Methylene blue က ကင်ဆာဖြစ်စေသလား? အဆိပ်ဗေဒဆိုင်ရာ အထောက်အထား

Methylene blue သည် ရေရှည်တိရစ္ဆာန်စမ်းသပ်မှုများတွင် အကျိတ်ဖြစ်ပေါ်နိုင်ကြောင်း အချက်ပြရလဒ်များနှင့် မျိုးဗီဇဆိုင်ရာထိခိုက်မှုကို စစ်ဆေးသည့် ဓာတ်ခွဲခန်းစမ်းသပ်မှုအချို့တွင် positive ရလဒ်များ ထွက်ပေါ်စေခဲ့သည်။ ထိုတွေ့ရှိချက်များကို အလေးထားစဉ်းစားရန် လိုအပ်သည်။ သို့သော် သတ်မှတ်ထားသော ထိတွေ့မှုတစ်ခုနောက်ပိုင်း လူတစ်ဦးတွင် ကင်ဆာဖြစ်ပေါ်မည့် ဖြစ်နိုင်ခြေကို ထိုရလဒ်များက သတ်မှတ်ပေးခြင်းမရှိပါ။

2016 ခုနှစ်တွင် ထုတ်ပြန်ခဲ့သော IARC အကဲဖြတ်ချက် တွင် methylene blue ကို Group 3 အဖြစ် သတ်မှတ်ခဲ့ပြီး၊ ယင်းသည် လူတွင် ကင်ဆာဖြစ်စေနိုင်မှုကို အမျိုးအစားခွဲသတ်မှတ်၍ မရခဲ့ကြောင်း ဆိုလိုသည်။ လုပ်ငန်းအဖွဲ့တွင် လူ့ကင်ဆာဆိုင်ရာ ဒေတာမရှိခဲ့ဘဲ တိရစ္ဆာန်ဆိုင်ရာ အထောက်အထားကိုလည်း အကန့်အသတ်ရှိသည်ဟု သတ်မှတ်ခဲ့သည်။ Group 3 ဆိုသည်မှာ အန္တရာယ်မရှိကြောင်း သက်သေပြထားသည်ဟု မဆိုလိုပါ။ ထို့အတူ တိရစ္ဆာန်တွင် တွေ့ရှိချက်ရှိခြင်းက လူတွင် ထိတွေ့မှုတိုင်းသည် ကင်ဆာဖြစ်စေကြောင်း သက်သေပြထားသည်ဟုလည်း မဆိုလိုပါ။

သီးခြားဖြေဆိုရန်လိုသော မေးခွန်းသုံးခု

Carcinogenicity သည် အကျိတ်များ ဖြစ်ပေါ်လာခြင်းနှင့် သက်ဆိုင်သည်။ ရေရှည်တိရစ္ဆာန်လေ့လာမှုတစ်ခုသည် သတ်မှတ်ထားသော ထိတွေ့မှုနောက်ပိုင်း ဖြစ်ပေါ်လာသည့် အကျိတ်ပုံစံများကို ရှာဖွေနိုင်သည်။ Genotoxicity သည် မျိုးဗီဇပစ္စည်း ထိခိုက်ခြင်း သို့မဟုတ် ယင်းနှင့်ဆက်စပ်သော ဆဲလ်ဖြစ်စဉ်များနှင့် သက်ဆိုင်သည်။ positive mutation assay တစ်ခုသည် သတိပေးအချက်ပြမှု ပေးနိုင်သော်လည်း လူတွင် ဖြစ်ပေါ်သည့် ကင်ဆာအရေအတွက်ကို တိုက်ရိုက်တိုင်းတာခြင်း မဟုတ်ပါ။ လူတွင်ဖြစ်နိုင်ခြေ သည် အမှန်တကယ် ထိတွေ့မှုအခြေအနေများအောက်တွင် ထိခိုက်မှုဖြစ်ပေါ်နိုင်ခြေနှင့် သက်ဆိုင်သည်။

