EMB ଆଗାର୍‌ରେ E. coli ଓ ଅନ୍ୟ କଲୋନିଗୁଡ଼ିକର ରୂପ ବୁଝିବା

ଜଣେ ଛାତ୍ର ଇଓସିନ୍ ମିଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ଆଗାର୍‌ରେ ଏକ ଅଜଣା ନମୁନାକୁ ରେଖା ଟାଣି ଲଗାନ୍ତି, ରାତିସାରା ଇନ୍‌କ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତି ଏବଂ ପରେ ସବୁଜ ଝଲକ ଥିବା ଗାଢ଼ କଲୋନିର ଏକ ପ୍ଲେଟ୍ ଦେଖନ୍ତି। ଖାତାରେ ଲେଖନ୍ତି, "E. coli, ପୁଷ୍ଟି ହୋଇଛି।" ପ୍ଲେଟ୍‌ରୁ ଯେତିକି ପ୍ରମାଣ ମିଳିପାରେ, ଏହି ଟିପ୍ପଣୀ ତାହାଠାରୁ ଅଧିକ ଦାବି କରୁଛି। ପ୍ଲେଟ୍‌ଟି ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପରିସ୍ଥିତିରେ ବୃଦ୍ଧି ଓ କିଣ୍ବନର ଏକ ଦୃଶ୍ୟମାନ ଲକ୍ଷଣରୂପ ଦେଖାଏ। ପ୍ରଜାତିର ପରିଚୟ ଏକ ଭିନ୍ନ ଦାବି, ଯାହା ପାଇଁ ଅଲଗା ପ୍ରମାଣ ଆବଶ୍ୟକ।

ଏହି ମାର୍ଗଦର୍ଶିକା EMB ଆଗାର୍‌ର ଫଳାଫଳକୁ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରିବାର ଏକ କାର୍ଯ୍ୟ ଭାବେ ଦେଖେ। ଏଥିରେ ମୂଳ ଧାରଣା ବୁଝାଯାଇଛି, ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ନମୁନା ସହିତ ଏକ ଉଦାହରଣମୂଳକ ପ୍ଲେଟ୍ ଚିତ୍ରାବଳୀ ଦିଆଯାଇଛି ଏବଂ ପାଠ୍ୟପୁସ୍ତକର ଚିତ୍ର କେଉଁ ପରିସ୍ଥିତିରେ ଭ୍ରମିତ କରିପାରେ, ତାହା ଦର୍ଶାଯାଇଛି।

ପ୍ଲେଟ୍ ପଛର ଧାରଣା

EMB ଆଗାର୍ ଉଭୟ ଚୟନମୂଳକ ଓ ପାର୍ଥକ୍ୟଦର୍ଶୀ। ଇଓସିନ୍ Y ଓ ମିଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ରଞ୍ଜକ ଅନେକ ଗ୍ରାମ୍-ପଜିଟିଭ୍ ଜୀବର ବୃଦ୍ଧିକୁ ଦମନ କରନ୍ତି, ତେଣୁ ଏହି ମାଧ୍ୟମ ଗ୍ରାମ୍-ନେଗେଟିଭ୍ ଜୀବର ବୃଦ୍ଧିକୁ ଅନୁକୂଳ କରେ। ସେହି ରଞ୍ଜକଗୁଡ଼ିକ ସୂଚକ ଭାବେ ମଧ୍ୟ କାମ କରନ୍ତି: କୌଣସି ଜୀବ ଉପଲବ୍ଧ ଶର୍କରାକୁ କିଣ୍ବନ କରି ସ୍ଥାନୀୟ ଭାବେ ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ଅମ୍ଳ ଉତ୍ପାଦନ କଲେ, କଲୋନି ବହୁ ପରିମାଣରେ ରଞ୍ଜକ ଗ୍ରହଣ କରେ ଏବଂ ଗାଢ଼ ବାଇଗଣିରୁ ନୀଳ-କଳା ହୋଇଯାଏ। ତୀବ୍ର ଅମ୍ଳ ଉତ୍ପାଦନ ହେଲେ କଲୋନିର ପୃଷ୍ଠରେ ଧାତବ ସବୁଜ ବର୍ଣ୍ଣଚ୍ଛଟା ଦେଖାଯାଇପାରେ। ଇଓସିନ୍ ମିଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ଆଗାର୍ ପ୍ଲେଟ୍ ପାଇଁ ASM ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ ଚୟନ ଓ ପାର୍ଥକ୍ୟ ନିର୍ଣ୍ଣୟର ଏହି ମିଳିତ ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ ବର୍ଣ୍ଣନା କରେ ଏବଂ ଶିକ୍ଷାଦାନ ପାଇଁ ସନ୍ଦର୍ଭ ଫଟୋ ଯୋଗାଇଥାଏ।

