G6PD ലബോറട്ടറി പരിശോധനകളിലെ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ: ഈ വർണ്ണകം യഥാർത്ഥത്തിൽ ചെയ്യുന്നതെന്ത്

ഇൻക്യുബേഷനുശേഷം ഒരു വിദ്യാർത്ഥി രണ്ട് ട്യൂബുകൾ നിരീക്ഷിക്കുന്നു. ഒന്നിന് പ്രതീക്ഷിച്ച നിറം വന്നിട്ടുണ്ട്. മറ്റൊന്നിന് വന്നിട്ടില്ല. രണ്ടാമത്തെ രോഗിക്ക് ഗ്ലൂക്കോസ്-6-ഫോസ്ഫേറ്റ് ഡീഹൈഡ്രജനേസ് കുറവാണെന്ന് വിദ്യാർത്ഥി നിഗമനത്തിലെത്തുന്നു. ആ നിഗമനം ശരിയായിരിക്കാം. എന്നാൽ പരിശോധന പ്രവർത്തിക്കുന്നതിന്റെ അടിസ്ഥാന ആശയം ആ യുക്തിയിൽ വിട്ടുപോകുന്നു. ട്യൂബിലുള്ള ഒന്നും എൻസൈമിനെ നേരിട്ട് അളക്കുന്നില്ല. മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവിനെ ഇടനിലക്കാരനാക്കി, എൻസൈം ഉത്പാദിപ്പിക്കുന്നതെയാണ് ട്യൂബിൽ അളക്കുന്നത്.

ഈ പരോക്ഷ രീതി വ്യക്തമായാൽ, നടപടിക്രമവും നിയന്ത്രണ സാമ്പിളുകളും തെറ്റായ ഫലങ്ങളുടെ നീണ്ട പട്ടികയും യാദൃച്ഛികമായി നിശ്ചയിച്ചവയല്ലെന്ന് മനസ്സിലാകും.

ചുരുക്കത്തിലുള്ള ഉത്തരം

G6PD പരിശോധനയിൽ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ ഒരു റെഡോക്സ് സൂചകമാണ്. G6PD എൻസൈം NADPH ഉത്പാദിപ്പിക്കുന്നു. NADPH-നെ ആശ്രയിക്കുന്ന സംവിധാനങ്ങൾ നീലനിറമുള്ള മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവിനെ നിരോക്സീകരിച്ച് അതിന്റെ നിറമില്ലാത്ത ല്യൂക്കോ രൂപത്തിലാക്കുന്നു (അല്ലെങ്കിൽ ഇലക്ട്രോണുകൾ കൈമാറാൻ അത് ഉപയോഗിക്കുന്നു). സാധാരണ എൻസൈം പ്രവർത്തനം കാര്യക്ഷമമായ നിരോക്സീകരണത്തിന് കാരണമാകുന്നു. പ്രവർത്തനത്തിലെ കുറവ് മന്ദഗതിയിലുള്ളതോ അപൂർണ്ണമായതോ ആയ നിരോക്സീകരണത്തിന് കാരണമാകുന്നു. പരിശോധന നൽകുന്ന സൂചന ഇത്രയുമാണ്.

ചരിത്രപരമായ രണ്ട് രീതികൾ ഒരേ വർണ്ണകം ഉപയോഗിക്കുന്നുണ്ടെങ്കിലും അവയുടെ അന്തിമ സൂചകങ്ങൾ വ്യത്യസ്തമാണ്. ഇവ വേർതിരിച്ചു മനസ്സിലാക്കിയാൽ ആശയക്കുഴപ്പത്തിന്റെ ഭൂരിഭാഗവും മാറും.

