ການວັດຊະນິດອອກຊີເຈນທີ່ມີປະຕິກິລິຍາໃນການທົດລອງເມທິລີນບລູ

ຫ້ອງທົດລອງສອງແຫ່ງເຮັດສິ່ງທີ່ແຕ່ລະແຫ່ງເອີ້ນວ່າການທົດລອງການຕ້ານອອກຊິເດຊັນຂອງເມທິລີນບລູ. ແຫ່ງໜຶ່ງລາຍງານວ່າສານຍ້ອມນີ້ຫຼຸດຊະນິດອອກຊີເຈນທີ່ມີປະຕິກິລິຍາ. ອີກແຫ່ງລາຍງານວ່າມັນສ້າງຊະນິດອອກຊີເຈນເຫຼົ່ານັ້ນ. ທັງສອງແຫ່ງສະແດງເສັ້ນໂຄ້ງການຕອບສະໜອງຕາມປະລິມານທີ່ຊັດເຈນ. ທັງສອງແຫ່ງລາຍງານຢ່າງຈິງໃຈ. ຄວາມແຕກຕ່າງບໍ່ໄດ້ມາຈາກການສໍ້ໂກງ ຫຼືການຂາດຄວາມສາມາດ. ແຕ່ເປັນເພາະທັງສອງກຸ່ມວັດຄົນລະສິ່ງ ພາຍໃຕ້ແສງທີ່ຕ່າງກັນ ດ້ວຍສານກວດວັດທີ່ຕອບຄົນລະຄຳຖາມ ແລ້ວໃຊ້ຄຳດຽວກັນອະທິບາຍທັງສອງຄຳຕອບ: ROS.

ເມທິລີນບລູເປັນໂມເລກຸນທີ່ວັດໃຫ້ແມ່ນຍຳໄດ້ຍາກ ເພາະມັນມີສ່ວນຮ່ວມໃນປະຕິກິລິຍາເຄມີທີ່ມັນຄວນຈະເປັນພຽງສິ່ງທີ່ຖືກສັງເກດ. ໃນຄວາມມືດ ມັນຖ່າຍໂອນອິເລັກຕຣອນລະຫວ່າງຕົວໃຫ້ແລະຕົວຮັບ ແລ້ວກັບຄືນສູ່ຮູບແບບເລີ່ມຕົ້ນ ພ້ອມທີ່ຈະໝູນວຽນອີກຄັ້ງ. ພາຍໃຕ້ແສງ ມັນກາຍເປັນສານໄວແສງ ໂດຍເຂົ້າສູ່ສະຖານະທຣິບເລັດທີ່ຖືກກະຕຸ້ນ ຊຶ່ງມັນສາມາດຖ່າຍໂອນພະລັງງານໃຫ້ອອກຊີເຈນເພື່ອສ້າງອອກຊີເຈນຊິງເກລັດ ຫຼືຖ່າຍໂອນອິເລັກຕຣອນເພື່ອສ້າງອະນຸມູນແລະໄຮໂດຣເຈນເປີອອກໄຊດ໌. ສານກວດວັດໃດກໍຕາມທີ່ໃສ່ເຂົ້າໃນລະບົບນີ້ ອາດຖືກອອກຊິໄດຊ໌, ຖືກຣີດິວຊ໌, ຖືກຟອກຈາງ ຫຼືຖືກບົດບັງສັນຍານທາງແສງໂດຍສານຍ້ອມເອງ. ດັ່ງນັ້ນ ຄຳຖາມທຳອິດຂອງການອ່ານຄ່າ ROS ຈຶ່ງບໍ່ແມ່ນວ່າຕົວເລກເທົ່າໃດ. ແຕ່ແມ່ນວ່າການທົດສອບນັ້ນກວດພົບຫຍັງແທ້ ແລະສານຍ້ອມມີຜົນແນວໃດຕໍ່ການທົດສອບ.

