ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ କ୍ୟାଲିବ୍ରେସନ୍ ବକ୍ର ତିଆରି: ବ୍ଲାଙ୍କ୍, ପରିସର ଓ ରୈଖିକତା

ଦୁଇଜଣ ବିଶ୍ଳେଷକ ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁର ଗୋଟିଏ ଷ୍ଟକ୍ ବୋତଲ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତି ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଏକ କ୍ୟାଲିବ୍ରେସନ୍ ବକ୍ର ତିଆରି କରନ୍ତି। ପ୍ରଥମଜଣ ମୂଳବିନ୍ଦୁ ଦେଇ ଯାଉଥିବା ଏକ ସରଳ ରେଖା ପାଆନ୍ତି ଏବଂ ଆତ୍ମବିଶ୍ୱାସର ସହ ଅଜ୍ଞାତ ସାନ୍ଦ୍ରତାର ନମୁନା ମାପନ କରନ୍ତି। ଦ୍ୱିତୀୟଜଣଙ୍କ ରେଖା ଉପର ଭାଗରେ ବଙ୍କିଯାଏ, ଅନ୍ତଃଖଣ୍ଡ ଶୂନ୍ୟ ନିକଟକୁ ଆସେ ନାହିଁ ଏବଂ ତନୁକରଣ ସହ ନମୁନାର ଫଳାଫଳ ବଦଳିଯାଏ। ରଞ୍ଜକ ସମାନ, ଯନ୍ତ୍ର ସମାନ, ତରଙ୍ଗଦୈର୍ଘ୍ୟ ସମାନ। ପାର୍ଥକ୍ୟ ଦକ୍ଷତାରେ ନୁହେଁ। ଏହା ପରୀକ୍ଷଣର ଯୋଜନାରେ: ବ୍ଲାଙ୍କ୍‌ରେ କ’ଣ ରହିଥିଲା, କେଉଁ ସାନ୍ଦ୍ରତାଗୁଡ଼ିକ ବାଛାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଯାଞ୍ଚ କରାଯାଇଥିବା ପରିସରଟି ଏପରି ଅଞ୍ଚଳ ଭିତରେ ଥିଲା କି ନାହିଁ, ଯେଉଁଠାରେ ଗୋଟିଏ ସରଳ ମଡେଲ୍ ଏବେ ମଧ୍ୟ ପ୍ରଯୁଜ୍ୟ।

ଏକ କ୍ୟାଲିବ୍ରେସନ୍ ବକ୍ର ହେଉଛି ଯନ୍ତ୍ରର ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଓ ସାନ୍ଦ୍ରତା ମଧ୍ୟରେ ଏକ ଚୁକ୍ତି, ଯାହା କେବଳ ଏହା ତିଆରି ହୋଇଥିବା ପରିସ୍ଥିତିରେ ବୈଧ। ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ପାଇଁ ଏହି ଚୁକ୍ତିର ଏକ ଜଣାଶୁଣା ଦୁର୍ବଳତା ରହିଛି। ଜଳରେ ରଞ୍ଜକର ଅଣୁଗୁଡ଼ିକ ପରସ୍ପର ସହ ଯୋଡ଼ିହୁଅନ୍ତି, ତେଣୁ ସାନ୍ଦ୍ରତା ବଦଳିଲେ ଆଲୋକ ଶୋଷଣ କରୁଥିବା ରାସାୟନିକ ପ୍ରଜାତି ବଦଳିଯାଏ। ଏହି ପରିବର୍ତ୍ତନକୁ ଅତିକ୍ରମ କରୁଥିବା ପରିସରରେ ତିଆରି ବକ୍ର ସରଳ ହେବ ନାହିଁ, ଏବଂ କୌଣସି ପରିମାଣର ପରିସଂଖ୍ୟାନ ଏହାକୁ ସୁଧାରିପାରିବ ନାହିଁ। ରେଖାଟି ଅର୍ଥପୂର୍ଣ୍ଣ ହେବା ପାଇଁ ବକ୍ରର ଯୋଜନା କିପରି କରିବେ, ଏହି ଲେଖା ତାହା ଦର୍ଶାଏ: ସଠିକ୍ ବ୍ଲାଙ୍କ୍ ବାଛନ୍ତୁ, ପରିସରକୁ ମୋନୋମର୍-ପ୍ରାଧାନ୍ୟ ଅଞ୍ଚଳ ଭିତରେ ରଖନ୍ତୁ, ଯଥାର୍ଥ ଭାବେ ପୁନରାବୃତ୍ତି ମାପନ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ବକ୍ରତାକୁ କୋଳାହଳ ନୁହେଁ, ସୂଚନା ଭାବେ ବୁଝନ୍ତୁ।

