। ତୃତୀୟରେ, ସେମାନେ ଏକ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଡ୍ ସାହାଯ୍ୟରେ ପେରକ୍ସାଇଡ୍ ଅପସାରଣକୁ ପୃଥକ୍ ଭାବେ ମାପିଥିଲେ ଏବଂ ଦେଖିଥିଲେ ଯେ ରଞ୍ଜକଟି ଉତ୍ପାଦନ ବଢ଼ାଇବା ସହିତ ଅପସାରଣକୁ ମଧ୍ୟ ଧୀର କରୁଥିଲା। କେବଳ ନିଟ୍ ପ୍ରତିଦୀପ୍ତି ଜଣାଉଥିବା ଏକ ପ୍ରୋବ୍ ଏହି ଦୁଇ ପ୍ରଭାବକୁ ଏକାଠି ମିଶାଇ ଦେଇଥାନ୍ତା।

ତଥାପି ଏହି ପରୀକ୍ଷାରେ ତ୍ରୁଟି ଘଟିବାର ବିଭିନ୍ନ ଉପାୟ ରହିଛି, ଏବଂ ମିଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ସେଗୁଡ଼ିକ ମଧ୍ୟରୁ ଅନେକକୁ ସକ୍ରିୟ କରେ। ରେସୋରୁଫିନ୍ ଯେଉଁ ଲାଲ୍ ବର୍ଣ୍ଣାଳୀ ଅଞ୍ଚଳରେ ଆଲୋକ ନିର୍ଗତ କରେ, ରଞ୍ଜକଟି ସେହି ଅଞ୍ଚଳରେ ବ୍ୟାପକ ଭାବେ ଆଲୋକ ଶୋଷଣ କରେ। ତେଣୁ ରଞ୍ଜକର ସାନ୍ଦ୍ରତା ଅଧିକ ହେଲେ ନମୁନା ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ଫିଲ୍ଟର୍ ପ୍ରଭାବ ଦ୍ୱାରା ନିଜ ସଙ୍କେତକୁ ଆଚ୍ଛାଦିତ କରିପାରେ। ସେଥିପାଇଁ ମାନକ ନମୁନାରେ ପରୀକ୍ଷା ନମୁନା ସହିତ ସମାନ ରଞ୍ଜକ ସାନ୍ଦ୍ରତା ରହିବା ଉଚିତ। Amplex Red ମଧ୍ୟ ନିଜେ ଆଲୋକ-ଜାରଣ ହୋଇପାରେ, ଏବଂ ଏହାର ଉତ୍ପାଦ ରେସୋରୁଫିନ୍ ଆଲୋକ-ରେଡକ୍ସ ଚକ୍ରଣରେ ପ୍ରବେଶ କରି ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍ ଓ ପେରକ୍ସାଇଡ୍ ସୃଷ୍ଟି କରିପାରେ। ପରୀକ୍ଷଣରେ ଏକ ଆଲୋକ-ସଂବେଦକକୁ ମଧ୍ୟ ଆଲୋକିତ କରାଯାଉଥିଲେ ଏହା ବିଶେଷ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ। ବ୍ୟବହାରିକ ସମାଧାନ ହେଉଛି ରଞ୍ଜକ ଓ ପ୍ରୋବ୍‌କୁ ଏକାଠି ଆଲୋକିତ ନକରି, ପ୍ରଥମେ ମିଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ନମୁନାଗୁଡ଼ିକୁ ଆଲୋକ ଦେବା ଏବଂ ପରେ ସେଗୁଡ଼ିକର ମାପିତ ଅଂଶକୁ ଅନ୍ଧାରରେ Amplex ବିକାରକ ସହିତ ପରୀକ୍ଷା କରିବା। ଶେଷରେ, ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍ ଡିସ୍‌ମ୍ୟୁଟେଜ୍ କେବଳ Amplex ସଙ୍କେତକୁ ଦମନ କରେ ନାହିଁ: ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍‌କୁ ପେରକ୍ସାଇଡ୍‌ରେ ପରିଣତ କରିବା ଦ୍ୱାରା ସଙ୍କେତ ବଢ଼ିପାରେ। ପ୍ରତିଦୀପ୍ତି ବଢ଼ାଉଥିବା ଏକ SOD ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପରୀକ୍ଷା ବିଫଳ ହୋଇନାହିଁ। ଏହା ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍‌କୁ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକ୍ରମର ପୂର୍ବବର୍ତ୍ତୀ ପ୍ରଜାତି ଭାବେ ଚିହ୍ନଟ କରିଛି।

