മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ കാലിബ്രേഷൻ വക്രം തയ്യാറാക്കൽ: ബ്ലാങ്കുകൾ, പരിധി, രേഖീയത

രണ്ട് വിശകലന വിദഗ്ധർ ഒരേ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ സ്റ്റോക്ക് കുപ്പി പങ്കിട്ട്, ഓരോരുത്തരും ഒരു കാലിബ്രേഷൻ വക്രം തയ്യാറാക്കുന്നു. ആദ്യത്തെയാൾക്ക് മൂലബിന്ദുവിലൂടെ കടന്നുപോകുന്ന നേർരേഖ ലഭിക്കുകയും അജ്ഞാത സാന്ദ്രതയുള്ള സാമ്പിളുകൾ ആത്മവിശ്വാസത്തോടെ അളക്കാൻ കഴിയുകയും ചെയ്യുന്നു. രണ്ടാമത്തെയാൾക്ക് ഉയർന്ന സാന്ദ്രതകളിൽ വളയുന്ന രേഖയും, പൂജ്യത്തോട് അടുക്കാത്ത ഇന്റർസെപ്റ്റും, നേർപ്പിക്കുമ്പോൾ മാറിക്കൊണ്ടിരിക്കുന്ന സാമ്പിൾ ഫലങ്ങളുമാണ് ലഭിക്കുന്നത്. ഒരേ ചായം, ഒരേ ഉപകരണം, ഒരേ തരംഗദൈർഘ്യം. വ്യത്യാസം വൈദഗ്ധ്യത്തിലല്ല. പരീക്ഷണരൂപകൽപ്പനയിലാണ്: ബ്ലാങ്കിൽ എന്തൊക്കെ ഉൾപ്പെടുത്തി, ഏതെല്ലാം സാന്ദ്രതകൾ തിരഞ്ഞെടുത്തു, പരിശോധിച്ച പരിധി ഒരു ലളിതമായ മാതൃക സാധുവായി തുടരുന്ന മേഖലയ്ക്കുള്ളിൽ തന്നെയായിരുന്നോ എന്നതിൽ.

ഒരു കാലിബ്രേഷൻ വക്രം ഉപകരണത്തിന്റെ പ്രതികരണവും സാന്ദ്രതയും തമ്മിലുള്ള ഒരു കരാറാണ്; അത് തയ്യാറാക്കിയ സാഹചര്യങ്ങളിൽ മാത്രമേ അതിന് സാധുതയുള്ളൂ. മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവിന്റെ കാര്യത്തിൽ ഈ കരാറിന് അറിയപ്പെടുന്ന ഒരു ദുർബലവശമുണ്ട്. ചായത്തിന്റെ തന്മാത്രകൾ വെള്ളത്തിൽ സ്വയം കൂട്ടുചേരുന്നതിനാൽ, പ്രകാശം ആഗിരണം ചെയ്യുന്ന രാസരൂപം സാന്ദ്രതയനുസരിച്ച് മാറുന്നു. ഈ മാറ്റം ഉൾപ്പെടുന്ന പരിധിയിൽ തയ്യാറാക്കിയ വക്രം നേർരേഖയാവില്ല; എത്ര സ്ഥിതിവിവരക്കണക്ക് പ്രയോഗിച്ചാലും അത് പരിഹരിക്കാനാവില്ല. രേഖയ്ക്ക് അർത്ഥമുണ്ടാകുന്ന വിധം വക്രം രൂപകൽപ്പന ചെയ്യുന്നതെങ്ങനെയെന്ന് ഈ ലേഖനം വിശദീകരിക്കുന്നു: ശരിയായ ബ്ലാങ്ക് തിരഞ്ഞെടുക്കുക, പരിധി മോണോമർ ആധിപത്യമുള്ള മേഖലയിൽ നിലനിർത്തുക, ആവർത്തനങ്ങൾ സത്യസന്ധമായി നടത്തുക, വക്രതയെ ശബ്ദമായി കാണാതെ വിവരമായി വായിക്കുക.

