दूधको मेथिलिन ब्लू अपचयन परीक्षण: सिद्धान्त र सीमाहरू

एक छात्राले दूध भएका दुईवटा परीक्षण नली उठाउँछिन्। एउटाको रङ एक घण्टामा सेतो भयो। अर्को पाँच घण्टासम्म नीलो रह्यो। उनी नीलो नलीतर्फ देखाउँदै त्यो दूध पिउन सुरक्षित छ भन्छिन्।

त्यो निष्कर्षले गलत बुझाइ उजागर गर्छ। दूधको मेथिलिन ब्लू परीक्षणले सुरक्षा पत्ता लगाउँदैन। यसले निश्चित अवस्थाहरूमा उक्त नलीको सूक्ष्मजीव समूहले रेडक्स विभव कति छिटो घटाउँछ भन्ने देखाउँछ। ढिलो परिणामको अर्थ नमुनामा समग्र चयापचय गतिविधि कम छ भन्ने हो। यसले कुन जीवहरू उपस्थित छन्, तिनमा रोगजनक छ कि छैन, वा दूधको पाश्चुरीकरण सही ढङ्गले गरिएको थियो कि थिएन भन्नेबारे केही बताउँदैन।

यो भिन्नता महत्त्वपूर्ण छ, किनकि परीक्षण हेर्दा विश्वसनीय देखिन्छ। नीलो रङ हराउँछ। घडीले एउटा सङ्ख्या दिन्छ। सङ्ख्याले आवश्यकभन्दा बढी अर्थ लगाउन प्रेरित गर्छ। यस लेखले उपयोगी व्याख्यालाई कायम राख्छ र असुरक्षित व्याख्यालाई रोक्छ।

अपचयनले वास्तवमा के मापन गर्छ

मेथिलिन ब्लू अक्सीकृत अवस्थामा नीलो हुन्छ र ल्युकोमेथिलिन ब्लूमा अपचयित हुँदा लगभग रङहीन हुन्छ। ताजा दूधमा घुलित अक्सिजन हुन्छ, जसले रङद्रव्यलाई नीलो राख्छ। श्वसन र किण्वन गर्ने ब्याक्टेरियाले त्यो अक्सिजन खपत गर्छन् र अपचायक यौगिकहरू छोड्छन्। रेडक्स विभव पर्याप्त घटेपछि रङद्रव्यले इलेक्ट्रोन ग्रहण गर्छ र आफ्नो रङ गुमाउँछ। युनिभर्सिटी अफ गुएल्फको दुग्ध सूक्ष्मजीवविज्ञान पाठले पनि यही क्रमलाई ब्याक्टेरियाको चयापचयका क्रममा पहिले अक्सिजन हट्ने र त्यसपछि अपचायक पदार्थ बन्ने प्रक्रियाका रूपमा वर्णन गर्छ।

जर्नल अफ डेरी साइन्समा प्रकाशित पुरानो अनुसन्धानले यसलाई दुई चरणको प्रक्रियाका रूपमा व्याख्या गर्छ: पहिले सूक्ष्मजीव समूहले अक्सिजन रित्याउँछ, त्यसपछि दूधका घटकहरूले रङद्रव्यलाई छिटो अपचयित गर्छन्। त्यसैले दूधको मेथिलिन ब्लू अपचयन परीक्षणलाई कोशिका गन्ने परीक्षण नभई संयुक्त चयापचय गतिविधिको कार्यात्मक परीक्षणका रूपमा बुझ्नु उचित हुन्छ। मेथिलिन ब्लूको रेडक्स व्यवहार ले यो परिवर्तनपछाडिको रसायनशास्त्र स्पष्ट गर्छ।