DCFDA: ଏକ ଅନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଜାରଣ ସୂଚକ

ମିଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ଓ DCFDA ଯୋଡ଼ି ଅଧିକାଂଶ ଦ୍ୱନ୍ଦ୍ୱର ଉତ୍ସ। DCFH-DA ହେଉଛି କୋଷ ମଧ୍ୟରେ ପ୍ରବେଶ କରାଯାଉଥିବା ଏକ ପୂର୍ବଗାମୀ ପଦାର୍ଥ। କୋଷ ଭିତରର ଏଷ୍ଟେରେଜ୍ ଏହାର ଆସିଟେଟ୍ ଗୋଷ୍ଠୀଗୁଡ଼ିକୁ ଅପସାରଣ କରି ଅପ୍ରତିଦୀପ୍ତ DCFH ରଖିଦିଏ, ଏବଂ DCFHର ଜାରଣରୁ ପ୍ରତିଦୀପ୍ତ DCF ସୃଷ୍ଟି ହୁଏ। ଏହାକୁ ଜାରିତ କରୁଥିବା ପଦାର୍ଥର ତାଲିକା ଲମ୍ବା: ହାଇଡ୍ରକ୍ସିଲ୍ ମୁକ୍ତମୂଳକ, ପେରକ୍ସିଡେଜ୍ ଓ ହିମ୍ ମଧ୍ୟବର୍ତ୍ତୀ ପଦାର୍ଥ, ନାଇଟ୍ରୋଜେନ୍ ଡାଇଅକ୍ସାଇଡ୍, ହାଇପୋକ୍ଲୋରସ୍ ଅମ୍ଳ ଏବଂ ପେରକ୍ସିନାଇଟ୍ରାଇଟ୍‌ରୁ ଉତ୍ପନ୍ନ ମୁକ୍ତମୂଳକ। ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ପେରକ୍ସାଇଡ୍ ଏକାକୀ ଏହାକୁ ସିଧାସଳଖ କୌଣସି ଉପଯୋଗୀ ହାରରେ ଜାରିତ କରେ ନାହିଁ; ପେରକ୍ସାଇଡ୍-ନିର୍ଭର ପ୍ରତିଦୀପ୍ତି ପାଇଁ ସାଧାରଣତଃ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକ୍ରମରେ ଲୌହ, ହିମ୍ ପ୍ରୋଟିନ୍ କିମ୍ବା ପେରକ୍ସିଡେଜ୍ ରସାୟନ ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ।

ପ୍ରତ୍ୟେକ ପଦ୍ଧତି ବିଭାଗରେ ଉଦ୍ଧୃତ କରାଯିବା ଉଚିତ ଥିବା ସମାଲୋଚନାଟି କଲ୍ୟାଣରାମନ୍ ଓ ସହକର୍ମୀଙ୍କ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରୋବ୍ ଭାବେ DCFHର ବିଶ୍ଳେଷଣରୁ ଆସିଛି। ଏହି କାରଣରୁ DCFDAକୁ ପ୍ରତ୍ୟାଖ୍ୟାନ କରିଥିବା ମସ୍ତିଷ୍କ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆ ଅଧ୍ୟୟନରେ ଏହାର ସାରାଂଶ ଦିଆଯାଇଛି। ସେମାନେ ଦେଖାଇଥିଲେ ଯେ ରଞ୍ଜକଟି ଧୀରେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କରେ, ଏହାର ଷ୍ଟୋଇକିଓମେଟ୍ରି ନିରୂପିତ ହୋଇନାହିଁ, ଏହାର ବୈଧ କ୍ୟାଲିବ୍ରେସନ୍ ନାହିଁ, ଏବଂ ଏହା ROS ନୁହେଁ ଏପରି ଯୌଗିକ ସହିତ ମଧ୍ୟ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କରେ। ପ୍ରୋବ୍‌ଟି ଯାହା ମାପେ ତାହାକୁ ମଧ୍ୟ ବଢ଼ାଏ: DCFHର ଏକ-ଇଲେକ୍ଟ୍ରନ୍ ଜାରଣରୁ ଏକ DCF ମୁକ୍ତମୂଳକ ସୃଷ୍ଟି ହୁଏ, ଯାହା ଅମ୍ଳଜାନ ସହିତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କରି ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍ ତିଆରି କରେ; ଏହା ଡିସ୍‌ମ୍ୟୁଟେସନ୍ ଦ୍ୱାରା ଅତିରିକ୍ତ ପେରକ୍ସାଇଡ୍‌ରେ ପରିଣତ ହୁଏ। ମାପନ ପ୍ରକ୍ରିୟା ଯେଉଁ ରସାୟନ ବିଷୟରେ ଜଣାଏ, ତାହାର କିଛି ଅଂଶ ନିଜେ ସୃଷ୍ଟି କରେ।

