EMB അഗാറിലെ E. coli-യുടെയും മറ്റു കോളനികളുടെയും രൂപം വായിച്ചറിയൽ

ഒരു വിദ്യാർത്ഥി തിരിച്ചറിയാത്ത ഒരു സൂക്ഷ്മജീവിയെ ഇയോസിൻ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ അഗാറിൽ സ്ട്രീക്ക് ചെയ്ത്, ഒരു രാത്രി ഇൻക്യുബേറ്റ് ചെയ്യുന്നു. പിറ്റേന്ന് പ്ലേറ്റിൽ പച്ചത്തിളക്കമുള്ള ഇരുണ്ട കോളനികൾ കാണുന്നു. നോട്ട്ബുക്കിലെ കുറിപ്പ് ഇങ്ങനെ: "E. coli, സ്ഥിരീകരിച്ചു." പ്ലേറ്റിന് പിന്തുണയ്ക്കാനാകുന്നതിലും കൂടുതലാണ് ആ കുറിപ്പ് അവകാശപ്പെടുന്നത്. നിർദിഷ്ട സാഹചര്യങ്ങളിലെ വളർച്ചയുടെയും ഫെർമെന്റേഷന്റെയും പ്രകടസ്വഭാവമാണ് പ്ലേറ്റ് കാണിക്കുന്നത്. സ്പീഷീസ് തിരിച്ചറിയൽ വേറൊരു അവകാശവാദമാണ്; അതിന് വേറെ തെളിവ് ആവശ്യമാണ്.

EMB അഗാർ ഫലങ്ങളെ വ്യാഖ്യാനിക്കേണ്ട ഒരു കാര്യമായാണ് ഈ മാർഗദർശി കാണുന്നത്. ഇതിനു പിന്നിലെ ആശയം വിശദീകരിക്കുകയും കൺട്രോളുകൾ ഉൾപ്പെടുന്ന ഒരു ചിത്രീകരണ പ്ലേറ്റ് അറ്റ്ലസിലൂടെ പരിചയപ്പെടുത്തുകയും പാഠപുസ്തകത്തിലെ ചിത്രം തെറ്റിദ്ധരിപ്പിക്കുന്ന സാഹചര്യങ്ങൾ ചൂണ്ടിക്കാട്ടുകയും ചെയ്യുന്നു.

പ്ലേറ്റിനു പിന്നിലെ ആശയം

EMB അഗാർ തിരഞ്ഞെടുക്കാനും വേർതിരിച്ചറിയാനും സഹായിക്കുന്ന ഒരു മാധ്യമമാണ്. ഇയോസിൻ Y, മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ എന്നീ വർണകങ്ങൾ പല ഗ്രാം പോസിറ്റീവ് ജീവികളുടെയും വളർച്ചയെ അടിച്ചമർത്തുന്നതിനാൽ, ഈ മാധ്യമം ഗ്രാം നെഗറ്റീവ് ജീവികളുടെ വളർച്ചയ്ക്ക് അനുകൂലമാണ്. ഇതേ വർണകങ്ങൾ സൂചകങ്ങളായും പ്രവർത്തിക്കുന്നു: ഒരു ജീവി ലഭ്യമായ പഞ്ചസാര ഫെർമെന്റ് ചെയ്ത് കോളനിക്കു ചുറ്റും ആവശ്യത്തിന് അമ്ലം ഉത്പാദിപ്പിക്കുമ്പോൾ, കോളനി കൂടുതലായി വർണകം ആഗിരണം ചെയ്ത് ഇരുണ്ട പർപ്പിൾ മുതൽ നീലകലർന്ന കറുപ്പ് വരെയുള്ള നിറത്തിലാകുന്നു. ശക്തമായ അമ്ലോത്പാദനം ഉണ്ടാകുമ്പോൾ കോളനിയുടെ ഉപരിതലത്തിൽ ലോഹസദൃശമായ പച്ച വർണത്തിളക്കം കാണാം. ഇയോസിൻ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ അഗാർ പ്ലേറ്റുകൾക്കായുള്ള ASM പ്രോട്ടോക്കോൾ തിരഞ്ഞെടുപ്പിന്റെയും വേർതിരിച്ചറിയലിന്റെയും ഈ സംയോജനം വിശദീകരിക്കുകയും പഠനത്തിനായുള്ള റഫറൻസ് ഫോട്ടോകൾ നൽകുകയും ചെയ്യുന്നു.