ମାନକ ଦ୍ରବଣରୁ ନୁହେଁ, ବ୍ଲାଙ୍କ୍‌ରୁ ଆରମ୍ଭ କରନ୍ତୁ

ବ୍ଲାଙ୍କ୍ ଶୂନ୍ୟକୁ ନିର୍ଦ୍ଧାରଣ କରେ, ଏବଂ ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ପାଇଁ ଏଥିରେ ରଞ୍ଜକ ବ୍ୟତୀତ ଅନ୍ୟ ସବୁକିଛି ରହିବା ଆବଶ୍ୟକ। ସମାନ ଜଳ ଗ୍ରେଡ୍, ସମାନ ବଫର୍ ଓ pH, ସମାନ ଲବଣ, ସମାନ ସହ-ଦ୍ରାବକ ଅଂଶ, ସମାନ ତାପମାତ୍ରା। କ୍ୟାଲିବ୍ରେସନ୍ ମାନକ ଦ୍ରବଣଗୁଡ଼ିକୁ ଠିକ୍ ସେହି ମ୍ୟାଟ୍ରିକ୍ସରେ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରନ୍ତୁ। ଏହାର କାରଣ ରାସାୟନିକ, ଔପଚାରିକ ନିୟମପାଳନ ନୁହେଁ। ଲବଣ ଓ ଦ୍ରାବକ ମୋନୋମର୍, ଡାଇମର୍ ଓ ବୃହତ୍ତର ସମୁଚ୍ଚୟ ମଧ୍ୟରେ ସନ୍ତୁଳନ ବଦଳାନ୍ତି, ଯାହା ମାପନ ତରଙ୍ଗଦୈର୍ଘ୍ୟରେ ବର୍ଣ୍ଣାଳୀକୁ ବଦଳାଏ। କେବଳ ଜଳ ଥିବା ବ୍ଲାଙ୍କ୍ ମ୍ୟାଟ୍ରିକ୍ସ ଯୋଗୁଁ ରାସାୟନିକ ପ୍ରଜାତିର ବିତରଣରେ ଘଟୁଥିବା ପରିବର୍ତ୍ତନକୁ ସଂଶୋଧନ କରିପାରେ ନାହିଁ। ଜଳରେ ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ବର୍ଣ୍ଣାଳୀର ସମଗ୍ର ବିଶ୍ଳେଷଣ, ଯାହା ଏହାର ମୁକ୍ତ ପ୍ରବେଶ ରେକର୍ଡ ମାଧ୍ୟମରେ ଉପଲବ୍ଧ, ସୋଡିୟମ୍ କ୍ଲୋରାଇଡ୍‌କୁ 0 ରୁ 0.15 M ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ବଦଳାଇଥିଲା। ଏହାର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ କାରଣ ଥିଲା ଯେ ଆୟନିକ ଶକ୍ତି ସାମ୍ୟାବସ୍ଥାକୁ ବଦଳାଏ, ଏବଂ ଲବଣ ବଢ଼ିବା ସହ ସମୁଚ୍ଚୟ ଗଠନ ବଢ଼ିଥିଲା।

ଏହାର ଏକ ବ୍ୟବହାରିକ ପରିଣାମ: କେବେ ମଧ୍ୟ ଡିଆୟନାଇଜ୍‌ଡ୍ ଜଳରେ କ୍ୟାଲିବ୍ରେସନ୍ କରି ତା’ପରେ ଫସ୍‌ଫେଟ୍ ବଫର୍ କିମ୍ବା ବର୍ଜ୍ୟଜଳର ପରିସ୍ରୁତ ଅଂଶରେ ନମୁନା ମାପନ କରନ୍ତୁ ନାହିଁ। ବିଶ୍ଳେଷ୍ୟ-ମୁକ୍ତ ମ୍ୟାଟ୍ରିକ୍ସ ଉପଲବ୍ଧ ନଥିଲେ, ମେଳ ଖାଉନଥିବା ବାହ୍ୟ ବକ୍ର ଅପେକ୍ଷା ନମୁନାରେ ସିଧାସଳଖ ମାନକ ଯୋଗ ପଦ୍ଧତି ଉତ୍ତମ। ଜଳୀୟ ପରିମାପଣକୁ ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟ ରଖିବା ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ନିର୍ଦ୍ଦେଶନା ମ୍ୟାଟ୍ରିକ୍ସ ଓ ବ୍ୟାଘାତ ଆଲୋଚନାରେ ରହିଛି, ଏବଂ ରଞ୍ଜକର ପରିମାଣାତ୍ମକ ପରିମାପଣର ସାଧାରଣ ସିଦ୍ଧାନ୍ତଗୁଡ଼ିକ ପରିମାପଣ ଯୋଜନାର ସାରାଂଶରେ ବର୍ଣ୍ଣିତ ହୋଇଛି।

