L-Artikolu
It-test tar-riduzzjoni tal-blu tal-metilen fil-ħalib: il-prinċipju u l-limitazzjonijiet
Studenta tgħolli żewġ tubi bil-ħalib. Wieħed sar abjad f’siegħa. L-ieħor baqa’ blu għal ħames sigħat. Hija tipponta lejn dak blu u tgħid li jista’ jinxtorob mingħajr periklu.
Dik il-konklużjoni turi fehma żbaljata ta’ kif jaħdem it-test. It-test tal-blu tal-metilen fil-ħalib ma jiddeterminax is-sikurezza. Juri kemm il-popolazzjoni mikrobjali f’dak it-tubu tbaxxi malajr il-potenzjal redox taħt kundizzjonijiet fissi. Riżultat bil-mod ifisser attività metabolika ġenerali baxxa fil-kampjun. Ma jgħid xejn dwar liema organiżmi huma preżenti, jekk hemmx patoġenu fosthom, jew jekk il-ħalib ġiex pasturizzat kif suppost.
Din id-distinzjoni hija importanti għax it-test jidher konvinċenti. Il-blu jisparixxi. Arloġġ jagħti numru. In-numri jħajru lil dak li jkun jislet aktar milli fil-fatt juru. Dan l-artiklu jżomm l-interpretazzjoni utli u jeskludi dik li mhijiex sikura.
X’tkejjel fil-fatt ir-riduzzjoni
Il-blu tal-metilen huwa blu meta jkun ossidat u kważi bla kulur meta jiġi ridott għal lewkoblu tal-metilen. Il-ħalib frisk fih ossiġnu maħlul, li jżomm il-kolorant blu. Il-batterji li jwettqu respirazzjoni u fermentazzjoni jikkunsmaw dak l-ossiġnu u jirrilaxxaw komposti riduċenti. Meta l-potenzjal redox jinżel biżżejjed, il-kolorant jaċċetta elettroni u jitlef il-kulur tiegħu. It-test dwar il-mikrobijoloġija tal-ħalib tal-Università ta’ Guelph jiddeskrivi l-istess sekwenza: it-tneħħija tal-ossiġnu segwita mill-formazzjoni ta’ sustanzi riduċenti waqt il-metaboliżmu batterjali.
Xogħol klassiku fil-Journal of Dairy Science jippreżentaha bħala proċess f’żewġ stadji: l-ewwel il-flora teżawrixxi l-ossiġnu, imbagħad il-kostitwenti tal-ħalib jirriduċu l-kolorant malajr. Għalhekk, it-test tar-riduzzjoni tal-blu tal-metilen fil-ħalib għandu jinftiehem bħala analiżi funzjonali tal-attività metabolika kkombinata, mhux bħala metodu biex jingħaddu ċ-ċelloli. L-imġiba redox tal-blu tal-metilen tispjega l-kimika wara dik il-bidla.
L-ossiġnu jaqleb lura l-bidla fil-punt finali. Il-forma lewko ridotta tal-kolorant, meta tkun esposta għall-arja, terġa’ tossida u ssir blu. Għalhekk, it-taħwid, it-tferrigħ, it-tubi wesgħin u spazju kbir ta’ arja fuq il-likwidu jdewmu r-riżultat. Ċirku blu rqiq spiss jibqa’ fil-wiċċ f’kuntatt mal-arja wara li l-bqija tal-ħalib fit-tubu jkun tilef il-kulur. Il-proċeduri standard jaċċettaw dak iċ-ċirku minflok jistennew li jisparixxi.
It-tip ta’ organiżmu jżid distorsjoni oħra. Il-koliformi u ħafna organiżmi lattiċi jirriduċu l-kolorant malajr. Ħafna organiżmi psikrotrofiċi u termoduriċi jirriduċuh bil-mod jew kważi xejn. Żewġ kampjuni tal-ħalib bl-istess għadd fuq pjanċa jistgħu jitilfu l-kulur blu b’differenza ta’ sigħat. Dan il-fatt waħdu jeskludi l-konverżjoni tal-ħin f’numru ta’ kolonji.
Proċedura kkontrollata fil-laboratorju
Il-verżjonijiet għall-użu fil-post u dawk fil-kotba tat-tagħlim ivarjaw fid-dettalji, għalhekk riżultat huwa validu biss fil-qafas tal-metodu li pproduċieh. Verżjoni konvenzjonali għal laboratorju tal-ikel issir hekk:
- Iġbor ħalib mhux ipproċessat b’arjazzjoni minima u kessaħ minnufih. Ħallat billi taqleb il-kontenitur bil-mod qabel tieħu kampjun.
- Poġġi 10 mL ħalib f’tubu sterili b’1 mL ta’ soluzzjoni tal-kolorant lesta għall-użu. Konċentrazzjoni użata ħafna hija 0.005 fil-mija kolorant, bi proporzjon ta’ ħalib għal kolorant ta’ 10 għal 1.
