Agar EMB berbanding agar MacConkey: pemilihan dan interpretasi media

Seorang pelajar mencoret sampel air yang sama pada dua plat. Pada satu plat, muncul koloni gelap dengan kilauan hijau metalik. Pada plat yang satu lagi, muncul koloni merah jambu terang dengan halo berkabus. Kedua-dua plat diinokulasikan daripada tiub yang sama, diinkubasi bersebelahan, dan dibaca pada waktu yang sama. Pelajar itu bertanya plat mana yang betul.

Kedua-dua plat adalah betul. Kedua-duanya menjawab soalan yang berbeza. Kekeliruan timbul apabila kedua-dua media dianggap sebagai saringan yang boleh saling menggantikan untuk bakteria usus. Kedua-duanya berkongsi tujuan, iaitu memilih organisma enterik Gram-negatif dan membezakan fermenter laktosa daripada bukan fermenter, tetapi tujuan itu dilaksanakan melalui kimia dan logik visual yang berbeza. Setelah dua konsep asas ini difahami, pemilihan plat dan pembacaan koloni menjadi rutin.

Jawapan ringkas

Agar EMB menggunakan dua pewarna, eosin Y dan methylene blue, yang menjalankan dua fungsi serentak: kedua-duanya menghalang pertumbuhan Gram-positif dan memendak di sekitar pengeluar asid yang kuat untuk menghasilkan koloni gelap, secara klasik dengan kilauan hijau metalik bagi Escherichia coli. Agar MacConkey memisahkan fungsi tersebut: garam hempedu bersama crystal violet menghalang Gram-positif, laktosa menjadi substrat fermentasi, dan neutral red menunjukkan pembentukan asid sebagai koloni merah jambu atau merah. Jika tugasnya ialah demonstrasi presumptif E. coli yang jelas secara visual, EMB sesuai digunakan. Jika tugasnya ialah pengasingan mudah fermenter laktosa berwarna merah jambu daripada bukan fermenter yang tidak berwarna, khususnya dalam aliran kerja najis atau air kencing, MacConkey biasanya lebih mudah dibaca. Tiada satu pun plat yang mengenal pasti organisma berdasarkan warna semata-mata.

EMB: pewarna yang memilih dan melaporkan serentak

Konsep EMB menggabungkan pemilihan dan penunjuk dalam molekul yang sama. Protokol agar eosin methylene blue ASM menerangkan EMB sebagai media yang bersifat selektif dan pembezaan, dengan pasangan pewarna menghalang banyak organisma Gram-positif sementara fermentasi laktosa mendorong pengambilan dan pemendakan pewarna. Formulasi Levine standard mengandungi pepton, laktosa, fosfat, eosin Y, methylene blue, dan agar, seperti yang disenaraikan dalam kaedah FDA BAM untuk agar Levine EMB. Perhatikan bahawa resipi EMB yang lebih lama kadangkala menambahkan sukrosa bersama laktosa, manakala Levine EMB mengandungi laktosa tanpa sukrosa, jadi rekodkan formulasi yang disimpan oleh makmal anda.

Membaca EMB bermaksud membaca tingkah laku pewarna. Fermentasi laktosa yang kuat menghasilkan asid yang mencukupi untuk mendorong pemendakan pewarna yang banyak, menghasilkan pusat koloni E. coli berwarna biru hitam gelap dan, dalam keadaan klasik, kilauan hijau metalik apabila dilihat dalam cahaya pantulan. Fermenter yang lebih lemah seperti Enterobacter dan Klebsiella lazimnya tumbuh sebagai koloni mukoid merah jambu hingga ungu tanpa kilauan tersebut. Bukan fermenter seperti Salmonella, Shigella, dan Proteus biasanya tumbuh sebagai koloni tidak berwarna atau lut sinar kerana tidak menghasilkan lonjakan asid yang menyebabkan pewarna memendak. Gram-positif biasanya dihalang, walaupun tahap penghalangan berbeza-beza mengikut strain dan produk. Kimia lengkap penyediaan pewarna, termasuk sebab methylene blue bertindak sebagai pewarna kationik, termasuk dalam perbincangan berasingan tentang formulasi pewarna, manakala konteks mikroskopi umum terdapat dalam atlas kaedah pewarnaan. Artikel ini memberi tumpuan kepada pemilihan dan pembacaan plat.