ଏସବୁ ମଧ୍ୟରୁ କୌଣସିଟି DCFDAକୁ ଅନୁପଯୋଗୀ କରେ ନାହିଁ। ବରଂ ଏହାକୁ ଚିହ୍ନଟ ପଦ୍ଧତି ନୁହେଁ, ଏକ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଯାଞ୍ଚ ପଦ୍ଧତି କରେ। DCF ପ୍ରତିଦୀପ୍ତି ବଢ଼ିବାର ଅର୍ଥ ହେଉଛି ଅକ୍ସିକାରକ-ନିର୍ଭର ପ୍ରୋବ୍ ଜାରଣ ବଢ଼ିଛି। ଏହାର ଅର୍ଥ ପେରକ୍ସାଇଡ୍ ବଢ଼ିଛି ନୁହେଁ, ଏବଂ ନିଶ୍ଚିତ ଭାବେ ମୋଟ ROS ବଢ଼ିଛି ମଧ୍ୟ ନୁହେଁ—ଏହି ପରିମାଣକୁ କୌଣସି ଏକକ ପ୍ରୋବ୍ ମାପେ ନାହିଁ। ଏକ ମାଇକ୍ରୋମୋଲାର୍‌ରୁ ଅଧିକ ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ DCF ଜାରଣ ଉପରେ ନିର୍ଭର କରିଥିବା ପୂର୍ବବର୍ତ୍ତୀ ମିଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ଗବେଷଣା ଜାରଣ-ପ୍ରବର୍ଦ୍ଧକ ପ୍ରଭାବ ରିପୋର୍ଟ କରିଥିଲା, ଯେତେବେଳେ ସେହି ସମୟର ଅନ୍ୟ ପ୍ରଣାଳୀଗୁଡ଼ିକ ପେରକ୍ସାଇଡ୍-ପ୍ରେରିତ କୋଷ ମୃତ୍ୟୁରୁ ସୁରକ୍ଷା ରିପୋର୍ଟ କରିଥିଲେ। ଭିନ୍ନ ରେଡକ୍ସ ପରିପ୍ରେକ୍ଷ୍ୟରେ ଏକେ ରଞ୍ଜକ ପାଇଁ ଉଭୟ ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ ସତ୍ୟ ହୋଇପାରେ, ଏବଂ କେବଳ DCF ଫଳାଫଳ କେଉଁ ଅକ୍ସିକାରକ ସଙ୍କେତ ବହନ କରିଥିଲା ତାହା କହିପାରେ ନାହିଁ। ପୂର୍ବବର୍ତ୍ତୀ ମସ୍ତିଷ୍କ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆ ଗବେଷଣାର ଗୁରୁତ୍ୱ ହେଉଛି, ଏହା ଏହି ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଯାଞ୍ଚ ବଦଳରେ କ୍ୟାଲିବ୍ରେଟ୍ କରାଯାଇଥିବା ପେରକ୍ସାଇଡ୍ ମାପନ ବ୍ୟବହାର କରି ପେରକ୍ସାଇଡ୍ ଭାରକୁ ସିଧାସଳଖ ଚିହ୍ନଟ କରିଥିଲା: ଏପରିକି ଏକ ଶହ ନାନୋମୋଲାର୍ ରଞ୍ଜକ ମଧ୍ୟ ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିବା ପ୍ରତ୍ୟେକ ସବ୍‌ଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ଓ ଶ୍ୱସନ ଅବସ୍ଥାରେ ପେରକ୍ସାଇଡ୍ ମୁକ୍ତିକୁ ଅନେକ ଗୁଣ ବଢ଼ାଇଥିଲା।