କୌଣସି ଫଳାଫଳ ବୁଝିବା ପୂର୍ବରୁ ଗୋଟିଏ ବିବରଣୀ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ: କେଉଁ ଫର୍ମୁଲେସନ୍ ବ୍ୟବହାର ହେଉଛି, ଯାଞ୍ଚ କରନ୍ତୁ। ପୁରୁଣା Holt Harris Teague ଫର୍ମୁଲେସନ୍‌ରେ ଲାକ୍ଟୋଜ୍ ସହିତ ସୁକ୍ରୋଜ୍ ରହିଥାଏ, କିନ୍ତୁ Levine EMB ରେ କେବଳ ଲାକ୍ଟୋଜ୍ ରହିଥାଏ। ଲାକ୍ଟୋଜ୍ କିଣ୍ବନ ନ କରି ସୁକ୍ରୋଜ୍ କିଣ୍ବନ କରୁଥିବା ଜୀବ, ଯଥା Serratia marcescens ର ଅନେକ ପୃଥକୀକୃତ ନମୁନା, ଏହି ଦୁଇ ପ୍ରକାରରେ ଭିନ୍ନ ଦେଖାଯାଇପାରନ୍ତି। EMB ମାଧ୍ୟମ ପାଇଁ ନିର୍ମାତାଙ୍କ ଦଲିଲ ଏହି ଫର୍ମୁଲେସନ୍ ପାର୍ଥକ୍ୟକୁ ସ୍ପଷ୍ଟ ଭାବେ ଉଲ୍ଲେଖ କରେ। ଫଳାଫଳ ସହିତ ଖାତାରେ ନିର୍ମାତା ଓ ଫର୍ମୁଲେସନ୍ ଲେଖି ରଖନ୍ତୁ।

ପ୍ରସ୍ତୁତ, କିନ୍ତୁ ଜୀବ ଲଗାଯାଇନଥିବା EMB ଆଗାର୍ ସାଧାରଣତଃ ଲାଲ-ବାଦାମୀରୁ ଲାଲଚେ ବାଇଗଣି ରଙ୍ଗର ହୁଏ; ବେଳେବେଳେ ଏଥିରେ ସବୁଜ ଆଭା କିମ୍ବା ସୂକ୍ଷ୍ମ ଅବକ୍ଷେପ ଥାଏ। ଏହି ପୃଷ୍ଠଭୂମି ରଙ୍ଗ ଜୀବର ବୃଦ୍ଧି ନୁହେଁ। ପ୍ରତ୍ୟେକ ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣକୁ ଜୀବ ଲଗାଯାଇନଥିବା ପ୍ଲେଟ୍ କିମ୍ବା ଲିପିବଦ୍ଧ ମୂଳ ଅବସ୍ଥା ସହିତ ତୁଳନା କରନ୍ତୁ। ଶିକ୍ଷାଦାନ ପ୍ରୋଟୋକଲ୍‌ରେ ଅନ୍ୟଥା ନିର୍ଦ୍ଦେଶ ନଥିଲେ, 35 ରୁ 37 C ରେ ପ୍ରାୟ 18 ରୁ 24 ଘଣ୍ଟା ବାୟବୀୟ ଇନ୍‌କ୍ୟୁବେସନ୍ ପରେ ପ୍ରାଥମିକ ପ୍ଲେଟ୍‌କୁ ଦେଖନ୍ତୁ। ଅଧିକ ସମୟ ଇନ୍‌କ୍ୟୁବେସନ୍ କଲେ କିଣ୍ବନର ଦୃଶ୍ୟମାନ ରୂପ ବଦଳିପାରେ।

