DNA र RNA रञ्जनका लागि मेथिलिन ब्लु: जेल र झिल्लीमा प्रयोग

एक विद्यार्थीले एगारोज जेल चलाउँछन्, त्यसलाई मेथिलिन ब्लुले रञ्जन गर्छन् र चम्किलो ब्यान्ड देखिने अपेक्षा गरेको ठाउँमा केही देख्दैनन्। छेउको कार्यस्थलमा एक पोस्टडक्टरल अनुसन्धानकर्ताले त्यही नीलो घोलको बोतलबाट नर्दर्न झिल्ली रञ्जन गर्छन् र तीन मिनेटमै स्पष्ट राइबोसोमल ब्यान्ड पाउँछन्। विद्यार्थीले जेल असफल भएको निष्कर्ष निकाल्छन्। जेल असफल भएको होइन। ती दुई काम फरक थिए, र एउटै रञ्जकले तिनका लागि फरक संवेदनशीलता, फरक पृष्ठभूमि र त्यसपछि गरिने कामका फरक नियमअनुसार नतिजा दिन्छ।

मेथिलिन ब्लुद्वारा DNA रञ्जन र मेथिलिन ब्लुद्वारा RNA रञ्जनको रसायन प्रक्रिया एउटै भए पनि उद्देश्य एउटै हुँदैन। जेलमा रञ्जकले छिद्रयुक्त म्याट्रिक्सभित्र कति न्यूक्लिक एसिड छ भन्ने देखाउँछ। झिल्लीमा यसले स्थानान्तरण सफल भयो कि भएन र लेनहरूमा समान रूपमा नमुना लोड गरिएको थियो कि थिएन भन्ने देखाउँछ। यो भिन्नता स्पष्ट भएपछि प्रोटोकल, पहिचानका सीमा र अनुकूलताका सीमा बुझ्न सजिलो हुन्छ।

संक्षिप्त उत्तर

मेथिलिन ब्लु समतलीय धनायनिक रञ्जक हो। यसले फस्फेटप्रतिको स्थिरविद्युतीय आकर्षण, बेस जोडीहरूबीचको अन्तरप्रवेशन र सानो खाँचोसँगको सम्बद्धताको मिश्रणबाट न्यूक्लिक एसिडसँग गैर-सहसंयोजक र उल्टाउन सकिने रूपमा बन्धन बनाउँछ। बन्धन उल्टाउन सकिनु नै यसको मुख्य विशेषता हो। दृश्य प्रकाशमा ब्यान्डको रञ्जन गरेर अभिलेख राख्न सकिन्छ, त्यसपछि क्लोनिङ, हाइब्रिडाइजेसन वा पुनः प्रोब परीक्षणका लागि रञ्जक हटाउन वा शुद्धीकरण गर्न सकिन्छ।

दुई-सूत्रीय DNA को मेथिलिन ब्लु एगारोज जेल रञ्जनका लागि मानक द्रुत विधि पानीमा 0.02 percent w/v (200 micrograms प्रति mL) हो। यसमा करिब 15 minutes रञ्जन र त्यसपछि पानीमा करिब 15 minutes रञ्जक हटाउने प्रक्रिया गरिन्छ, अनि सेतो प्रकाश बक्समा हेरिन्छ। झिल्लीका लागि परम्परागत नर्दर्न ब्लट विधिमा pH 5.2 नजिकको सोडियम एसीटेटमा 0.02 देखि 0.04 percent रञ्जक प्रयोग गरिन्छ। स्थानान्तरण र स्थिरीकरणपछि केही मिनेट रञ्जन गरिन्छ, त्यसपछि पानीले पखालिन्छ र हाइब्रिडाइजेसनअघि रञ्जक पूर्ण रूपमा हटाइन्छ। संवेदनशीलता सीमित हुन्छ: राम्रो अवस्थामा प्रति जेल ब्यान्ड दसौँदेखि सयौँ न्यानोग्रामसम्म, र सावधानीपूर्ण मार्गदर्शिकाहरूले 0.5 देखि 1 microgram उल्लेख गर्छन्। यो एथिडियम ब्रोमाइड र SYBR रञ्जकको तुलनामा परिमाणका धेरै तहले बढी हो। झिल्लीमा कुनै एउटै ट्रान्सक्रिप्टका लागि उपयोगी पहिचान सीमा हुँदैन, किनभने रञ्जकले मुख्यतः प्रशस्त मात्रामा भएको राइबोसोमल RNA र लोड गरिएको कुल सामग्री देखाउँछ। यीमध्ये कुनै पनि विधिमा खुद्रा पूरक उत्पादनको घोल प्रतिस्थापन नगर्नुहोस्। प्रमाणित विधिहरूले विश्लेषणात्मक ग्रेडको रञ्जक, निश्चित बफर र RNA समावेश हुँदा RNase-मुक्त ह्यान्डलिङ मान्छन्।