സ്റ്റാൻഡേർഡുകളിൽ നിന്നല്ല, ബ്ലാങ്കിൽ നിന്ന് തുടങ്ങുക

ബ്ലാങ്കാണ് പൂജ്യം നിർവചിക്കുന്നത്; മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവിന്റെ കാര്യത്തിൽ ചായം ഒഴികെയുള്ള എല്ലാം അതിൽ ഉണ്ടായിരിക്കണം. ഒരേ ഗുണനിലവാരത്തിലുള്ള വെള്ളം, ഒരേ ബഫറും pH-ഉം, ഒരേ ലവണങ്ങൾ, ഒരേ സഹലായക അംശം, ഒരേ താപനില. കാലിബ്രേഷൻ സ്റ്റാൻഡേർഡുകളും അതേ മാട്രിക്സിൽ തയ്യാറാക്കുക. ഇതിന്റെ കാരണം രാസപരമാണ്, നടപടിക്രമപരമായ ഔപചാരികതയല്ല. ലവണവും ലായകവും മോണോമർ, ഡൈമർ, ഉയർന്ന അഗ്രിഗേറ്റുകൾ എന്നിവ തമ്മിലുള്ള സന്തുലിതാവസ്ഥ മാറ്റുന്നു; ഇതോടെ അളക്കുന്ന തരംഗദൈർഘ്യത്തിലെ സ്പെക്ട്രവും മാറുന്നു. വെള്ളം മാത്രമുള്ള ബ്ലാങ്കിന് മാട്രിക്സ് മൂലമുണ്ടാകുന്ന രാസരൂപവിതരണത്തിലെ മാറ്റം തിരുത്താനാവില്ല. വെള്ളത്തിലെ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ സ്പെക്ട്രങ്ങളുടെ സമഗ്ര വിശകലനത്തിൽ, അതിന്റെ തുറന്ന പ്രവേശന രേഖയിലൂടെ ലഭ്യമാകുന്ന പഠനത്തിൽ, സോഡിയം ക്ലോറൈഡ് 0 മുതൽ 0.15 M വരെ മാറ്റിയിരുന്നു. അയോണിക ശക്തി സന്തുലിതാവസ്ഥയെ മാറ്റുന്നതിനാലായിരുന്നു ഇത്; ലവണത്തിന്റെ അളവ് കൂടിയപ്പോൾ കൂട്ടുചേരലും വർധിച്ചു.

പ്രായോഗികമായ ഒരു അനന്തരഫലം: ഡീയോണൈസ്ഡ് വെള്ളത്തിൽ കാലിബ്രേഷൻ നടത്തിയിട്ട് ഫോസ്ഫേറ്റ് ബഫറിലോ മലിനജല ഫിൽട്രേറ്റിലോ ഉള്ള സാമ്പിളുകൾ ഒരിക്കലും അളക്കരുത്. അളക്കേണ്ട ഘടകം ഇല്ലാത്ത മാട്രിക്സ് ലഭ്യമല്ലെങ്കിൽ, പൊരുത്തമില്ലാത്ത ബാഹ്യ കാലിബ്രേഷൻ വക്രത്തേക്കാൾ നല്ലത് സാമ്പിളിൽ തന്നെയുള്ള സ്റ്റാൻഡേർഡ് അഡിഷൻ രീതിയാണ്. ജലീയ അസേകളുടെ വിശ്വസനീയത നിലനിർത്തുന്നതിനുള്ള അനുബന്ധ മാർഗനിർദേശം മാട്രിക്സും ഇടപെടലുകളും സംബന്ധിച്ച ചർച്ചയിൽ ലഭ്യമാണ്; ചായങ്ങളുടെ അളവുനിർണയ അസേകളുടെ പൊതുതത്ത്വങ്ങൾ അസേ രൂപകൽപ്പനയുടെ അവലോകനത്തിൽ വിശദീകരിച്ചിരിക്കുന്നു.