ဤမေးခွန်းများအတွက် မတူညီသော တိုင်းတာမှုများ လိုအပ်သည်။ ဘက်တီးရီးယား mutant များကို ရေတွက်ခြင်း၊ ကြွက်၏ သွေးဆဲလ်များကို စစ်ဆေးခြင်းနှင့် necropsy အချိန်တွင် အကျိတ်များကို ရောဂါရှာဖွေသတ်မှတ်ခြင်းတို့သည် အပြန်အလှန် အစားထိုးသုံးနိုင်သော endpoint များ မဟုတ်ပါ။ ထို့အပြင် ပစ္စည်းတစ်ခုက ကင်ဆာဆဲလ်များကို ထိခိုက်စေကြောင်း ပြသသည့် ကုသမှုဆိုင်ရာ စမ်းသပ်ချက်တစ်ခုက ထပ်ခါတလဲလဲ ထိတွေ့မှုသည် ကျန်းမာသောအကြောင်းအရာတွင် အကျိတ်စတင်ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်ခြင်း ရှိမရှိကို မသတ်မှတ်နိုင်ပါ။ ကုသမှုဆိုင်ရာ အဆိုများကို ကင်ဆာသုတေသနတွင် methylene blue အကြောင်း သီးခြားဆွေးနွေးချက်တွင် ဖော်ပြထားသည်။

လေ့လာမှုနှိုင်းယှဉ်ချက်: အမှန်တကယ် ရေရှည်ထိတွေ့မှုများ

အဓိကစမ်းသပ်မှုတွင် methylene blue trihydrate ကို အသုံးပြုပြီး 0.5% aqueous methylcellulose အတွင်း ထည့်သွင်းကာ oral gavage ဖြင့် ပေးခဲ့သည်။ ယင်းမှာ အစာအိမ်ထဲသို့ ပိုက်တစ်ချောင်းမှတစ်ဆင့် တိုင်းတာထားသော ပမာဏကို ပေးသွင်းခြင်းဖြစ်သည်။ ရေရှည်လေ့လာမှု dose အုပ်စုတစ်ခုစီတွင် မျိုးစိတ်တစ်မျိုးချင်းအတွက် အထီး 50 ကောင်နှင့် အမ 50 ကောင် ပါဝင်ခဲ့သည်။ Auerbach နှင့် လုပ်ဖော်ကိုင်ဖက်များ၏ လေ့လာမှုအစီရင်ခံစာ အရ နှစ်နှစ်ကြာ တစ်ပတ်လျှင် ငါးရက် ပေးသွင်းခဲ့သည်။

ဇယားတွင် NTP ၏ မျိုးစိတ်အလိုက် သတ်မှတ်ချက်များ ကို မူရင်းအဓိပ္ပာယ်အတိုင်း ထိန်းသိမ်းထားသည်။ ပမာဏများသည် dose ပေးသည့်နေ့များတွင် တိရစ္ဆာန်ခန္ဓာကိုယ်အလေးချိန် တစ်ကီလိုဂရမ်လျှင် စမ်းသပ်ပစ္စည်း၏ မီလီဂရမ်ပမာဏဖြစ်ပြီး လူအတွက် အကြံပြုချက်များ မဟုတ်ပါ။ Zero-dose တိရစ္ဆာန်များသည် vehicle ကိုသာ ရရှိခဲ့သည်။

မော်ဒယ်	Dose အုပ်စုများ, mg/kg	ပေးသွင်းနည်းလမ်းနှင့် ကြာချိန်	NTP သတ်မှတ်ချက်နှင့် သက်ဆိုင်ရာတွေ့ရှိချက်
အထီး F344/N ကြွက်များ	0, 5, 25, 50	Oral gavage; တစ်ပတ်လျှင် ငါးရက်; နှစ်နှစ်	အထောက်အထားအချို့: pancreatic islet-cell adenomas နှင့် adenoma/carcinoma ပေါင်းစပ်ဖြစ်ပွားမှု မြင့်တက်ခဲ့သည်။
အမ F344/N ကြွက်များ	0, 5, 25, 50	တူညီသော အစီအစဉ်	ဤအခြေအနေများအောက်တွင် carcinogenic activity ရှိကြောင်း အထောက်အထားမရှိပါ။
အထီး B6C3F1 ကြွက်ငယ်များ	0, 2.5, 12.5, 25	Oral gavage; တစ်ပတ်လျှင် ငါးရက်; နှစ်နှစ်	အထောက်အထားအချို့: အူသိမ် carcinoma နှင့် adenoma/carcinoma ပေါင်းစပ်ဖြစ်ပွားမှု မြင့်တက်ခဲ့သည်။ Malignant lymphoma လည်း ဆက်စပ်နိုင်သည်။
အမ B6C3F1 ကြွက်ငယ်များ	0, 2.5, 12.5, 25	တူညီသော အစီအစဉ်	မသေချာသော အထောက်အထား: malignant lymphoma အနည်းငယ် မြင့်တက်ခဲ့သည်။