ଏପରି ପରିସର ବାଛନ୍ତୁ ଯେଉଁଠାରେ ଗୋଟିଏ ପ୍ରଜାତିର ପ୍ରାଧାନ୍ୟ ରହେ

664 nm ନିକଟର ଦୀର୍ଘ ତରଙ୍ଗଦୈର୍ଘ୍ୟ ବ୍ୟାଣ୍ଡରେ ପରିମାଣ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବାବେଳେ ଧରାଯାଏ ଯେ ଅଧିକାଂଶ ରଞ୍ଜକ ମୋନୋମର୍ ଅବସ୍ଥାରେ ଅଛି। ସାଧାରଣ ଜଳରେ ଏହି ଧାରଣା କେବଳ ଦ୍ରବଣ ତନୁ ରହିଥିବା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ, ପ୍ରାୟ ନିମ୍ନ micromolar ଅଞ୍ଚଳରେ, ପ୍ରଯୁଜ୍ୟ। ପ୍ରକାଶିତ ପରୀକ୍ଷଣଭିତ୍ତିକ ଢାଳଗୁଡ଼ିକ ଏହି ସୀମାକୁ ସ୍ପଷ୍ଟ କରନ୍ତି: 1 cm ସେଲ୍‌ରେ ପ୍ରାୟ 7 micromolar ତଳେ ରଖାଯାଇଥିବା କ୍ୟାଲିବ୍ରେସନ୍‌ର ଢାଳ ପ୍ରାୟ 82,000 M-1 cm-1 ହୁଏ, କିନ୍ତୁ ପ୍ରାୟ 37 micromolar ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ବିସ୍ତାରିତ କ୍ୟାଲିବ୍ରେସନ୍‌ର ଢାଳ ପ୍ରାୟ 67,100 କୁ କମିଯାଏ, କାରଣ ଉଚ୍ଚ ସାନ୍ଦ୍ରତାର ମାନକ ଦ୍ରବଣଗୁଡ଼ିକରେ ପୂର୍ବରୁ ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ପରିମାଣର ଡାଇମର୍ ଥାଏ। ଏଠାରେ ଉଦ୍ଧୃତ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଗୁଣାଙ୍କ ସହ ଏହାର ପରିସ୍ଥିତି ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁର ବର୍ଣ୍ଣାଳୀ ସନ୍ଦର୍ଭରେ ଦିଆଯାଇଛି; ସଂଖ୍ୟାଗୁଡ଼ିକ ତୁଳନା କରିବା ପାଇଁ ତାହା ହିଁ ଉପଯୁକ୍ତ ସ୍ଥାନ। ଏହି ଲେଖା ସେଗୁଡ଼ିକୁ କେବଳ ପରିସର ନିର୍ଦ୍ଧାରଣ ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରେ।

ଏଥିରୁ ସିଧାସଳଖ ନିମ୍ନଲିଖିତ ଯୋଜନା ନିୟମଗୁଡ଼ିକ ମିଳେ:

1. ସର୍ବୋଚ୍ଚ ମାନକ ଦ୍ରବଣକୁ ଯଥେଷ୍ଟ ତନୁ ରଖନ୍ତୁ, ଯାହାଦ୍ୱାରା ବର୍ଣ୍ଣାଳୀର ଆକୃତି ସ୍ଥିର ରହିବ। ପଦ୍ଧତି ବିକାଶ ସମୟରେ ଗୋଟିଏ ତରଙ୍ଗଦୈର୍ଘ୍ୟରେ ମାପିବା ପରିବର୍ତ୍ତେ ପ୍ରତ୍ୟେକ ସ୍ତର ପାଇଁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଦୃଶ୍ୟମାନ ପରିସରକୁ ସ୍କାନ୍ କରନ୍ତୁ (ପ୍ରାୟ 550 ରୁ 750 nm)। ସାନ୍ଦ୍ରତା ସହ ସାମାନ୍ୟୀକୃତ ବର୍ଣ୍ଣାଳୀର ଆକୃତି ବଦଳିଲେ, ରାସାୟନିକ ଅବସ୍ଥା ବଦଳୁଛି ଏବଂ ପରିସର ଅତ୍ୟଧିକ ବ୍ୟାପକ।
2. ସବୁ ସ୍ତରରେ 610 nm ନିକଟର ଅବଶୋଷଣ ଓ 665 nm ନିକଟର ଅବଶୋଷଣର ଅନୁପାତ ନିରୀକ୍ଷଣ କରନ୍ତୁ। ସାନ୍ଦ୍ରତା ସହ ଅନୁପାତ ବଢ଼ିଲେ, ଡାଇମର୍‌ର କାନ୍ଧସଦୃଶ ବର୍ଣ୍ଣାଳୀ ଅଂଶ ବଢ଼ୁଛି ଏବଂ ମୋନୋମର୍ ମଡେଲ୍ ଆଉ ପ୍ରଯୁଜ୍ୟ ହେଉନାହିଁ। ଏହି ନିର୍ଣ୍ଣାୟକ ସୂଚକକୁ ସମୁଚ୍ଚୟ ଗଠନ ଓ ସାନ୍ଦ୍ରତା ପ୍ରଭାବ ମାର୍ଗଦର୍ଶିକାରେ ଅଧିକ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରାଯାଇଛି।
3. ନିମ୍ନ micromolar ସ୍ତରର କାମ ପାଇଁ 1 cm ସେଲ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ। ଢାଳ ପ୍ରାୟ 82,000 ହେଲେ, 5 micromolar ରେ ଅବଶୋଷଣ ପ୍ରାୟ 0.41 ଏବଂ 10 micromolar ରେ ପ୍ରାୟ 0.82 ହୁଏ; ଉଭୟ ଅଧିକାଂଶ ଯନ୍ତ୍ର ପାଇଁ ସୁବିଧାଜନକ।
4. ସାନ୍ଦ୍ର ଷ୍ଟକ୍ ଦ୍ରବଣ ପାଇଁ 1 ଠାରୁ ବହୁତ ଅଧିକ ଅବଶୋଷଣକୁ ଗ୍ରହଣ କରିବା ପରିବର୍ତ୍ତେ ଆଲୋକପଥ ଛୋଟ କରନ୍ତୁ। କିନ୍ତୁ ମନେ ରଖନ୍ତୁ, ଛୋଟ ଆଲୋକପଥ ଆଲୋକମାପନ ସମସ୍ୟାକୁ ସୁଧାରେ, ରାସାୟନିକ ଅବସ୍ଥାକୁ ନୁହେଁ। ସମୁଚ୍ଚୟ ଗଠନ ସାନ୍ଦ୍ରତା ଉପରେ ନିର୍ଭର କରେ, ଆଲୋକପଥ ଦୈର୍ଘ୍ୟ ଉପରେ ନୁହେଁ। ତେଣୁ ସାନ୍ଦ୍ର ଷ୍ଟକ୍ ପାଇଁ ତନୁ ମୋନୋମର୍ ବକ୍ର ପରିବର୍ତ୍ତେ ତାହାର ନିଜସ୍ୱ ରାସାୟନିକ ପ୍ରଜାତି ବିତରଣକୁ ଧ୍ୟାନରେ ରଖି ବିଶ୍ଳେଷଣ ଆବଶ୍ୟକ।