ഒരു രാസരൂപത്തിന് ആധിപത്യമുള്ള പരിധി തിരഞ്ഞെടുക്കുക

664 nm-ന് സമീപമുള്ള ദീർഘ തരംഗദൈർഘ്യ ബാൻഡിൽ അളവുനിർണയം നടത്തുമ്പോൾ, ചായത്തിന്റെ ഭൂരിഭാഗവും മോണോമർ രൂപത്തിലാണെന്ന് അനുമാനിക്കുന്നു. സാധാരണ വെള്ളത്തിൽ, ലായനികൾ നേർപ്പിച്ച നിലയിൽ—ഏകദേശം താഴ്ന്ന മൈക്രോമോളാർ മേഖലയിൽ—തുടരുമ്പോൾ മാത്രമേ ഈ അനുമാനം നിലനിൽക്കൂ. പ്രസിദ്ധീകരിച്ച പരീക്ഷണാധിഷ്ഠിത ചരിവുകൾ ഈ അതിർത്തി വ്യക്തമാക്കുന്നു: 1 cm സെല്ലുകളിൽ ഏകദേശം 7 മൈക്രോമോളാറിൽ താഴെ നിലനിർത്തിയ കാലിബ്രേഷനുകൾക്ക് 82,000 M-1 cm-1-ന് സമീപമുള്ള ചരിവ് ലഭിക്കുന്നു. എന്നാൽ ഏകദേശം 37 മൈക്രോമോളാർ വരെ നീട്ടിയ കാലിബ്രേഷനിൽ അത് ഏകദേശം 67,100 ആയി കുറയുന്നു; കാരണം ഉയർന്ന സാന്ദ്രതയിലുള്ള സ്റ്റാൻഡേർഡുകളിൽ ഇതിനകം ഗണ്യമായ ഡൈമർ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു. ഇവിടെ ഉദ്ധരിച്ച ഓരോ ഗുണാങ്കത്തിന്റെയും സാഹചര്യങ്ങൾ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവിന്റെ സ്പെക്ട്രൽ റഫറൻസിൽ രേഖപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്. സംഖ്യകൾ താരതമ്യം ചെയ്യാൻ അനുയോജ്യമായ സ്ഥലം അതാണ്; ഈ ലേഖനം അവയെ പരിധി നിശ്ചയിക്കാൻ മാത്രമാണ് ഉപയോഗിക്കുന്നത്.

ഇതിൽ നിന്ന് രൂപകൽപ്പനാ നിയമങ്ങൾ നേരിട്ട് ലഭിക്കുന്നു:

1. ഏറ്റവും ഉയർന്ന സാന്ദ്രതയിലുള്ള സ്റ്റാൻഡേർഡ് പോലും സ്പെക്ട്രത്തിന്റെ ആകൃതി സ്ഥിരമായി തുടരുന്നത്ര നേർപ്പിച്ചതായിരിക്കണം. രീതി വികസിപ്പിക്കുമ്പോൾ, ഒരു തരംഗദൈർഘ്യത്തിൽ മാത്രം വായിക്കുന്നതിനുപകരം ഓരോ നിലയ്ക്കും ദൃശ്യപ്രകാശത്തിന്റെ മുഴുവൻ പരിധിയും (ഏകദേശം 550 മുതൽ 750 nm വരെ) സ്കാൻ ചെയ്യുക. നോർമലൈസ് ചെയ്ത സ്പെക്ട്രങ്ങളുടെ ആകൃതി സാന്ദ്രതയനുസരിച്ച് മാറുന്നുവെങ്കിൽ, രാസസ്വഭാവം മാറുന്നു; തിരഞ്ഞെടുത്ത പരിധി വളരെ വിശാലമാണ്.
2. ഓരോ നിലയിലും 610 nm-ന് സമീപമുള്ള ആഗിരണാങ്കവും 665 nm-ന് സമീപമുള്ള ആഗിരണാങ്കവും തമ്മിലുള്ള അനുപാതം നിരീക്ഷിക്കുക. സാന്ദ്രതയോടൊപ്പം ഉയരുന്ന അനുപാതം ഡൈമർ ഷോൾഡർ വളരുന്നുവെന്നും മോണോമർ മാതൃക പരാജയപ്പെടുന്നുവെന്നും സൂചിപ്പിക്കുന്നു. ഈ പരിശോധനയെക്കുറിച്ച് കൂട്ടുചേരലിന്റെയും സാന്ദ്രതയുടെയും സ്വാധീനങ്ങളെക്കുറിച്ചുള്ള മാർഗദർശിയിൽ കൂടുതൽ വിശദീകരിച്ചിരിക്കുന്നു.
3. താഴ്ന്ന മൈക്രോമോളാർ അളവുകൾക്കായി 1 cm സെൽ ഉപയോഗിക്കുക. ചരിവ് 82,000-ന് സമീപമായിരിക്കുമ്പോൾ, 5 മൈക്രോമോളാറിൽ ആഗിരണാങ്കം ഏകദേശം 0.41-ഉം 10 മൈക്രോമോളാറിൽ ഏകദേശം 0.82-ഉം ലഭിക്കുന്നു; മിക്ക ഉപകരണങ്ങൾക്കും ഇവ രണ്ടും അനുയോജ്യമാണ്.
4. സാന്ദ്രമായ സ്റ്റോക്കുകൾക്കായി, 1-നേക്കാൾ വളരെ ഉയർന്ന ആഗിരണാങ്കം അംഗീകരിക്കുന്നതിനുപകരം പ്രകാശപഥത്തിന്റെ നീളം കുറയ്ക്കുക. എന്നാൽ ചെറിയ പ്രകാശപഥം പ്രകാശമാപനത്തിലെ പ്രശ്നമാണ് പരിഹരിക്കുന്നത്, രാസസ്വഭാവത്തിലെ പ്രശ്നമല്ല എന്ന് ഓർക്കുക. കൂട്ടുചേരൽ ആശ്രയിക്കുന്നത് സാന്ദ്രതയെയാണ്, പ്രകാശപഥത്തിന്റെ നീളത്തെയല്ല. അതിനാൽ സാന്ദ്രമായ സ്റ്റോക്കിന് നേർപ്പിച്ച മോണോമർ വക്രം ഉപയോഗിക്കുന്നതിനുപകരം, അതിലെ രാസരൂപവിതരണം പരിഗണിക്കുന്ന പ്രത്യേക സമീപനം ആവശ്യമാണ്.