ഏതൊരു ഫലവും വായിച്ചറിയുന്നതിനുമുമ്പ് ഒരു കാര്യം ശ്രദ്ധിക്കണം: ഏത് ഫോർമുലേഷനാണ് ഉപയോഗിക്കുന്നതെന്ന് പരിശോധിക്കുക. പഴയ Holt Harris Teague ഫോർമുലേഷനിൽ ലാക്ടോസും സുക്രോസും അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു; Levine EMB-യിൽ ലാക്ടോസ് മാത്രമാണുള്ളത്. Serratia marcescens-ന്റെ പല ഐസൊലേറ്റുകളെയും പോലെ, സുക്രോസ് ഫെർമെന്റ് ചെയ്യുകയും ലാക്ടോസ് ഫെർമെന്റ് ചെയ്യാതിരിക്കുകയും ചെയ്യുന്ന ഒരു ജീവിക്ക് ഈ രണ്ടു പതിപ്പുകളിലും വ്യത്യസ്ത രൂപം കാണാം. EMB മാധ്യമങ്ങളെക്കുറിച്ചുള്ള നിർമ്മാതാവിന്റെ രേഖകൾ ഫോർമുലേഷനിലെ ഈ വ്യത്യാസം വ്യക്തമായി പറയുന്നു. ഫലത്തോടൊപ്പം നിർമ്മാതാവിനെയും ഫോർമുലേഷനെയും നോട്ട്ബുക്കിൽ രേഖപ്പെടുത്തുക.

തയ്യാറാക്കിയ, ഇനോകുലേറ്റ് ചെയ്യാത്ത EMB അഗാറിന് സാധാരണയായി ചുവപ്പുകലർന്ന തവിട്ടു മുതൽ ചുവപ്പുകലർന്ന പർപ്പിൾ വരെയുള്ള നിറമുണ്ടാകും; ചിലപ്പോൾ പച്ചഛായയോ സൂക്ഷ്മമായ അവക്ഷേപമോ ഉണ്ടാകാം. ആ പശ്ചാത്തലനിറം വളർച്ചയല്ല. ഓരോ നിരീക്ഷണവും ഇനോകുലേറ്റ് ചെയ്യാത്ത പ്ലേറ്റുമായോ രേഖപ്പെടുത്തിയ അടിസ്ഥാനനിലയുമായോ താരതമ്യം ചെയ്യുക. പഠനപ്രോട്ടോക്കോൾ മറ്റൊന്നും നിർദേശിക്കുന്നില്ലെങ്കിൽ, 35 മുതൽ 37 C വരെ താപനിലയിൽ ഏകദേശം 18 മുതൽ 24 മണിക്കൂർ വരെ വായുസാന്നിധ്യത്തിൽ ഇൻക്യുബേറ്റ് ചെയ്തശേഷം പ്രാഥമിക പ്ലേറ്റ് വായിച്ചറിയുക. ദീർഘമായ ഇൻക്യുബേഷൻ ഫെർമെന്റേഷന്റെ ദൃശ്യരൂപം മാറ്റാം.

പ്ലേറ്റ് എങ്ങനെ നിരീക്ഷിക്കണം

രണ്ടുതരം പ്രകാശം ഉപയോഗിക്കുക. ആദ്യം പ്രതിഫലിത പ്രകാശത്തിലോ ചരിഞ്ഞ കോണിൽ പതിക്കുന്ന പ്രകാശത്തിലോ പ്ലേറ്റ് പരിശോധിക്കുകയും ചെരിക്കുകയും ചെയ്യുക: ലോഹത്തിളക്കം വർണത്തിളക്കമുള്ളതാണ്; നോക്കുന്ന കോണനുസരിച്ച് അത് പ്രത്യക്ഷപ്പെടുകയോ അപ്രത്യക്ഷമാകുകയോ ചെയ്യാം. തുടർന്ന് കോളനിയുടെ നിറവും ഇരുണ്ട മധ്യഭാഗങ്ങളും വിലയിരുത്താൻ പ്ലേറ്റിലൂടെ കടന്നുവരുന്ന പ്രകാശത്തിൽ പരിശോധിക്കുക. വ്യക്തമായി വേർതിരിഞ്ഞുനിൽക്കുന്ന കോളനികളിൽനിന്ന് നിരീക്ഷണം നടത്തുക. തിരക്കും അയൽക്കോളനികളും പ്രാദേശിക അമ്ലസഞ്ചയം മാറ്റുന്നതിനാൽ നിറം കുറയുകയോ കൂടുതൽ പ്രകടമാകുകയോ ചെയ്യാം. ASM ചിത്രസമാഹാരം ഇത് നേരിട്ട് കാണിക്കുന്നു: മിശ്ര കൾച്ചറിലെ E. coli-ക്ക് പ്രതീക്ഷിക്കുന്ന തിളക്കം നഷ്ടപ്പെട്ടേക്കാം, കാരണം ചുറ്റുമുള്ള ജീവികൾ അമ്ലപരിസരം മാറ്റുന്നു.