Amplex Red: ການທົດສອບໄຮໂດຣເຈນເປີອອກໄຊດ໌ທີ່ມີການສອບທຽບ

ການໃຊ້ ເມທິລີນບລູຮ່ວມກັບ Amplex Red ເປັນຄູ່ທີ່ມີຫຼັກຖານຮອງຮັບໜັກແໜ້ນທີ່ສຸດໃນວັນນະກຳວິຊາການດ້ານນີ້ ເມື່ອຈັດການທົດສອບຢ່າງຖືກຕ້ອງ. ປະຕິກິລິຍາເຄມີມີຄວາມຈຳເພາະ: ເອນໄຊ horseradish peroxidase ໃຊ້ໄຮໂດຣເຈນເປີອອກໄຊດ໌ເພື່ອອອກຊິໄດຊ໌ສານຕັ້ງຕົ້ນ Amplex ໃຫ້ເປັນ resorufin ທີ່ເຮືອງແສງ ໃນອັດຕາສ່ວນປະລິມານສານປະມານໜຶ່ງຕໍ່ໜຶ່ງ. ເປີອອກໄຊດ໌ຈາກຕົວຢ່າງປ່ຽນເປັນການເຮືອງແສງທີ່ເຄື່ອງກວດຈັບອ່ານໄດ້. ບໍ່ມີສານອື່ນໃນກຸ່ມ ROS ທີ່ຍອມຮັບກັນໂດຍທົ່ວໄປຂັບເຄື່ອນປະຕິກິລິຍານີ້ໂດຍກົງ.

ຂໍ້ໄດ້ປຽບທີ່ສຳຄັນທີ່ສຸດແມ່ນການສອບທຽບ. ຜູ້ປະຕິບັດງານທີ່ຮອບຄອບຈະທົດສອບສານມາດຕະຖານເປີອອກໄຊດ໌ທີ່ຮູ້ປະລິມານ ໃນບັບເຟີດຽວກັນ ດ້ວຍຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ peroxidase ແລະສານຕັ້ງຕົ້ນດຽວກັນ, ເວລາບົ່ມດຽວກັນ ແລະການຕັ້ງຄ່າທາງແສງດຽວກັນ ແລ້ວອ່ານຄ່າຕົວຢ່າງທຽບກັບເສັ້ນໂຄ້ງນັ້ນ. ໃນການສຶກສາໄມໂທຄອນເດຣຍທີ່ແຍກຈາກສະໝອງ ຊຶ່ງເປັນພື້ນຖານຂອງວິທີນີ້ ຜູ້ຂຽນໄດ້ເຮັດແບບນັ້ນແທ້ ໂດຍເພີ່ມເປີອອກໄຊດ໌ທີ່ຮູ້ປະລິມານໃນຕອນທ້າຍຂອງການທົດສອບແຕ່ລະຮອບ ແລະລາຍງານຕົວເລກເປັນອັດຕາໃນໜ່ວຍພິໂຄໂມນຕໍ່ນາທີຕໍ່ມິນລິກຣາມຂອງໂປຣຕີນ ແທນໜ່ວຍການເຮືອງແສງທີ່ກຳນົດຂຶ້ນເອງ. ນີ້ຄືສິ່ງທີ່ປ່ຽນການເຮືອງແສງໃຫ້ເປັນການວັດ.

ລາຍລະອຽດສາມຢ່າງຈາກການສຶກສານັ້ນຄວນນຳໄປເປັນແບບຢ່າງ. ຢ່າງທຳອິດ ຜູ້ຂຽນຢືນຢັນສັນຍານດ້ວຍ catalase ຊຶ່ງສະຫຼາຍເປີອອກໄຊດ໌. ການເພີ່ມຂຶ້ນຂອງການເຮືອງແສງທີ່ເກີດຈາກເມທິລີນບລູຢຸດລົງເມື່ອເພີ່ມ catalase ຢືນຢັນວ່າສັນຍານມາຈາກເປີອອກໄຊດ໌ ບໍ່ແມ່ນສັນຍານລວງທາງແສງ. ຢ່າງທີສອງ ພວກເຂົາທົດສອບຜົນຂອງແສງໂດຍກົງ ໂດຍໃຊ້ຊັດເຕີກັ້ນລຳແສງກະຕຸ້ນ ໃຫ້ຕົວຢ່າງໄດ້ຮັບແສງພຽງໜຶ່ງສ່ວນແປດຂອງປະລິມານປົກກະຕິ ແລະສັນຍານຫຼຸດລົງພຽງເກົ້າເປີເຊັນ. ເປີອອກໄຊດ໌ທີ່ລາຍງານຫຼາຍກວ່າເກົ້າສິບເປີເຊັນບໍ່ໄດ້ຂຶ້ນກັບແສງທີ່ໃຊ້ໃນການວັດ. ຢ່າງທີສາມ ພວກເຂົາວັດການກຳຈັດເປີອອກໄຊດ໌ແຍກຕ່າງຫາກດ້ວຍອິເລັກໂທຣດ ແລະພົບວ່າສານຍ້ອມທັງເພີ່ມການຜະລິດແລະເຮັດໃຫ້ການກຳຈັດຊ້າລົງ. ສານກວດວັດທີ່ລາຍງານພຽງການເຮືອງແສງສຸດທິຈະລວມຜົນທັງສອງນີ້ເຂົ້າເປັນຢ່າງດຽວ.