बन्धन कसरी हुन्छ, र यसले कहाँ भ्रममा पार्छ

उपयोगी मोडेलका तीन भाग छन्। पहिलो, धनात्मक आवेश भएको रिङ प्रणाली ऋणात्मक आवेश भएको फस्फेट ढाँचातर्फ आकर्षित हुन्छ। स्पेक्ट्रोस्कोपिक अध्ययनले कम लवण भएको अवस्थामा यो स्थिरविद्युतीय पक्ष प्रमुख रहेको देखाउँछ। मोडेलिङ र आणविक गतिशीलताले भने दुई-सूत्रीय DNA का लागि अन्तरप्रवेशन र सानो खाँचोमा बन्धनलाई स्थिर अवस्थाका रूपमा देखाउँछन्, जसको सारांश मेथिलिन ब्लु र DNA बन्धनको स्पेक्ट्रोस्कोपिक अध्ययन मा छ। दोस्रो, GC प्रतिको केही प्राथमिकता हुन्छ। मोडेलिङले CpG र GpC चरणलाई प्राथमिकता दिन्छ र मेथिलिन ब्लुको अन्तरप्रवेशन प्राथमिकतासम्बन्धी अध्ययन का प्रयोगहरूले GC-समृद्ध द्विसूत्रीय संरचनासँग प्राथमिकतापूर्ण सम्बद्धता देखाउँछन्, तर AT द्विसूत्रीय संरचनाले पनि बन्धन बनाउँछन्। नियमित रञ्जन अनुक्रम-विशिष्ट हुँदैन। तेस्रो, एक-सूत्रीय DNA र RNA मुख्यतः स्थिरविद्युतीय आकर्षण तथा पहुँचयोग्य बेस र द्विसूत्रीय क्षेत्रसँगको स्ट्याकिङबाट बाँधिन्छन्। त्यसैले रञ्जनको तीव्रता लम्बाइ, अनुक्रम र द्वितीयक संरचनाअनुसार फरक हुन्छ।

यसबाट दुई परिणाम आउँछन्। बन्धन गैर-सहसंयोजक भएकाले रञ्जक पखालेर हट्छ। जानाजानी स्थायी रूपमा स्थिरीकरण नगरेसम्म पोलिएक्रिलामाइडका ब्यान्ड छिट्टै फिका हुन्छन्। सामान्य रञ्जन अस्थायी हुने भएकैले विशेष स्थायी स्थिरीकरण विधि उपलब्ध छ, जसलाई PAGE जेलका लागि Soto र Draper ले वर्णन गरेका छन्। रञ्जक फोटोसेन्सिटाइजर भएकाले अक्सिजनको उपस्थितिमा रञ्जित DNA लाई लामो समय तेज प्रकाशमा राख्दा ग्वानिनको अक्सिडेसन हुन सक्छ र अन्ततः सूत्रमा साना कट लाग्न सक्छन्। यो संयन्त्र मेथिलिन ब्लुद्वारा संवेदित ग्वानिन अक्सिडेसनसम्बन्धी अध्ययन मा विस्तृत रूपमा वर्णन गरिएको छ। छोटो समय सेतो प्रकाशमा हेर्दा परम्परागत एथिडियम ब्रोमाइड कार्यप्रवाहमा हुने परिचित UV क्षति टर्छ, र तयारीका लागि DNA पुनः प्राप्त गर्दा यो वास्तविक लाभ हो। दृश्य प्रकाश तुलनात्मक रूपमा कम हानिकारक हुन्छ, हानिरहित होइन। DNA क्लोनिङ गरिने भए प्रकाशमा राख्ने समय छोटो राख्नुहोस्। यो सावधानीको पछाडिको व्यापक प्रकाश-रसायन बुझ्न मेथिलिन ब्लु प्रकाश-रसायनका दुई मार्ग हेर्नुहोस्। अक्सिडाइज्ड रूपले किन बन्धन बनाउँछ र रिड्युस्ड रूपले किन बनाउँदैन भन्ने बुझाउने रेडक्स जोडी र आवेश अवस्थाका लागि मेथिलिन ब्लुको संरचना र गुणहरूको रसायन हेर्नुहोस्।