ପ୍ଲେଟ୍‌କୁ କିପରି ଦେଖିବେ

ଦୁଇ ପ୍ରକାରର ଆଲୋକ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ। ପ୍ରଥମେ ପ୍ରତିଫଳିତ କିମ୍ବା ତିର୍ଯ୍ୟକ୍ ଆଲୋକରେ ପ୍ଲେଟ୍‌କୁ ଦେଖନ୍ତୁ ଏବଂ ଏହାକୁ ଢଳାନ୍ତୁ: ଧାତବ ଚମକର ବର୍ଣ୍ଣଚ୍ଛଟା ଦେଖିବା କୋଣ ଅନୁସାରେ ଦେଖାଯାଇପାରେ କିମ୍ବା ଅଦୃଶ୍ୟ ହୋଇପାରେ। ତାପରେ କଲୋନିର ରଙ୍ଗ ଓ ଗାଢ଼ କେନ୍ଦ୍ରକୁ ଆକଳନ କରିବା ପାଇଁ ପ୍ଲେଟ୍ ମଧ୍ୟ ଦେଇ ଯାଉଥିବା ଆଲୋକରେ ଦେଖନ୍ତୁ। ପରସ୍ପରଠାରୁ ଭଲ ଭାବେ ଅଲଗା ଥିବା କଲୋନି ଉପରେ କାମ କରନ୍ତୁ, କାରଣ ଘନ ଭିଡ଼ ଓ ପାଖରେ ଥିବା କଲୋନିଗୁଡ଼ିକ ସ୍ଥାନୀୟ ଅମ୍ଳ ସଞ୍ଚୟକୁ ବଦଳାନ୍ତି ଏବଂ ରଙ୍ଗକୁ କମାଇ କିମ୍ବା ବଢ଼ାଇପାରନ୍ତି। ASM ଚିତ୍ର ସଂଗ୍ରହ ଏହାକୁ ସିଧାସଳଖ ଦର୍ଶାଏ: ମିଶ୍ର କଲ୍ଚର୍‌ରେ ଚାରିପାଖର ଜୀବମାନେ ଅମ୍ଳୀୟ ପରିବେଶ ବଦଳାଇବାରୁ E. coli ର ଆଶା କରାଯାଉଥିବା ଚମକ ରହିନପାରେ।

ଅଭ୍ୟାସରେ ସୁଯୋଗ ଥିଲେ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ନମୁନା ସାମିଲ କରନ୍ତୁ। ଶିକ୍ଷାଦାନରେ ସାଧାରଣତଃ ନୀଳ-କଳା ରଙ୍ଗ ଓ ଧାତବ ଚମକର ଲକ୍ଷଣରୂପ ପାଇଁ E. coli ATCC 25922, ବର୍ଣ୍ଣହୀନ ଲକ୍ଷଣରୂପ ପାଇଁ Salmonella Typhimurium ATCC 14028 କିମ୍ବା Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 ପରି କିଣ୍ବନ ନ କରୁଥିବା ଜୀବ, ଏବଂ ବୃଦ୍ଧି-ଦମନ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପାଇଁ Enterococcus faecalis କିମ୍ବା Staphylococcus aureus ପରି ଗ୍ରାମ୍-ପଜିଟିଭ୍ ଜୀବ ନିଆଯାଏ। ଏଗୁଡ଼ିକ EMB ମାଧ୍ୟମ ପାଇଁ ମାନକ ଗୁଣବତ୍ତା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ସାରଣୀରେ ତାଲିକାଭୁକ୍ତ ଅଛି। ପଜିଟିଭ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣରେ ଚମକ ନଥିଲେ, ଅଜଣା ନମୁନାକୁ ସନ୍ଦେହ କରିବା ପୂର୍ବରୁ ଇନ୍‌କ୍ୟୁବେସନ୍, ଘନ ଭିଡ଼ କିମ୍ବା ଫର୍ମୁଲେସନ୍‌କୁ ସନ୍ଦେହ କରନ୍ତୁ।