अक्सिजनले परीक्षणको अन्तिम अवस्थालाई उल्ट्याउँछ। अपचयित ल्युको रङद्रव्य हावाको सम्पर्कमा आएपछि फेरि अक्सीकृत हुन्छ र नीलो बन्छ। त्यसैले हल्लाउने, खन्याउने, फराकिला नली प्रयोग गर्ने र दूधमाथि ठूलो खाली ठाउँ राख्ने कामले परिणाम ढिलो गराउँछन्। नलीभित्रको मुख्य भाग रङहीन भएपछि पनि हावासँग जोडिएको सतहमा प्रायः पातलो नीलो घेरा रहिरहन्छ। मानक प्रक्रियाहरूले त्यो घेरा हराउन पर्खनुको सट्टा त्यसलाई स्वीकार गर्छन्।

जीवको प्रकारले अर्को विकृति थप्छ। कोलिफर्म र धेरै ल्याक्टिक जीवहरूले रङद्रव्यलाई छिटो अपचयित गर्छन्। धेरै शीतवर्धी र तापसहनशील जीवहरूले यसलाई बिस्तारै अपचयित गर्छन् वा लगभग गर्दैनन्। प्लेट गणना उस्तै भएका दूधका दुई नमुनाको नीलो रङ हराउने समयमा घण्टौँको फरक हुन सक्छ। यही तथ्यले मात्र पनि समयलाई कोलोनीको सङ्ख्यामा रूपान्तरण गर्न नमिल्ने देखाउँछ।

नियन्त्रित प्रयोगशाला प्रक्रिया

मैदानी र पाठ्यपुस्तकका विधिहरूका विवरण फरक हुन्छन्, त्यसैले परिणाम जुन विधिबाट प्राप्त भएको हो, त्यही विधिभित्र मात्र मान्य हुन्छ। खाद्य प्रयोगशालामा प्रचलित एउटा विधि यसरी चल्छ:

1. हावाको सम्पर्क सकेसम्म कम हुने गरी कच्चा दूध सङ्कलन गर्नुहोस् र तुरुन्तै चिस्याउनुहोस्। नमुना लिनुअघि बिस्तारै उल्ट्याएर मिसाउनुहोस्।
2. निर्जीवाणु नलीमा 10 mL दूध र 1 mL प्रयोगका लागि तयार रङद्रव्य घोल राख्नुहोस्। व्यापक रूपमा प्रयोग हुने एउटा घोलमा रङद्रव्यको सान्द्रता 0.005 प्रतिशत हुन्छ, र दूध तथा रङद्रव्य घोलको अनुपात 10 र 1 हुन्छ।
3. नलीमा बिर्को लगाउनुहोस्, बिस्तारै दुई पटक उल्ट्याउनुहोस् र केही मिनेटभित्र पानीको स्नानमा राख्नुहोस्। प्रयोग गरिएको मानकअनुसार सामान्य इन्क्युबेसन तापक्रम 35 देखि 38 डिग्री सेल्सियस हुन्छ। कुन मानक पालना गर्नुभएको हो, अभिलेख राख्नुहोस्।
4. इन्क्युबेसनका बेला नलीहरूलाई प्रकाशबाट जोगाउनुहोस्, किनकि प्रकाशले अपचयनलाई तीव्र बनाउँछ।
5. 30 मिनेटमा र त्यसपछि निश्चित अन्तरालमा अवलोकन गर्नुहोस्। नलीको रङ उमालेको दूधको सन्दर्भ नमुनासँग मिल्ने वा प्रक्रियाले परिभाषित गरेको हदसम्म रङ हराउने समय नै अन्तिम बिन्दु हो।
6. विधिले मागेको अवस्थामा, दृश्य नियन्त्रणका लागि त्यही दूधको कुनै उपचार नगरिएको नली राख्नुहोस्।

FAO को दूध परीक्षण पुस्तिकाले यस क्रमको स्पष्ट मैदानी विधि दिन्छ: 10 mL दूधमा 1 mL रङद्रव्य घोल थप्ने, बिर्को लगाउने, बिस्तारै उल्ट्याउने, करिब 37 देखि 38 डिग्रीमा इन्क्युबेसन गर्ने र प्रत्येक 30 मिनेटमा अवलोकन गर्ने। यसका नियन्त्रण नलीहरूमा प्राकृतिक अपचायक प्रणाली नष्ट गर्न र रङ तुलना गर्ने आधार दिन उमालेको दूध प्रयोग गरिन्छ।