- Agħlaq it-tubu b’tapp, aqilbu bil-mod darbtejn, u poġġih f’banju tal-ilma fi żmien ftit minuti. L-inkubazzjoni tipika ssir bejn 35 u 38 grad Celsius skont l-istandard speċifikat. Irreġistra liema wieħed qed issegwi.
- Ipproteġi t-tubi mid-dawl waqt l-inkubazzjoni, għax id-dawl iħaffef ir-riduzzjoni.
- Aqra r-riżultat wara 30 minuta, imbagħad f’intervalli fissi. Il-punt finali huwa l-ħin meta t-tubu jaqbel ma’ referenza ta’ ħalib mgħolli jew jilħaq it-telf tal-kulur definit mill-proċedura.
- Żomm tubu mhux trattat mill-istess ħalib bħala kontroll viżiv fejn il-metodu jitlob wieħed.
Il-manwal tal-FAO għall-ittestjar tal-ħalib jagħti verżjoni espliċita għall-użu fil-post ta’ din is-sekwenza: 10 mL ħalib flimkien ma’ 1 mL kolorant, għeluq b’tapp, qlib bil-mod, inkubazzjoni qrib 37 sa 38 grad, u qari kull 30 minuta. It-tubi ta’ kontroll tiegħu jużaw ħalib mgħolli biex jeqirdu s-sistema riduċenti naturali u jipprovdu referenza għat-tqabbil tal-kulur.
Id-dijagramma ta’ hawn fuq tiddefinixxi l-qafas tal-kontroll. L-istess volumi, l-istess kolorant, l-istess temperatura, l-istess taħlit, l-istess protezzjoni mid-dawl, l-istess regola għall-punt finali. Ibdel wieħed minn dawn u l-ħin jinbidel miegħu. Għalhekk, verżjonijiet magħmula d-dar li jużaw konċentrazzjoni arbitrarja tal-kolorant mhumiex komparabbli mal-gradi tal-laboratorju.
X’jindika l-ħin tar-riduzzjoni
Ħin itwal ifisser attività ġenerali aktar baxxa taħt il-kundizzjonijiet iddikjarati. Ħin iqsar ifisser attività ġenerali ogħla. It-tabelli użati fit-tagħlim dwar il-ħalib jorbtu gradi approssimattivi ma’ dawk il-ħinijiet, pereżempju 5 sigħat jew aktar bħala tajjeb ħafna u inqas minn 30 minuta bħala fqir fi skema waħda derivata mill-BIS.
Il-lezzjoni hija fil-varjazzjoni. Riżultat ta’ 5 sigħat m’għandux grad universali. Jappartjeni għall-proċedura li ddefinietu. Għalhekk, il-format tar-rapport li jista’ jiġi ġġustifikat huwa:
MBRT huwa ugwali għal X sigħat skont il-metodu speċifikat, li jikkorrispondi għall-grad ta’ dak il-metodu.
Qatt mhu MBRT huwa ugwali għal X unitajiet li jiffurmaw kolonji għal kull mL. Il-gwida derivata minn Standard Methods tgħid li r-riżultati tar-riduzzjoni tal-kolorant m’għandhomx jiġu rrappurtati bħala numri ta’ batterji. Il-proċedura ta’ tbajja’ sempliċi bil-blu tal-metilen ukoll twieġeb mistoqsija differenti, għax turi l-forma taċ-ċelloli taħt il-mikroskopju minflok l-attività ġenerali f’tubu.
Tabella tal-interpretazzjoni u tal-limiti
Din it-tabella hija r-referenza oriġinali għall-artiklu. Aqra kull ringiela kollha kemm hi. Ebda ċellola waħda ma għandha tiġi interpretata waħedha.
| Osservazzjoni jew stqarrija | X’tindika | X’ma tistax tipprova | Fatturi ewlenin li jfixklu l-interpretazzjoni |
|---|---|---|---|
| Telf rapidu tal-blu, f’inqas minn 2 sigħat fi skema waħda għall-ħalib mhux ipproċessat | Attività riduċenti għolja, konsistenti ma’ tagħbija mikrobjali kbira jew kwalità fqira ta’ konservazzjoni | Speċi, għadd eżatt, tossini, jew falliment tal-pasturizzazzjoni | Ħażna f’temperatura sħuna, flora rikka f’koliformi, dawl, ammont baxx ta’ kolorant |
| Ħin intermedju, 2 sa 4 sigħat | Attività moderata; grad biss fil-qafas tal-iskema speċifikata | Sikurezza jew assenza ta’ organiżmi li jirriduċu bil-mod | Temperatura għolja tal-inkubazzjoni, differenzi fl-arjazzjoni, separazzjoni tax-xaħam |
| Riduzzjoni bil-mod, 5 sigħat jew aktar | Attività ġenerali baxxa f’dik l-iskema | Assenza ta’ patoġeni, pasturizzazzjoni, jew sikurezza kimika | Residwi ta’ antibijotiċi, preservattivi, ossiġnu maħlul żejjed, ammont għoli ta’ kolorant |
| Ċirku blu jibqa’ fil-wiċċ filwaqt li l-bqija jitlef il-kulur | Ossidazzjoni mill-ġdid fl-interfaċċa mal-arja, effett normali fit-tarf | Test li falla jew reazzjoni mhux kompluta | Tubu wiesa’, tapp mhux magħluq sew, ftuħ ripetut għall-ispezzjoni |
| Tubu abjad wara l-inkubazzjoni ta’ ħalib imsaħħan | Sistema riduċenti mibdula flimkien ma’ attività li baqgħet wara t-tisħin | Li t-tisħin kien ekwivalenti għal pasturizzazzjoni vvalidata | Ħsara mis-sħana, irkupru waqt l-inkubazzjoni, kontaminazzjoni aktar tard |
| Kwalunkwe valur wieħed tal-MBRT ikkwotat mingħajr il-metodu | Kundizzjonijiet tat-test mhux magħrufa | Kwalunkwe grad jew għadd | Il-formulazzjoni tal-kolorant, il-proporzjon, it-temperatura, it-taħlit u r-regola għall-punt finali kollha mhux irrappurtati |
Il-kontrolli bbażati fuq it-tkabbir, bħal dawk li jużaw mezzi ta’ kultura batterjali, jibqgħu l-mezz għall-għadd u l-iżolament. It-tubu tar-riduzzjoni jservi għall-iskrinjar. Il-pjanċa tidentifika u tgħodd.