ഈ ധാരണയുടെ വലിയൊരു ഭാഗത്തിന് അടിസ്ഥാനമായ സമഗ്ര ഫിറ്റിൽ 1.1 മൈക്രോമോളാർ മുതൽ 3.4 മില്ലിമോളാർ വരെയുള്ള 224 സ്പെക്ട്രങ്ങൾ ഉൾപ്പെട്ടിരുന്നു; 34 മൈക്രോമോളാറിൽ താഴെപ്പോലും ടെട്രാമർ സിഗ്നൽ കണ്ടെത്താനാകുമെന്ന് അത് കാണിച്ചു. ഈ കണ്ടെത്തൽ നൽകുന്ന സന്ദേശം വ്യക്തമാണ്: രേഖീയത നിലനിൽക്കുന്ന പരിധി നാം ഊഹിക്കുന്നതിലും ഇടുങ്ങിയതാണ്; അതിനാൽ അത് അനുമാനിക്കാതെ പരിശോധിച്ച് ഉറപ്പാക്കുക.

നിലകൾ, ആവർത്തനങ്ങൾ, ക്രമം

മൂന്ന് ബിന്ദുക്കളുള്ള ഒരു വക്രം ഒന്നും തെളിയിക്കുന്നില്ല. രേഖീയത വിലയിരുത്താൻ കുറഞ്ഞത് അഞ്ച് സാന്ദ്രതകളെങ്കിലും വേണമെന്ന് ICH Q2(R2)-ലെ സാധൂകരണ മാർഗനിർദേശം ആവശ്യപ്പെടുന്നു. പൂജ്യമല്ലാത്ത ആറ് മുതൽ എട്ട് വരെ നിലകൾ കൂടുതൽ വിശ്വസനീയമായ പ്രവർത്തന വക്രം നൽകുന്നു; പ്രത്യേകിച്ച് കൂട്ടുചേരൽ തുടങ്ങുന്ന ഉയർന്ന സാന്ദ്രതാഭാഗത്ത്. സൗകര്യത്തിനായി തിരഞ്ഞെടുത്ത ഗുണോത്തര ശ്രേണിയിലല്ല നിലകൾ ക്രമീകരിക്കേണ്ടത്. പകരം, ഉദ്ദേശിക്കുന്ന സാമ്പിൾ പരിധി ഉൾക്കൊള്ളുകയും വക്രതയ്ക്ക് ഏറ്റവും സാധ്യതയുള്ള ഭാഗത്ത് കൂടുതൽ നിലകൾ ഉൾപ്പെടുത്തുകയും ചെയ്യുക.