DCFDAରେ ମିଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଆଉ ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଫାନ୍ଦ ରହିଛି। ରଞ୍ଜକଟି ଗାଢ଼ ରଙ୍ଗର ଓ ରେଡକ୍ସ-ସକ୍ରିୟ, ତେଣୁ ଏହା ପ୍ରତିଦୀପ୍ତିକୁ ବର୍ଣ୍ଣହୀନ କରିପାରେ, ଆଲୋକ ନିର୍ଗମନକୁ ପ୍ରଶମିତ କରିପାରେ, କିମ୍ବା କୋଷୀୟ ROSଠାରୁ ସ୍ୱାଧୀନ ଭାବେ ପ୍ରୋବ୍‌ର ରାସାୟନିକ ପ୍ରଣାଳୀକୁ ଜାରିତ କରିପାରେ। ରଞ୍ଜକ ଓ ପ୍ରୋବ୍ ଥିବା, କିନ୍ତୁ କୋଷ ନଥିବା ଏକ କୋଷମୁକ୍ତ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପରୀକ୍ଷା କୌଣସି ଇଚ୍ଛାଧୀନ ଅଳଙ୍କାର ନୁହେଁ। ରଞ୍ଜକ ପ୍ରୋବ୍ ସହିତ ଅନ୍ତଃକ୍ରିୟା କରୁଛି କି ନାହିଁ, ତାହା ଜଣାଇବାର ପରୀକ୍ଷଣ ଏହା ହିଁ।

ସ୍ପିନ୍ ଟ୍ରାପିଂ ଏବଂ ଅମ୍ଳଜାନ ଗ୍ରହଣ: ପରିଚୟ ଓ ପ୍ରବାହ ହାର

ପ୍ରତିଦୀପ୍ତ ପ୍ରୋବ୍‌ଗୁଡ଼ିକ ଯେଉଁଠାରେ କିଛି ଜାରଣଯୋଗ୍ୟ ପଦାର୍ଥ ଦେଖାଦେଇଛି ବୋଲି ଜଣାନ୍ତି, ସ୍ପିନ୍ ଟ୍ରାପ୍ ସହିତ ଇଲେକ୍ଟ୍ରନ୍ ସ୍ପିନ୍ ରେଜୋନାନ୍ସ ତାହା କ’ଣ ଥିଲା, ସେ ସମ୍ପର୍କରେ ଅଧିକ ନିକଟ ଉତ୍ତର ଦିଏ। ମିଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁର ଚିରପରିଚିତ ଆଲୋକ-ରସାୟନ ଅଧ୍ୟୟନ ରଞ୍ଜକ, ଆସ୍କର୍ବେଟ୍ ଓ ଆଲୋକରୁ ଉତ୍ପନ୍ନ ଆସ୍କର୍ବେଟ୍ ମୁକ୍ତମୂଳକକୁ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ESR ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲା। ପରେ ଏହା ଅମ୍ଳଜାନ ଗ୍ରହଣ ପରୀକ୍ଷଣରେ ପେରକ୍ସାଇଡ୍ ଗଠନ ଏବଂ ସ୍ପିନ୍ ଟ୍ରାପିଂ ପରୀକ୍ଷାରେ ଲୌହ-ଉତ୍ପ୍ରେରିତ ହାଇଡ୍ରକ୍ସିଲ୍ ମୁକ୍ତମୂଳକ ଗଠନ ଦେଖାଇଥିଲା। ପ୍ରତ୍ୟେକ କୌଶଳ ଏପରି ପ୍ରଶ୍ନର ଉତ୍ତର ଦେଇଥିଲା, ଯାହାର ଉତ୍ତର ଅନ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ଦେଇପାରି ନଥିଲେ: ESR ମୁକ୍ତମୂଳକର ପରିଚୟ ଦେଇଥିଲା, ଅମ୍ଳଜାନ ଗ୍ରହଣ କୌଣସି ପ୍ରତିଦୀପ୍ତ ପ୍ରୋବ୍‌ଠାରୁ ସ୍ୱାଧୀନ ଭାବେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ପ୍ରବାହ ହାର ଦେଇଥିଲା, ଏବଂ ଏହି ସଂଯୋଗ ଏକେ ଆଲୋକିତ ପ୍ରଣାଳୀରେ ସିଙ୍ଗଲେଟ୍ ଅମ୍ଳଜାନ ଓ ମୁକ୍ତମୂଳକ—ଉଭୟ ପଥ କାର୍ଯ୍ୟ କରୁଥିବା ଦେଖାଇଥିଲା।