ଉଦାହରଣମୂଳକ ପ୍ଲେଟ୍ ଚିତ୍ରାବଳୀ

ନିମ୍ନରେ ଥିବା ପ୍ଲେଟ୍‌ଗୁଡ଼ିକ ତିଆରି କରାଯାଇଥିବା ଉଦାହରଣମୂଳକ ଚିତ୍ର, ପ୍ରକୃତ କଲ୍ଚର୍‌ର ଫଟୋ ନୁହେଁ। ଏଗୁଡ଼ିକ କେଉଁ ଢାଞ୍ଚା ଖୋଜିବା ଉଚିତ ତାହା ଦେଖାଏ, କୌଣସି ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଷ୍ଟ୍ରେନ୍‌ର ଠିକ୍ ରଙ୍ଗ ନୁହେଁ। ଏଗୁଡ଼ିକୁ ASM ସନ୍ଦର୍ଭ ଫଟୋ ଏବଂ ଶିକ୍ଷାଦାନ ପରୀକ୍ଷାଗାରର ପ୍ରକୃତ ପ୍ଲେଟ୍ ସହିତ ତୁଳନା କରନ୍ତୁ।

ପ୍ଲେଟ୍ 1: EMB ଆଗାର୍‌ରେ Escherichia coli, ତୀବ୍ର ଲାକ୍ଟୋଜ୍ କିଣ୍ବନକାରୀ

EMB ଆଗାର୍‌ରେ E. coli ସାଧାରଣତଃ ଗାଢ଼ ବାଇଗଣିରୁ ନୀଳ-କଳା ରଙ୍ଗର ହୁଏ; ପ୍ରାୟତଃ ଗାଢ଼ କେନ୍ଦ୍ର ଥାଏ ଏବଂ ତୀବ୍ର ଅମ୍ଳ ଉତ୍ପାଦନରୁ ଧାତବ ସବୁଜ ଚମକ ଦେଖାଯାଏ। ଛାତ୍ରମାନେ ଏହି ପରିଚିତ ଚମକକୁ ଖୋଜନ୍ତି, କିନ୍ତୁ ଏହାକୁ ପରିଚୟର ସଂଜ୍ଞା ଭାବେ ନୁହେଁ, ସହାୟକ ପ୍ରମାଣ ଭାବେ ଗ୍ରହଣ କରନ୍ତୁ। ଷ୍ଟ୍ରେନ୍, ଇନ୍‌କ୍ୟୁବେସନ୍ ସମୟ, କଲୋନିର ଘନତା ଓ ଦେଖିବା କୋଣ ଅନୁସାରେ ଚମକର ତୀବ୍ରତା ବଦଳେ। ଚମକ ନଥିଲେ E. coli କୁ ବାଦ ଦିଆଯାଇପାରିବ ନାହିଁ, ଏବଂ ଚମକ ନଥିବା ଗାଢ଼ କଲୋନି ଅନ୍ୟ ଅନେକ କିଣ୍ବନକାରୀ ଜୀବକୁ ସୂଚାଇପାରେ। ପରବର୍ତ୍ତୀ କାମ ପାଇଁ ଭିଡ଼ ଥିବା ଅଂଶରୁ ନିଷ୍କର୍ଷ କରିବା ପରିବର୍ତ୍ତେ ଭଲ ଭାବେ ଅଲଗା ଥିବା ଗୋଟିଏ କଲୋନି ବାଛନ୍ତୁ।

ପ୍ଲେଟ୍ 2: EMB ଆଗାର୍‌ରେ Klebsiella pneumoniae, ଶ୍ଳେଷ୍ମାସଦୃଶ କିଣ୍ବନକାରୀ

EMB ଆଗାର୍‌ରେ Klebsiella pneumoniae ସାଧାରଣତଃ ଗୋଲାପୀ-ବାଇଗଣିରୁ ବାଦାମୀ-ବାଇଗଣି ରଙ୍ଗର ବଡ଼, ଝଲମଲ କରୁଥିବା, ଶ୍ଳେଷ୍ମାସଦୃଶ କଲୋନି ତିଆରି କରେ। ପ୍ରାୟତଃ ଏଗୁଡ଼ିକର ଗାଢ଼ କେନ୍ଦ୍ର ଥାଏ, କିନ୍ତୁ ସାଧାରଣତଃ ପ୍ରବଳ ଧାତବ ଚମକ ନଥାଏ। Enterobacter ପରି ସମ୍ପର୍କିତ କିଣ୍ବନକାରୀ ଜୀବରେ ମଧ୍ୟ ସମାନ ଆକୃତି ଦେଖାଯାଏ। ଶ୍ଳେଷ୍ମାସଦୃଶ ଗଠନ ଓ କଲୋନିର ଆକାର ମଧ୍ୟ ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣର ଅଂଶ: ଛୋଟ ଓ ସମତଳ ଗୋଲାପୀ କଲୋନିର ପ୍ରମାଣମୂଲ୍ୟ ଏକ ବଡ଼, ଗମ୍ବୁଜାକାର, ଶ୍ଳେଷ୍ମାସଦୃଶ କଲୋନିଠାରୁ ଭିନ୍ନ। E. coli ପରି, ଏଠାରେ ମଧ୍ୟ ପ୍ଲେଟ୍ କିଣ୍ବନର ଏକ ଲକ୍ଷଣରୂପ ସୂଚାଏ; ପ୍ରଜାତି ସ୍ତରରେ ନାମ ଦେବା ପାଇଁ ତଳେ ବର୍ଣ୍ଣିତ ଜୈବରାସାୟନିକ ପୁଷ୍ଟିକରଣ ଆବଶ୍ୟକ।