माथिको योजनाचित्रले नियन्त्रणको सीमा देखाउँछ। उही आयतन, उही रङद्रव्य, उही तापक्रम, उही मिश्रण प्रक्रिया, प्रकाशबाट उही सुरक्षा र अन्तिम बिन्दुको उही नियम। यीमध्ये कुनै एउटा परिवर्तन गरे समय पनि त्यससँगै परिवर्तन हुन्छ। त्यसैले मनलाग्दो रङद्रव्य सान्द्रता प्रयोग गर्ने घरेलु विधिहरूलाई प्रयोगशालाका श्रेणीहरूसँग तुलना गर्न मिल्दैन।

अपचयन समयले के सङ्केत गर्छ

लामो समयको अर्थ उल्लेखित अवस्थाहरूमा समग्र गतिविधि कम छ भन्ने हो। छोटो समयको अर्थ समग्र गतिविधि बढी छ भन्ने हो। दुग्धसम्बन्धी शिक्षण तालिकाहरूले यी समयलाई मोटामोटी श्रेणी दिन्छन्; उदाहरणका लागि, BIS बाट व्युत्पन्न एउटा वर्गीकरणमा 5 वा बढी घण्टालाई धेरै राम्रो र 30 मिनेटभन्दा कमलाई खराब मानिन्छ।

वर्गीकरणमा देखिने भिन्नता नै मुख्य पाठ हो। 5 घण्टाको परिणामको कुनै सार्वभौमिक श्रेणी हुँदैन। यो त्यसलाई परिभाषित गर्ने प्रक्रियासँग सम्बन्धित हुन्छ। त्यसैले उचित आधारसहितको प्रतिवेदन ढाँचा यस्तो हुन्छ:

उल्लेखित विधिअन्तर्गत MBRT बराबर X घण्टा, जुन सो विधिको सम्बन्धित श्रेणीमा पर्छ।

यसको अर्थ कहिल्यै पनि MBRT बराबर प्रति mL X कोलोनी निर्माण गर्ने एकाइ भन्ने हुँदैन। Standard Methods बाट व्युत्पन्न मार्गदर्शनले रङद्रव्य अपचयनका परिणामलाई ब्याक्टेरियाको सङ्ख्याका रूपमा प्रतिवेदन गर्न नहुने बताउँछ। मेथिलिन ब्लूबाट साधारण रञ्जन गर्ने प्रक्रिया ले पनि फरक प्रश्नको उत्तर दिन्छ, किनकि यसले नलीको समग्र गतिविधि होइन, सूक्ष्मदर्शकमा कोशिकाको आकार देखाउँछ।

व्याख्या र सीमाहरूको तालिका

यो तालिका लेखको मूल सन्दर्भ हो। पूरै पङ्क्ति पढ्नुहोस्। कुनै पनि एउटा कोष्ठलाई छुट्टै अर्थ लगाउन मिल्दैन।

ब्याक्टेरिया संवर्धन माध्यमजस्ता वृद्धि-आधारित जाँचहरू नै गणना र पृथकीकरणको माध्यम रहन्छन्। अपचयन नलीले प्रारम्भिक छनोट गर्छ। प्लेटले पहिचान र गणना गर्छ।

परीक्षणले सुरक्षाबारे के प्रमाणित गर्न सक्दैन

ढिलो परिणामले रोगजनकको अनुपस्थिति प्रमाणित गर्न सक्दैन। चिकित्सकीय दृष्टिले महत्त्वपूर्ण परिमाणमा उपस्थित रोगजनकले समग्र अक्सिजन खपतमा थोरै मात्र योगदान दिन सक्छ। रोगजनक पत्ता लगाउन जीव-विशिष्ट विधिहरू आवश्यक पर्छन्, जसलाई हालको Standard Methods ले सामान्य गुणस्तरको प्रारम्भिक परीक्षणभन्दा छुट्टै क्षेत्र मान्छ।