पहिलो काम: जेलभित्र रञ्जन

जेल रञ्जनले एउटा प्रश्नको उत्तर दिन्छ: यो ब्यान्डमा आँखाले देख्न सकिने गरी पर्याप्त न्यूक्लिक एसिड छ कि छैन। एगारोजमा दुई-सूत्रीय DNA सबैभन्दा राम्रोसँग अध्ययन गरिएको अवस्था हो। Flores र सहकर्मीहरूको मूल मेथिलिन ब्लु जेल विधि ले 1 percent एगारोजमा 0.02 percent द्रुत प्रोटोकल प्रमाणित गर्‍यो र त्यसपछि सफल पुनः प्राप्ति र क्लोनिङ देखायो। उही आपूर्तिकर्ताको प्रोटोकल IBI Scientific को मेथिलिन ब्लु उत्पादन पृष्ठ मा पनि छ, जहाँ 0.04 percent झिल्ली विधि र द्रुत जेल विधि सँगसँगै उल्लेख छन्।

व्यावहारिक कार्यप्रवाह:

1. जेल सामान्य रूपमा चलाउनुहोस्। परिमार्जित विधिका लागि स्थानान्तरण वा छुट्याउने क्षमता प्रमाणित गरिएको छैन भने इलेक्ट्रोफोरेसिसको समयमा होइन, त्यसपछि रञ्जन गर्नुहोस्।
2. आसुत पानीमा 0.02 percent w/v मेथिलिन ब्लुमा हल्का हल्लाउँदै करिब 15 minutes डुबाउनुहोस्।
3. म्याट्रिक्सको पृष्ठभूमि घटेर ब्यान्ड स्पष्ट नहुँदासम्म पानी धेरै पटक फेर्दै कुल करिब 15 minutes रञ्जक हटाउनुहोस्।
4. सेतो प्रकाश दिने उपकरणमा तुरुन्तै फोटो खिच्नुहोस्।

एगारोज र पोलिएक्रिलामाइडको व्यवहार फरक हुन्छ। एगारोजले म्याट्रिक्समा रञ्जक राखिरहन्छ, त्यसैले रञ्जक हटाउने चरण ढिलो हुन्छ। पातला पोलिएक्रिलामाइड जेल छिटो रञ्जित हुन्छन् तर तिनबाट रञ्जक पनि छिट्टै हट्छ। यसले तयारीका लागि ब्यान्ड काटेर निकाल्न मद्दत गर्छ, तर दीर्घकालीन अभिलेखका लागि समस्या बनाउँछ। स्थापित Current Protocols शैलीका PAGE विधिहरूअनुसार, पोलिएक्रिलामाइडमा भएका कृत्रिम ओलिगोन्यूक्लियोटाइडलाई उही 0.02 percent विधि र बारम्बार पानीले पखालेर 20 देखि 30 minutes मा पत्ता लगाउन सकिन्छ। तयारीका लागि ओलिगोहरूमा धेरै घण्टासम्म पातलो TBE मा करिब 0.0002 percent का अत्यन्त पातला विधि प्रयोग गरिएको विवरण छ, तर यसको प्रमाणको आधार कमजोर छ।

DNA र RNA बीचको भिन्नता महत्त्वपूर्ण छ। दुई-सूत्रीय DNA ले सबैभन्दा बलियो संरचनात्मक बन्धन दिन्छ। RNA र एक-सूत्रीय DNA पनि रञ्जित हुन्छन्, तर कमजोर र कम पूर्वानुमानयोग्य रूपमा। फर्माल्डिहाइड एगारोज RNA जेलका लागि अधिकांश प्रयोगशालाले जेलभित्र नीलो रञ्जन नगरी पहिले RNA लाई झिल्लीमा सार्छन् र त्यहाँ रञ्जन गर्छन्। यसरी कमजोर जेल सङ्केतको सट्टा बढी स्पष्ट झिल्ली सङ्केत र लोडिङको अभिलेख पाइन्छ।