ପ୍ଲେଟ୍ 3: EMB ଆଗାର୍‌ରେ Salmonella ଓ ଅନ୍ୟ କିଣ୍ବନ ନ କରୁଥିବା ଜୀବ, ବର୍ଣ୍ଣହୀନ କଲୋନି

EMB ଆଗାର୍‌ରେ Salmonella ଏବଂ ଲାକ୍ଟୋଜ୍ କିଣ୍ବନ ନ କରୁଥିବା ସମ୍ପର୍କିତ ଜୀବ, ଯଥା Shigella ଓ Pseudomonas ର ଅନେକ ପୃଥକୀକୃତ ନମୁନା, ସାଧାରଣତଃ ବର୍ଣ୍ଣହୀନରୁ ଅର୍ଦ୍ଧସ୍ୱଚ୍ଛ କିମ୍ବା ହାଲୁକା ଆମ୍ବର୍ ରଙ୍ଗର କଲୋନି ଭାବେ ବଢ଼ନ୍ତି। କେତେକ ଫର୍ମୁଲେସନ୍ ଓ ପରିସ୍ଥିତିରେ ହାଲୁକା ଗୋଲାପୀ ଆଭା ଦେଖାଯାଏ, ତେଣୁ ହାଲୁକା ଗୋଲାପୀ କଲୋନିକୁ ସ୍ୱତଃ କିଣ୍ବନକାରୀ ବୋଲି ଧରାଯାଇପାରିବ ନାହିଁ। EMB ଦ୍ୱାରା Salmonella କୁ Shigella କିମ୍ବା ଅନ୍ୟ କିଣ୍ବନ ନ କରୁଥିବା ଜୀବଠାରୁ ପୃଥକ୍ କରାଯାଇପାରେ ନାହିଁ; ଏହି ପାର୍ଥକ୍ୟ ପରବର୍ତ୍ତୀ ପରୀକ୍ଷାରେ ନିର୍ଣ୍ଣୟ ହୁଏ। ଏହା ମଧ୍ୟ ମନେ ରଖନ୍ତୁ ଯେ E. coli ପରି ଧାତବ ଚମକ ଥିବା କଲୋନି ତିଆରି କରୁଥିବା ଲାକ୍ଟୋଜ୍-ପଜିଟିଭ୍ Salmonella ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ଲିପିବଦ୍ଧ ହୋଇଛି। ଗୋଟିଏ ପ୍ଲେଟ୍‌ରୁ ଚୂଡ଼ାନ୍ତ ନିଷ୍କର୍ଷ କରିହେବ ନାହିଁ ବୋଲି ଏହା ଆଉ ଗୋଟିଏ କାରଣ।