രണ്ട് പരിശോധനകൾ, ഒരു വർണ്ണകം, വ്യത്യസ്ത അന്തിമ സൂചകങ്ങൾ

ആദ്യത്തേത് നേരിട്ടുള്ള മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ നിരോക്സീകരണ പരിശോധനയാണ്. Sass-ഉം സഹപ്രവർത്തകരും വിവരിച്ച ഈ രീതി പിന്നീട് Gibbs വിലയിരുത്തി. ഇവിടെ അന്തിമ സൂചകം വർണ്ണകം തന്നെയാണ്: ഓക്സീകരിക്കപ്പെട്ട നീല മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ നിരോക്സീകരിക്കപ്പെട്ട് നിറമില്ലാത്ത ല്യൂക്കോമെത്തിലീൻ ബ്ലൂവിലേക്ക് മാറുന്നു. ഈ മാറ്റത്തിന്റെ വേഗം NADPH ഉത്പാദിപ്പിക്കാനുള്ള ശേഷിയെ പ്രതിഫലിപ്പിക്കുന്നു. ആദ്യകാല സ്ക്രീനിംഗ് പഠനപ്രബന്ധം PubMed-ൽ Sass എന്നിവർ (1966) എന്ന പേരിൽ സൂചികപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്.

രണ്ടാമത്തേത് Brewer മെത്തീമോഗ്ലോബിൻ നിരോക്സീകരണ പരിശോധനയാണ്. ആദ്യം സോഡിയം നൈട്രൈറ്റ് ഹീമോഗ്ലോബിനെ ഓക്സീകരിച്ച് തവിട്ടുനിറമുള്ള മെത്തീമോഗ്ലോബിനാക്കുന്നു. തുടർന്ന് മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ ഇലക്ട്രോൺ കൈമാറ്റത്തിന്റെ മധ്യസ്ഥനായി പ്രവർത്തിക്കുന്നു: നിരോക്സീകരിക്കപ്പെട്ട മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ മെത്തീമോഗ്ലോബിന് നിരോക്സീകരണ തുല്യങ്ങൾ കൈമാറി അതിനെ വീണ്ടും ചുവന്ന ഹീമോഗ്ലോബിനാക്കുന്നു. അതിനാൽ ദൃശ്യമായ അന്തിമ സൂചകം തവിട്ടുനിറവും ചുവപ്പുനിറവും തമ്മിലുള്ള വ്യത്യാസമാണ്; നീലനിറവും നിറമില്ലായ്മയും തമ്മിലുള്ളതല്ല. ആദ്യ രീതി ലോകാരോഗ്യ സംഘടനയുടെ ബുള്ളറ്റിനിൽ (Brewer എന്നിവർ, 1960) പ്രസിദ്ധീകരിച്ചു.

Brewer പരിശോധനയെ വർണ്ണകത്തിന്റെ നിറം നീക്കുന്ന പരിശോധന എന്നു വിളിക്കുന്നത് രാസപരമായി കൃത്യമല്ല. വർണ്ണകം ചാക്രികമായി പ്രവർത്തിക്കുന്നു; നിറം മാറുന്നത് ഹീമോഗ്ലോബിനാണ്. താഴെയുള്ള ചിത്രം രണ്ട് പാതകളും കാണിക്കുന്നു.

അടിസ്ഥാന രാസപ്രവർത്തനം

പെന്റോസ് ഫോസ്ഫേറ്റ് പാതയിലെ ആദ്യ ഓക്സീകരണ ഘട്ടത്തെ G6PD ഉത്തേജിപ്പിക്കുന്നു:

Glucose-6-phosphate + NADP+ becomes 6-phosphogluconolactone + NADPH + H+

പക്വമായ ചുവന്ന രക്തകോശങ്ങൾ NADPH-നായി ഈ പാതയെ വളരെയധികം ആശ്രയിക്കുന്നു. Blood-ൽ Luzzatto-ഉം സഹപ്രവർത്തകരും (2020) പ്രസിദ്ധീകരിച്ച അവലോകനം ഇത് വിശദീകരിക്കുന്നു. NADPH ഗ്ലൂട്ടത്തയോണിനെ നിരോക്സീകരിക്കപ്പെട്ട നിലയിൽ നിലനിർത്തുകയും ഓക്സീകരണം മൂലമുള്ള കേടുപാടുകളിൽനിന്ന് കോശത്തെ സംരക്ഷിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ ഈ സംവിധാനത്തിൽ ഇലക്ട്രോൺ സ്വീകരിക്കുന്ന ഘടകമായി ഇടപെടുന്നു. മതിയായ G6PD മതിയായ NADPH നൽകുന്നു; അത് കാര്യക്ഷമമായ നിരോക്സീകരണത്തിന് വഴിയൊരുക്കുന്നു. G6PD കുറവാണെങ്കിൽ ഈ ശൃംഖലയുടെ ആദ്യ കണ്ണിയിൽത്തന്നെ തടസ്സമുണ്ടാകുന്നു.