ການທົດສອບນີ້ຍັງມີຈຸດທີ່ອາດໃຫ້ຜົນຜິດພາດ ແລະເມທິລີນບລູກໍເຮັດໃຫ້ເກີດໄດ້ຫຼາຍຢ່າງ. ສານຍ້ອມດູດກືນແສງເປັນຊ່ວງກວ້າງໃນບໍລິເວນສີແດງດຽວກັນກັບທີ່ resorufin ປ່ອຍແສງ ດັ່ງນັ້ນ ເມື່ອສານຍ້ອມມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງ ຕົວຢ່າງອາດບົດບັງສັນຍານຂອງຕົນເອງຜ່ານຜົນການກອງແສງພາຍໃນ. ສານມາດຕະຖານຈຶ່ງຄວນມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງສານຍ້ອມເທົ່າກັບຕົວຢ່າງ. Amplex Red ຍັງອາດເກີດອອກຊິເດຊັນຈາກແສງດ້ວຍຕົນເອງ ແລະຜະລິດຕະພັນ resorufin ຂອງມັນອາດເຂົ້າສູ່ວົງຈອນຣີດອກຊ໌ທີ່ຂັບເຄື່ອນດ້ວຍແສງ ເຊິ່ງສ້າງຊູເປີອອກໄຊດ໌ແລະເປີອອກໄຊດ໌. ສິ່ງນີ້ສຳຄັນຫຼາຍເມື່ອການທົດລອງມີການສ່ອງແສງໃສ່ສານໄວແສງດ້ວຍ. ວິທີແກ້ໃນທາງປະຕິບັດແມ່ນສ່ອງແສງໃສ່ຕົວຢ່າງເມທິລີນບລູກ່ອນ ແລ້ວນຳສ່ວນແບ່ງຂອງຕົວຢ່າງໄປທົດສອບດ້ວຍສານທົດສອບ Amplex ໃນຄວາມມືດ ແທນການສ່ອງແສງໃສ່ສານຍ້ອມແລະສານກວດວັດພ້ອມກັນ. ສຸດທ້າຍ ເອນໄຊ superoxide dismutase ບໍ່ໄດ້ພຽງແຕ່ຫຼຸດສັນຍານ Amplex: ການປ່ຽນຊູເປີອອກໄຊດ໌ເປັນເປີອອກໄຊດ໌ອາດເພີ່ມສັນຍານໄດ້. ຊຸດຄວບຄຸມ SOD ທີ່ເຮັດໃຫ້ການເຮືອງແສງເພີ່ມຂຶ້ນບໍ່ໄດ້ລົ້ມເຫຼວ. ມັນໄດ້ລະບຸວ່າຊູເປີອອກໄຊດ໌ເປັນຊະນິດສານທີ່ຢູ່ກ່ອນໜ້າໃນລຳດັບປະຕິກິລິຍາ.

