Il-blu tal-metilen u l-ALS: għaliex ir-riżultati jvarjaw bejn mudelli sperimentali

Fittex il-blu tal-metilen u l-ALS u ssib żewġ stqarrijiet li jidhru li jikkontradixxu lil xulxin. Waħda tgħid li ż-żebgħa blu pproteġiet in-newroni f’mudelli tal-ALS. L-oħra tgħid li ma għamlet xejn f’ġurdien b’mudell tal-ALS. Iż-żewġ stqarrijiet jikkwotaw artikli xjentifiċi reali, u ż-żewġ artikli jistħoqqilhom jitqiesu bis-serjetà. Il-kontradizzjoni tisparixxi ladarba tiddikjara l-kunċett wara kull esperiment: il-mudell huwa l-istqarrija.

Riżultat f’dudu huwa stqarrija dwar dudu. Riżultat f’ħuta fl-istadju ta’ larva huwa stqarrija dwar ħuta fl-istadju ta’ larva. L-ebda wieħed minnhom ma huwa stqarrija dwar pazjent sakemm il-kors tal-marda f’mammiferu ma jikkonfermahx. Dan l-artiklu jqabbel iż-żewġ artikli xjentifiċi l-aktar ikkwotati ħdejn xulxin biex tkun tista’ tara għaliex it-tweġibiet tagħhom ivarjaw.

Iż-żewġ esperimenti f’tabella waħda

Żomm din it-tabella miftuħa waqt li taqra. Kull differenza importanti bejn l-istudji tinsab fiha.

Il-ġenetika tvarja, l-ispeċi jvarjaw, ir-rotta tad-dożaġġ tvarja, iż-żmien ivarja, u l-punti finali jvarjaw. Il-ġenotip huwa biss waħda minn ħames differenzi, għalhekk dawn iż-żewġ studji ma jistgħux jipprovaw li l-blu tal-metilen jaħdem b’mod selettiv fuq mogħdija waħda tal-ALS. Jipprovaw xi ħaġa aktar limitata iżda xorta utli: irkupru qawwi taħt esponiment dirett bikri f’mudelli sempliċi ma ttrasferiex għal kors ta’ marda f’mammiferu b’għoti kroniku mill-ħalq.

Ir-riżultat pożittiv: x’wera l-istudju fid-dud u fil-ħut

L-istudju tal-2012 fid-dud u fil-ħut esprima TDP-43 jew FUS uman mutanti fin-newroni motorji tad-dud u injetta mRNA uman mutanti fl-embrijuni tal-ħut. Dawn huma mudelli ta’ proteotossiċità. Jirriproduċu l-effetti tossiċi tal-proteina mutanti fuq il-moviment u l-forma tan-newroni fuq medda ta’ jiem, mhux il-kors sħiħ tal-ALS fil-bniedem adult fuq medda ta’ snin.

It-trattament beda kmieni ħafna. Id-dud kiber fuq agar li kien fih il-blu tal-metilen mit-tfaqqis. L-embrijuni tal-ħut tqiegħdu f’soluzzjoni tal-mediċina matul il-lejl, minn 24 siegħa wara l-fertilizzazzjoni, u l-imġiba ġiet ittestjata madwar jumejn wara. Ma kienx hemm barriera bejn id-demm u l-moħħ bejn il-mediċina u n-newron kif hemm f’mammiferu, u ma tkejjel l-ebda livell tal-mediċina fil-plażma jew fil-moħħ.

F’dawk il-kundizzjonijiet l-effetti kienu kbar u konsistenti. Kemm 6 kif ukoll 60 μM naqqsu l-paraliżi dipendenti fuq l-età fid-dud b’TDP-43 u FUS. Fit-12-il jum tal-istadju adult, bejn wieħed u ieħor 80 fil-mija tad-dud b’TDP-43 mhux trattat kien paralizzat, meta mqabbel ma’ madwar 10 fil-mija tad-dud trattat mit-tfaqqis. Test sinaptiku indika l-istess ħaġa: id-dud b’TDP-43 kien ipersensittiv għall-aldicarb, mediċina li tintuża biex tiġi eżaminata t-trażmissjoni newromuskolari, u l-blu tal-metilen ċaqlaq ir-rispons lura lejn in-normal. L-għadd ta’ projezzjonijiet tan-newroni motorji li kienu qed jiddeġeneraw naqas, bl-aktar effett ċar f’60 μM. Fil-ħut, l-għawm ikkawżat mill-mess tjieb b’mod sostanzjali u l-assoni motorji mqassra reġgħu kibru lejn tul normali f’30 jew 60 μM, għalkemm l-irkupru kien parzjali aktar milli sħiħ.