ପ୍ଲେଟ୍ 4: Serratia marcescens ଓ ଫର୍ମୁଲେସନ୍‌ର ଭ୍ରମଜାଲ

Serratia marcescens ପାଇଁ ଅଲଗା ବିଭାଗ ଆବଶ୍ୟକ, କାରଣ ଛାତ୍ରମାନେ ପ୍ରାୟତଃ ଲାଲ କଲୋନି ଆଶା କରନ୍ତି ଏବଂ ପରେ ପ୍ଲେଟ୍‌କୁ ଭୁଲ୍ ବୁଝନ୍ତି। ଅଧିକାଂଶ କ୍ଲିନିକାଲ୍ ପୃଥକୀକୃତ ନମୁନା ଲାକ୍ଟୋଜ୍ କିଣ୍ବନ କରନ୍ତି ନାହିଁ, ତେଣୁ Levine EMB ରେ ସେଗୁଡ଼ିକ ସାଧାରଣତଃ ଫିକାରୁ ଅଳ୍ପ ରଙ୍ଗଯୁକ୍ତ ଦେଖାଯାନ୍ତି। ଅନେକ ପୃଥକୀକୃତ ନମୁନା ସୁକ୍ରୋଜ୍ କିଣ୍ବନ କରୁଥିବାରୁ, ସୁକ୍ରୋଜ୍ ଥିବା ଫର୍ମୁଲେସନ୍‌ରେ ଅଧିକ ଗାଢ଼ କିମ୍ବା ଅମ୍ଳ ଉତ୍ପାଦନ ସହିତ ଅଧିକ ସମ୍ପର୍କିତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଦେଖାଯାଇପାରେ। 35 ରୁ 37 C ରେ ପରିଚିତ ଲାଲ ପ୍ରୋଡିଜିଓସିନ୍ ରଞ୍ଜକ ମଧ୍ୟ ଆଶା କରନ୍ତୁ ନାହିଁ; ଇନ୍‌କ୍ୟୁବେଟର୍ ତାପମାତ୍ରାରେ ରଞ୍ଜକ ଉତ୍ପାଦନ ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟ ନୁହେଁ। ପ୍ରୋଟୋକଲ୍‌ରେ EMB ଆଗାର୍‌ରେ Serratia marcescens ବିଷୟରେ ଉଲ୍ଲେଖ ଥିଲେ, ସେହି ବକ୍ତବ୍ୟ କେଉଁ ଫର୍ମୁଲେସନ୍‌କୁ ଧରି ଲେଖାଯାଇଛି, ଯାଞ୍ଚ କରନ୍ତୁ। Serratia ର ବିପାକ ବିଷୟରେ ଏକ ସମୀକ୍ଷା ଏହି ଭ୍ରମ ପଛରେ ଥିବା ଲାକ୍ଟୋଜ୍-ନେଗେଟିଭ୍ ଓ ସୁକ୍ରୋଜ୍ କିଣ୍ବନର ପରିବର୍ତ୍ତନଶୀଳ ଢାଞ୍ଚାକୁ ସଂକ୍ଷେପରେ ବର୍ଣ୍ଣନା କରେ।

ପ୍ଲେଟ୍ 5: ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ନମୁନା ଓ ବୃଦ୍ଧି ଦମିତ ଜୀବ

Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus ଓ Bacillus ପରି ଗ୍ରାମ୍-ପଜିଟିଭ୍ ଜୀବଙ୍କ ବୃଦ୍ଧି EMB ଆଗାର୍‌ରେ ସାଧାରଣତଃ ରୋକାଯାଏ କିମ୍ବା ବହୁ ପରିମାଣରେ ଦମିତ ହୁଏ, ଯଦିଓ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ପାଇଁ ଏହି ଦମନ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ନୁହେଁ। ଏକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ନମୁନା ସମୂହ ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣକୁ ବିଶ୍ୱସନୀୟ କରେ: E. coli ନିୟନ୍ତ୍ରଣରେ ନୀଳ-କଳା ରଙ୍ଗ ଓ ଚମକ ସହିତ ଭଲ ବୃଦ୍ଧି, କିଣ୍ବନ ନ କରୁଥିବା ନିୟନ୍ତ୍ରଣରେ ବର୍ଣ୍ଣହୀନ ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ବୃଦ୍ଧି-ଦମନ ନିୟନ୍ତ୍ରଣରେ ଅତି ଅଳ୍ପ କିମ୍ବା କୌଣସି ବୃଦ୍ଧି ନଥିବା ଦେଖାଯିବା ଉଚିତ। ବୃଦ୍ଧି-ଦମନ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭଲ ଭାବେ ବଢ଼ିଲେ, ଚୟନମୂଳକ ପଦକ୍ଷେପ ବିଫଳ ହୋଇଛି ଏବଂ ସେହି ବ୍ୟାଚ୍‌ର ଅନ୍ୟ ସମସ୍ତ ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ ସନ୍ଦେହଜନକ। ରଞ୍ଜନ ପଦ୍ଧତି କଲ୍ଚର୍ ମାଧ୍ୟମଠାରୁ ଭିନ୍ନ ପ୍ରଶ୍ନର ଉତ୍ତର ଦେଇଥାଏ; ପରୀକ୍ଷାଗାରରେ ସ୍ଲାଇଡ୍ ରଞ୍ଜନ ବିଷୟ ପାଇଁ ମିଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ରଞ୍ଜନ ଚିତ୍ରାବଳୀ ଦେଖନ୍ତୁ।