പരിശീലനം അനുവദിക്കുമ്പോഴെല്ലാം കൺട്രോളുകൾ ഉൾപ്പെടുത്തുക. EMB മാധ്യമങ്ങൾക്കായുള്ള സാധാരണ QC പട്ടികകളിൽ നൽകിയിരിക്കുന്നതുപോലെ, പഠനത്തിനായി സാധാരണ ഉപയോഗിക്കുന്ന ഒരു കൂട്ടത്തിൽ നീലകലർന്ന കറുപ്പും ലോഹത്തിളക്കവും പ്രകടിപ്പിക്കുന്നതിന് E. coli ATCC 25922, നിറമില്ലാത്ത പ്രകടസ്വഭാവത്തിനായി Salmonella Typhimurium ATCC 14028 അല്ലെങ്കിൽ Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 പോലുള്ള ഫെർമെന്റേഷൻ നടത്താത്ത ഒരു ജീവി, വളർച്ചാതടസ്സത്തിന്റെ കൺട്രോളായി Enterococcus faecalis അല്ലെങ്കിൽ Staphylococcus aureus പോലുള്ള ഒരു ഗ്രാം പോസിറ്റീവ് ജീവി എന്നിവ ഉൾപ്പെടുന്നു. പോസിറ്റീവ് കൺട്രോളിന് തിളക്കമില്ലെങ്കിൽ, തിരിച്ചറിയാത്ത ജീവിയെ സംശയിക്കുന്നതിനുമുമ്പ് ഇൻക്യുബേഷൻ, കോളനികളുടെ തിരക്ക്, ഫോർമുലേഷൻ എന്നിവ സംശയിക്കുക.

ചിത്രീകരണ പ്ലേറ്റ് അറ്റ്ലസ്

താഴെയുള്ള പ്ലേറ്റുകൾ സൃഷ്ടിച്ച ചിത്രീകരണങ്ങളാണ്; യഥാർഥ കൾച്ചറുകളുടെ ഫോട്ടോകളല്ല. ഏതെങ്കിലും ഒരു സ്ട്രെയിനിന്റെ കൃത്യമായ നിറഛായയല്ല, ശ്രദ്ധിക്കേണ്ട രൂപമാതൃകയാണ് അവ കാണിക്കുന്നത്. അവയെ ASM റഫറൻസ് ഫോട്ടോകളുമായും പഠനലബോറട്ടറിയിലെ യഥാർഥ പ്ലേറ്റുകളുമായും താരതമ്യം ചെയ്യുക.

പ്ലേറ്റ് 1: EMB അഗാറിലെ Escherichia coli, ശക്തമായി ലാക്ടോസ് ഫെർമെന്റ് ചെയ്യുന്ന ജീവി