दोस्रो काम: झिल्लीमा रञ्जन

झिल्ली रञ्जनले फरक प्रश्नको उत्तर दिन्छ: स्थानान्तरण सफल भयो कि भएन, र लेनहरू तुलना गर्न मिल्ने छन् कि छैनन्। यसको परम्परागत प्रयोग Herrin र Schmidt को उल्टाउन सकिने नर्दर्न ब्लट रञ्जन हो। मूल विधिमा pH 5.0 भएको 50 mM सोडियम एसीटेटमा 0.04 percent रञ्जकले 2 देखि 3 minutes रञ्जन गरेर पानीले पखालिन्थ्यो। हाइब्रिडाइजेसनअघि SSPE मा पातलो SDS प्रयोग गरेर रञ्जक हटाउन सकिन्थ्यो।

व्यापक रूपमा प्रयोग हुने आधुनिक विधि यसरी गरिन्छ:

1. RNA वा विकृत गरिएको DNA लाई नाइलन वा नाइट्रोसेल्युलोजमा स्थानान्तरण गर्नुहोस्, त्यसपछि रञ्जनको क्रममा नमुना नहराओस् भनेर UV क्रसलिङ्किङ वा तताएर स्थिरीकरण गर्नुहोस्।
2. वैकल्पिक तर प्रचलित चरण: झिल्लीलाई 5 percent एसीटिक एसिडमा करिब 15 minutes भिजाउनुहोस्।
3. pH 5.2 नजिकको 0.3 देखि 0.5 M सोडियम एसीटेटमा 0.02 देखि 0.04 percent मेथिलिन ब्लुले 5 देखि 10 minutes रञ्जन गर्नुहोस्।
4. पानीले पखालेर 5 देखि 15 minutes रञ्जक हटाउनुहोस्, अभिलेख राख्नुहोस्, अनि हाइब्रिडाइजेसनअघि बाँकी रञ्जक हटाउनुहोस्।

नर्दर्न कार्यमा धनात्मक आवेश भएको नाइलनको प्रयोग प्रमुख छ। नाइट्रोसेल्युलोज पनि उही एसीटिक एसिड र एसीटेट कार्यप्रवाहसँग उपयोगी हुन्छ। चित्रलाई स्थानान्तरण पुष्टि गर्न, 28S र 18S ब्यान्ड तुलना गर्न (वा ब्याक्टेरियाको RNA का लागि 23S र 16S), ल्याडर र मानक चिन्ह लगाउन, र कुल RNA सामान्यीकरणको मोटामोटी अभिलेख राख्न प्रयोग गरिन्छ। प्रकाशित नर्दर्न विधिहरूले लोडिङ जाँचका लागि रञ्जित राइबोसोमल ब्यान्डको परिमाण मापन गर्छन्। यसमा सामान्यीकरणका लागि मेथिलिन ब्लु राइबोसोमल ब्यान्ड प्रयोग गरेको दुग्ध विज्ञानसम्बन्धी अध्ययन पनि पर्छ। सदर्न झिल्ली पनि यसरी नै दृश्य बनाउन सकिन्छ, तर यो रञ्जक नर्दर्न लोडिङ र स्थानान्तरण जाँचका लागि धेरै बढी स्थापित छ। साथै, सदर्न DNA स्थानान्तरणअघि विकृत गरिन्छ, त्यसैले जेलको संवेदनशीलताका आँकडा त्यहाँ लागू हुँदैनन्।

पहिचान सीमा र पृष्ठभूमि: नीलो रञ्जक कहाँ कमजोर पर्छ

तलको तुलना जानाजानी अनुमानित राखिएको छ। रञ्जकको प्रदर्शन जेलको प्रतिशत, ब्यान्डको चौडाइ, प्रकाशीय उपकरण र रञ्जक हटाउने प्रक्रियाको अनुशासनमा निर्भर हुन्छ। प्रत्येक सङ्ख्यालाई निश्चित विनिर्देश होइन, परिमाणको मोटामोटी तहका रूपमा लिनुहोस्।