ଏହି ବୁଝାମଣାର ଅନେକ ଅଂଶର ଆଧାର ଥିବା ସମଗ୍ର ଫିଟ୍‌ରେ 1.1 micromolar ରୁ 3.4 millimolar ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ 224 ବର୍ଣ୍ଣାଳୀ ସାମିଲ ଥିଲା, ଏବଂ 34 micromolar ତଳେ ମଧ୍ୟ ଟେଟ୍ରାମର୍ ସଙ୍କେତ ଚିହ୍ନଟ ହୋଇପାରୁଥିବା ଜଣାପଡ଼ିଥିଲା। ଏହି ଫଳାଫଳ ସତର୍କତାର ଆବଶ୍ୟକତା ଦର୍ଶାଏ: ସହଜ ଅନୁମାନରୁ ଯେତେ ବ୍ୟାପକ ମନେହୁଏ, ରୈଖିକ ପରିସର ତା’ଠାରୁ ସଂକୀର୍ଣ୍ଣ। ତେଣୁ ଧରିନେବା ପରିବର୍ତ୍ତେ ଏହାକୁ ଯାଞ୍ଚ କରନ୍ତୁ।

ସ୍ତର, ପୁନରାବୃତ୍ତି ମାପନ ଓ କ୍ରମ

ତିନୋଟି ବିନ୍ଦୁ ଥିବା ବକ୍ର କିଛି ପ୍ରମାଣ କରେ ନାହିଁ। ICH Q2(R2) ର ବୈଧତା ଯାଞ୍ଚ ନିର୍ଦ୍ଦେଶନା ରୈଖିକତା ଆକଳନ ପାଇଁ ଅତି କମରେ ପାଞ୍ଚଟି ସାନ୍ଦ୍ରତା ଆବଶ୍ୟକ କରେ। ଛଅରୁ ଆଠଟି ଅଣଶୂନ୍ୟ ସ୍ତର ଅଧିକ ବିଶ୍ୱସନୀୟ କାର୍ଯ୍ୟକାରୀ ବକ୍ର ଦିଏ, ବିଶେଷକରି ଉପର ସୀମା ନିକଟରେ ଯେଉଁଠାରେ ସମୁଚ୍ଚୟ ଗଠନ ଆରମ୍ଭ ହୁଏ। ସୁବିଧା ପାଇଁ ବାଛିଥିବା ଗୁଣୋତ୍ତର ଶ୍ରେଣୀ ଅନୁସାରେ ନୁହେଁ, ବରଂ ଉଦ୍ଦିଷ୍ଟ ନମୁନା ପରିସରକୁ ଆବୃତ କରିବା ପାଇଁ ସ୍ତରଗୁଡ଼ିକ ବିନ୍ୟାସ କରନ୍ତୁ; ବକ୍ରତାର ସମ୍ଭାବନା ଅଧିକ ଥିବା ସ୍ଥାନରେ ସ୍ତରଗୁଡ଼ିକୁ ଅଧିକ ନିକଟରେ ରଖନ୍ତୁ।