1984ର ସେହି ଫଳାଫଳ ଆଜି ମଧ୍ୟ ଏକ ସତର୍କତା ଲେବେଲ୍ ପରି ଲାଗେ। ଆଲୋକ ଓ ଏକ ବିଜାରକ ଉପସ୍ଥିତ ଥିବାବେଳେ ରଞ୍ଜକଟି ପେରକ୍ସାଇଡ୍ ସୃଷ୍ଟି କରିଥିଲା, ଏବଂ ଲୌହ ଉପସ୍ଥିତ ଥିବାବେଳେ ପ୍ରଣାଳୀ ଏହି ଗୋଷ୍ଠୀର ସବୁଠାରୁ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଶୀଳ ପ୍ରଜାତି, ହାଇଡ୍ରକ୍ସିଲ୍ ମୁକ୍ତମୂଳକ, ସୃଷ୍ଟି କରିଥିଲା। ଲେଖକମାନେ ଏହାକୁ ଆଖିରେ ଥିବା ଆସ୍କର୍ବେଟ୍ ସହିତ ସମ୍ପର୍କିତ କରିଥିଲେ ଏବଂ ଆଖିରେ ଏହାର ଅବିଚାରିତ ବ୍ୟବହାର ଉପରେ ପ୍ରଶ୍ନ ଉଠାଇଥିଲେ। ଆଧୁନିକ ପାଠକମାନେ ସର୍ତ୍ତଗୁଡ଼ିକୁ ଧ୍ୟାନ ଦେବା ଉଚିତ: ଆଲୋକ ସହିତ ବିଜାରକ ସହିତ ଲୌହ। ଏଗୁଡ଼ିକ ମଧ୍ୟରୁ ଯେକୌଣସି ଗୋଟିଏକୁ ହଟାଇଲେ ପଥଟି ଦୁର୍ବଳ ହୁଏ କିମ୍ବା ଲୋପ ପାଏ।

ଅମ୍ଳଜାନ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଡ୍‌ର ଉପଯୋଗିତା ଅନ୍ୟ ଭାବେ ପ୍ରମାଣିତ ହୁଏ। ଏକ କ୍ଲାର୍କ ପ୍ରକାରର ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଡ୍ ନିଟ୍ ଅମ୍ଳଜାନ ଖର୍ଚ୍ଚ ମାପେ। ଏହା ରଞ୍ଜକ-ଚାଳିତ ରେଡକ୍ସ ରସାୟନ ଆଣବିକ ଅମ୍ଳଜାନ ଖର୍ଚ୍ଚ କରୁଥିବା ସ୍ଥାପିତ କରେ ଏବଂ ଏପରି ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଗତି ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ତଥ୍ୟ ଦିଏ, ଯାହାକୁ କୌଣସି ପ୍ରତିଦୀପ୍ତି ଆର୍ଟିଫ୍ୟାକ୍ଟ ନକଲ କରିପାରିବ ନାହିଁ। ଏହା ଉତ୍ପାଦକୁ ଚିହ୍ନଟ କରେ ନାହିଁ। ପେରକ୍ସାଇଡ୍, ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍ ଓ ଜଳର ଗଠନ, ଏବଂ ସିଙ୍ଗଲେଟ୍ ଅମ୍ଳଜାନର କ୍ଷୟ—ସବୁ ଅମ୍ଳଜାନ ଖର୍ଚ୍ଚ କରେ। ପରିଚୟ ବିନା ପ୍ରବାହ ହାର ଯେତିକି ଅସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ, ପ୍ରବାହ ହାର ବିନା ପରିଚୟ ମଧ୍ୟ ସେତିକି ଅସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ। ସେଥିପାଇଁ ଦୃଢ଼ ଗବେଷଣା ପତ୍ରଗୁଡ଼ିକ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଡ୍‌କୁ ଏକ କ୍ୟାଲିବ୍ରେଟ୍ କରାଯାଇଥିବା ପେରକ୍ସାଇଡ୍ ପରୀକ୍ଷା କିମ୍ବା ଟ୍ରାପ୍ ସହିତ ଯୋଡ଼ନ୍ତି।