ସୀମାବଦ୍ଧ ତୁଳନା

ଭ୍ରମାତ୍ମକ ରୂପଗୁଡ଼ିକୁ ତିନୋଟି ବାକ୍ୟରେ ସାରାଂଶ କରାଯାଇପାରେ। ଗାଢ଼ ରଙ୍ଗ ଅର୍ଥ E. coli ନୁହେଁ, କାରଣ Klebsiella, Enterobacter ଓ ଅନ୍ୟ କିଣ୍ବନକାରୀ ଜୀବରେ ଚମକ ବିନା ଗାଢ଼ କେନ୍ଦ୍ର ତିଆରି ହୁଏ। ଗୋଲାପୀ ରଙ୍ଗ ଅର୍ଥ Klebsiella ନୁହେଁ, କାରଣ ମଧ୍ୟମ କିମ୍ବା ଧୀର ଗତିରେ କିଣ୍ବନ କରୁଥିବା ଜୀବ ଏବଂ ସାଧାରଣତଃ କିଣ୍ବନ ନ କରୁଥିବା ବୋଲି ବର୍ଗୀକୃତ କେତେକ ଜୀବ ଗୋଲାପୀ କିମ୍ବା ହାଲୁକା ବାଇଗଣି ଦେଖାଯାନ୍ତି। ଚମକ ଅର୍ଥ ନିଶ୍ଚିତ E. coli ନୁହେଁ, କାରଣ ଅନ୍ୟ ତୀବ୍ର କିଣ୍ବନକାରୀ ଜୀବ ମଧ୍ୟ ଏହା ଉତ୍ପାଦନ କରିପାରନ୍ତି। ଶିକ୍ଷାଦାନ ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ ଓ ଏଥିରେ ଥିବା ମିଶ୍ର କଲ୍ଚର୍ ଚିତ୍ରଗୁଡ଼ିକ ଏହି ପ୍ରତ୍ୟେକ ଭୁଲ୍ ଅନୁମାନକୁ ଦର୍ଶାଏ।

ପୁଷ୍ଟିକରଣର ସୀମା

EMB ଆଗାର୍ ଏକ ଲକ୍ଷଣରୂପ ଦର୍ଶାଏ, ପ୍ରଜାତି ନୁହେଁ। ଭିନ୍ନ ଜୀବର କଲୋନି ସମାନ ଦେଖାଯାଇପାରେ, ଏବଂ ଗୋଟିଏ ଜୀବ ମଧ୍ୟ ଷ୍ଟ୍ରେନ୍, ବୟସ, ଘନ ଭିଡ଼, ଫର୍ମୁଲେସନ୍ ଓ ଇନ୍‌କ୍ୟୁବେସନ୍ ଅନୁସାରେ ତାହାର ପାଠ୍ୟପୁସ୍ତକର ରୂପଠାରୁ ଭିନ୍ନ ହୋଇପାରେ। ଏହି କାରଣରୁ ଶିକ୍ଷାଦାନ ଓ କ୍ଲିନିକାଲ୍ କାର୍ଯ୍ୟପ୍ରବାହରେ EMB ର କଲୋନି ଆକୃତିକୁ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଅନୁମାନର ଆଧାର ଭାବେ ଗ୍ରହଣ କରାଯାଏ।