DCFDA: ຕົວຊີ້ວັດອອກຊິເດຊັນທີ່ບໍ່ຈຳເພາະ

ການໃຊ້ ເມທິລີນບລູຮ່ວມກັບ DCFDA ເປັນແຫຼ່ງຂອງຄວາມສັບສົນສ່ວນໃຫຍ່. DCFH-DA ເປັນສານຕັ້ງຕົ້ນທີ່ນຳເຂົ້າສູ່ເຊວ. ເອນໄຊ esterase ພາຍໃນເຊວຕັດໝູ່ອາຊີເຕດຂອງມັນອອກ ເຫຼືອເປັນ DCFH ທີ່ບໍ່ເຮືອງແສງ ແລະການອອກຊິໄດຊ໌ DCFH ຈະໃຫ້ DCF ທີ່ເຮືອງແສງ. ສານທີ່ອອກຊິໄດຊ໌ມັນໄດ້ມີຫຼາຍຢ່າງ: ອະນຸມູນໄຮດຣອກຊິລ, ສານຕົວກາງຂອງ peroxidase ແລະ heme, ໄນໂຕຣເຈນໄດອອກໄຊດ໌, ອາຊິດໄຮໂປຄລໍຣັສ ແລະອະນຸມູນທີ່ມາຈາກເປີອອກຊີໄນໄຕຣຕ໌. ໄຮໂດຣເຈນເປີອອກໄຊດ໌ຢ່າງດຽວບໍ່ອອກຊິໄດຊ໌ມັນໂດຍກົງໃນອັດຕາທີ່ໃຊ້ວັດໄດ້ຢ່າງເໝາະສົມ; ການເຮືອງແສງທີ່ຂຶ້ນກັບເປີອອກໄຊດ໌ໂດຍທົ່ວໄປຕ້ອງມີເຫຼັກ, ໂປຣຕີນ heme ຫຼືປະຕິກິລິຍາເຄມີຂອງ peroxidase ເຂົ້າຮ່ວມ.

ຂໍ້ວິຈານທີ່ທຸກພາກວິທີການຄວນອ້າງອີງ ມາຈາກການວິເຄາະ DCFH ໃນຖານະສານກວດວັດໂດຍ Kalyanaraman ແລະຄະນະ ດັ່ງທີ່ສະຫຼຸບໄວ້ໃນ ການສຶກສາໄມໂທຄອນເດຣຍຂອງສະໝອງທີ່ບໍ່ຍອມຮັບການໃຊ້ DCFDA ດ້ວຍເຫດຜົນນີ້. ພວກເຂົາສະແດງວ່າສານຍ້ອມນີ້ເຮັດປະຕິກິລິຍາຊ້າ, ມີອັດຕາສ່ວນປະລິມານສານທີ່ຍັງບໍ່ໄດ້ລະບຸ, ບໍ່ມີການສອບທຽບທີ່ຖືກຕ້ອງ ແລະເຮັດປະຕິກິລິຍາກັບສານປະກອບທີ່ບໍ່ແມ່ນ ROS. ສານກວດວັດຍັງຂະຫຍາຍສິ່ງທີ່ມັນວັດ: ການອອກຊິໄດຊ໌ DCFH ໂດຍເສຍອິເລັກຕຣອນໜຶ່ງຕົວ ສ້າງອະນຸມູນ DCF ທີ່ເຮັດປະຕິກິລິຍາກັບອອກຊີເຈນເພື່ອສ້າງຊູເປີອອກໄຊດ໌ ຊຶ່ງເກີດປະຕິກິລິຍາດິສມິວເທຊັນໃຫ້ເປີອອກໄຊດ໌ເພີ່ມຂຶ້ນ. ການອ່ານຄ່າຈຶ່ງສ້າງປະຕິກິລິຍາເຄມີທີ່ມັນລາຍງານຂຶ້ນເອງສ່ວນໜຶ່ງ.