ପ୍ରତ୍ୟେକ ସ୍ତରକୁ ଦୁଇ କିମ୍ବା ତିନିଟି ସ୍ୱାଧୀନ ଭାବେ ପ୍ରସ୍ତୁତ ଦ୍ରବଣରେ ମାପନ କରନ୍ତୁ, ଗୋଟିଏ ଫ୍ଲାସ୍କରୁ ତିନିଥର ପଢ଼ନ୍ତୁ ନାହିଁ। ସ୍ୱାଧୀନ ପୁନରାବୃତ୍ତି ମାପନ ପ୍ରସ୍ତୁତି ତ୍ରୁଟିକୁ ପ୍ରକାଶ କରେ; ଗୋଟିଏ ଫ୍ଲାସ୍କର ବାରମ୍ବାର ମାପନ କେବଳ ଯନ୍ତ୍ରର କୋଳାହଳକୁ ପ୍ରକାଶ କରେ। 2020 ର ସମଗ୍ର ଅଧ୍ୟୟନରେ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଦ୍ରବଣକୁ ତିନିଥର ମାପାଯାଇଥିଲା, ଯାହା ଏବେ ମଧ୍ୟ ଏକ ଯୁକ୍ତିସଙ୍ଗତ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ପଦ୍ଧତି। ମାପନ କ୍ରମକୁ ଯାଦୃଚ୍ଛିକ କରନ୍ତୁ, ଯାହାଦ୍ୱାରା ସମୟ ସହ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ପରିବର୍ତ୍ତନ, କାଚରେ ଅଧିଶୋଷଣ କିମ୍ବା ତାପମାତ୍ରା ପରିବର୍ତ୍ତନ ବକ୍ରତା ପରି ଦେଖାଯିବ ନାହିଁ। କ୍ୱାର୍ଟ୍ଜ କ୍ୟୁଭେଟ୍ ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଏକ ଅଧ୍ୟୟନରେ 34 micromolar ଦ୍ରବଣରୁ 10 ମିନିଟ୍ ମଧ୍ୟରେ ପ୍ରାୟ 3 ପ୍ରତିଶତ ରଞ୍ଜକ ଅଧିଶୋଷିତ ହେଉଥିବା ଦେଖାଯାଇଥିଲା। ତେଣୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ମାପନ ଶୃଙ୍ଖଳାରେ ସଂସ୍ପର୍ଶ ସମୟ, କ୍ୟୁଭେଟ୍, ସଫା କରିବା ପଦ୍ଧତି ଓ କ୍ରମକୁ ସୁସଙ୍ଗତ ରଖନ୍ତୁ।

ବ୍ୟାଖ୍ୟାମୂଳକ ଗଣନା ଉଦାହରଣ (ମାପାଯାଇଥିବା ତଥ୍ୟ ନୁହେଁ)

ନିମ୍ନର ସଂଖ୍ୟାଗୁଡ଼ିକ ଗଣନା ଦର୍ଶାଇବା ପାଇଁ କଳ୍ପିତ। ଏଗୁଡ଼ିକ ପରୀକ୍ଷାଗାର ମାପନ ନୁହେଁ ଏବଂ ଏଗୁଡ଼ିକୁ ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ତଥ୍ୟ ଭାବେ ଉଦ୍ଧୃତ କରିବା ଉଚିତ ନୁହେଁ। ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ହେଉଛି ଏହି ସଂଖ୍ୟାଗୁଡ଼ିକ ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଯାଞ୍ଚର ଧାରା।

ଧରନ୍ତୁ, ମେଳ ଖାଉଥିବା ବଫର୍‌ରେ ଛଅଟି ମାନକ ଦ୍ରବଣ ଅଛି, ଆଲୋକପଥ 1 cm, ଏବଂ ମେଳ ଖାଉଥିବା ବ୍ଲାଙ୍କ୍‌କୁ ଆଧାର କରି 665 nm ରେ ମାପନ କରାଯାଉଛି:

ସାନ୍ଦ୍ରତା ବିପକ୍ଷରେ ହାରାହାରି ଅବଶୋଷଣକୁ ସରଳ ରେଖା ସହ ଫିଟ୍ କଲେ ଢାଳ ପ୍ରତି micromolar ପ୍ରାୟ 0.0805 ଅବଶୋଷଣ ଏକକ ହୁଏ ଏବଂ ଅନ୍ତଃଖଣ୍ଡ ଶୂନ୍ୟଠାରୁ କିଛି ମିଲିଅବଶୋଷଣ ଏକକ ମଧ୍ୟରେ ରହେ। ଢାଳକୁ ଆଲୋକପଥ ଦୈର୍ଘ୍ୟରେ ଭାଗ କଲେ ଏହା ଏକ ଆପାତ ଅବଶୋଷକତାରେ ପରିଣତ ହୁଏ: ପ୍ରତି micromolar 0.0805 ପ୍ରାୟ 80,500 M-1 cm-1 ସହ ସମାନ, ଯାହା ଜଳରେ ମୋନୋମର୍-ପ୍ରାଧାନ୍ୟ ପରିସର ସହ ସୁସଙ୍ଗତ। ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଯାଞ୍ଚ R ବର୍ଗ ନୁହେଁ, କାରଣ ଉଭୟ ସ୍ଥିତିରେ ଏହା ଉତ୍କୃଷ୍ଟ ଦେଖାଯିବ। ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ହେଉଛି ଶୂନ୍ୟ ନିକଟର ଅନ୍ତଃଖଣ୍ଡ, S2 ରୁ S5 ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ସ୍ଥିର A610/A665 ଅନୁପାତ ଓ କୌଣସି ଧାରା ବିନା ବିକ୍ଷିପ୍ତ ଅବଶିଷ୍ଟଗୁଡ଼ିକ। S6 ରେ ଅନୁପାତର ସାମାନ୍ୟ ବୃଦ୍ଧି ଏକ ଯଥାର୍ଥ ସଙ୍କେତ: ସେହି ସ୍ତରକୁ ବାଦ ଦିଅନ୍ତୁ କିମ୍ବା ଏହି ମ୍ୟାଟ୍ରିକ୍ସ ଓ ଯନ୍ତ୍ରର ସଂଯୋଗ ପାଇଁ 7 micromolar କୁ ସାମୟିକ ଉପର ସୀମା ଭାବେ ଚିହ୍ନିତ କରନ୍ତୁ।

ସମାନ ପରିସ୍ଥିତିରେ ଅଜ୍ଞାତ ନମୁନାର ମାପନ 0.245 ହେଲେ ସିଧାସଳଖ ରୂପାନ୍ତର କରାଯାଇପାରେ: 0.245 କୁ ପ୍ରତି micromolar 0.0805 ରେ ଭାଗ କଲେ ପ୍ରାୟ 3.0 micromolar ମିଳେ, କୌଣସି ନମୁନା ତନୁକରଣ ଗୁଣକ ପ୍ରୟୋଗ କରିବା ପୂର୍ବରୁ। ଫଳାଫଳ ସହ ଏହାର ପରିସ୍ଥିତି ଲେଖନ୍ତୁ: ତରଙ୍ଗଦୈର୍ଘ୍ୟ, ଆଲୋକପଥ, ବ୍ଲାଙ୍କ୍ ମ୍ୟାଟ୍ରିକ୍ସ, କ୍ୟାଲିବ୍ରେସନ୍ ପରିସର ଓ ତାରିଖ।

ପୂରଣଯୋଗ୍ୟ କ୍ୟାଲିବ୍ରେସନ୍ କାର୍ଯ୍ୟପତ୍ର

ପ୍ରତ୍ୟେକ ନୂଆ ମ୍ୟାଟ୍ରିକ୍ସ ପାଇଁ ଏହି ନମୁନା ଢାଞ୍ଚାକୁ ପରୀକ୍ଷାଗାର ରେକର୍ଡରେ ନକଲ କରନ୍ତୁ। ଗୋଟିଏ ମ୍ୟାଟ୍ରିକ୍ସ, ଗୋଟିଏ ପତ୍ର, ଗୋଟିଏ ବକ୍ର।

ପ୍ରତିକାରକର ରୂପ ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଧାଡ଼ିଟିର ଯଥେଷ୍ଟ ଗୁରୁତ୍ୱ ରହିଛି। ବାଣିଜ୍ୟିକ ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ନିର୍ଜଳ ଲବଣ କିମ୍ବା ଟ୍ରାଇହାଇଡ୍ରେଟ୍ ପରି ଏକ ହାଇଡ୍ରେଟ୍ ହୋଇପାରେ, ଏବଂ ଭୁଲ ମୋଲାର୍ ଭର ପ୍ରତ୍ୟେକ ନାମମାତ୍ର ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ ଅଜାଣତରେ ବ୍ୟବସ୍ଥିତ ତ୍ରୁଟି ଆଣେ। ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ପଦାର୍ଥର ଶୁଦ୍ଧତା ଓ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଯାଞ୍ଚ ଗୁଣବତ୍ତା ଓ ଗ୍ରେଡ୍ ମାର୍ଗଦର୍ଶିକାରେ ବର୍ଣ୍ଣିତ ହୋଇଛି।