വർണ്ണകത്തെ എൻജിനായല്ല, ഇന്ധനനില കാണിക്കുന്ന മീറ്ററായി കരുതുക. അത് NADPH ലഭ്യതയെക്കുറിച്ചാണ് സൂചിപ്പിക്കുന്നത്. ഈ ലഭ്യതയെയോ ഫലവായനയെയോ മാറ്റുന്ന മറ്റേതൊരു ഘടകത്തിനും ജീനിൽ മാറ്റമൊന്നുമില്ലാതെതന്നെ മീറ്ററിന്റെ സൂചി നീക്കാൻ കഴിയും.

Brewer രീതിയിലുള്ള പരിശോധന എങ്ങനെ നടത്തുന്നു

പതിറ്റാണ്ടുകൾക്കിടെ അഭികാരകങ്ങളുടെ ചേരുവകളും അനുപാതങ്ങളും മാറിയിട്ടുണ്ട്. അതിനാൽ പഠനാവശ്യത്തിനുള്ള വിവരണത്തെ ക്ലിനിക്കൽ പ്രോട്ടോക്കോളായി തെറ്റിദ്ധരിക്കരുത്. ഓരോ ലബോറട്ടറിയും സാധുത ഉറപ്പാക്കിയ സ്വന്തം മാനക പ്രവർത്തന നടപടിക്രമമാണ് പിന്തുടരുന്നത്. ഈ മുന്നറിയിപ്പോടെ, പരമ്പരാഗത ട്യൂബ് പരിശോധനയുടെ ക്രമം താഴെ നൽകുന്നു. മൂന്ന് ട്യൂബുകളും 3 മണിക്കൂർ ഇൻക്യുബേഷനും ഉപയോഗിച്ച രൂപം പ്രസിദ്ധീകരിച്ച ഈ പ്രയോഗത്തിൽ രേഖപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്:

1. രോഗിയുടെ ട്യൂബ്: സമ്പൂർണ്ണ രക്തത്തോടൊപ്പം ഗ്ലൂക്കോസ്, സോഡിയം നൈട്രൈറ്റ്, മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ എന്നിവ. നൈട്രൈറ്റ് മെത്തീമോഗ്ലോബിൻ സൃഷ്ടിക്കുന്നു, ഗ്ലൂക്കോസ് ചുവന്ന രക്തകോശങ്ങളുടെ ഉപാപചയത്തിന് ആവശ്യമായ ഇന്ധനം നൽകുന്നു, വർണ്ണകം NADPH-നെ ആശ്രയിച്ചുള്ള കൈമാറ്റ സംവിധാനം ഒരുക്കുന്നു.
2. ഓക്സീകരിക്കപ്പെട്ട നിയന്ത്രണ സാമ്പിൾ: രക്തത്തോടൊപ്പം നൈട്രൈറ്റും ഗ്ലൂക്കോസും, എന്നാൽ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ ഇല്ല. ഇത് തവിട്ടുനിറമുള്ള മെത്തീമോഗ്ലോബിൻ എന്ന അന്തിമ സൂചകം കാണിക്കുന്നു; കുറവിനെ സൂചിപ്പിക്കുന്ന മാതൃകയാണിത്.
3. ഹീമോഗ്ലോബിൻ നിയന്ത്രണ സാമ്പിൾ: രക്തത്തോടൊപ്പം വെള്ളം. ഇത് ചുവന്ന ഹീമോഗ്ലോബിൻ എന്ന അന്തിമ സൂചകം കാണിക്കുന്നു; സാധാരണ മാതൃകയാണിത്.
4. ഇൻക്യുബേറ്റ് ചെയ്യുക: എല്ലാ ട്യൂബുകളും ഏകദേശം 37 C-ൽ, സാധാരണയായി 3 മണിക്കൂർ, മൃദുവായി കലർത്തിക്കൊണ്ട് സൂക്ഷിക്കുക.
5. നേർപ്പിക്കുക: ഓരോ ട്യൂബിൽനിന്നും ചെറിയൊരു അളവ് വാറ്റിയ വെള്ളത്തിൽ ചേർക്കുക. കോശങ്ങൾ വിഘടിപ്പിക്കാനും നിറങ്ങൾ താരതമ്യം ചെയ്യുന്നത് വ്യക്തമാക്കാനുമാണിത്.
6. താരതമ്യം ചെയ്യുക: രോഗിയുടെ ട്യൂബിനെ രണ്ട് നിയന്ത്രണ സാമ്പിളുകളുമായും താരതമ്യം ചെയ്യുക. നിറം വീണ്ടും ചുവപ്പിലേക്ക് മാറുന്നത് ഗണ്യമായ നിരോക്സീകരണ ശേഷിയെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. തവിട്ടുനിറം നിലനിൽക്കുന്നത് കാര്യമായ കുറവിനെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.

