Filannoowwan Methylene Blue Maayikirooskoopiif

Bacterial smear salphaadhaaf, kaayyoon boca seelii arguudha yoo ta'e crystal violet methylene blue bakka bu'uu danda'a. Seelota lubbuuf immoo filannoon caalu phase contrast halluu tokko illee malee ta'uu danda'a. Filannoon sun wanta ati daawwachuu barbaaddu irratti hundaa'a.

Namoonni lama bacterial culture tokko qorachaa jiru haa jennu. Tokko seelota ulee fakkaatan seelota geengoo irraa adda baasuu barbaada. Inni kaan immoo treatment tokko bacteria ajjeesee jiraachuu isaa beekuu barbaada. Halluun nama jalqabaatiif suuraa ifaa kennu nama lammaffaatiif deebii itti fayyadamuu danda'u tokko illee kennuu dhiisuu danda'a.

Bakka bu'aa filachuu kee dura hima kana guuti: “Ani ___ keessatti ___ daawwachuu qaba, akkasumas seelonni lubbuun turuu qabu / turuun isaanii hin barbaachisu.” Himni kun hojii halluun sun hojjechuu qabu murteessa.

Saampilii fi gaaffii irraa jalqabi

Jalqaba seelonni lubbuun turuu qabaachuu isaanii murteessi; itti aansuun amaloota ati daawwachuu barbaaddu adda baasi:

Seelonni lubbuun turuu qabu: sochii yookaan bocaaf, phase contrast halluu hin dibamin yookaan DIC ilaali; DNA niwukilasiif, fluorescence waliin Hoechst 33342 ilaali; membrane integrity'f, assay mirkanaa'e kan akka SYTO 9 propidium iodide waliin filadhu.
Seelonni lubbuun turuun isaanii hin barbaachisu: bacterial morphology'f, crystal-violet simple stain yookaan nigrosin negative stain ilaali; Gram reaction'f, mala Gram-stain guutuu fayyadami; DNA niwukilasii seelota fixed keessatti, DAPI fluorescence ilaali.

Daangaa damee tokkoon tokkoo walbira qabuuf gabatee kana fayyadami. Isaan kun filannoowwan malaati; protocol jiru keessatti qaruuraawwan wal jijjiiruuf qajeelfama miti.

| --- | --- | --- | --- |

| Daangaa seelii duubbee dukkanaa'aa irratti | Qophii bacteriological; brightfield | Nigrosin negative stain | Qophii fi formulation'n barbaachisaa dha; seeliin halluu hin fudhanne jechuun dirqamaan lubbuudha jechuu miti. |

| Sochii yookaan jijjiirama seelota lubbuu | Qophii jiidhaa walsimu; phase contrast yookaan DIC | Halluu hin qabu | Optics mijataa barbaada; contrast'n molecule tokko adda hin baasu. |

| DNA niwukilasii seelota lubbuu keessatti | Seelota lubbuu; fluorescence | Hoechst 33342 | Seelii keessa seenuun haalli suura-kaasuu miidhaa hin geessisne ta'uu hin mirkaneessu. |

Smear salphaadhaaf, mala sana of eeggannoodhaan bakka buusi

Hojiin barbaadame bacterial morphology halluu tokkoon ilaaluudha yoo ta'e crystal violet filannoo hojii irra oolu dha. Bacteriological Analytical Manual kan FDA crystal-violet formulations lama simple staining'f mijatan tarreessa. Formulation galmeeffame fi mala qophii isaa fayyadami; maqaan dye qofti reagent hojii irra oolu tokko hin ibsu.

Crystal violet Gram staining keessattis mul'ata, garuu kun crystal-violet simple stain'n Gram stain ta'a jechuu miti. ASM Gram-stain protocol keessatti, bu'aan differential crystal violet, iodine, decolorization fi counterstaining tartiibaan hojjechuu isaanii irratti hundaa'a. Tarkaanfiiwwan sana dhiisuun wanta suuraan mirkaneessuu danda'u jijjiira. Garaagarummaa kanaaf simple staining fi Gram staining ilaali.

Nigrosin karaa biraatiin daangaa seelii mul'isa: duubbee dukkaneessa, bacterial cells immoo wal bira qabamee yoo ilaalamu ifaa ta'anii hafu. Qajeelfama nigrosin kan Merck keessatti bal'inni barbaachisaan tarree bakka bu'ootaa waliigalaa keessatti hafuu danda'u tokko jira. Formulation hojii irra oolu kan ibsame formaldehyde of keessaa qaba. Kanaaf, seelonni ofii isaanii halluu hin fudhanne fakkaatan illee, jecha “negative stain” jedhu irraa live-cell compatibility tilmaamuu hin dandeessu. Formulation guutuu fi qophii saampilii mirkaneessi.