ഓരോ നിലയും രണ്ടോ മൂന്നോ ആവർത്തനങ്ങളിൽ അളക്കുക; ഒരേ ഫ്ലാസ്കിൽ നിന്ന് മൂന്ന് തവണ വായിക്കുന്നതിനുപകരം അവ സ്വതന്ത്രമായി തയ്യാറാക്കണം. സ്വതന്ത്ര ആവർത്തനങ്ങൾ തയ്യാറാക്കലിലെ പിശകുകൾ വെളിപ്പെടുത്തുന്നു; ഒരേ ഫ്ലാസ്കിന്റെ ആവർത്തിച്ച വായനകൾ ഉപകരണത്തിലെ ശബ്ദം മാത്രമാണ് വെളിപ്പെടുത്തുന്നത്. 2020-ലെ സമഗ്ര പഠനത്തിൽ ഓരോ ലായനിയും മൂന്ന് തവണ അളന്നിരുന്നു; ഇത് ഇപ്പോഴും നല്ലൊരു അടിസ്ഥാന സമീപനമാണ്. വായനാക്രമം യാദൃച്ഛികമാക്കുക, അങ്ങനെ ഡ്രിഫ്റ്റ്, ഗ്ലാസിലേക്കുള്ള അധിശോഷണം, താപനിലമാറ്റം എന്നിവ വക്രതയായി തെറ്റിദ്ധരിക്കപ്പെടാതിരിക്കും. ക്വാർട്സ് ക്യൂവെറ്റുകളെക്കുറിച്ചുള്ള ഒരു പഠനത്തിൽ 34 മൈക്രോമോളാർ ലായനിയിലെ ചായത്തിന്റെ ഏകദേശം 3 ശതമാനം 10 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ അധിശോഷിക്കപ്പെടുന്നതായി കണ്ടെത്തി. അതിനാൽ അളവെടുപ്പിലുടനീളം സമ്പർക്കസമയം, ക്യൂവെറ്റ്, വൃത്തിയാക്കൽ, ക്രമം എന്നിവ സ്ഥിരമായി നിലനിർത്തുക.

വിശദീകരണത്തിനുള്ള കണക്കുകൂട്ടൽ ഉദാഹരണം (അളന്ന ഡാറ്റയല്ല)

താഴെയുള്ള സംഖ്യകൾ കണക്കുകൂട്ടൽ കാണിക്കാൻ സൃഷ്ടിച്ചവയാണ്. ഇവ ലബോറട്ടറി അളവുകളല്ല; മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ ഡാറ്റയായി ഉദ്ധരിക്കരുത്. ഇവയെ ചുറ്റിപ്പറ്റിയുള്ള പരിശോധനാരീതിയാണ് പ്രധാനപ്പെട്ടത്.

ഒരേ മാട്രിക്സുള്ള ബഫറിൽ ആറ് സ്റ്റാൻഡേർഡുകൾ തയ്യാറാക്കി, 1 cm പ്രകാശപഥത്തിൽ, പൊരുത്തപ്പെടുന്ന ബ്ലാങ്കിനെ അടിസ്ഥാനമാക്കി 665 nm-ൽ വായിക്കുന്നു എന്ന് കരുതുക:

സാന്ദ്രതയ്ക്കെതിരെ ശരാശരി ആഗിരണാങ്കം നേർരേഖയായി ഫിറ്റ് ചെയ്യുമ്പോൾ, മൈക്രോമോളാറിന് ഏകദേശം 0.0805 ആഗിരണാങ്ക യൂണിറ്റ് എന്ന ചരിവും പൂജ്യത്തിൽ നിന്ന് ഏതാനും മില്ലിആഗിരണാങ്ക യൂണിറ്റുകൾക്കുള്ളിലുള്ള ഇന്റർസെപ്റ്റും ലഭിക്കുന്നു. ചരിവിനെ പ്രകാശപഥത്തിന്റെ നീളം കൊണ്ട് ഹരിച്ചാൽ അത് പ്രത്യക്ഷ ആഗിരണക്ഷമതയായി മാറുന്നു: മൈക്രോമോളാറിന് 0.0805 എന്നത് ഏകദേശം 80,500 M-1 cm-1-ന് തുല്യമാണ്; വെള്ളത്തിൽ മോണോമറിന് ആധിപത്യമുള്ള ഒരു പരിധിയുമായി ഇത് പൊരുത്തപ്പെടുന്നു. പ്രധാനപ്പെട്ട പരിശോധന R സ്ക്വയർ അല്ല; ഏതുവിധേനയും അത് മികച്ചതായി തോന്നും. പൂജ്യത്തിന് സമീപമുള്ള ഇന്റർസെപ്റ്റ്, S2 മുതൽ S5 വരെ സ്ഥിരമായ A610/A665 അനുപാതം, പ്രവണതയില്ലാതെ ചിതറിക്കിടക്കുന്ന അവശിഷ്ടങ്ങൾ എന്നിവയാണ് പ്രധാനപ്പെട്ടത്. S6-ൽ അനുപാതം അല്പം ഉയരുന്നത് ആ നില ഒഴിവാക്കാനോ, ഈ മാട്രിക്സ്-ഉപകരണ സംയോജനത്തിന്റെ താൽക്കാലിക ഉയർന്ന പരിധിയായി 7 മൈക്രോമോളാറിനെ അടയാളപ്പെടുത്താനോ ഉള്ള വ്യക്തമായ സൂചനയാണ്.

അതേ സാഹചര്യങ്ങളിൽ 0.245 ആയി വായിച്ച അജ്ഞാത സാമ്പിളിനെ നേരിട്ട് പരിവർത്തനം ചെയ്യാം: 0.245-നെ മൈക്രോമോളാറിന് 0.0805 കൊണ്ട് ഹരിച്ചാൽ ഏകദേശം 3.0 മൈക്രോമോളാർ ലഭിക്കുന്നു; സാമ്പിളിന്റെ ഏതെങ്കിലും നേർപ്പിക്കൽ ഘടകം പ്രയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പുള്ള മൂല്യമാണിത്. തരംഗദൈർഘ്യം, പ്രകാശപഥം, ബ്ലാങ്കിന്റെ മാട്രിക്സ്, കാലിബ്രേഷൻ പരിധി, തീയതി എന്നീ സാഹചര്യങ്ങളോടൊപ്പം ഫലം റിപ്പോർട്ട് ചെയ്യുക.

പൂരിപ്പിക്കാവുന്ന കാലിബ്രേഷൻ വർക്ക്‌ഷീറ്റ്

ഓരോ പുതിയ മാട്രിക്സിനും ഈ മാതൃക ലാബ് രേഖയിലേക്ക് പകർത്തുക. ഒരു മാട്രിക്സ്, ഒരു ഷീറ്റ്, ഒരു വക്രം.

രാസപ്രതികാരകത്തിന്റെ രൂപം രേഖപ്പെടുത്തുന്ന വരി അനിവാര്യമാണ്. വാണിജ്യ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ അൻഹൈഡ്രസ് ലവണമോ ട്രൈഹൈഡ്രേറ്റ് പോലുള്ള ഹൈഡ്രേറ്റോ ആയിരിക്കാം; തെറ്റായ മോളാർ മാസ് ഉപയോഗിച്ചാൽ ഓരോ നാമമാത്ര സാന്ദ്രതയിലും ശ്രദ്ധയിൽപ്പെടാതെ വ്യതിയാനം ഉണ്ടാകും. തുടക്ക വസ്തുവിന്റെ ശുദ്ധിയും സ്പെസിഫിക്കേഷനും പരിശോധിക്കുന്നതിനെക്കുറിച്ച് ഗുണനിലവാരവും ഗ്രേഡും സംബന്ധിച്ച മാർഗദർശിയിൽ വിശദീകരിച്ചിരിക്കുന്നു.