ପ୍ରମାଣ ଆଧାରରେ ସମର୍ଥନଯୋଗ୍ୟ ଏକ ଛାତ୍ର କାର୍ଯ୍ୟପ୍ରବାହ ହେଉଛି: ପୃଥକ୍ କଲୋନିର ବର୍ଣ୍ଣନା କରନ୍ତୁ—ଆକାର, ରଙ୍ଗ, କେନ୍ଦ୍ର, ତିର୍ଯ୍ୟକ୍ ଆଲୋକରେ ଚମକ ଓ ଶ୍ଳେଷ୍ମାସଦୃଶ ଲକ୍ଷଣ; ଫର୍ମୁଲେସନ୍, ଇନ୍‌କ୍ୟୁବେସନ୍ ସମୟ ଓ ତାପମାତ୍ରା, ଏବଂ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ନମୁନା ଲିପିବଦ୍ଧ କରନ୍ତୁ; ତାପରେ କୌଣସି ପୁଷ୍ଟିକରଣ ପରୀକ୍ଷା ପୂର୍ବରୁ ଭଲ ଭାବେ ଅଲଗା ଥିବା ଗୋଟିଏ କଲୋନିକୁ ଉପକଲ୍ଚର୍ କରି ଶୁଦ୍ଧ କଲ୍ଚର୍ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରନ୍ତୁ। ସାଧାରଣ ପରବର୍ତ୍ତୀ ପରୀକ୍ଷାଗୁଡ଼ିକରେ ସମ୍ଭାବ୍ୟ E. coli ଓ କୋଲିଫର୍ମ ପରିଚୟ ପାଇଁ ଗ୍ରାମ୍ ରଞ୍ଜନ ସହିତ IMViC ପ୍ରତିକ୍ରିୟା, ଆନ୍ତ୍ରିକ ଜୀବ ପାଇଁ TSI କିମ୍ବା KIA ଓ ଜୀବ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଜୈବରାସାୟନିକ ପରୀକ୍ଷା ସମୂହ ସାମିଲ। କାର୍ଯ୍ୟର ଆବଶ୍ୟକତା ଅନୁସାରେ ସିରୋଲଜିକ୍, MALDI TOF କିମ୍ବା ଅନ୍ୟ ବୈଧତା-ପ୍ରମାଣିତ ପରିଚୟ ପଦ୍ଧତି ମଧ୍ୟ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ। ଚୟନମୂଳକ ଓ ପାର୍ଥକ୍ୟଦର୍ଶୀ ଆନ୍ତ୍ରିକ ମାଧ୍ୟମଗୁଡ଼ିକ ମଧ୍ୟରେ EMB ର ସ୍ଥାନ ବୁଝିବା ପାଇଁ ଆନ୍ତ୍ରିକ କଲ୍ଚର୍ ମାଧ୍ୟମର ପରିଚୟ ଏବଂ ଗ୍ରାମ୍ ରଞ୍ଜନର ପରବର୍ତ୍ତୀ ପରୀକ୍ଷା ଦେଖନ୍ତୁ। ନୀଳ ସ୍ଲାଇଡ୍ ରଞ୍ଜନ କଣ ପ୍ରମାଣ କରିପାରେ ଓ କଣ କରିପାରେ ନାହିଁ—ଏହି ସମ୍ପର୍କିତ ପ୍ରଶ୍ନ ପାଇଁ ମିଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ରଞ୍ଜନ ଚିତ୍ରାବଳୀ ମଧ୍ୟ ସେହି ନୀତିରେ ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ ଓ ନିଷ୍କର୍ଷକୁ ପୃଥକ୍ ରଖେ।

ନିଷ୍କର୍ଷ ପୂର୍ବରୁ ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ ଲେଖନ୍ତୁ। "24 ଘଣ୍ଟା ପରେ Levine EMB ରେ ଦେଖିବା କୋଣ ଅନୁସାରେ ବଦଳୁଥିବା ସବୁଜ ଚମକ ସହିତ ଗାଢ଼ ନୀଳ-କଳା କଲୋନି, ଯାହା ତୀବ୍ର ଲାକ୍ଟୋଜ୍ କିଣ୍ବନ ସହିତ ସୁସଙ୍ଗତ"—ଏହି ବକ୍ତବ୍ୟ ପ୍ରମାଣ ଆଧାରରେ ସମର୍ଥନଯୋଗ୍ୟ। "E. coli, ପୁଷ୍ଟି ହୋଇଛି" ଲେଖିବା ପାଇଁ ପୁଷ୍ଟିକରଣ ପଦକ୍ଷେପ ଆବଶ୍ୟକ, ଯାହା କେବଳ ପ୍ଲେଟ୍ ଯୋଗାଇପାରେ ନାହିଁ।