Saampilii lubbuuf, optics jijjiiruu ilaali

Seelonni socho'uu yookaan qoodamuu isaanii ilaaluuf yoo barbaadde, dye biraa dabaluun daawwannaa sana walxaxaa gochuu danda'a. Akkuma Nikon qajeelfama isaa contrast in transparent specimens keessatti ibsutti, phase contrast fi differential interference contrast, yookaan DIC, garaagarummaa amaloota optical isaanii fayyadamuun saampilii mul'isu. Maayikirooskoopichi qaamolee barbaachisan qabaannaan seelota lubbuu, halluu hin dibamin mul'isuu danda'u.

Filannoon kun qophii halluu hin dibamin eega, garuu odeeffannoo argamu jijjiira. Molecule kam contrast sana uume osoo hin beekin daangaa yookaan sochii hordofuu dandeessa. Gaaffiin molecular localization yoo ta'e, mala labeling mijataa filadhu.

DNA niwukilasiif, walbira qabuu DAPI fi Hoechst stains kan Invitrogen itti fayyadama DAPI kan yeroo baay'ee seelota fixed waliin ta'u, Hoechst 33342 isa seelii keessa caalaa seenuu danda'uu fi live-cell labeling'f filatamu irraa adda baasa. Lamaanuu fluorescence equipment barbaadu. Tokkoon isaanii illee colored brightfield stain bakka kallattiin hin bu'u.

Dye exposure fi illumination akka haalota experimental'tti ilaali. Yeroo amala seelotaa safartu qophii halluu dibamee fi hin dibamne walbira qabi.

Seeliin diimaan ofumaan seelii du'e miti

SYTO 9 fi propidium iodide yeroo baay'ee bacterial membrane integrity madaaluuf waliin fayyadamu. BacLight manual membrane hin miidhamne green staining waliin, membrane miidhame immoo red staining waliin walqabsiisa. Hiikni kun saampilii sanaaf mirkaneeffamuu qaba.

Qorannoon 2019 kan Rosenberg fi hiriyoonni isaa rakkoo kana fakkeenyaan agarsiisa. Biofilms E. coli sa'aatii 24, glass irratti phosphate-buffered saline keessatti, keessaa naannoo 96% seelotaa in situ propidium-iodide-positive fakkaatan. Haa ta'u malee, barreessitoonni erga walitti qabamanii booda 82% cultivable akka turan tilmaaman. Suuraawwan confocal seelota keessaa isaanii magariisa ta'e, meeshaa diimaan halluu dibame jala jiran agarsiisan; kun extracellular nucleic acids signal dogoggoraa keessatti gahee qabaachuu isaanii akeeka.

Dhibbeentaan sun safartuuwwan adda addaa qophii qorannichaa irratti taasifaman ibsa; universal correction factor miti. Barumsi faayidaa qabu signal sana maaltu akka uume mirkaneessuudha. Biofilm keessatti, nucleic-acid dye'n meeshaa seelota alaa jiru akkuma seelota miidhaman keessaa jiru adda baasuu danda'a. Viability irratti xumura kennuuf, qorattoonni safartuuwwan wal-dabalataa, kan akka cultivation yookaan metabolic activity, gorsu; yeroo wal fakkaatutti tokkoon tokkoon isaanii daangaa akka qabu ni fudhatu.

Filannoon sun dhugumaan maal akka of keessaa qabu mirkaneessi

Malli staining bakka bu'aa methylene blue of keessaa qabaachuu danda'a. Giemsa fakkeenya dha: Merck oomisha isaa akka azure-eosin-methylene-blue solutiontti ibsa; hojiiwwan blood fi bone-marrow smears dabalatan irratti akka oolu kaayyeffame. Saampilii biraaf mala biraa ta'uu danda'a, garuu methylene blue keessaa hambisuuf ulaagaalee jiran hin guutu.

Compound tokko keessaa hambisuun qaama experiment yoo ta'e, suuraawwan walbira qabuun dura eenyummaa reagent fi formulation isaa mirkaneessi. Qajeelfamni methyl blue, methylene blue fi dyes maqaa wal fakkaataa qaban garaagarummaa maqaa ibsa.

Bu'aa fayyadamuun dura bakka buusicha mirkaneessi

Mala haaraadhaaf, representative specimens fi control mijataa fayyadamuun walbira qabuu xiqqaa godhi. Bakka danda'ametti microscope settings walbira qabamuu danda'anitti eegi. Formulation reagent, qophii saampilii, exposure fi imaging conditions galmeessi; kun suuraa caalaa bareedu qofa filachuu irra maaliif akka fooyya'e qorachuuf gargaara.

Milkaa'ina gaaffii jalqabaa irratti hundaa'uun madaali. Morphology'f, daangaan seelii fi qindaa'inni isaanii hiikamuu danda'anii akka hafan madaali. Nuclear labeling'f, bakka signal fi background madaali. Viability'f, halluu hawwataa adda baasu caalaa ragaa gaafadhu. Qajeelfamni bal'aan methylene blue staining fi laboratory applications daawwannaa fi qophiin akkamitti walitti akka hidhaman ibsa.

Filannoo safartuu si barbaachisu eegu filadhu. Halluun amala suuraa argamu keessaa tokko qofa.