EMB агар дээрх E. coli болон бусад колонийн төрхийг тайлбарлах нь

Нэг оюутан үл мэдэгдэх бичил биетнийг эозин-метилен хөх агар дээр зурааслан тарьж, шөнөжин инкубацласны дараа ногоон гялбаатай бараан колони ургасан аягыг ажиглав. Тэмдэглэлийн дэвтэртээ “E. coli, баталгаажсан” гэж бичжээ. Энэ тэмдэглэл нь аяган дээрх ажиглалтаар нотолж чадахаас илүү дүгнэлт хийсэн байна. Аяга нь тодорхой нөхцөл дэх өсөлт, исгэлтийн фенотипийг харуулдаг. Зүйлийг тогтоох нь тусдаа нотолгоо шаардсан өөр дүгнэлт юм.

Энэ гарын авлагад EMB агарийн үр дүнг тайлбарлахад анхаарна. Үндсэн зарчмыг тайлбарлаж, хяналттай жишээ аягануудын атласаар дамжуулан ажиглах аргыг үзүүлж, сурах бичгийн дүр зураг төөрөгдүүлж болох тохиолдлуудыг нэрлэнэ.

Аяганы цаадах зарчим

EMB агар нь сонгомол бөгөөд ялган таних тэжээлт орчин юм. Эозин Y ба метилен хөх будаг нь олон Грам эерэг бичил биетний өсөлтийг дарангуйлдаг тул энэ орчин Грам сөрөг бичил биетний өсөлтийг дэмжинэ. Мөн эдгээр будаг индикаторын үүрэг гүйцэтгэдэг: бичил биетэн орчинд байгаа сахарыг исгэж, тухайн хэсэгт хангалттай хүчил үүсгэхэд колони будгийг ихээр шингээж, бараан нил ягаанаас хөх хар өнгөтэй болдог. Хүчил эрчимтэй үүсэх үед колонийн гадаргууд металлаг ногоон солонгорсон гялбаа илэрч болно. Эозин-метилен хөх агарийн аяганы ASM протокол нь сонгомол үйлчлэл ба ялган таних энэ хослолыг тайлбарлаж, сургалтад зориулсан лавлах гэрэл зургуудыг өгдөг.

Аливаа үр дүнг тайлбарлахаас өмнө нэг чухал зүйлийг шалгах хэрэгтэй: ямар найрлагатай орчин хэрэглэж байгааг нягтал. Хуучны Holt Harris Teague найрлагад лактоз болон сахароз хоёулаа байдаг бол Levine EMB нь зөвхөн лактоз агуулдаг. Serratia marcescens-ийн олон изолятын адил сахарозыг исгэдэг боловч лактозыг исгэдэггүй бичил биетэн энэ хоёр хувилбарт өөр төрхтэй байж болно. EMB орчны үйлдвэрлэгчийн баримт бичиг энэ найрлагын ялгааг тодорхой заасан байдаг. Үр дүнгийн хамт үйлдвэрлэгч болон найрлагыг тэмдэглэлийн дэвтэртээ бич.

Бэлтгэсэн, тарилга хийгээгүй EMB агар нь ихэвчлэн улаан хүрнээс улаавтар нил ягаан өнгөтэй, заримдаа ногоовтор туяатай эсвэл нарийн тунадастай байдаг. Энэ суурь өнгө нь өсөлт биш юм. Ажиглалт бүрийг тарилга хийгээгүй аяга эсвэл баримтжуулсан анхны төрхтэй харьцуул. Сургалтын протоколд өөрөөр заагаагүй бол анхны тарилгатай аягыг 35 to 37 C-д аэроб нөхцөлд ойролцоогоор 18 to 24 цаг инкубацласны дараа ажигла. Инкубацлах хугацааг сунгах нь исгэлтээс үүдсэн төрхийг өөрчилж болно.