Id-data dwar l-istress ossidattiv hija konsistenti ma’ interpretazzjoni antiossidanti. Id-dud u l-ħut mutanti wrew indikaturi elevati ta’ speċijiet reattivi tal-ossiġnu li naqsu bit-trattament, u dud normali fuq il-blu tal-metilen baqa’ ħaj għal ħafna aktar żmien minn dud mhux trattat meta ġie espost għal aġent pro-ossidanti. Iżda żewġ limiti huma importanti. Il-livelli totali tal-proteini mutanti TDP-43 u FUS ma naqsux, u l-istudju ma kkwantifikax direttament l-aggregati tal-proteini, għalhekk juri rkupru funzjonali mingħajr ma jipprova t-tneħħija tal-aggregati. Kull min isegwi kif normalment jitfasslu l-ipoteżijiet dwar ir-redox u l-mitokondriji għandu jqis il-mekkaniżmu bħala appoġġjat iżda mhux stabbilit b’mod definittiv.

Iż-żmien kien l-aktar dettall istruttiv. Meta l-awturi stennew sal-5 jum tal-istadju adult biex jibdew it-trattament, ir-rata ta’ paraliżi fit-12-il jum kienet madwar 55 fil-mija minflok madwar 10 fil-mija bit-trattament mit-tfaqqis. L-istess mediċina, l-istess dudu, l-istess mutazzjoni, effett ħafna iżgħar. L-esponiment profilattiku bikri kien responsabbli għal ħafna mill-benefiċċju apparenti.

Ir-riżultat null: x’wera l-istudju fil-ġrieden b’SOD1

L-istudju tal-2011 fil-ġrieden staqsa mistoqsija aktar diffiċli f’sistema aktar stretta. Il-ġrieden konġeniċi b’SOD1 G93A jgħaddu minn rogħda fir-riġlejn ta’ wara għal indeboliment tal-mixi u telf tar-rifless li jerġa’ jqegħedhom fuq saqajhom, sa punt finali terminali ddefinit minn qabel. It-trattament beda qabel is-sintomi fil-45 jum u kompla kuljum, b’osservaturi li evalwaw l-istat newroloġiku fuq skala minn 0 sa 6. Dan huwa esperiment fuq il-kors sħiħ tal-marda, u għalhekk huwa eqreb lejn dak li jkun importanti għal pazjent minn kwalunkwe kurva tal-paraliżi f’dudu.

It-tweġibiet ewlenin kienu nulli. Il-bidu ġenerali tas-sintomi seħħ f’121 jum fil-kontrolli kontra 124 jum bil-blu tal-metilen, differenza li ma kinitx sinifikanti. Is-sopravivenza sal-istadju finali kienet 167 jum kontra 170 jum, ukoll mhux sinifikanti. Xi analiżijiet sekondarji ffavorew it-trattament: in-nisa wrew dewmien ta’ madwar 7 ijiem fil-bidu tas-sintomi, u l-annimali trattati qattgħu xi ftit aktar żmien fi stadji ħfief u inqas fi stadji severi. B’sottogruppi żgħar skont is-sess u ħafna tqabbil bejn l-istadji, dawk l-analiżijiet għandhom jinqraw bħala sors ta’ ipoteżijiet aktar milli bħala prova. Ma tkejlu ebda għadd ta’ newroni, ebda test tal-aggregazzjoni ta’ SOD1, u ebda markatur ossidattiv jew infjammatorju, għalhekk l-istudju lanqas ma jista’ jgħid jekk il-mediċina laħqitx il-miri tagħha u fallietx jew sempliċement qatt ma aġixxiet fuqhom b’din id-doża. Ġiet ittestjata doża waħda biss.

L-awturi nfushom ġibdu l-attenzjoni lejn l-aktar limitu fundamentali, li japplika fiż-żewġ direzzjonijiet. Il-mudell SOD1 G93A b’numru għoli ta’ kopji jirrappreżenta tajjeb il-marda kkawżata mit-tossiċità ta’ SOD1, iżda l-marda marbuta ma’ SOD1 hija sehem żgħir tal-ALS familjari u għandha bijoloġija differenti mill-biċċa l-kbira tal-marda sporadika. Huma ssuġġerew li l-kandidati jerġgħu jiġu ttestjati f’mudelli mammiferi bbażati fuq TDP-43. Minn dak iż-żmien din is-suġġeriment sar aktar ikkumplikat, għax l-awturi tal-istudju fid-dud u fil-ħut jinnotaw li studju separat tal-blu tal-metilen fil-ġrieden b’TDP-43 ukoll naqas milli jtejjeb ir-riżultati motorji. Għalhekk, kompost jista’ jidher qawwi f’sistema waħda b’TDP-43 u mingħajr effett f’sistema oħra b’TDP-43. Is-sistema hija importanti daqs il-ġene.

Għaliex titjib f’dudu jew f’ħuta ma jistax jistabbilixxi benefiċċju għall-pazjenti

Aħseb f’kull mudell bħala wieħed li jwieġeb mistoqsija differenti.

L-ewwel, il-bijoloġija tvarja. TDP-43 u FUS huma proteini li jintrabtu mal-aċidi nuklejċi u għandhom interazzjonijiet ġenetiċi komuni f’dawn is-sistemi sempliċi, filwaqt li t-tossiċità ta’ SOD1 tinvolvi mekkaniżmi prossimali li huma parzjalment distinti. Mediċina li ttaffi stress proteotossiku wieħed mhux bilfors ittaffi l-ieħor, u s-suċċess kontra espressjoni żejda fl-embrijuni mhux bilfors ibassar suċċess kontra newrodeġenerazzjoni bil-mod fl-adulti li tinvolvi infjammazzjoni, ċelloli glijali, u deterjorament sistemiku.