ചരിത്രപരമായ ഒരു ചേരുവക്രമത്തിൽ ഏകദേശം 1 mL രക്തത്തോടൊപ്പം 180 mM-നടുത്ത് സോഡിയം നൈട്രൈറ്റ്, 280 mM ഡെക്സ്ട്രോസ്, 0.4 mM മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ എന്നിവയുള്ള അഭികാരകങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ചിരുന്നു. ഈ സംഖ്യകളെ പ്രസിദ്ധീകരണങ്ങളിൽനിന്നുള്ള ഒരു ഉദാഹരണമായി മാത്രം കാണുക; എല്ലായിടത്തും ബാധകമായ നിർദേശമായി കാണരുത്.

ഫലം വായിക്കുന്നത്

ഗുണാത്മക സ്ക്രീനിംഗ് സാധാരണ പ്രവർത്തനത്തിന്റെ ഏകദേശം 30 മുതൽ 40 ശതമാനം വരെയുള്ള പരിധിയിലാണ് ഏറ്റവും നന്നായി വേർതിരിച്ചറിയുന്നത്. G6PD കണ്ടെത്തലിലെ വിടവുകളെക്കുറിച്ചുള്ള ഈ Malaria Journal അവലോകനം ഇത് ചർച്ച ചെയ്യുന്നു. അതിനാൽ സാധാരണ സ്ക്രീനിംഗ് ഫലം അർത്ഥമാക്കുന്നത് പരിശോധനയിൽ ഗുരുതരമായ കുറവ് കണ്ടെത്തിയില്ല എന്നാണ്. പ്രവർത്തനം പൂർണ്ണമായും സാധാരണമാണെന്ന് അത് ഉറപ്പുനൽകുന്നില്ല.

സ്ക്രീനിംഗ് തെറ്റിദ്ധരിപ്പിക്കുന്നത് എന്തുകൊണ്ട്

ഹീമോളിസിസിനുശേഷമുള്ള റെറ്റിക്കുലോസൈറ്റുകളുടെ വർധന തെറ്റായി സാധാരണ ഫലം ലഭിക്കുന്നതിന്റെ പരിചിതമായ കാരണമാണ്. പഴയ കോശങ്ങളെക്കാൾ കൂടുതൽ G6PD പുതുതായി രൂപപ്പെട്ട ചുവന്ന രക്തകോശങ്ങളിലും റെറ്റിക്കുലോസൈറ്റുകളിലും ഉണ്ടാകും. പെട്ടെന്നുണ്ടാകുന്ന ഹീമോളിസിസ് സംഭവത്തിനിടെ ഏറ്റവും പഴക്കമുള്ളതും ഏറ്റവും കൂടുതൽ എൻസൈം കുറവുള്ളതുമായ കോശങ്ങൾ ഇതിനകം നശിച്ചിരിക്കാം. ശേഷിക്കുന്ന പുതിയ കോശസമൂഹത്തിന്റെ പ്രവർത്തനം പരിശോധനയിൽ സാധാരണയായി കാണാം. ഈ ജൈവപ്രക്രിയ വർണ്ണക സ്ക്രീനിംഗിനെ മാത്രമല്ല, പരിമാണാത്മക പരിശോധനകളെയും തെറ്റിദ്ധരിപ്പിക്കുന്നു.