“အထောက်အထားအချို့” ဆိုသည်မှာ “ရှင်းလင်းသောအထောက်အထား” ထက် အားနည်းသည့် positive စမ်းသပ်တွေ့ရှိချက်အတွက် NTP က အသုံးပြုသော အမျိုးအစားတစ်ခုဖြစ်သည်။ “မသေချာသော” ဆိုသည်မှာ မသေချာသေးသည့် တွေ့ရှိချက်ကို ဖော်ပြခြင်းဖြစ်သည်။ ဤအမျိုးအစားများသည် အထောက်အထား၏ ခိုင်မာမှုကို ဖော်ပြခြင်းဖြစ်ပြီး ရာခိုင်နှုန်းဖြင့် ဖော်ပြထားသော ဖြစ်နိုင်ခြေ သို့မဟုတ် carcinogen တစ်ခု မည်မျှပြင်းထန်ကြောင်း အဆင့်သတ်မှတ်ချက် မဟုတ်ပါ။

အထီးကြွက်ရလဒ်သည် dose မြင့်လာသလို အဆက်မပြတ် တိုးလာသည့်ပုံစံ မဟုတ်ပါ။ Pancreatic islet adenoma သို့မဟုတ် carcinoma ကို control အုပ်စုတွင် 4/50 ကောင်နှင့် dose တိုးလာသည့်အုပ်စုများတွင် 9/50, 14/50 နှင့် 8/50 ကောင်တွင် တွေ့ရှိခဲ့သည်။ ထုတ်ဝေထားသောစာတမ်းတွင် အလယ် dose အတွက်သာ statistical significance ရှိကြောင်း ဖော်ပြထားသည်။ ထို့ကြောင့် ရိုးရှင်းသော မျဉ်းဖြောင့်ဆန်သည့် dose-response ဇာတ်လမ်းတစ်ခုအဖြစ် ဖော်ပြခြင်းသည် မတိကျပါ။ သို့သော် အမြင့်ဆုံး dose က ကာကွယ်ပေးခဲ့သည်ဟုလည်း ယင်းက မသက်သေပြပါ။ Adenoma သည် benign tumour ဖြစ်ပြီး carcinoma သည် malignant ဖြစ်သည်။ ပေါင်းစပ် endpoint တစ်ခုကို ရေတွက်ထားသည့် အကျိတ်အားလုံးသည် ကင်ဆာဖြစ်သကဲ့သို့ မဖော်ပြသင့်ပါ။

မတူညီသော အကျဉ်းချုပ်များက ဘာကြောင့် ဆန့်ကျင်သကဲ့သို့ ထင်ရသလဲ

လက်ရှိ PROVAYBLUE prescribing information တွင် အထီးကြွက်များ၏ pancreatic တွေ့ရှိချက်များကို ဖော်ပြထားသော်လည်း ကြွက်ငယ်များတွင် ဆေးနှင့်ဆက်စပ်သော neoplastic တွေ့ရှိချက် မရှိကြောင်း ဖော်ပြထားသည်။ သုတေသနစာတမ်းတွင် ကြွက်ငယ်များ၏ neoplastic တိုးလာမှုများသည် statistical significance မရှိကြောင်း ဆိုထားသော်လည်း positive trends များရှိသည်ကို မှတ်သားထားသည်။ သို့သော် NTP က အထက်တွင် ဖော်ပြထားသော ကြွက်ငယ်အမျိုးအစားများကို သတ်မှတ်ခဲ့သည်။

IARC တိရစ္ဆာန်လေ့လာမှုခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာချက် တွင် အရေးကြီးသော စာရင်းအင်းဆိုင်ရာ ကွာခြားချက်တစ်ခုကို ရှင်းလင်းထားသည်။ အထီးကြွက်ငယ်များ၏ အူလမ်းကြောင်းတွေ့ရှိချက်များတွင် significant dose trends ရှိခဲ့သော်လည်း dose ပေးထားသော အုပ်စုတစ်ခုချင်းစီကို control နှင့် pairwise comparisons ပြုလုပ်ရာတွင် significance မရှိခဲ့ပါ။ Dose များတစ်လျှောက် အလုံးစုံပုံစံတစ်ခုကို စမ်းသပ်ခြင်းနှင့် အုပ်စုတစ်ခုချင်းစီကို သီးခြားစမ်းသပ်ခြင်းတို့သည် မတူညီပါ။ ဖတ်ရှုသူများသည် တွေ့ရှိချက်အားလုံးကို “ကြွက်ငယ်များ ကင်ဆာဖြစ်ခဲ့သည်” သို့မဟုတ် “ကြွက်ငယ်လေ့လာမှုက negative ဖြစ်သည်” ဟု ချုံ့မရေးဘဲ အရင်းအမြစ်နှင့် ၎င်းအသုံးပြုထားသော စကားလုံးများကို ထိန်းသိမ်းစဉ်းစားသင့်သည်။ မည်သည့်အရင်းအမြစ်ကမျှ တိုင်းတာထားသော လူ့ကင်ဆာဖြစ်ပွားနှုန်းကို မပေးပါ။