Rajah di atas adalah ilustratif. Ia menunjukkan logik visual yang boleh dijangkakan: koloni gelap berkilau bersama jenis mukoid merah jambu dan jenis pucat pada EMB, berbanding jenis merah jambu dan pucat pada MacConkey. Gunakannya untuk mempelajari corak tersebut, kemudian sahkan setiap tafsiran dengan kawalan bergambar dan sisipan produk bagi media tepat yang digunakan di meja kerja anda.

MacConkey: fungsi berasingan, peraturan visual lebih mudah

Konsep MacConkey memberikan setiap fungsi kepada bahan yang berasingan. Protokol agar MacConkey ASM menggunakan kerangka selektif dan pembezaan yang sama, manakala kaedah FDA BAM untuk agar MacConkey menyenaraikan komponen berfungsi: pepton, laktosa, garam hempedu, garam, neutral red, crystal violet, dan agar. Garam hempedu bersama crystal violet memilih dengan menghalang Gram-positif. Laktosa membekalkan substrat fermentasi. Neutral red bertindak sebagai penunjuk pH, berubah menjadi merah jambu hingga merah apabila asid terbentuk, kadangkala dengan hempedu termendak di sekitar fermenter yang kuat.

Peraturan pembacaannya sengaja dibuat ringkas: merah jambu bermaksud fermenter laktosa, manakala tidak berwarna atau pucat bermaksud bukan fermenter. E. coli kelihatan merah jambu hingga merah, selalunya dengan halo mendakan hempedu. Klebsiella dan Enterobacter kelihatan merah jambu dan sering bersifat mukoid kerana kapsulnya. Salmonella, Shigella, Proteus, dan banyak rod Gram-negatif lain kelihatan tidak berwarna. Terdapat satu manfaat tambahan yang penting dalam makmal pengajaran: garam hempedu lazimnya mengurangkan pergerakan berkelompok Proteus, jadi koloni terasing lebih mudah diperoleh pada MacConkey berbanding media tidak selektif, walaupun penghalangan tidak mutlak dan alternatif tanpa garam tersedia apabila kawalan pergerakan berkelompok menjadi keutamaan.

Sebab molekul pewarna ini bertindak sedemikian berkaitan dengan cas dan struktur. Methylene blue ialah pewarna phenothiazine kationik yang struktur dan sifatnya menerangkan afinitinya terhadap permukaan bakteria berasid, iaitu afiniti yang sama yang berperanan apabila ia memendak dalam zon berasid pada EMB.

Perbandingan sepintas lalu

Baca jadual ini sebagai prosedur membuat keputusan. Apabila latihan memerlukan pelajar melihat julat kekuatan fermentasi dengan satu titik akhir yang jelas, EMB menunjukkannya. Apabila latihan memerlukan pengasingan binari yang pantas sebelum pengesahan biokimia, MacConkey menunjukkannya.

Media mana untuk sampel mana

Untuk latihan air yang bertujuan mengenal pasti secara presumptif koliform najis atau E. coli, EMB menarik kerana kilauannya mudah dibezakan secara visual. MacConkey juga sesuai untuk Gram-negatif enterik dan mempunyai sejarah penggunaan dalam analisis air, tetapi tiada satu pun plat ini menggantikan kaedah kawal selia untuk air, yang mungkin menetapkan media seperti modified mTEC atau MI bergantung pada ujian. Semak kaedah yang wajib diikuti oleh makmal anda.

Untuk pengasingan gaya sampel najis antara fermenter dan bukan fermenter, MacConkey secara amnya lebih berguna antara kedua-duanya. Kerja praktikal najis untuk Salmonella atau Shigella biasanya menambahkan media enterik yang lebih selektif seperti XLD atau Hektoen enteric dan tidak bergantung pada MacConkey sahaja.