ପ୍ରତିଅକ୍ସିକାରକ ଫଳାଫଳ କାହିଁକି ପରସ୍ପର ବିରୋଧୀ ହୁଏ

ତିନୋଟି ମାପନ ଫଳକୁ ପାଖାପାଖି ରଖିଲେ, ମିଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ଗବେଷଣା ସାହିତ୍ୟର ଆପାତ ବିରୋଧାଭାସଗୁଡ଼ିକ ପଦ୍ଧତିର ପାର୍ଥକ୍ୟ ଏବଂ ତିନୋଟି ଜୈବିକ ତଥ୍ୟ ଦ୍ୱାରା ବୁଝାପଡ଼େ।

ପ୍ରଥମେ, ରଞ୍ଜକଟି ଉଭୟ ଏକ ଇଲେକ୍ଟ୍ରନ୍ ବାହକ ଓ ଏକ ପେରକ୍ସାଇଡ୍ ଉତ୍ସ। ଯେଉଁ ଶ୍ୱସନ ସ୍ଥଳଗୁଡ଼ିକରେ ଅମ୍ଳଜାନ ଅନ୍ୟଥା ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍‌ରେ ପରିଣତ ହୋଇଥାନ୍ତା, ସେଠାରୁ ଇଲେକ୍ଟ୍ରନ୍‌କୁ ଅନ୍ୟ ଦିଗକୁ ମୋଡ଼ି ଏହା ଗୋଟିଏ ROS କମାଇପାରେ। ଅନ୍ୟପଟେ, ଏହାର ବିଜାରିତ ରୂପ ଅମ୍ଳଜାନକୁ ସିଧାସଳଖ ପେରକ୍ସାଇଡ୍‌ରେ ବିଜାରିତ କରି ଅନ୍ୟ ଏକ ROS ବଢ଼ାଏ। ତେଣୁ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆର ରେଡକ୍ସ ରସାୟନ ଏବଂ ଏହାର ବିକଳ୍ପ ପଥ ଭୂମିକା ଅଧ୍ୟୟନ କରୁଥିବା ପରୀକ୍ଷାଗାର ପ୍ରୋବ୍-ନିର୍ଭର ଉତ୍ତର ଆଶା କରିବା ଉଚିତ: ଏକେ କ୍ୟୁଭେଟ୍‌ରେ ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍-ସଂବେଦନଶୀଳ ମାପନ ଫଳ କମେ, ଯେତେବେଳେ ପେରକ୍ସାଇଡ୍ ମାପନ ଫଳ ବଢ଼େ।