Аягыг хэрхэн ажиглах вэ

Хоёр төрлийн гэрэлтүүлэг ашигла. Эхлээд ойсон эсвэл ташуу туссан гэрэлд аягыг шалгаж, хазайлга: металлаг гялбаа нь солонгордог тул харах өнцгөөс хамааран үзэгдэж эсвэл алга болж болно. Дараа нь нэвт туссан гэрлээр колонийн өнгө болон бараан төвийг үнэл. Нягт ургалт болон хөрш колониуд нь тухайн хэсгийн хүчил хуримтлалд нөлөөлж, өнгийг сулруулж эсвэл тодруулж болох тул сайтар тусгаарлагдсан колониос ажиглалтаа хий. ASM-ийн зургийн цуглуулга үүнийг шууд харуулдаг: холимог өсгөвөр дэх E. coli нь эргэн тойрны бичил биетнүүд хүчиллэг орчныг өөрчилснөөс хүлээгдэж буй гялбаагаа алдаж болно.

Дадлагын ажилд боломжтой бол хяналтын өсгөврүүдийг оруул. Сургалтад түгээмэл хэрэглэдэг багц нь хөх хар өнгө, металлаг гялбааны фенотипийн хяналт болгон E. coli ATCC 25922; өнгөгүй фенотипийн хяналт болгон Salmonella Typhimurium ATCC 14028 эсвэл Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 зэрэг исгэлт явуулдаггүй бичил биетэн; дарангуйлалтын хяналт болгон Enterococcus faecalis эсвэл Staphylococcus aureus зэрэг Грам эерэг бичил биетнээс бүрддэг. Эдгээрийг EMB орчны чанарын хяналтын стандарт хүснэгтүүдэд жагсаасан байдаг. Эерэг хяналтад гялбаа байхгүй бол үл мэдэгдэх бичил биетнийг эргэлзэхээсээ өмнө инкубацлах нөхцөл, ургалтын нягтрал эсвэл орчны найрлагыг шалга.

Жишээ аягануудын атлас

Доорх аяганууд нь зохиомлоор бүтээсэн дүрслэл бөгөөд бодит өсгөврийн гэрэл зураг биш юм. Эдгээр нь аль нэг омгийн яг тодорхой өнгийг бус, анхаарах хэв шинжийг харуулна. Тэдгээрийг ASM-ийн лавлах гэрэл зургууд болон сургалтын лабораторийн бодит аягануудтай харьцуул.

Аяга 1: EMB агар дээрх Escherichia coli, лактозыг эрчимтэй исгэгч

EMB агар дээрх E. coli нь ихэвчлэн бараан нил ягаанаас хөх хар өнгөтэй бөгөөд хүчил эрчимтэй үүсгэдгийн улмаас бараан төв, металлаг ногоон гялбаатай байдаг. Энэ гялбаа нь оюутнуудын эрж хайдаг алдартай шинж боловч түүнийг тодорхойлох зайлшгүй шинж бус, дэмжих нотолгоо гэж үз. Гялбааны эрчим нь омог, инкубацлах хугацаа, колонийн нягтрал, харах өнцгөөс хамааран өөрчлөгдөнө. Гялбаа байхгүй нь E. coli биш гэдгийг нотлохгүй, харин гялбаагүй бараан колони нь өөр хэд хэдэн исгэгч бичил биетнийг сэжиглэх үндэс болдог. Цаашдын аливаа шинжилгээнд нягт ургасан хэсгээс дүгнэлт хийхийн оронд сайтар тусгаарлагдсан колони сонго.