ଏକ ସ୍ୱାଧୀନ ଯାଞ୍ଚ ମାନକ ଦ୍ରବଣ ସହ ଯାଞ୍ଚ କରନ୍ତୁ

ଏକ କ୍ୟାଲିବ୍ରେସନ୍ ବକ୍ର କେବେ ମଧ୍ୟ ନିଜର ସଠିକତାକୁ ନିଜେ ମୂଲ୍ୟାୟନ କରିବା ଉଚିତ ନୁହେଁ। ଫିଟ୍ କରିବା ପରେ, ଅଲଗା ଭାବେ ଓଜନ କରି ପ୍ରସ୍ତୁତ ଷ୍ଟକ୍‌ରୁ ଗ୍ରହଣୀୟ ପରିସରର ମଧ୍ୟଭାଗ ନିକଟ ସାନ୍ଦ୍ରତାର ଗୋଟିଏ ଯାଞ୍ଚ ମାନକ ଦ୍ରବଣ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ଏହାକୁ ଅଜ୍ଞାତ ନମୁନା ଭାବେ ମାପନ କରନ୍ତୁ। କିଛି ପ୍ରତିଶତ ମଧ୍ୟରେ ମେଳ ହେଲେ ପ୍ରସ୍ତୁତି ଶୃଙ୍ଖଳା ସଠିକ୍ ବୋଲି ନିଶ୍ଚିତ ହୁଏ; ମେଳ ନହେଲେ ଯନ୍ତ୍ର ପରିବର୍ତ୍ତେ ଷ୍ଟକ୍ କିମ୍ବା ତନୁକରଣରେ ସମସ୍ୟା ଥିବା ସୂଚିତ ହୁଏ। ପ୍ରତ୍ୟେକ ନମୁନା ବ୍ୟାଚ୍ ସହ ଯାଞ୍ଚ ମାନକ ଦ୍ରବଣର ମାପନ ପୁନରାବୃତ୍ତି କରନ୍ତୁ। ବକ୍ର ଅପରିବର୍ତ୍ତିତ ଥିବାବେଳେ ଏହାର ମାପନ ବଦଳିଲେ, ନମୁନାକୁ ସନ୍ଦେହ କରିବା ପୂର୍ବରୁ କାର୍ଯ୍ୟକାରୀ ଦ୍ରବଣ କିମ୍ବା କ୍ୟୁଭେଟ୍‌କୁ ସନ୍ଦେହ କରନ୍ତୁ। ଏହି ଗୋଟିଏ ଅଭ୍ୟାସ ଅଧିକାଂଶ ଅପ୍ରକାଶିତ ତ୍ରୁଟି ଧରିପାରେ: ନିର୍ଜଳ ପଦାର୍ଥର ବୋତଲ ପାଇଁ ହାଇଡ୍ରେଟ୍‌ର ମୋଲାର୍ ଭର ପ୍ରୟୋଗ, କ୍ୟାଲିବ୍ରେସନ୍ ଠିକ୍ ନଥିବା ମାଇକ୍ରୋପିପେଟ୍, ଭୁଲ ଆୟନିକ ଶକ୍ତିରେ ପ୍ରସ୍ତୁତ ବଫର୍। କାର୍ଯ୍ୟପତ୍ରରେ ଢାଳ ପାଖରେ ଯାଞ୍ଚ ମାନକର ପୁନରୁଦ୍ଧାର ଫଳ ଲିପିବଦ୍ଧ କରନ୍ତୁ, ଯାହାଦ୍ୱାରା ପରବର୍ତ୍ତୀ ପାଠକ ଦେଖିପାରିବେ ଯେ ରେଖାଟି କେବଳ ଅଙ୍କାଯାଇନଥିଲା, ପରୀକ୍ଷା ମଧ୍ୟ କରାଯାଇଥିଲା।