ສິ່ງເຫຼົ່ານີ້ບໍ່ໄດ້ເຮັດໃຫ້ DCFDA ໄຮ້ປະໂຫຍດ. ແຕ່ເຮັດໃຫ້ມັນເປັນວິທີກວດເບື້ອງຕົ້ນ ບໍ່ແມ່ນວິທີລະບຸຊະນິດສານ. ການເຮືອງແສງຂອງ DCF ທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນ ໝາຍເຖິງການອອກຊິໄດຊ໌ສານກວດວັດທີ່ຂຶ້ນກັບສານອອກຊິໄດຊ໌ໄດ້ເພີ່ມຂຶ້ນ. ມັນບໍ່ໄດ້ໝາຍຄວາມວ່າເປີອອກໄຊດ໌ເພີ່ມຂຶ້ນ ແລະແນ່ນອນວ່າບໍ່ໄດ້ໝາຍຄວາມວ່າ ROS ທັງໝົດເພີ່ມຂຶ້ນ ເພາະບໍ່ມີສານກວດວັດຕົວດຽວໃດວັດປະລິມານນັ້ນໄດ້. ງານກ່ຽວກັບເມທິລີນບລູໃນຊ່ວງກ່ອນ ທີ່ອາໄສການອອກຊິໄດຊ໌ DCF ໃນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງກວ່າໜຶ່ງໄມໂຄຣໂມລາ ລາຍງານຜົນທີ່ສົ່ງເສີມອອກຊິເດຊັນ ຂະນະທີ່ລະບົບອື່ນໃນຍຸກດຽວກັນລາຍງານການປ້ອງກັນການຕາຍຂອງເຊວທີ່ເກີດຈາກເປີອອກໄຊດ໌. ຂໍ້ສັງເກດທັງສອງອາດເປັນຈິງສຳລັບສານຍ້ອມດຽວກັນໃນບໍລິບົດຣີດອກຊ໌ທີ່ຕ່າງກັນ ແລະຜົນ DCF ພຽງຢ່າງດຽວບໍ່ສາມາດບອກໄດ້ວ່າສານອອກຊິໄດຊ໌ຊະນິດໃດເປັນຕົ້ນຕໍຂອງສັນຍານ. ຄວາມສຳຄັນຂອງງານໄມໂທຄອນເດຣຍຂອງສະໝອງໃນຊ່ວງກ່ອນ ແມ່ນການປ່ຽນຈາກການກວດເບື້ອງຕົ້ນນີ້ມາເປັນການວັດເປີອອກໄຊດ໌ທີ່ມີການສອບທຽບ ແລະພົບປະລິມານເປີອອກໄຊດ໌ໂດຍກົງ: ແມ່ນແຕ່ສານຍ້ອມໜຶ່ງຮ້ອຍນາໂນໂມລາ ກໍເພີ່ມການປ່ອຍເປີອອກໄຊດ໌ຫຼາຍເທົ່າ ໃນທຸກສານຕັ້ງຕົ້ນແລະທຸກສະພາວະການຫາຍໃຈທີ່ທົດສອບ.

DCFDA ຍັງມີຈຸດທີ່ອາດນຳໃຫ້ຕີຄວາມຜິດອີກຢ່າງໜຶ່ງ ຊຶ່ງຈຳເພາະຕໍ່ເມທິລີນບລູ. ສານຍ້ອມມີສີເຂັ້ມຫຼາຍ ແລະເຮັດປະຕິກິລິຍາຣີດອກຊ໌ໄດ້ ຈຶ່ງອາດຟອກຈາງການເຮືອງແສງ, ດັບການປ່ອຍແສງ ຫຼືອອກຊິໄດຊ໌ສານກວດວັດໂດຍບໍ່ຂຶ້ນກັບ ROS ຂອງເຊວ. ຊຸດຄວບຄຸມທີ່ມີສານຍ້ອມຮ່ວມກັບສານກວດວັດ ແຕ່ບໍ່ມີເຊວ ບໍ່ແມ່ນສ່ວນເສີມທີ່ຈະເຮັດຫຼືບໍ່ເຮັດກໍໄດ້. ມັນເປັນການທົດລອງທີ່ບອກວ່າສານຍ້ອມມີປະຕິສຳພັນກັບສານກວດວັດຫຼືບໍ່.