यसले पाश्चुरीकरण पुष्टि गर्न सक्दैन। Codex को दुग्ध स्वच्छता मार्गदर्शनअनुसार ताप उपचारको प्रमाणीकरणमा अल्कलाइन फस्फटेज परीक्षण वा अर्को प्रमाणित विधि प्रयोग गरिन्छ। सेतो वा नीलो नलीले उक्त ब्याचको समय र तापक्रमको इतिहासबारे केही बताउँदैन।

यसले खाद्य सुरक्षा प्रमाणित गर्न सक्दैन। सुरक्षा रोगजनक, पहिल्यै बनेका विषाक्त पदार्थ, औषधिका अवशेष, रासायनिक दूषक, शीत शृङ्खलाको इतिहास र नमुना लिएपछि भएको दूषणमा निर्भर हुन्छ। Codex ले दुग्ध सुरक्षालाई एउटा प्रारम्भिक परीक्षणको परिणाम नभई नियन्त्रण उपायहरूको शृङ्खलाका रूपमा लिन्छ।

खाद्य प्रयोगशालाको सन्दर्भ घरेलु परीक्षण होइन

दुग्ध प्रयोगशालामा यो परीक्षणले प्राप्त दूधको प्रारम्भिक जाँच गर्छ, समयसँगै आपूर्तिकर्ताहरूको तुलना गर्छ वा सुपरिवेक्षणमा रेडक्स सूक्ष्मजीवविज्ञान सिकाउँछ। नमुनाहरूको स्रोत र अभिलेख पत्ता लगाउन सकिन्छ। अभिकर्मकहरू मानकीकृत हुन्छन्। तापक्रमको अभिलेख राखिन्छ। फोहोर प्रयोगशालाको व्यवस्थाअनुसार विसर्जन गरिन्छ।

घरेलु परीक्षणमा यी कुनै व्यवस्था हुँदैनन्। भान्सामा नापिने आयतन अनुमानित हुन्छ। अनलाइन बेचिने रङद्रव्यको सान्द्रतामा ठूलो भिन्नता हुन्छ। इन्क्युबेसन प्रायः अंशाङ्कन गरिएको पानीको स्नानको सट्टा न्यानो कोठामा गरिन्छ। रङ भने परिवर्तन हुन्छ, जसले परिणामलाई विश्वसनीय जस्तो बनाउँछ, जबकि त्यसलाई अर्थ दिने सबै नियन्त्रणहरू अनुपस्थित हुन्छन्।

अझ गम्भीर जोखिम व्यवहारसँग सम्बन्धित छ। घरमा नीलो नली देख्दा कच्चा दूध पिउन प्रेरित हुन सकिन्छ, जबकि प्रयोगशालाले त्यही दूधलाई अझै प्लेट गणना, रोगजनक जाँच र अवशेष परीक्षणका लागि पठाउने थियो। दूधको मेथिलिन ब्लू परीक्षण प्राप्त हुने कच्चा दूधको श्रेणी निर्धारण गर्न बनाइएको हो, दूध उपभोगका लागि स्वीकृत गर्न होइन। अझ छिटो हुने रेसाज्युरिन प्रारम्भिक परीक्षणको सीमा पनि उही हो: रङको नतिजा छिटो देखिन्छ, तर रोगजनकबारे उत्तर अझै दिँदैन।

प्रयोगशाला कार्यमेजका लागि छोटो नियम

रङद्रव्य, अनुपात, तापक्रम, मिश्रण प्रक्रिया, प्रकाश र अन्तिम बिन्दुलाई मानकीकृत गर्नुहोस्। विधिको नाम र श्रेणीसहित समय प्रतिवेदन गर्नुहोस्। समयको व्याख्या गर्दा भण्डारणको इतिहास, सूक्ष्मजीव समूहको प्रकार, अवशेष र नमुना सङ्कलनको गुणस्तरलाई सँगै विचार गर्नुहोस्। छिटो परिणामले थप जाँच गर्नुपर्ने गतिविधिको सङ्केत गर्छ। ढिलो परिणामले कहिल्यै सुरक्षा प्रमाणित गर्दैन।