ଅରୈଖିକତାରୁ କାରଣ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା

ବକ୍ର ବଙ୍କିଗଲେ, ବିଚ୍ୟୁତିର ଆକୃତି ଏହାର କାରଣ ଚିହ୍ନଟ କରେ। ବର୍ଣ୍ଣାଳୀର ଆକୃତି ଅପରିବର୍ତ୍ତିତ ଥାଇ ଉଚ୍ଚ ଅବଶୋଷଣରେ ନିମ୍ନମୁଖୀ ବକ୍ରତା ଯନ୍ତ୍ରର ସମସ୍ୟା ସୂଚାଏ; ପ୍ରାୟତଃ ଅବାଞ୍ଛିତ ଆଲୋକ ଯୋଗୁଁ ଉଚ୍ଚ ଅବଶୋଷଣର ମାପ କମ୍ ଦେଖାଯାଏ। 610 nm ର କାନ୍ଧସଦୃଶ ଅଂଶ ବଢ଼ିବା ସହ ବକ୍ରତା ଦେଖାଗଲେ, ତାହା ରାସାୟନିକ କାରଣ ସୂଚାଏ: ଡାଇମର୍ ଓ ବୃହତ୍ତର ସମୁଚ୍ଚୟ ମୋନୋମର୍‌ଠାରୁ ଭିନ୍ନ ଭାବେ ଆଲୋକ ଶୋଷଣ କରୁଛନ୍ତି। ଶୂନ୍ୟ ମାପ ନଦେଉଥିବା ବ୍ଲାଙ୍କ୍ କିମ୍ବା ସମୟ ସହ ମାପ କମିଯାଉଥିବା ମାନକ ଦ୍ରବଣ ପାତ୍ରର ସମସ୍ୟା ସୂଚାଏ: କାଚ କିମ୍ବା କ୍ୟୁଭେଟ୍‌ରେ ଅଧିଶୋଷଣ, ବିଶେଷକରି ଯଦି ମାପନ ଶୃଙ୍ଖଳାରେ ସଂସ୍ପର୍ଶ ସମୟ ଭିନ୍ନ ଥିଲା। ଏବଂ ବିନ୍ଦୁଗୁଡ଼ିକ ଦେଇ ଏକ ସ୍ପଷ୍ଟ ସରଳ ରେଖା ଯାଉଥିଲେ ମଧ୍ୟ ନମୁନାର ଫଳାଫଳ ଭୁଲ ହେଲେ, ତାହା ମ୍ୟାଟ୍ରିକ୍ସର ସମସ୍ୟା ସୂଚାଏ: ନମୁନା କ୍ୟାଲିବ୍ରେସନ୍ ମାନକ ଦ୍ରବଣଠାରୁ ଭିନ୍ନ। ତେଣୁ ନମୁନା ମ୍ୟାଟ୍ରିକ୍ସରେ ବକ୍ରକୁ ପୁନଃ ତିଆରି କରନ୍ତୁ କିମ୍ବା ମାନକ ଯୋଗ ପଦ୍ଧତିକୁ ଅପଣାନ୍ତୁ। ପ୍ରତ୍ୟେକ କ୍ଷେତ୍ରରେ ସାନ୍ଦ୍ରତା ବିପକ୍ଷରେ ଅବଶିଷ୍ଟଗୁଡ଼ିକର ଲେଖଚିତ୍ର ଅଙ୍କନ କରନ୍ତୁ। ଯାଦୃଚ୍ଛିକ ବିକ୍ଷେପ ସରଳ ରେଖା ମଡେଲ୍‌କୁ ସମର୍ଥନ କରେ; ହସ କିମ୍ବା ଭ୍ରୂକୁଟି ପରି ବକ୍ର ଆକୃତି କୌଣସି R ବର୍ଗ ସୀମାମୂଲ୍ୟ ଅପେକ୍ଷା ଅଧିକ ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟ ଭାବେ ଏହାକୁ ଖଣ୍ଡନ କରେ। ବୈଧତା ଯାଞ୍ଚ ନିର୍ଦ୍ଦେଶନା ଏହି କଥାକୁ ସ୍ପଷ୍ଟ ଭାବେ ସମର୍ଥନ କରେ।

ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁରେ ଏହି ଶୃଙ୍ଖଳିତ ପଦ୍ଧତିର ସୁଫଳ ମିଳେ। ଏହାର ମୋନୋମର୍ ବ୍ୟାଣ୍ଡ ଶକ୍ତିଶାଳୀ, ଏହାର ରାସାୟନିକ ଆଚରଣ ଭଲ ଭାବେ ଅଧ୍ୟୟନ କରାଯାଇଛି, ଏବଂ ଏହାର ବିଚ୍ୟୁତିଗୁଡ଼ିକ ସଂଖ୍ୟାକୁ ବିକୃତ କରିବା ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣାଳୀରେ ନିଜ ସଙ୍କେତ ଦିଅନ୍ତି। ବକ୍ରକୁ ସଂକୀର୍ଣ୍ଣ ପରିସରରେ ତିଆରି କରନ୍ତୁ, ଯଥାର୍ଥ ବ୍ଲାଙ୍କ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ, ସ୍ୱାଧୀନ ଭାବେ ପୁନରାବୃତ୍ତି ମାପନ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ପରିସର ନିର୍ଦ୍ଧାରଣରେ ବର୍ଣ୍ଣାଳୀର ଆକୃତିକୁ ନିର୍ଣ୍ଣାୟକ ହେବାକୁ ଦିଅନ୍ତୁ। ଫଳରେ ମିଳୁଥିବା ରେଖା ଛୋଟ, କିନ୍ତୁ ଏଥିରେ ଥିବା ପ୍ରତ୍ୟେକ ବିନ୍ଦୁ ଯଥାର୍ଥ।

ଏହି ଲେଖାର ବ୍ୟାଖ୍ୟାମୂଳକ ଗଣନାଗୁଡ଼ିକରେ ପଦ୍ଧତି ଦର୍ଶାଇବା ପାଇଁ କଳ୍ପିତ ସଂଖ୍ୟା ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଛି। ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ପରିସ୍ଥିତି ସହ ମାପାଯାଇଥିବା ସନ୍ଦର୍ଭ ଗୁଣାଙ୍କଗୁଡ଼ିକ ସଂଯୁକ୍ତ ବର୍ଣ୍ଣାଳୀ ସନ୍ଦର୍ଭରେ ରହିଛି, ଏବଂ ମୂଳ ସମୁଚ୍ଚୟ ଗଠନ ଅଧ୍ୟୟନ PMID 33251415 ରେ ସୂଚୀଭୁକ୍ତ ହୋଇଛି।