അടുത്തിടെ നടത്തിയ രക്തപ്പകർച്ച കുറവിനെ മറയ്ക്കുന്നു. കാരണം ദാതാവിന്റെ ചുവന്ന രക്തകോശങ്ങൾ സാമ്പിളിലേക്ക് സ്വന്തം എൻസൈം ചേർക്കുന്നു. റെറ്റിക്കുലോസൈറ്റുകളുടെ വർധനയും വെള്ള രക്തകോശങ്ങളുടെ ഇടപെടലും ഉൾപ്പെടെ എൻസൈം പരിശോധനാഫലങ്ങളെ അവിശ്വസനീയമാക്കുന്ന കാരണങ്ങളിൽ Mayo Clinic Laboratories രക്തപ്പകർച്ചയും ഉൾപ്പെടുത്തുന്നു.

ഹെറ്ററോസൈഗസ് സ്ത്രീകൾ ആണ് ഏറ്റവും സങ്കീർണ്ണമായ വിഭാഗം. ക്രമരഹിതമായ X-ക്രോമസോം നിർജ്ജീവീകരണം സാധാരണയും കുറവുള്ളതുമായ ചുവന്ന രക്തകോശങ്ങളുടെ മിശ്രിതം സൃഷ്ടിക്കുന്നു. മൊത്തത്തിലുള്ള പ്രവർത്തനം ഗുരുതരമായ കുറവ് മുതൽ സാധാരണമെന്ന് തോന്നുന്ന നില വരെ എവിടെയുമാകാം. ഗുണാത്മക സ്ക്രീനിംഗുകൾ ഇടത്തരം ഫീനോടൈപ്പുകൾ പലപ്പോഴും കണ്ടെത്താതെ പോകുന്നു. G6PD പരിശോധനയെക്കുറിച്ചുള്ള WHO രേഖ ഈ പരിമിതി വിശദമായി ചർച്ച ചെയ്യുന്നു.

സാമ്പിളിന്റെ പഴക്കം, സംഭരണ താപനില, ദൃശ്യമായ അന്തിമ സൂചകം വിലയിരുത്തുന്നതിലെ വ്യക്തിനിഷ്ഠത, ഹീമറ്റോക്രിറ്റ്, അഭികാരകങ്ങളുടെ ഗുണനിലവാരം എന്നിവ ഈ ജൈവപ്രഭാവങ്ങൾക്കു പുറമേ വിശകലനത്തിലെ വ്യതിയാനങ്ങളും വർധിപ്പിക്കുന്നു.

സ്ക്രീനിംഗ് രോഗനിർണയമല്ല

കുറവ് സൂചിപ്പിക്കുന്നതോ ഇടത്തരമായതോ ക്ലിനിക്കൽ നിരീക്ഷണങ്ങളുമായി പൊരുത്തപ്പെടാത്തതോ ആയ സ്ക്രീനിംഗ് ഫലം ലഭിച്ചാൽ പരിമാണാത്മക G6PD എൻസൈം പരിശോധന ആവശ്യമാണ്. താപനില നിയന്ത്രിച്ചുള്ള പരിമാണാത്മക സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമെട്രിയെയാണ് WHO മാനക സമീപനമായി കണക്കാക്കുന്നത്. ആ പരിശോധനയിൽ, ചുവന്ന രക്തകോശങ്ങൾ വിഘടിപ്പിച്ചുണ്ടാക്കിയ ലായനിയിലേക്ക് ഗ്ലൂക്കോസ്-6-ഫോസ്ഫേറ്റും NADP+-ഉം ചേർക്കുന്നു. രൂപപ്പെടുന്ന NADPH-നെ 340 nm-ൽ പ്രകാശ ആഗിരണം വർധിക്കുന്നത് അളന്ന് നിരീക്ഷിക്കുന്നു. മാറ്റത്തിന്റെ നിരക്ക് എൻസൈം പ്രവർത്തനത്തിന് ആനുപാതികമാണ്. സാധാരണയായി ഹീമോഗ്ലോബിന്റെ ഓരോ ഗ്രാമിനുമുള്ള യൂണിറ്റുകളായി അത് മാനകീകരിക്കുന്നു. നിലവിലുള്ള ക്ലിനിക്കൽ ലബോറട്ടറി രീതികൾ G6PD പ്രവർത്തനത്തെക്കുറിച്ചുള്ള Mayo പരിശോധനാ കാറ്റലോഗ് കുറിപ്പിൽ സംഗ്രഹിച്ചിട്ടുണ്ട്.