ଦ୍ୱିତୀୟରେ, କମ୍ ମାତ୍ରାରେ ପେରକ୍ସାଇଡ୍ କେବଳ କ୍ଷତି ନୁହେଁ, ଏକ ସଙ୍କେତ ମଧ୍ୟ। ପୂର୍ବବର୍ତ୍ତୀ ଗବେଷଣା ପରେ କରାଯାଇଥିବା ମୂଷା ମସ୍ତିଷ୍କ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆ ଅଧ୍ୟୟନରେ ମାତ୍ର ପଚାଶ ନାନୋମୋଲାର୍ ରଞ୍ଜକରୁ ପେରକ୍ସାଇଡ୍ ସୃଷ୍ଟି ହେଉଥିବା, କିନ୍ତୁ ଚିକିତ୍ସାଗତ ସ୍ତରରେ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆ DNAରେ କ୍ଷତ ସୃଷ୍ଟି ନହେଉଥିବା ଦେଖାଯାଇଥିଲା; ପୂର୍ବ-ଉପଚାର ପରେ ରୋଟେନୋନ୍-ପ୍ରେରିତ କ୍ଷତରୁ ସୁରକ୍ଷା ମଧ୍ୟ ଦେଖାଯାଇଥିଲା। କେବଳ ଏକ ଶହ ମାଇକ୍ରୋମୋଲାର୍‌ରେ, ଯାହା ଚିକିତ୍ସାଗତ ସୀମାଠାରୁ ବହୁ ଉପରେ, ରଞ୍ଜକଟି କେତେକ ନିର୍ବାଚିତ DNA ଖଣ୍ଡକୁ କ୍ଷତି କରିଥିଲା। ଏବଂ ଲାଲ୍ ଆଲୋକ ସହିତ କୋଡ଼ିଏ ମାଇକ୍ରୋମୋଲାର୍ ରଞ୍ଜକ ସିଙ୍ଗଲେଟ୍ ଅମ୍ଳଜାନ ସୃଷ୍ଟି କରିଥିଲା, ଯାହା ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିବା ସମସ୍ତ ଖଣ୍ଡକୁ କ୍ଷତି କରିଥିଲା। ପ୍ରସ୍ତାବିତ କାର୍ଯ୍ୟପ୍ରଣାଳୀଟି ହର୍ମେସିସ୍-ଭିତ୍ତିକ: ମୃଦୁ ପେରକ୍ସାଇଡ୍ ଉତ୍ପାଦନ Nrf2-ସଂଯୁକ୍ତ ପ୍ରତିଅକ୍ସିକାରକ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ଓ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆ ଜୈବଜନନକୁ ସକ୍ରିୟ କରେ। ତେଣୁ ଦୀର୍ଘକାଳୀନ ପ୍ରତିଅକ୍ସିକାରକ ଫଳାଫଳ ପୂର୍ବରୁ ସ୍ୱଳ୍ପକାଳୀନ ଜାରଣ-ପ୍ରବର୍ଦ୍ଧକ ମାପନ ଫଳ ଦେଖାଯାଏ। ଏକ ଘଣ୍ଟାରେ ପଢ଼ାଯାଇଥିବା ପରୀକ୍ଷା ଓ ଏକ ଦିନରେ ପଢ଼ାଯାଇଥିବା ପରୀକ୍ଷା ପରସ୍ପର ସହିତ ମେଳ ନଖାଇପାରନ୍ତି, କାରଣ ମଧ୍ୟବର୍ତ୍ତୀ ସମୟରେ ଜୈବିକ ପ୍ରକ୍ରିୟା ବଦଳିଯାଇଥିଲା।

ତୃତୀୟରେ, କେଉଁ ଅଣୁ ପ୍ରକୃତରେ ଉପସ୍ଥିତ ଅଛି, ତାହା ମଧ୍ୟ ଆଲୋକ ନିର୍ଦ୍ଧାରଣ କରେ। ଆଲୋକ ରଞ୍ଜକରୁ ମିଥାଇଲ୍ ଗୋଷ୍ଠୀ ଅପସାରଣ କରି ଏହାକୁ Azure B ଓ ସମ୍ବନ୍ଧିତ ଉତ୍ପାଦ ଦିଗକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରେ, ଏବଂ ଏକ ଡିଶ୍ ଉପରେ ଥିବା ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ୍ ବତୀ ମଧ୍ୟ ଏହାକୁ ଆଲୋକ-ସଂବେଦିତ କରିବା ପାଇଁ ଯଥେଷ୍ଟ। ଅନ୍ଧାରରେ ଓ ଆଲୋକରେ କରାଯାଇଥିବା ପରୀକ୍ଷଣ ଭିନ୍ନ ପରୀକ୍ଷଣ, ଏବଂ ଯେକୌଣସି ପ୍ରୋଟୋକଲ୍‌ର ଆଲୋକ ଓ ରଞ୍ଜକ ପରିଚାଳନା ପାଇଁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ବିଭାଗ ସେଗୁଡ଼ିକୁ ସେହିପରି ଗ୍ରହଣ କରିବା ଉଚିତ।