EMB അഗാറിലെ E. coli-ക്ക് സാധാരണയായി ഇരുണ്ട പർപ്പിൾ മുതൽ നീലകലർന്ന കറുപ്പ് വരെയുള്ള നിറമുണ്ടാകും. പലപ്പോഴും ഇരുണ്ട മധ്യഭാഗവും ശക്തമായ അമ്ലോത്പാദനത്തിൽനിന്നുള്ള ലോഹസദൃശമായ പച്ചത്തിളക്കവും കാണാം. വിദ്യാർത്ഥികൾ അന്വേഷിക്കുന്ന പ്രസിദ്ധമായ നിരീക്ഷണമാണ് ഈ തിളക്കം; എന്നാൽ അതിനെ ഒരു നിർവചനമായല്ല, പിന്തുണയ്ക്കുന്ന തെളിവായാണ് കാണേണ്ടത്. സ്ട്രെയിൻ, ഇൻക്യുബേഷൻ സമയം, കോളനി സാന്ദ്രത, നോക്കുന്ന കോണം എന്നിവയ്ക്കനുസരിച്ച് തിളക്കത്തിന്റെ തീവ്രത മാറുന്നു. തിളക്കമില്ലാത്തത് E. coli-യെ ഒഴിവാക്കുന്നില്ല; തിളക്കമില്ലാത്ത ഇരുണ്ട കോളനി മറ്റു പല ഫെർമെന്റേഷൻ നടത്തുന്ന ജീവികളെയും സൂചിപ്പിക്കാം. തുടർപരിശോധനകൾക്കായി തിരക്കേറിയ ഭാഗത്തുനിന്ന് വായിച്ചറിയുന്നതിനുപകരം വ്യക്തമായി വേർതിരിഞ്ഞുനിൽക്കുന്ന ഒരു കോളനി തിരഞ്ഞെടുക്കുക.

പ്ലേറ്റ് 2: EMB അഗാറിലെ Klebsiella pneumoniae, ശ്ലേഷ്മസദൃശമായ ഫെർമെന്റേഷൻ നടത്തുന്ന ജീവി

EMB അഗാറിലെ Klebsiella pneumoniae സാധാരണയായി വലിയ, മിനുസത്തിളക്കമുള്ള, ശ്ലേഷ്മസദൃശ കോളനികൾ രൂപപ്പെടുത്തുന്നു. ഇവയ്ക്ക് പിങ്ക് കലർന്ന പർപ്പിൾ മുതൽ തവിട്ടുകലർന്ന പർപ്പിൾ വരെയുള്ള നിറഛായകളും പലപ്പോഴും ഇരുണ്ട മധ്യഭാഗങ്ങളും ഉണ്ടാകും; എന്നാൽ സാധാരണയായി ശക്തമായ ലോഹത്തിളക്കം ഉണ്ടാകാറില്ല. Enterobacter പോലുള്ള ബന്ധപ്പെട്ട ഫെർമെന്റേഷൻ നടത്തുന്ന ജീവികളിലും സമാനമായ രൂപം കാണാം. ശ്ലേഷ്മസദൃശ ഘടനയും കോളനിയുടെ വലുപ്പവും വായിച്ചറിയലിന്റെ ഭാഗമാണ്: ചെറുതും പരന്നതുമായ ഒരു പിങ്ക് കോളനിക്ക് നൽകുന്ന പ്രാധാന്യം, വലുതും കൂമ്പാരാകൃതിയിലുള്ളതുമായ ഒരു ശ്ലേഷ്മസദൃശ കോളനിക്ക് നൽകുന്നതിൽനിന്ന് വ്യത്യസ്തമാണ്. E. coli-യുടെ കാര്യത്തിലെന്നപോലെ, പ്ലേറ്റ് സൂചിപ്പിക്കുന്നത് ഫെർമെന്റേഷന്റെ ഒരു പ്രകടസ്വഭാവമാണ്; സ്പീഷീസ് തലത്തിൽ പേരിടാൻ താഴെ വിവരിക്കുന്ന ജൈവരാസ സ്ഥിരീകരണം ആവശ്യമാണ്.

പ്ലേറ്റ് 3: EMB അഗാറിലെ Salmonella-യും ഫെർമെന്റേഷൻ നടത്താത്ത മറ്റു ജീവികളും, നിറമില്ലാത്ത കോളനികൾ