സ്വതന്ത്ര ചെക്ക് സ്റ്റാൻഡേർഡ് ഉപയോഗിച്ച് ഉറപ്പാക്കുക

ഒരു കാലിബ്രേഷൻ വക്രം അതിന്റെ സ്വന്തം പ്രവർത്തനം സ്വയം വിലയിരുത്തരുത്. ഫിറ്റ് ചെയ്ത ശേഷം, പ്രത്യേകം തൂക്കി തയ്യാറാക്കിയ സ്റ്റോക്കിൽ നിന്ന് അംഗീകരിച്ച പരിധിയുടെ മധ്യത്തിന് സമീപമുള്ള സാന്ദ്രതയിൽ ഒരു ചെക്ക് സ്റ്റാൻഡേർഡ് തയ്യാറാക്കുക; അത് അജ്ഞാത സാമ്പിളായി വായിക്കുക. ഏതാനും ശതമാനത്തിനുള്ളിലെ പൊരുത്തം തയ്യാറാക്കൽ ശൃംഖലയുടെ കൃത്യത സ്ഥിരീകരിക്കുന്നു; പൊരുത്തക്കേട് ഉപകരണത്തേക്കാൾ സ്റ്റോക്കിലോ നേർപ്പിക്കലുകളിലോ ഉള്ള പ്രശ്നത്തെയാണ് സൂചിപ്പിക്കുന്നത്. ഓരോ സാമ്പിൾ ബാച്ചിനൊപ്പവും ചെക്ക് സ്റ്റാൻഡേർഡ് പരിശോധന ആവർത്തിക്കുക. വക്രം മാറാതിരിക്കുമ്പോഴും ചെക്ക് സ്റ്റാൻഡേർഡിന്റെ ഫലം മാറുന്നുവെങ്കിൽ, സാമ്പിളുകളെ സംശയിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് ഉപയോഗത്തിനുള്ള ലായനികളെയോ ക്യൂവെറ്റിനെയോ സംശയിക്കുക. ഈ ഒരൊറ്റ ശീലം ശ്രദ്ധയിൽപ്പെടാത്ത മിക്ക പിശകുകളും കണ്ടെത്തുന്നു: അൻഹൈഡ്രസ് വസ്തുവുള്ള കുപ്പിക്ക് ഹൈഡ്രേറ്റിന്റെ മോളാർ മാസ് പ്രയോഗിക്കൽ, കാലിബ്രേഷൻ തെറ്റിയ മൈക്രോപിപ്പെറ്റ്, തെറ്റായ അയോണിക ശക്തിയിൽ തയ്യാറാക്കിയ ബഫർ എന്നിവ. ചെക്ക് സ്റ്റാൻഡേർഡിന്റെ റിക്കവറി വർക്ക്‌ഷീറ്റിൽ ചരിവിന് അടുത്തായി രേഖപ്പെടുത്തുക; അങ്ങനെ പിന്നീട് വായിക്കുന്നയാൾക്ക് രേഖ വെറുതെ വരച്ചതല്ല, പരിശോധിച്ചതാണെന്ന് മനസ്സിലാക്കാം.