ଏକ ନ୍ୟୂନତମ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ସମୂହ, ଏବଂ ଯେକୌଣସି ଦାବିକୁ କିପରି ପଢ଼ିବେ

ନିମ୍ନର ତୁଳନାଟି ଏହି ପ୍ରବନ୍ଧ ପାଇଁ ମୂଳ ସନ୍ଦର୍ଭ ସାମଗ୍ରୀ। ମିଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଯେକୌଣସି ROS ଫଳାଫଳ ଗ୍ରହଣ କରିବା ପୂର୍ବରୁ, ଲେଖକମାନେ କେଉଁ ଧାଡ଼ିର ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିଛନ୍ତି ଏବଂ କେଉଁଟି ଛାଡ଼ିଛନ୍ତି, ତାହା ଯାଞ୍ଚ କରନ୍ତୁ।

ଏଥିରୁ ପଢ଼ିବାର ଏକ ବ୍ୟବହାରିକ ନିୟମ ମିଳେ। ପେରକ୍ସିଡେଜ୍ ସହିତ, କ୍ୟାଲିବ୍ରେଟ୍ କରାଯାଇଥିବା ଏବଂ କ୍ୟାଟାଲେଜ୍ ଦ୍ୱାରା ଯାଞ୍ଚ କରାଯାଇଥିବା Amplex ପରୀକ୍ଷା ପେରକ୍ସାଇଡ୍ ସମ୍ପର୍କରେ ପ୍ରମାଣ ଦିଏ। DCFDA ଅନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରୋବ୍ ଜାରଣ ସମ୍ପର୍କରେ ପ୍ରମାଣ ଦିଏ, ଏହାଠାରୁ ଅଧିକ କିଛି ନୁହେଁ। ମୁକ୍ତମୂଳକ-ଅପସାରକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ସହିତ ସ୍ପିନ୍ ଟ୍ରାପିଂ ମୁକ୍ତମୂଳକର ପରିଚୟ ସମ୍ପର୍କରେ ପ୍ରମାଣ ଦିଏ। ଅମ୍ଳଜାନ ଗ୍ରହଣ ପ୍ରବାହ ହାର ସମ୍ପର୍କରେ ପ୍ରମାଣ ଦିଏ। ଏକ ପରୀକ୍ଷା ଯେତେଦୂର ସମର୍ଥନ କରିପାରେ, ତାହାଠାରୁ ଅଧିକ ଦାବି କରୁଥିବା ବାକ୍ୟ ଯେତେ ଆତ୍ମବିଶ୍ୱାସର ସହିତ ଲେଖାଯାଇଥାଉ ନା କାହିଁକି, ସେହି ବାକ୍ୟ ପ୍ରୋବ୍ ବିଷୟରେ, ରଞ୍ଜକ ବିଷୟରେ ନୁହେଁ। ମାତ୍ରା ଉପରେ ନିର୍ଭରଶୀଳତା ଓ ହର୍ମେସିସ୍ ସୀମା, ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆର ଇଲେକ୍ଟ୍ରନ୍ ପ୍ରବାହ, ରଞ୍ଜିତ ନମୁନାରେ ପରୀକ୍ଷାଗତ ବାଧା ଏବଂ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି ଆଲୋକରୁ ସୃଷ୍ଟ ଆର୍ଟିଫ୍ୟାକ୍ଟ ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଆଲୋଚନା ଏହି ପ୍ରତ୍ୟେକ ବିଷୟକୁ ଆହୁରି ବିସ୍ତାର କରେ, ଏବଂ ସେଗୁଡ଼ିକର ଅସ୍ଥାୟୀ ସନ୍ଦର୍ଭ ପ୍ରତିସ୍ଥାପିତ ହେବା ପରେ ମଧ୍ୟ ପ୍ରତ୍ୟେକ ବିଷୟ ବୈଧ ରହେ।