X’ma jistax jipprova t-test dwar is-sikurezza
Riżultat bil-mod ma jistax jipprova l-assenza ta’ patoġeni. Patoġenu preżenti f’ammont ta’ importanza klinika jista’ jikkontribwixxi ftit għall-konsum ġenerali tal-ossiġnu. L-identifikazzjoni tal-preżenza ta’ patoġeni teħtieġ metodi speċifiċi għall-organiżmu, li l-edizzjoni attwali ta’ Standard Methods tittratta bħala qasam separat mill-iskrinjar ġenerali tal-kwalità.
Ma jistax jivverifika l-pasturizzazzjoni. Il-verifika tat-trattament bis-sħana tuża test tal-fosfatażi alkalina jew metodu vvalidat ieħor skont il-gwida tal-Codex dwar l-iġjene tal-ħalib. Tubu abjad jew blu ma jgħid xejn dwar l-istorja tal-ħin u tat-temperatura tal-lott.
Ma jistax jiċċertifika s-sikurezza tal-ikel. Is-sikurezza tiddependi fuq il-patoġeni, it-tossini diġà ffurmati, ir-residwi ta’ mediċini, il-kontaminanti kimiċi, l-istorja tal-katina tal-kesħa, u l-kontaminazzjoni wara t-teħid tal-kampjun. Il-Codex jittratta s-sikurezza tal-ħalib bħala katina ta’ miżuri ta’ kontroll aktar milli riżultat wieħed ta’ skrinjar.
Il-kuntest ta’ laboratorju tal-ikel mhuwiex ittestjar id-dar
F’laboratorju tal-ħalib, it-test jintuża għall-iskrinjar tal-ħalib li jidħol, għat-tqabbil tal-fornituri matul iż-żmien, jew għat-tagħlim tal-mikrobijoloġija redox taħt superviżjoni. Il-kampjuni huma traċċabbli. Ir-reaġenti huma standardizzati. It-temperaturi jiġu rreġistrati. L-iskart jintrema permezz tas-sistema tal-laboratorju għar-rimi tal-iskart.
L-ittestjar id-dar m’għandu xejn minn dan. Il-volumi mkejla fil-kċina huma approssimattivi. Il-konċentrazzjonijiet tal-koloranti mibjugħa online ivarjaw ħafna. L-inkubazzjoni spiss issir f’kamra sħuna minflok f’banju kkalibrat. Il-bidla fil-kulur xorta sseħħ, u dan jagħmel ir-riżultat jidher affidabbli minkejja li jkun nieqes kull kontroll li tah tifsira.
Ir-riskju aktar serju jinsab fl-imġiba. Tubu blu fid-dar iħajjar lil dak li jkun jixrob ħalib mhux ipproċessat li laboratorju xorta jibgħat għal għadd fuq pjanċi, skrinjar għall-patoġeni u kontrolli tar-residwi. It-test tal-blu tal-metilen fil-ħalib kien iddisinjat biex jikklassifika l-ħalib mhux ipproċessat meta jiġi riċevut, mhux biex japprovah għall-konsum. L-iskrinjar aktar rapidu bir-resażurina għandu l-istess limitu: qari aktar mgħaġġel tal-kulur, iżda xorta ebda tweġiba dwar il-patoġeni.
Regola qasira għall-bank tal-laboratorju
Standardizza l-kolorant, il-proporzjon, it-temperatura, it-taħlit, id-dawl u l-punt finali. Irrapporta l-ħin flimkien mal-isem tal-metodu u l-grad. Interpreta l-minuti flimkien mal-istorja tal-ħażna, it-tip ta’ flora, ir-residwi u l-kwalità tat-teħid tal-kampjun. Ħin qasir jindika attività li jistħoqqilha investigazzjoni. Ħin twil qatt ma jiċċertifika s-sikurezza.