လေ့လာမှုနှိုင်းယှဉ်ချက်: မျိုးဗီဇထိခိုက်မှု endpoint များ

NTP Technical Report 540 ၏ genetic toxicology အပိုင်း တွင် မတူညီသော စမ်းသပ်မှုအစုတစ်ခုကို ဖော်ပြထားသည်။ S9 သည် metabolic activation ကို ပုံစံတူဖော်ပြရန် အသုံးပြုသည့် အသည်း enzyme များပါဝင်သော ဓာတ်ခွဲခန်းအရောအနှောတစ်ခုဖြစ်သည်။ ၎င်းပါဝင်ခြင်းက cell assay တစ်ခုကို whole-body exposure လေ့လာမှုအဖြစ် ပြောင်းလဲပေးခြင်း မရှိပါ။

စမ်းသပ်စနစ်	အမှန်တကယ် ထိတွေ့မှုအခြေအနေများ	တိုင်းတာသည့် endpoint နှင့် ရလဒ်
ဘက်တီးရီးယား mutation assays, ဒုတိယစမ်းသပ် lot	Salmonella: 0.25–150 µg/plate; E. coli: 0.25–1,500 µg/plate; ကြွက်အသည်း S9 ပါဝင်ပြီးနှင့် မပါဝင်ဘဲ	စမ်းသပ်ထားသော strains များတွင် mutations တိုးလာခဲ့သည်။
မွေးမြူထားသော Chinese hamster ovary cells	Sister-chromatid exchange စမ်းသပ်မှုတွင် S9 မပါဘဲ 0.17–2.5 µg/mL၊ S9 ပါဝင်လျှင် 5 µg/mL အထိ; chromosome-aberration စမ်းသပ်မှုတွင် 4.7–22 µg/mL အသုံးပြုခဲ့သည်	Positive exchange နှင့် chromosome-aberration ရလဒ်များ။
အထီးကြွက်ငယ်များ, acute experiment	Single intraperitoneal injection: 25, 50 သို့မဟုတ် 150 mg/kg; 48 နာရီတွင် samples ယူခဲ့သည်	Marrow သို့မဟုတ် သွေးအတွင်း micronucleated erythrocytes မတိုးခဲ့ပါ။
အထီးနှင့် အမ ကြွက်ငယ်များ, repeated experiment	Oral gavage: 25, 50, 100 သို့မဟုတ် 200 mg/kg; သုံးလကြာ တစ်ပတ်လျှင် ငါးရက်	Peripheral-blood micronucleated erythrocytes မတိုးခဲ့ပါ။

Micronucleus သည် ဆဲလ်ခွဲခြားမှုအတွင်း chromosome ကျိုးပဲ့ခြင်း သို့မဟုတ် chromosome ဆုံးရှုံးခြင်းကို ထင်ဟပ်နိုင်သည့် သေးငယ်သော ထပ်ဆောင်း nuclear body တစ်ခုဖြစ်သည်။ Negative blood-cell assay တစ်ခုက sample ယူထားသော ဆဲလ်များတွင် ထိုတိကျသော မေးခွန်းကိုသာ ဖြေဆိုပေးသည်။ ကိုယ်အင်္ဂါအားလုံးတွင် DNA ထိခိုက်မှုအမျိုးအစားအားလုံးကို ဖယ်ထုတ်သတ်မှတ်၍ မရပါ။ အပြန်အလှန်အားဖြင့် positive cultured-cell assay တစ်ခုက လူတစ်ဦး၏ tissue များ အမှန်တကယ် ရောက်ရှိခဲ့သည့် concentration ကို မပြောနိုင်ပါ။