It-tieni, l-esponiment ivarja. Esponiment kontinwu f’banju b’konċentrazzjonijiet mikromolari mhuwiex dożaġġ mill-ħalq. L-assorbiment mill-musrana, il-metaboliżmu tal-ewwel passaġġ, l-irbit mal-proteini tal-plażma, il-penetrazzjoni fil-moħħ, u t-tneħħija mill-ġisem kollha jinsabu bejn doża li tinbela’ u newron motorju tas-sinsla tad-dahar. L-ebda studju ma kejjel il-livelli tal-mediċina fis-sistema nervuża, għalhekk l-ebda wieħed ma jista’ jqabbel il-konċentrazzjoni tiegħu ma’ dik tal-ieħor.

It-tielet, iż-żmien ivarja. Il-benefiċċji fid-dud u fil-ħut kienu jiddependu ħafna fuq trattament qabel ma akkumulat il-patoloġija. It-trattament fil-ġrieden ukoll beda qabel is-sintomi, u dan huwa punt b’saħħtu, iżda t-trattament fil-bniedem kważi dejjem jibda wara li jibdew is-sintomi, jiġifieri aktar tard minn hekk. Sinjal profilattiku f’test ta’ jumejn fuq embrijuni huwa punt tat-tluq għar-riċerka, mhux mudell tal-użu kliniku.

Ir-raba’, il-punti finali jvarjaw. Il-paraliżi fi 12-il jum, is-sensittività għall-aldicarb, it-tul tal-assoni f’mikrometri, u d-distanza tal-għawm huma fenotipi prossimali. Il-bidu tas-sintomi u s-sopravivenza f’mammiferu jintegraw kull proċess fil-ġisem li jikkumpensa jew jikkomplika. Il-mediċini ta’ spiss ibiddlu l-indikaturi prossimali mingħajr ma jbiddlu s-sopravivenza, u għalhekk jeżistu punti finali li jkejlu ż-żmien sa avveniment fil-mammiferi.

Il-qarrejja li jridu lista ta’ kontroll għall-aħbar li jmiss jistgħu jissellfu waħda minn kif taqra studji prekliniċi: staqsi dwar l-ispeċi, it-transġene, id-doża u r-rotta, jekk tkejlux il-livelli tal-mediċina, meta beda t-trattament meta mqabbel mal-patoloġija, jekk il-punt finali kienx fenotip fuq żmien qasir jew kors ta’ marda, u jekk l-effett ġiex riprodott fit-tieni laboratorju. Il-bażi usa’ tal-evidenza fil-bniedem għall-blu tal-metilen tibqa’ l-post fejn tiċċekkja jekk xi wieħed minn dawn is-sinjali bikrin żviluppax f’data klinika.

Xi jfisser dan għall-pazjenti u l-familji

Minn dawn l-artikli ma joħroġ ebda protokoll stabbilit tal-blu tal-metilen għall-ALS. L-istudju pożittiv jappoġġja aktar riċerka dwar mekkaniżmi ossidattivi u sinaptiċi fil-bijoloġija ta’ TDP-43 u FUS. L-istudju b’riżultat null ma jappoġġjax l-aspettattiva ta’ modifika tal-marda minn dożaġġ kroniku mill-ħalq b’dan l-esponiment f’mard tat-tip SOD1. Flimkien jiddeskrivu inkonsistenza bejn il-mudelli, mhux rakkomandazzjoni ta’ trattament.

Is-sigurtà jistħoqqilha l-istess evalwazzjoni kawta bħall-effikaċja. L-istudji tal-ALS fil-ġrieden ma jgħidu xejn dwar dożaġġ sikur fil-bniedem, u l-blu tal-metilen għandu riskji reali minħabba l-emoliżi fid-defiċjenza ta’ G6PD u t-tossiċità tas-serotonina meta jingħaqad ma’ mediċini serotonerġiċi. Suspett ta’ defiċjenza ta’ G6PD, użu attwali ta’ antidipressanti, u kwalunkwe bidla ppjanata fil-mediċini għandhom jiġu diskussi ma’ kliniku, bħalma għandha ssir reviżjoni tad-data ġenerali dwar is-sigurtà tal-blu tal-metilen qabel ma xi ħadd jaġixxi fuq aħbarijiet dwar riżultati tal-laboratorju.

Il-konklużjoni tista’ tinġabar f’sentenza waħda. Il-blu tal-metilen ipproduċa rkupru qawwi b’esponiment bikri fil-fenotipi tad-dud u tal-larvi tal-ħut b’TDP-43 u FUS, u essenzjalment ebda benefiċċju fil-bidu tas-sintomi jew fis-sopravivenza fi studju b’għoti kroniku mill-ħalq fil-ġrieden b’SOD1; għalhekk l-interpretazzjoni onesta hija evidenza dipendenti fuq il-mudell li ma tappoġġjax l-użu fil-pazjenti.