ലബോറട്ടറി സാധുത ഉറപ്പാക്കിയ റഫറൻസ് പരിധിയാണ് ഫലവ്യാഖ്യാനത്തിന് ഉപയോഗിക്കുന്നത്. ഇത് പലപ്പോഴും ജനസമൂഹത്തിലെ സാധാരണ പ്രവർത്തനവുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തിയാണ് നിർവചിക്കുന്നത്. കുറവ് സാധാരണയായി 30 ശതമാനം പരിധിക്കു സമീപവും ഇടത്തരം പ്രവർത്തനം അതിനു മുകളിലുമായാണ് ചർച്ച ചെയ്യപ്പെടുന്നത്. G6PD പരിശോധനകൾക്കായുള്ള WHO ലക്ഷ്യ ഉൽപ്പന്ന പ്രൊഫൈലുകൾ (2022) ഈ രോഗനിർണയ ചട്ടക്കൂട് വിശദീകരിക്കുന്നു. അടുത്തിടെയുണ്ടായ ഹീമോളിസിസോ രക്തപ്പകർച്ചയോ ഫീനോടൈപ്പ് നിർണയം അവിശ്വസനീയമാക്കുന്നുവെങ്കിൽ, ചുവന്ന രക്തകോശസമൂഹം വീണ്ടും സന്തുലിതാവസ്ഥയിലെത്തിയശേഷം പരിശോധന ആവർത്തിക്കുക. എൻസൈം അളക്കലിന് പകരമാകാതെതന്നെ തന്മാത്രാതല പരിശോധനയ്ക്ക് കൂടുതൽ വിവരങ്ങൾ നൽകാനാകും.

പാലിക്കേണ്ട ഒരു വേർതിരിവ്

ഈ പരിശോധനകളിൽ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ ഒരു ശരീരത്തിനു പുറത്തുള്ള ലബോറട്ടറി അഭികാരകമാണ്. രോഗിക്ക് മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ നൽകുന്നതിന്റെ സുരക്ഷയെക്കുറിച്ചുള്ള ചർച്ചയിൽനിന്ന് ഇത് വ്യത്യസ്തമാണ്. ആ വിഷയം മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ ഉപയോഗിക്കരുതാത്ത സാഹചര്യങ്ങളെക്കുറിച്ചുള്ള മാർഗനിർദേശത്തിൽ വിശദീകരിക്കുന്നു. മരുന്നും NADPH-നെ ആശ്രയിച്ചുള്ള നിരോക്സീകരണത്തെ ആശ്രയിക്കുന്നതിനാൽ ജൈവരസതന്ത്രം ഇവയെ ബന്ധിപ്പിക്കുന്നു. എന്നാൽ ഒരു പരീക്ഷണ ട്യൂബിലെ വർണ്ണകം രക്തപ്രവാഹത്തിലുള്ള മരുന്നിന്റെ അളവല്ല. മറ്റൊരു സാഹചര്യത്തിൽ ഈ വർണ്ണകം സ്റ്റെയിനായി എങ്ങനെ പ്രവർത്തിക്കുന്നു എന്നതിന്റെ പശ്ചാത്തലത്തിന് മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ സ്റ്റെയിനിംഗിന്റെ തത്ത്വങ്ങൾ കാണുക. അത് ഉൾപ്പെടുന്ന രാസവിഭാഗത്തെക്കുറിച്ച് അറിയാൻ ലബോറട്ടറിയിലെ റെഡോക്സ് വർണ്ണകങ്ങൾ എന്ന വിഷയം കാണുക.

നിരോക്സീകരണ ശേഷി തകരാറില്ലാത്തതായി തോന്നുന്നുണ്ടോ എന്നതാണ് സ്ക്രീനിംഗ് ചോദിക്കുന്നത്. യഥാർത്ഥത്തിൽ എത്ര എൻസൈം ഉണ്ടെന്നാണ് സ്ഥിരീകരണ പരിശോധന ചോദിക്കുന്നത്. രണ്ടാമത്തെ ചോദ്യത്തിന് ഉത്തരം നൽകാൻ വർണ്ണകത്തോട് ആവശ്യപ്പെടാത്തിടത്തോളം, ആദ്യത്തെ ചോദ്യത്തിന് അത് നല്ല സൂചന നൽകുന്നു.