Prescribing information တွင်လည်း ယေဘုယျပုံစံတစ်ခုတည်းကို မှတ်တမ်းတင်ထားသည်။ ဘက်တီးရီးယားနှင့် cultured-cell စမ်းသပ်မှုများတွင် positive ဖြစ်ပြီး ကြွက်ငယ် micronucleus စမ်းသပ်မှုများတွင် negative ဖြစ်သည်။ Methylene blue ကို ရိုးရိုး “genotoxic” သို့မဟုတ် “non-genotoxic” ဟုသာ ခေါ်ဆိုခြင်းက အဓိပ္ပာယ်ဖွင့်ဆိုရာတွင် အရေးကြီးသော အချက်အလက်များကို ဖယ်ရှားပစ်ရာရောက်သည်။

လူတွင် ထိတွေ့မှုတစ်ခုအတွက် ယင်းက ဘာကိုဆိုလိုသလဲ

ဤလေ့လာမှုများက လူများအတွက် အတည်ပြုထားသော ကင်ဆာဘေးကင်းသည့် နေ့စဉ် threshold တစ်ခုကို မပေးပါ။ ကြွက် dose ကို body-weight factor တစ်ခုဖြင့် စားလိုက်ခြင်းက absorption, metabolism, route, exposure frequency သို့မဟုတ် lifetime duration ကွာခြားမှုများကို ဖြေရှင်းပေးမည် မဟုတ်ပါ။ ယင်းက ပြောင်းလဲတွက်ချက်ထားသော ပမာဏတစ်ခုကိုသာ ပေးနိုင်ပြီး ဘေးကင်းကြောင်း သက်သေမဟုတ်ပါ။

နှစ်နှစ်ကြာ gavage စမ်းသပ်မှုတစ်ခုနှင့် ဆေးဘက်ဆိုင်ရာ ကြီးကြပ်မှုအောက်တွင် အချိန်တို intravenous treatment တစ်ခုတို့သည် မတူညီသော မေးခွန်းများကို စစ်ဆေးခြင်းဖြစ်သည်။ ထိုကွာခြားချက်ကြောင့် ကိန်းဂဏန်းအတိုင်း တိုက်ရိုက် extrapolation ပြုလုပ်၍ မရသော်လည်း တိရစ္ဆာန်တွေ့ရှိချက်များကို ပယ်ဖျက်ပစ်ခြင်း မဟုတ်ပါ။ အသုံးဝင်သော အကဲဖြတ်ချက်တစ်ခုသည် တိကျသော compound နှင့် formulation၊ ပမာဏ၊ route၊ frequency၊ duration နှင့် အသုံးပြုရသည့်အကြောင်းရင်းတို့မှ စတင်ရမည်။ “အစက်အနည်းငယ်” ဆိုသည်မှာ concentration နှင့် တိုင်းတာထားသော volume နှစ်ခုစလုံးကို မဖော်ပြထားပါ။

Methylene blue ကို ဆေးဘက်ဆိုင်ရာအကြောင်းပြချက်ဖြင့် ပေးသွင်းခဲ့ပါက အကျိတ်ဆိုင်ရာတွေ့ရှိချက်များတစ်ခုတည်းဖြင့် ထိုကုသမှု၏ အကျိုးကျေးဇူးများက ဖြစ်နိုင်ခြေများထက် သာလွန်ခဲ့ခြင်းရှိမရှိကို သတ်မှတ်၍ မရပါ။ ထပ်ခါတလဲလဲ elective use ကို စဉ်းစားနေပါက မတိုင်းတာရသေးသော ရေရှည်ကင်ဆာဖြစ်နိုင်ခြေကို သုညဟု မဖော်ပြသင့်ပါ။ ဆေးဝါးအပြန်အလှန်သက်ရောက်မှုများနှင့် haemolysis ဖြစ်လွယ်မှုအပါအဝင် ပိုမိုချက်ချင်းသက်ဆိုင်သော ကိစ္စများကို ဘေးထွက်ဆိုးကျိုးများနှင့် contraindications တွင် ဖော်ပြထားသည်။

ဆက်လက်ဖတ်ရှုရန် သုတေသနစာကြည့်တိုက် ကို အသုံးပြုပြီး လူတွင်ပြုလုပ်သော လေ့လာမှုများနှင့် တိရစ္ဆာန်၊ ဆဲလ်စမ်းသပ်မှုများကို ခွဲခြားကြည့်ပါ။ စာတမ်းတစ်ခုချင်းစီအတွက် အဓိကမေးခွန်းမှာ မည်သည့်ထိတွေ့မှုကို စမ်းသပ်ခဲ့သလဲနှင့် အမှန်တကယ် မည်သည့်ရလဒ်ကို တိုင်းတာခဲ့သလဲဆိုသည် ဖြစ်သည်။