ການດັກຈັບສະປິນ ແລະການໃຊ້ອອກຊີເຈນ: ຊະນິດສານແລະອັດຕາການໄຫຼ

ໃນຂະນະທີ່ສານກວດວັດເຮືອງແສງລາຍງານວ່າມີບາງສິ່ງທີ່ຖືກອອກຊິໄດຊ໌ໄດ້ເກີດຂຶ້ນ ການວັດການສັ່ນພ້ອງສະປິນຂອງອິເລັກຕຣອນຮ່ວມກັບສານດັກຈັບສະປິນ ລາຍງານໄດ້ໃກ້ຄຽງກວ່າວ່າສິ່ງນັ້ນແມ່ນຫຍັງ. ການສຶກສາເຄມີແສງຂອງເມທິລີນບລູທີ່ເປັນງານຄລາສສິກ ໄດ້ໃຊ້ ESR ເພື່ອກວດພົບອະນຸມູນອາສຄໍເບດຈາກສານຍ້ອມ, ອາສຄໍເບດ ແລະແສງ ແລ້ວສະແດງການເກີດເປີອອກໄຊດ໌ໃນການທົດລອງການໃຊ້ອອກຊີເຈນ ແລະການເກີດອະນຸມູນໄຮດຣອກຊິລທີ່ມີເຫຼັກເປັນຕົວເລັ່ງ ໃນການທົດລອງດັກຈັບສະປິນ. ແຕ່ລະເຕັກນິກຕອບຄຳຖາມທີ່ເຕັກນິກອື່ນຕອບບໍ່ໄດ້: ESR ລະບຸຊະນິດອະນຸມູນ, ການໃຊ້ອອກຊີເຈນໃຫ້ອັດຕາການໄຫຼຂອງປະຕິກິລິຍາໂດຍບໍ່ຂຶ້ນກັບສານກວດວັດເຮືອງແສງໃດໆ ແລະການໃຊ້ຮ່ວມກັນສະແດງວ່າທັງເສັ້ນທາງອອກຊີເຈນຊິງເກລັດແລະເສັ້ນທາງອະນຸມູນກຳລັງເກີດຂຶ້ນໃນລະບົບທີ່ຖືກສ່ອງແສງດຽວກັນ.

ຜົນຈາກປີ 1984 ນັ້ນຍັງອ່ານໄດ້ຄືກັບປ້າຍຄຳເຕືອນ. ເມື່ອມີແສງແລະສານຣີດິວຊ໌ ສານຍ້ອມສ້າງເປີອອກໄຊດ໌ ແລະເມື່ອມີເຫຼັກ ລະບົບຈະສ້າງອະນຸມູນໄຮດຣອກຊິລ ຊຶ່ງເປັນຊະນິດສານທີ່ມີປະຕິກິລິຍາສູງທີ່ສຸດໃນກຸ່ມ. ຜູ້ຂຽນເຊື່ອມໂຍງສິ່ງນີ້ກັບອາສຄໍເບດໃນຕາ ແລະຕັ້ງຄຳຖາມຕໍ່ການນຳໄປໃຊ້ທາງຕາຢ່າງບໍ່ລະມັດລະວັງ. ຜູ້ອ່ານໃນປັດຈຸບັນຄວນສັງເກດເງື່ອນໄຂ: ແສງ ບວກສານຣີດິວຊ໌ ບວກເຫຼັກ. ເອົາສິ່ງໃດສິ່ງໜຶ່ງອອກ ເສັ້ນທາງນັ້ນຈະອ່ອນລົງຫຼືຫາຍໄປ.

ອິເລັກໂທຣດອອກຊີເຈນມີບົດບາດດ້ວຍເຫດຜົນທີ່ຕ່າງອອກໄປ. ອິເລັກໂທຣດແບບ Clark ວັດການໃຊ້ອອກຊີເຈນສຸດທິ ຊຶ່ງຢືນຢັນວ່າປະຕິກິລິຍາຣີດອກຊ໌ທີ່ສານຍ້ອມຂັບເຄື່ອນກຳລັງໃຊ້ອອກຊີເຈນໂມເລກຸນ ແລະໃຫ້ຂໍ້ມູນຈະລະນະສາດທີ່ສັນຍານລວງຈາກການເຮືອງແສງບໍ່ສາມາດປອມແປງໄດ້. ມັນບໍ່ໄດ້ລະບຸຜະລິດຕະພັນ. ການເກີດເປີອອກໄຊດ໌, ຊູເປີອອກໄຊດ໌, ນ້ຳ ແລະການຄາຍສະພາບຂອງອອກຊີເຈນຊິງເກລັດ ລ້ວນໃຊ້ອອກຊີເຈນ. ອັດຕາການໄຫຼທີ່ບໍ່ຮູ້ຊະນິດສານ ບໍ່ຄົບຖ້ວນເຊັ່ນດຽວກັບການຮູ້ຊະນິດສານໂດຍບໍ່ຮູ້ອັດຕາການໄຫຼ. ນີ້ແມ່ນເຫດຜົນທີ່ບົດຄວາມທີ່ມີຫຼັກຖານໜັກແໜ້ນໃຊ້ອິເລັກໂທຣດຄູ່ກັບການທົດສອບເປີອອກໄຊດ໌ທີ່ມີການສອບທຽບ ຫຼືສານດັກຈັບ.