सीमित सङ्केत उपयोगी हुन्छ कि हुँदैन भन्ने पृष्ठभूमि नियन्त्रणले निर्धारण गर्छ। स्वतन्त्र रञ्जकको रङ तीव्र हुन्छ, त्यसैले बाँधिएको रञ्जक नहटाई नबाँधिएको रञ्जक हटाउँदा मात्र स्पष्ट भिन्नता देखिन्छ। बढी सान्द्र रञ्जकले विरलै संवेदनशीलता बढाउँछ। यसले मुख्यतः रञ्जक हटाउन लाग्ने समय बढाउँछ। प्रयोग गरिने ठीक त्यही जेल, झिल्ली र क्यामेरामा क्रमिक तनुकरणका नमुना परीक्षण गर्नुहोस्, र समेकित घनत्व प्रारम्भिक मात्राको अनुपातमा रहने दायरा मात्र प्रयोग गर्नुहोस्। मेथिलिन ब्लुले अर्धपरिमाणात्मक लोडिङ सामान्यीकरणमा मद्दत गर्छ। यो उच्च गतिशील दायरा भएको परिमाणात्मक परीक्षण होइन, किनभने झिल्लीको क्षमता, स्थानान्तरण दक्षता, सन्तृप्ति र रञ्जक हट्ने मात्रा लेनअनुसार फरक हुन्छन्।

अनुकूलताका सीमा: रञ्जनपछि के काम गर्न सक्छ

नीलो रञ्जनपछि क्लोनिङ सफल भएको देखाइएको छ। Flores र सहकर्मीहरूले रञ्जित एगारोज ब्यान्ड काटेर निकाले, DNA पुनः प्राप्त गरे, अनि लिगेसन र ट्रान्सफर्मेसन गरे। उनीहरूले UV सहितको एथिडियम ब्रोमाइड प्रयोगपछि भन्दा राम्रो क्लोनिङ भएको बताए। सम्भावित कारण कम प्रकाशजन्य क्षति हो, रञ्जक आफैँबाट हुने लाभ होइन। सेतो प्रकाशमा राख्ने समय छोटो राख्नुहोस् र पुनः प्राप्त DNA लाई सामान्य जेल निष्कर्षण शुद्धीकरण प्रक्रियाबाट गुजार्नुहोस्।

PCR र सिक्वेन्सिङका लागि प्रमाण कम छ। बाँकी रञ्जक न्यूक्लिक एसिडसँग बाँधिन्छ, त्यसैले इन्जाइमसम्बन्धी चरणअघि रञ्जक हटाएर शुद्धीकरण गर्नुहोस्। नीलो जेलबाट राम्ररी शुद्ध पारिएको DNA ले काम गर्ने अपेक्षा गरिन्छ, तर विभिन्न पोलिमरेज र सिक्वेन्सिङ रसायन प्रक्रियामा सिधै सँगै गएको अवशिष्ट रञ्जक कति सहन सकिन्छ भन्ने राम्रोसँग परिमाणित गरिएको छैन। त्यसलाई स्वतः मान्य नठान्नुहोस्।

क्रम कडाइका साथ पालना गर्दा ब्लट हाइब्रिडाइजेसन अनुकूल हुन्छ: स्थानान्तरण, स्थिरीकरण, रञ्जन, अभिलेखन, रञ्जक हटाउने, हाइब्रिडाइजेसन। यो क्रम Herrin र Schmidt को डिजाइन हो। स्थानान्तरणअघि रञ्जन गर्नु वा रञ्जक हटाउने चरण छोड्नु फरक विधि हो र त्यसको छुट्टै प्रमाणीकरण चाहिन्छ। रञ्जक हटाएपछि मानक प्रोब हटाउने र पुनः प्रोब परीक्षणका प्रक्रिया सामान्य रूपमा अघि बढ्छन्। यही रञ्जक परिवारबाट कोशिका स्तरमा रञ्जनबारे र स्थिर गरिएको फिल्मको तर्क जीवित कोशिकाका विधिमा किन लागू हुँदैन भन्नेबारे सूक्ष्मदर्शी रञ्जन एटलस हेर्नुहोस्।

स्थायी स्थिरीकरण विधि प्रयोग नगरिएको अवस्थामा तयारीका लागि एगारोजका ब्यान्ड र नीलो रञ्जकबाट पत्ता लगाइएका PAGE ओलिगो काटेर निकाल्न सकिन्छ। उल्टाउन सकिने बन्धन बनाउने रञ्जकका लागि रञ्जक हटाएपछि इलेक्ट्रोइलुसन रासायनिक रूपमा सम्भव देखिन्छ, तर मेथिलिन ब्लुसँग विशेष सम्बन्धित नियन्त्रित प्राप्ति-दरका तथ्याङ्क सीमित छन्। इलुसनपछि लवण हटाउनुहोस् वा अवक्षेपण गर्नुहोस्।