രേഖീയമല്ലാത്ത സ്വഭാവത്തെ കാരണനിർണയമായി വായിക്കുക

വക്രം വളയുമ്പോൾ, ആ വ്യതിയാനത്തിന്റെ ആകൃതി കാരണം തിരിച്ചറിയാൻ സഹായിക്കുന്നു. സ്പെക്ട്രത്തിന്റെ ആകൃതി മാറാതെ ഉയർന്ന ആഗിരണാങ്കത്തിൽ താഴോട്ടുള്ള വക്രത ഉണ്ടാകുന്നത് ഉപകരണത്തിലെ പ്രശ്നത്തെയാണ് സൂചിപ്പിക്കുന്നത്; പലപ്പോഴും അനാവശ്യ പ്രകാശം ശക്തമായ ആഗിരണാങ്കങ്ങളെ യഥാർത്ഥത്തേക്കാൾ താഴെയായി കാണിക്കുന്നതാണ് കാരണം. 610 nm ഷോൾഡർ ഉയരുന്നതിനോടൊപ്പമുള്ള വക്രത രാസസ്വഭാവത്തിലേക്കാണ് വിരൽചൂണ്ടുന്നത്: ഡൈമറും ഉയർന്ന അഗ്രിഗേറ്റുകളും മോണോമറിൽ നിന്ന് വ്യത്യസ്തമായി പ്രകാശം ആഗിരണം ചെയ്യുന്നു. പൂജ്യമാകാത്ത ബ്ലാങ്കോ കാലക്രമേണ വായന കുറയുന്ന സ്റ്റാൻഡേർഡുകളോ കണ്ടെയ്നറിലെ പ്രശ്നം സൂചിപ്പിക്കുന്നു: ഗ്ലാസിലോ ക്യൂവെറ്റുകളിലോ ഉള്ള അധിശോഷണം, പ്രത്യേകിച്ച് അളവെടുപ്പിനിടെ സമ്പർക്കസമയങ്ങൾ വ്യത്യാസപ്പെട്ടെങ്കിൽ. ബിന്ദുക്കളിലൂടെ നല്ലൊരു നേർരേഖ ലഭിച്ചിട്ടും സാമ്പിൾ ഫലങ്ങൾ തെറ്റാണെങ്കിൽ, പ്രശ്നം മാട്രിക്സിലാണ്: സാമ്പിളുകൾ കാലിബ്രേഷൻ സ്റ്റാൻഡേർഡുകളിൽ നിന്ന് വ്യത്യസ്തമാണ്. അതിനാൽ സാമ്പിൾ മാട്രിക്സിൽ വക്രം വീണ്ടും തയ്യാറാക്കുക, അല്ലെങ്കിൽ സ്റ്റാൻഡേർഡ് അഡിഷനിലേക്ക് മാറുക. എല്ലാ സാഹചര്യങ്ങളിലും സാന്ദ്രതയ്ക്കെതിരെ അവശിഷ്ടങ്ങൾ പ്ലോട്ട് ചെയ്യുക. യാദൃച്ഛികമായ ചിതറൽ നേർരേഖാ മാതൃകയെ പിന്തുണയ്ക്കുന്നു; പുഞ്ചിരിയോ നെറ്റിചുളിക്കലോ പോലുള്ള വളവ് ഏത് R സ്ക്വയർ പരിധിയേക്കാളും വിശ്വസനീയമായി അതിനെ തള്ളിക്കളയുന്നു. സാധൂകരണ മാർഗനിർദേശം ഈ കാര്യത്തെ വ്യക്തമായി പിന്തുണയ്ക്കുന്നു.

മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവിൽ ഈ അച്ചടക്കം ഫലം കാണിക്കും. അതിന്റെ മോണോമർ ബാൻഡ് ശക്തമാണ്, അതിന്റെ രാസസ്വഭാവം നന്നായി പഠിക്കപ്പെട്ടതാണ്, അളവുകൾ തെറ്റുന്നതിന് മുമ്പുതന്നെ പ്രശ്നങ്ങളുടെ സൂചനകൾ സ്പെക്ട്രത്തിൽ പ്രകടമാകുന്നു. ഇടുങ്ങിയ പരിധിയിൽ വക്രം തയ്യാറാക്കുക, യോജിച്ച ബ്ലാങ്ക് ഉപയോഗിക്കുക, സ്വതന്ത്രമായി ആവർത്തിക്കുക, പരിധി തീരുമാനിക്കാൻ സ്പെക്ട്രങ്ങളുടെ ആകൃതിയെ മാനദണ്ഡമാക്കുക. ലഭിക്കുന്ന രേഖ ചെറുതായിരിക്കും; എന്നാൽ അതിലെ ഓരോ ബിന്ദുവും വിശ്വസനീയമായിരിക്കും.

ഈ ലേഖനത്തിലെ വിശദീകരണ കണക്കുകൂട്ടലുകൾ രീതി കാണിക്കാൻ സൃഷ്ടിച്ച സംഖ്യകളാണ് ഉപയോഗിക്കുന്നത്. പൂർണ സാഹചര്യങ്ങളോടുകൂടിയ അളന്ന റഫറൻസ് ഗുണാങ്കങ്ങൾ ലിങ്ക് ചെയ്ത സ്പെക്ട്രൽ റഫറൻസിൽ ലഭ്യമാണ്; അടിസ്ഥാനമായ കൂട്ടുചേരൽ പഠനം PMID 33251415 എന്ന രേഖയിൽ സൂചികപ്പെടുത്തിയിരിക്കുന്നു.