ເຫດໃດຜົນການຕ້ານອອກຊິເດຊັນຈຶ່ງຂັດແຍ້ງກັນ

ເມື່ອນຳຜົນການອ່ານທັງສາມມາປຽບທຽບກັນ ຄວາມຂັດແຍ້ງທີ່ເບິ່ງຄືມີຢູ່ໃນວັນນະກຳກ່ຽວກັບເມທິລີນບລູ ຈະອະທິບາຍໄດ້ດ້ວຍຄວາມແຕກຕ່າງຂອງວິທີການ ຮ່ວມກັບຂໍ້ເທັດຈິງທາງຊີວະວິທະຍາສາມຢ່າງ.

ຢ່າງທຳອິດ ສານຍ້ອມເປັນທັງຕົວຖ່າຍໂອນອິເລັກຕຣອນແລະແຫຼ່ງເປີອອກໄຊດ໌. ໂດຍບ່ຽງອິເລັກຕຣອນອອກຈາກຈຸດໃນຂະບວນການຫາຍໃຈ ທີ່ອອກຊີເຈນຈະກາຍເປັນຊູເປີອອກໄຊດ໌ຖ້າບໍ່ມີການບ່ຽງນັ້ນ ມັນສາມາດຫຼຸດ ROS ຊະນິດໜຶ່ງ ໃນຂະນະທີ່ຮູບແບບທີ່ຖືກຣີດິວຊ໌ຂອງມັນຣີດິວຊ໌ອອກຊີເຈນໂດຍກົງໃຫ້ເປັນເປີອອກໄຊດ໌ ເພີ່ມ ROS ອີກຊະນິດໜຶ່ງ. ຫ້ອງທົດລອງທີ່ສຶກສາ ເຄມີຣີດອກຊ໌ຂອງໄມໂທຄອນເດຣຍແລະບົດບາດຂອງມັນໃນການເປັນເສັ້ນທາງອ້ອມ ຈຶ່ງຄວນຄາດຫວັງຄຳຕອບທີ່ຂຶ້ນກັບສານກວດວັດ: ຄ່າທີ່ໄວຕໍ່ຊູເປີອອກໄຊດ໌ຫຼຸດລົງ ຂະນະທີ່ຄ່າເປີອອກໄຊດ໌ເພີ່ມຂຶ້ນໃນຄິວເວດດຽວກັນ.