बारम्बार देखिने असफलता

फिका जेल ब्यान्डले सामान्यतः वर्णमितीय रञ्जकका लागि मात्रा निकै कम भएको जनाउँछन्, विशेषतः छोटा एक-सूत्रीय वा RNA लक्ष्यमा। बढी नमुना लोड गर्नुहोस्, ताजा रञ्जक प्रयोग गर्नुहोस्, सान्द्रता बढाउनुअघि रञ्जनको समय बढाउनुहोस् र रञ्जक हटाउने प्रक्रिया पहिले नै रोक्नुहोस्। कुनै स्पष्ट भिन्नता नभएको पूरै नीलो जेलले सामान्यतः अत्यधिक रञ्जन वा पानी पर्याप्त पटक नफेरेको जनाउँछ। PAGE ब्यान्ड फिका हुँदै जानु अपेक्षित रासायनिक व्यवहार हो, रञ्जन असफल भएको होइन। छिट्टै फोटो खिच्नुहोस्। झिल्लीको असमान पृष्ठभूमिले चाउरी, फोका, औँलाका छाप, असमान हल्लाइ वा टुक्राटुक्रा क्षेत्रमा भएको स्थानान्तरणतर्फ सङ्केत गर्छ। हाइब्रिडाइजेसन नियन्त्रणबिना त्यसलाई असमान लोडिङका रूपमा नबुझ्नुहोस्। फैलिएको कमजोर राइबोसोमल ढाँचाले विघटन जनाउन सक्छ, तर अपूर्ण स्थानान्तरण, निकै कम कुल RNA (सामान्य लेनमा केहीदेखि दसौँ micrograms हुन्छ) वा अत्यधिक रञ्जक हटाएको पनि जनाउन सक्छ। रञ्जकले प्रशस्त मात्रामा भएको राइबोसोमल RNA देखाउँछ। यसले कुनै विशेष ट्रान्सक्रिप्ट देखाउँदैन। त्यो काम प्रोबको हो।

अतिरञ्जित दाबी नगरी सुरक्षा र ह्यान्डलिङ

मेथिलिन ब्लु एथिडियम ब्रोमाइडभन्दा ह्यान्डल गर्न सजिलो छ, तर यो हानिरहित होइन। हालको MilliporeSigma सुरक्षा तथ्यपत्रले रञ्जकलाई तीव्र मौखिक विषाक्तता श्रेणी 4, निलेमा हानिकारक, भनी वर्गीकृत गर्छ। Sigma-Aldrich को मेथिलिन ब्लु SDS अनुसार स्वीकृत फोहोर व्यवस्थापन प्रक्रियाबाट यसको विसर्जन गर्नुपर्छ। एथिडियम ब्रोमाइडमा आनुवंशिक विषाक्ततासम्बन्धी अझ कडा चेतावनी छन्, जसमा यसको Sigma-Aldrich को एथिडियम ब्रोमाइड SDS मा जनन कोशिकामा शङ्कास्पद प्रभाव पनि समावेश छ। Thermo Fisher को न्यूक्लिक एसिड रञ्जक मार्गदर्शिका मा उल्लेख भएअनुसार यसका जेल र घोल सामान्यतः खतरनाक रासायनिक फोहोरका रूपमा अलग राखिन्छन्। दुवैका लागि SDS र संस्थागत नियम पालना गर्नुहोस्। सुक्खा रञ्जक कसिलो गरी बन्द र सुक्खा राख्नुहोस्, प्रोटोकलले अनुमति दिएअनुसार मात्र प्रयोगमा रहेको रञ्जक पुनः प्रयोग गर्नुहोस्, रञ्जित झिल्ली फिल्टर कागजका पानाबीच सुक्खा अवस्थामा भण्डारण गर्नुहोस् र ब्यान्ड विसरण भएर हराउनुअघि जेलको फोटो खिच्नुहोस्।

प्रयोगशालाको यो मुख्य वाक्य सम्झनुहोस्। जेलले सेतो प्रकाशमा बढी मात्रा लोड गरिएको नमुनाको दृश्यता जाँच्छ। प्रोबले संवेदनशील काम गर्नुअघि झिल्लीले स्थानान्तरण र लोडिङ जाँच्छ। सीमित संवेदनशीलता, उल्टाउन सकिने बन्धन र कामको कडा क्रमसहित एउटै रञ्जकले दुवै काम गर्छ।