EMB അഗാറിലെ Salmonella-യും Shigella, പല Pseudomonas ഐസൊലേറ്റുകൾ എന്നിവ ഉൾപ്പെടുന്ന ബന്ധപ്പെട്ട ലാക്ടോസ് ഫെർമെന്റ് ചെയ്യാത്ത ജീവികളും സാധാരണയായി നിറമില്ലാത്തതോ അർധസുതാര്യമായതോ ഇളം ആംബർ നിറമുള്ളതോ ആയ കോളനികളായി വളരുന്നു. ചില ഫോർമുലേഷനുകളും സാഹചര്യങ്ങളും നേരിയ പിങ്ക് ഛായ നൽകുന്നു; അതിനാൽ ഇളം പിങ്ക് കോളനി കണ്ടതുകൊണ്ടുമാത്രം അത് ഫെർമെന്റേഷൻ നടത്തുന്ന ജീവിയാണെന്ന് പറയാനാവില്ല. EMB, Salmonella-യെ Shigella-യിൽനിന്നോ ഫെർമെന്റേഷൻ നടത്താത്ത മറ്റു ജീവികളിൽനിന്നോ വേർതിരിക്കുന്നില്ല; ആ വേർതിരിവ് തുടർപരിശോധനകളിലൂടെയാണ് നടത്തേണ്ടത്. E. coli-യുടേതുപോലുള്ള ലോഹത്തിളക്കമുള്ള കോളനികൾ രൂപപ്പെടുത്തുന്ന ലാക്ടോസ് പോസിറ്റീവ് Salmonella സ്ട്രെയിനുകൾ രേഖപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ടെന്നതും ശ്രദ്ധിക്കുക. ഒരു പ്ലേറ്റുകൊണ്ടുമാത്രം അന്തിമനിഗമനത്തിലെത്താനാവില്ല എന്നതിന് ഇതും ഒരു കാരണമാണ്.

പ്ലേറ്റ് 4: Serratia marcescens-ഉം ഫോർമുലേഷൻ മൂലമുള്ള തെറ്റിദ്ധാരണയും

വിദ്യാർത്ഥികൾ പലപ്പോഴും ചുവന്ന കോളനികൾ പ്രതീക്ഷിക്കുകയും തുടർന്ന് പ്ലേറ്റ് തെറ്റായി വായിച്ചറിയുകയും ചെയ്യുന്നതിനാൽ Serratia marcescens-ന് പ്രത്യേക വിഭാഗം ആവശ്യമാണ്. മിക്ക ക്ലിനിക്കൽ ഐസൊലേറ്റുകളും ലാക്ടോസ് ഫെർമെന്റ് ചെയ്യുന്നില്ല; അതിനാൽ Levine EMB-യിൽ അവ സാധാരണയായി വിളറിയതോ നേരിയ നിറമുള്ളതോ ആയി കാണപ്പെടുന്നു. പല ഐസൊലേറ്റുകളും സുക്രോസ് ഫെർമെന്റ് ചെയ്യുന്നതിനാൽ, സുക്രോസ് അടങ്ങിയ ഫോർമുലേഷൻ കൂടുതൽ ഇരുണ്ടതോ അമ്ലവുമായി കൂടുതൽ ബന്ധപ്പെട്ടതോ ആയ പ്രതികരണം നൽകാം. 35 മുതൽ 37 C വരെ താപനിലയിൽ പരിചിതമായ ചുവന്ന പ്രോഡിജിയോസിന്‍ വർണകവും പ്രതീക്ഷിക്കരുത്; ഇൻക്യുബേറ്റർ താപനിലയിലെ വർണകോത്പാദനം വിശ്വസനീയമല്ല. പ്രോട്ടോക്കോൾ EMB അഗാറിലെ Serratia marcescens-നെക്കുറിച്ച് പറയുമ്പോൾ, ആ പ്രസ്താവന ഏത് ഫോർമുലേഷനെയാണ് അടിസ്ഥാനമാക്കുന്നതെന്ന് പരിശോധിക്കുക. Serratia-യുടെ ഉപാപചയത്തെക്കുറിച്ചുള്ള ഒരു അവലോകനം ഈ തെറ്റിദ്ധാരണയ്ക്കു പിന്നിലെ ലാക്ടോസ് നെഗറ്റീവ് സ്വഭാവവും സുക്രോസ് ഉപയോഗത്തിലെ വ്യത്യാസവും സംഗ്രഹിക്കുന്നു.