Аяга 2: EMB агар дээрх Klebsiella pneumoniae, салслаг исгэгч

EMB агар дээрх Klebsiella pneumoniae нь ихэвчлэн ягаан нил ягаанаас хүрэн нил ягаан туяатай, том, гялалзсан, салслаг колони үүсгэдэг. Тэдгээр нь олонтоо бараан төвтэй боловч ихэвчлэн хүчтэй металлаг гялбаагүй байдаг. Enterobacter зэрэг төстэй исгэгч бичил биетэнд мөн ийм морфологи ажиглагдана. Салслаг байдал болон колонийн хэмжээ нь тайлбарын нэг хэсэг юм: жижиг, хавтгай ягаан колони нь том, бөмбөгөр, салслаг колониос өөр ач холбогдолтой. E. coli-ийн нэгэн адил энэ аяга исгэлтийн фенотипийг таамаглуулах бөгөөд зүйлийн түвшинд нэрлэхийн тулд доор тайлбарласан биохимийн баталгаажуулалт шаардлагатай.

Аяга 3: EMB агар дээрх Salmonella болон бусад исгэлт явуулдаггүй бичил биетэн, өнгөгүй колони

EMB агар дээрх Salmonella болон лактоз исгэдэггүй бусад бичил биетэн, тухайлбал Shigella болон Pseudomonas-ийн олон изолят нь ихэвчлэн өнгөгүй, хагас тунгалаг эсвэл цайвар хув шар колони үүсгэн ургадаг. Зарим найрлага, нөхцөлд бүдэг ягаавтар туяа үүсдэг тул цайвар ягаан колони заавал исгэгч байна гэсэн үг биш. EMB нь Salmonella-г Shigella болон бусад исгэлт явуулдаггүй бичил биетнээс ялгахгүй; энэ ялгааг дараагийн шинжилгээгээр тогтооно. Мөн E. coli-той төстэй металлаг колони үүсгэдэг, лактоз эерэг Salmonella-ийн омгууд баримтжуулагдсан байдгийг анхаар. Энэ нь ганц аягаар эцсийн дүгнэлт хийж болохгүйн бас нэг шалтгаан юм.

Аяга 4: Serratia marcescens ба найрлагаас үүдэх төөрөгдөл

Оюутнууд улаан колони хүлээгээд аяганы үр дүнг буруу тайлбарлах нь элбэг тул Serratia marcescens-д тусгай хэсэг зориулав. Эмнэлзүйн изолятуудын ихэнх нь лактоз исгэдэггүй учраас Levine EMB дээр ихэвчлэн цайвар эсвэл бүдэг өнгөтэй харагддаг. Олон изолят сахароз исгэдэг тул сахароз агуулсан найрлагад илүү бараан эсвэл хүчил үүсэлттэй илүү холбоотой урвал үзүүлж болно. Мөн 35 to 37 C-д сонгодог улаан продигиозин пигмент үүснэ гэж бүү хүлээ; инкубаторын температурт пигмент үүсэлт найдвартай биш. Протоколд EMB агар дээрх Serratia marcescens-ийг дурдсан бол тухайн тайлбар ямар найрлагыг үндэслэснийг шалга. Serratia-ийн бодисын солилцооны тойм нь энэ төөрөгдлийн цаадах лактоз сөрөг, сахарозын хувьд хувьсамтгай хэв шинжийг нэгтгэн тайлбарладаг.

Аяга 5: Хяналтууд ба өсөлт нь дарангуйлагдсан бичил биетнүүд

Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus, Bacillus зэрэг Грам эерэг бичил биетний өсөлт EMB агар дээр ерөнхийдөө дарангуйлагддаг эсвэл эрс буурдаг ч бүх омогт дарангуйлалт бүрэн явагдахгүй. Хяналтын багц нь тайлбарыг бодит үндэслэлтэй болгоно: E. coli-ийн хяналт хөх хар өнгө, гялбаатай сайн ургалттай; исгэлт явуулдаггүй бичил биетний хяналт өнгөгүй ургалттай; дарангуйлалтын хяналт бага ургалттай эсвэл огт ургалтгүй байх ёстой. Дарангуйлалтын хяналт сайн ургавал сонгомол үйлчлэл алдагдсан бөгөөд тухайн багцын бусад бүх үр дүн эргэлзээтэй болно. Будалтын аргууд нь өсгөврийн орчноос өөр асуултад хариулдаг; лабораторийн тавиур шилний будалтын талаар метилен хөх будалтын атласаас үзнэ үү.