Untuk pengajaran gaya sampel air kencing yang meniru aliran kerja klinikal, gabungkan MacConkey dengan agar darah. MacConkey menyediakan pengasingan awal Gram-negatif manakala agar darah memulihkan organisma yang dihalang oleh MacConkey. Gabungan ini lazim dalam penerangan klinikal mengenai penyediaan kultur air kencing.

Untuk pengajaran konsep secara tulen, gunakan kedua-duanya. EMB mengajar bahawa kekuatan fermentasi penting dan bahawa satu molekul boleh menjalankan dua fungsi. MacConkey mengajar reka bentuk modular: pemilih, substrat, dan penunjuk dikekalkan berasingan. Pelajar yang mencoret E. coli yang diketahui, Klebsiella aerogenes yang diketahui, dan Salmonella yang diketahui secara bersebelahan pada kedua-dua media jarang mengelirukan dua logik ini lagi.

Perangkap pembacaan yang berulang setiap penggal

Kegagalan yang paling lazim ialah membuat pengenalpastian berdasarkan warna semata-mata. Warna merah jambu pada MacConkey boleh menunjukkan E. coli, Klebsiella, Enterobacter, atau fermenter lain. Tidak berwarna boleh menunjukkan Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas, atau bukan fermenter lain. Warna ialah fenotip saringan yang mengarahkan kerja pengesahan seperti pewarnaan Gram, oksidase, panel biokimia, atau pengenalpastian menggunakan instrumen, bukannya nama spesies.

Kegagalan kedua ialah mentafsir ketiadaan kilauan secara berlebihan. Sesetengah koloni E. coli sebenar, khususnya yang terasing, menghasilkan sedikit atau langsung tiada kilauan metalik pada EMB. Ketiadaan kilauan tidak mengecualikan E. coli, dan kehadiran kilauan tidak membuktikannya. Anggap kilauan sebagai petunjuk presumptif.

Kegagalan ketiga ialah membandingkan plat dengan umur yang berbeza. Fermenter laktosa tertunda boleh berubah menjadi merah jambu pada MacConkey selepas inkubasi berpanjangan, yang mengaburkan pemisahan jelas antara fermenter dengan bukan fermenter. Baca pada waktu yang ditetapkan oleh makmal dan rekodkan tempoh inkubasi bersama keputusan.

Kegagalan keempat ialah membaca pertumbuhan bercampur sebagai satu organisma. Koloni merah jambu bersebelahan dengan koloni tidak berwarna menunjukkan dua fenotip, bukannya satu bentuk perantaraan. Pilih koloni yang terasing dengan baik dan kendalikan setiap morfotaip secara berasingan. Tekstur mukoid mewujudkan perangkap yang serupa: Klebsiella dan Enterobacter kedua-duanya boleh kelihatan mukoid, jadi kapsul sahaja tidak pernah menentukan nama organisma. Organisma yang dahulu diajar sebagai Enterobacter aerogenes kini diklasifikasikan sebagai Klebsiella aerogenes, yang menerangkan mengapa carta lama dan label baharu kelihatan bercanggah.

Kawalan dan peraturan penutup

Jalankan kawalan bergambar atau kawalan segar pada setiap sesi: E. coli untuk tindak balas fermenter yang kuat, Klebsiella aerogenes untuk fermentasi mukoid tanpa kilauan klasik, strain Salmonella untuk tindak balas bukan fermenter yang tidak berwarna, dan Staphylococcus aureus untuk mengesahkan penghalangan Gram-positif pada produk tepat yang anda gunakan. Padankan nombor strain dan kriteria penerimaan dengan sisipan pengilang, kerana selektiviti berubah mengikut kandungan hempedu, crystal violet, dan pewarna.

Ingat satu ayat di meja kerja. EMB menggunakan pewarna yang memilih dan melaporkan serentak, menghasilkan isyarat E. coli yang jelas tetapi memerlukan pembacaan yang lebih halus. MacConkey memisahkan proses pemilihan daripada proses pelaporan, menghasilkan pengasingan mudah antara merah jambu dengan pucat tetapi memberikan kurang perincian tentang fermentasi. Pilih media yang konsepnya sepadan dengan soalan, sahkan warna dengan ujian yang sesuai, dan kedua-dua plat tidak lagi bersaing tetapi mula saling melengkapi.