പ്ലേറ്റ് 5: കൺട്രോളുകളും വളർച്ച തടയപ്പെട്ട ജീവികളും

Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus, Bacillus പോലുള്ള ഗ്രാം പോസിറ്റീവ് ജീവികളുടെ വളർച്ച EMB അഗാറിൽ പൊതുവെ തടയപ്പെടുകയോ ഗണ്യമായി അടിച്ചമർത്തപ്പെടുകയോ ചെയ്യുന്നു; എന്നാൽ എല്ലാ സ്ട്രെയിനുകളിലും വളർച്ചാതടസ്സം പൂർണമല്ല. ഒരു കൺട്രോൾ പാനൽ വായിച്ചറിയലിനെ വിശ്വസനീയമാക്കുന്നു: E. coli കൺട്രോളിൽ നീലകലർന്ന കറുപ്പും തിളക്കവും സഹിതം നല്ല വളർച്ച കാണണം, ഫെർമെന്റേഷൻ നടത്താത്ത ജീവിയുടെ കൺട്രോളിൽ നിറമില്ലാത്ത വളർച്ച കാണണം, വളർച്ചാതടസ്സത്തിന്റെ കൺട്രോളിൽ വളരെ കുറച്ച് വളർച്ചയോ വളർച്ചയില്ലായ്മയോ കാണണം. വളർച്ചാതടസ്സത്തിന്റെ കൺട്രോൾ നന്നായി വളരുന്നുവെങ്കിൽ, തിരഞ്ഞെടുക്കൽ ഘട്ടം പരാജയപ്പെട്ടു; ആ ബാച്ചിലെ മറ്റെല്ലാ വായിച്ചറിയലുകളും സംശയാസ്പദമാണ്. സ്റ്റെയിനിംഗ് രീതികൾ കൾച്ചർ മാധ്യമങ്ങളിൽനിന്ന് വ്യത്യസ്തമായ ഒരു ചോദ്യത്തിനാണ് ഉത്തരം നൽകുന്നത്; ലബോറട്ടറിയിലെ സ്ലൈഡ് സ്റ്റെയിനിംഗിനെക്കുറിച്ച് അറിയാൻ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ സ്റ്റെയിനിംഗ് അറ്റ്ലസ് കാണുക.

പരിധികൾ വ്യക്തമാക്കിയ താരതമ്യം

തെറ്റിദ്ധരിപ്പിക്കുന്ന രൂപങ്ങളെ മൂന്ന് വാക്യങ്ങളിൽ സംഗ്രഹിക്കാം. ഇരുണ്ട നിറം E. coli ആണെന്നതിന് തുല്യമല്ല; Klebsiella, Enterobacter, ഫെർമെന്റേഷൻ നടത്തുന്ന മറ്റു ജീവികൾ എന്നിവ തിളക്കമില്ലാതെ ഇരുണ്ട മധ്യഭാഗങ്ങൾ രൂപപ്പെടുത്തുന്നു. പിങ്ക് നിറം Klebsiella ആണെന്നതിന് തുല്യമല്ല; മിതമായോ സാവധാനത്തിലോ ഫെർമെന്റ് ചെയ്യുന്ന ജീവികളും ഫെർമെന്റേഷൻ നടത്താത്തവയായി പൊതുവെ കണക്കാക്കപ്പെടുന്ന ചില ജീവികളും പിങ്ക് അല്ലെങ്കിൽ ലാവെൻഡർ നിറത്തിൽ കാണപ്പെടുന്നു. തിളക്കം E. coli ആണെന്ന നിർണായക തെളിവിന് തുല്യമല്ല; ശക്തമായി ഫെർമെന്റ് ചെയ്യുന്ന മറ്റു ജീവികൾക്കും അത് ഉണ്ടാക്കാം. പഠനപ്രോട്ടോക്കോളും അതിലെ മിശ്ര കൾച്ചർ ചിത്രങ്ങളും ഈ ഓരോ പരിമിതിയും ചിത്രീകരിക്കുന്നു.

സ്ഥിരീകരണത്തിന്റെ പരിധികൾ

EMB അഗാർ റിപ്പോർട്ട് ചെയ്യുന്നത് ഒരു പ്രകടസ്വഭാവമാണ്, സ്പീഷീസ് അല്ല. വ്യത്യസ്ത ജീവികൾക്ക് ഒരേ കോളനി രൂപം ഉണ്ടായേക്കാം. സ്ട്രെയിൻ, പ്രായം, കോളനികളുടെ തിരക്ക്, ഫോർമുലേഷൻ, ഇൻക്യുബേഷൻ എന്നിവയ്ക്കനുസരിച്ച് ഒരു ജീവി അതിന്റെ പാഠപുസ്തകത്തിലെ രൂപത്തിൽനിന്ന് വ്യതിചലിക്കുകയും ചെയ്യാം. അതുകൊണ്ടാണ് പഠനപരവും ക്ലിനിക്കലുമായ പ്രവർത്തനക്രമങ്ങൾ EMB-യിലെ രൂപലക്ഷണങ്ങളെ പ്രാഥമിക സൂചനയായി കാണുന്നത്.