Хязгаарыг нь харгалзсан харьцуулалт

Төөрөгдүүлж болох төрхийг гурван өгүүлбэрээр дүгнэж болно. Бараан өнгө нь E. coli гэсэн үг биш, учир нь Klebsiella, Enterobacter болон бусад исгэгчид гялбаагүй бараан төв үүсгэдэг. Ягаан өнгө нь Klebsiella гэсэн үг биш, учир нь дунд зэргийн эсвэл удаан исгэгчид, мөн ерөнхийдөө исгэлт явуулдаггүйд тооцогддог зарим бичил биетэн ягаан эсвэл цайвар нил ягаан харагддаг. Гялбаа нь E. coli гэдгийг эцэслэн тогтоохгүй, учир нь бусад эрчимтэй исгэгчид ч үүнийг үүсгэж болно. Сургалтын протокол болон түүний холимог өсгөврийн зургууд эдгээр алдаа бүрийг харуулдаг.

Баталгаажуулалтын хязгаар

EMB агар нь зүйлийг бус, фенотипийг харуулдаг. Өөр өөр бичил биетэн ижил төрхтэй колони үүсгэж болох бөгөөд нэг бичил биетэн ч омог, насжилт, ургалтын нягтрал, орчны найрлага, инкубацлах нөхцөлөөс шалтгаалан сурах бичигт дүрсэлсэн төрхөөсөө зөрж болно. Тиймээс сургалтын болон эмнэлзүйн ажлын явцад EMB дээрх морфологийг урьдчилсан таамаглал гэж үздэг.

Оюутны үндэслэлтэй ажлын дараалал нь: тусгаарлагдсан колонийг тодорхойлох (хэмжээ, өнгө, төв, ташуу гэрэл дэх гялбаа, салслаг шинж), орчны найрлага, инкубацлах хугацаа ба температур, хяналтуудыг тэмдэглэх; дараа нь баталгаажуулах аливаа шинжилгээний өмнө сайтар тусгаарлагдсан колонийг дамжуулан өсгөвөрлөж цэвэр өсгөвөр гаргах явдал юм. Түгээмэл дараагийн шинжилгээнд E. coli болон колиформыг урьдчилан танихад Грам будалт ба IMViC урвалууд, гэдэсний бүлгийн бичил биетэнд TSI эсвэл KIA болон тухайн бичил биетэнд тохирсон биохимийн сорилын багцууд орно. Даалгавар шаардсан тохиолдолд ийлдэс судлалын арга, MALDI TOF эсвэл баталгаажсан бусад таних аргыг хэрэглэнэ. EMB нь гэдэсний бүлгийн бичил биетний сонгомол болон ялган таних орчнуудын дунд ямар байр суурьтайг ойлгохын тулд гэдэсний бүлгийн бичил биетний өсгөврийн орчны танилцуулгууд болон Грам будалтын дараах шинжилгээний тухай үзнэ үү. Тавиур шил дээрх хөх будалт юуг нотолж чадах, юуг нотолж чадахгүй гэсэн холбоотой асуултын хувьд метилен хөх будалтын атлас мөн адил ажиглалт ба дүгнэлтийг тусад нь авч үздэг.

Дүгнэлтээсээ өмнө ажиглалтаа бич. “Levine EMB дээр 24 цагийн дараа харах өнцгөөс хамаарсан ногоон гялбаатай бараан хөх хар колони үүссэн нь лактозын эрчимтэй исгэлттэй нийцэж байна” гэвэл үндэслэлтэй. Харин “E. coli, баталгаажсан” гэж бичихэд аяга дангаараа хангаж чадахгүй баталгаажуулах шат шаардлагатай.