തെളിവിന്റെ അടിസ്ഥാനത്തിൽ ന്യായീകരിക്കാവുന്ന ഒരു വിദ്യാർത്ഥി പ്രവർത്തനക്രമം ഇതാണ്: വേർതിരിഞ്ഞുനിൽക്കുന്ന കോളനിയെ വിവരിക്കുക (വലുപ്പം, നിറം, മധ്യഭാഗം, ചരിഞ്ഞ പ്രകാശത്തിലെ തിളക്കം, ശ്ലേഷ്മസദൃശ സ്വഭാവം), ഫോർമുലേഷൻ, ഇൻക്യുബേഷൻ സമയം, താപനില, കൺട്രോളുകൾ എന്നിവ രേഖപ്പെടുത്തുക; തുടർന്ന് ഏതൊരു സ്ഥിരീകരണ പരിശോധനയ്ക്കും മുമ്പ് വ്യക്തമായി വേർതിരിഞ്ഞുനിൽക്കുന്ന ഒരു കോളനി സബ്കൾച്ചർ ചെയ്ത് ശുദ്ധ കൾച്ചർ നേടുക. സാധാരണ തുടർപരിശോധനകളിൽ, E. coli-യുടെയും കോളിഫോമുകളുടെയും പ്രാഥമിക തിരിച്ചറിയലിനായി ഗ്രാം സ്റ്റെയിനും IMViC പ്രതികരണങ്ങളും, ആന്ത്രബന്ധിത ജീവികൾക്കായി TSI അല്ലെങ്കിൽ KIA-യും ജീവിക്കനുസരിച്ചുള്ള ജൈവരാസ പരിശോധനാ പാനലുകളും ഉൾപ്പെടുന്നു. ആവശ്യമായിടത്ത് സീറോളജിക്കൽ, MALDI TOF, അല്ലെങ്കിൽ സാധുത സ്ഥിരീകരിച്ച മറ്റു തിരിച്ചറിയൽ രീതികളും ഉപയോഗിക്കുന്നു. തിരഞ്ഞെടുക്കാനും വേർതിരിച്ചറിയാനും സഹായിക്കുന്ന ആന്ത്രബന്ധിത കൾച്ചർ മാധ്യമങ്ങൾക്കിടയിൽ EMB-യുടെ സ്ഥാനം മനസ്സിലാക്കാൻ, ആന്ത്രബന്ധിത കൾച്ചർ മാധ്യമങ്ങളെക്കുറിച്ചുള്ള ആമുഖങ്ങളും ഗ്രാം സ്റ്റെയിനിന്റെ തുടർപരിശോധനകളും കാണുക. നീല സ്ലൈഡ് സ്റ്റെയിനിന് എന്തെല്ലാം തെളിയിക്കാനാകും, എന്തെല്ലാം തെളിയിക്കാനാവില്ല എന്ന അനുബന്ധ ചോദ്യത്തിൽ, മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ സ്റ്റെയിനിംഗ് അറ്റ്ലസ് ഇതേ സമീപനത്തോടെ നിരീക്ഷണത്തെയും നിഗമനത്തെയും വേർതിരിക്കുന്നു.

നിഗമനത്തിനു മുമ്പ് നിരീക്ഷണം എഴുതുക. "24 മണിക്കൂറിൽ Levine EMB-യിൽ നോക്കുന്ന കോണനുസരിച്ച് മാറുന്ന പച്ചത്തിളക്കമുള്ള ഇരുണ്ട നീലകലർന്ന കറുത്ത കോളനികൾ; ശക്തമായ ലാക്ടോസ് ഫെർമെന്റേഷനുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നു" എന്നത് ന്യായീകരിക്കാവുന്നതാണ്. "E. coli, സ്ഥിരീകരിച്ചു" എന്നതിന് പ്ലേറ്റിനു മാത്രം നൽകാനാകാത്ത സ്ഥിരീകരണ ഘട്ടം ആവശ്യമാണ്.