ຢ່າງທີສອງ ເປີອອກໄຊດ໌ໃນປະລິມານຕ່ຳເປັນສັນຍານ ບໍ່ແມ່ນພຽງສິ່ງທີ່ກໍ່ຄວາມເສຍຫາຍ. ການສຶກສາໄມໂທຄອນເດຣຍຂອງສະໝອງໜູທີ່ສືບຕໍ່ຈາກງານກ່ອນ ພົບ ການສ້າງເປີອອກໄຊດ໌ຈາກສານຍ້ອມພຽງຫ້າສິບນາໂນໂມລາ ໂດຍບໍ່ມີຮອຍເສຍຫາຍຂອງ DNA ໄມໂທຄອນເດຣຍໃນລະດັບທີ່ໃຊ້ທາງການຮັກສາ ພ້ອມກັບການປ້ອງກັນຮອຍເສຍຫາຍທີ່ເກີດຈາກ rotenone ຫຼັງການໃຫ້ສານຍ້ອມລ່ວງໜ້າ. ມີພຽງທີ່ໜຶ່ງຮ້ອຍໄມໂຄຣໂມລາ ຊຶ່ງສູງກວ່າຊ່ວງທີ່ໃຊ້ທາງການຮັກສາຫຼາຍ ທີ່ສານຍ້ອມເຮັດໃຫ້ຊິ້ນສ່ວນ DNA ບາງສ່ວນທີ່ເລືອກມາເສຍຫາຍ ແລະແສງສີແດງຮ່ວມກັບສານຍ້ອມຊາວໄມໂຄຣໂມລາ ສ້າງອອກຊີເຈນຊິງເກລັດທີ່ເຮັດໃຫ້ທຸກຊິ້ນສ່ວນທີ່ທົດສອບເສຍຫາຍ. ກົນໄກທີ່ສະເໜີເປັນແບບຮໍມີຊິສ: ການຜະລິດເປີອອກໄຊດ໌ໃນລະດັບອ່ອນໆ ກະຕຸ້ນລະບົບປ້ອງກັນອອກຊິເດຊັນທີ່ເຊື່ອມໂຍງກັບ Nrf2 ແລະການສ້າງໄມໂທຄອນເດຣຍໃໝ່ ດັ່ງນັ້ນ ຄ່າທີ່ບົ່ງຊີ້ການສົ່ງເສີມອອກຊິເດຊັນໃນໄລຍະສັ້ນ ຈຶ່ງເກີດກ່ອນຜົນການຕ້ານອອກຊິເດຊັນໃນໄລຍະຍາວ. ການທົດສອບທີ່ອ່ານຄ່າເມື່ອຄົບໜຶ່ງຊົ່ວໂມງ ແລະການທົດສອບທີ່ອ່ານຄ່າເມື່ອຄົບໜຶ່ງມື້ ອາດໃຫ້ຜົນບໍ່ກົງກັນ ເພາະສະພາບທາງຊີວະວິທະຍາປ່ຽນໄປໃນລະຫວ່າງນັ້ນ.

ຢ່າງທີສາມ ແສງເປັນຕົວກຳນົດແມ່ນແຕ່ວ່າມີໂມເລກຸນຊະນິດໃດຢູ່. ການສ່ອງແສງກຳຈັດໝູ່ເມທິລຂອງສານຍ້ອມ ເຮັດໃຫ້ມັນປ່ຽນໄປເປັນ Azure B ແລະຜະລິດຕະພັນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ ແລະແສງຈາກຫຼອດໄຟກ້ອງຈຸລະທັດທີ່ສ່ອງລົງໃສ່ຈານກໍພຽງພໍທີ່ຈະກະຕຸ້ນມັນໃຫ້ເກີດປະຕິກິລິຍາຈາກແສງ. ການທົດລອງໃນຄວາມມືດແລະການທົດລອງທີ່ມີແສງເປັນຄົນລະການທົດລອງ ແລະພາກ ການຄວບຄຸມແສງແລະການຈັດການສານຍ້ອມ ຂອງຂັ້ນຕອນທົດລອງໃດກໍຕາມ ຄວນຈັດການກັບມັນໂດຍຖືວ່າເປັນຄົນລະການທົດລອງ.

ຊຸດຄວບຄຸມຂັ້ນຕ່ຳ ແລະວິທີອ່ານຂໍ້ອ້າງໃດໆ

ຕາຕະລາງປຽບທຽບດ້ານລຸ່ມເປັນຂໍ້ມູນອ້າງອີງຕົ້ນສະບັບຂອງບົດຄວາມນີ້. ກ່ອນຍອມຮັບຜົນ ROS ຂອງເມທິລີນບລູໃດໆ ໃຫ້ກວດເບິ່ງວ່າຜູ້ຂຽນໄດ້ເຮັດຕາມແຖວໃດ ແລະຂ້າມແຖວໃດໄປ.

ຈາກນີ້ຈຶ່ງໄດ້ຫຼັກການອ່ານໃນທາງປະຕິບັດ. Amplex ທີ່ໃຊ້ຮ່ວມກັບ peroxidase, ມີການສອບທຽບ ແລະກວດຢືນຢັນດ້ວຍ catalase ແມ່ນຫຼັກຖານກ່ຽວກັບເປີອອກໄຊດ໌. DCFDA ແມ່ນຫຼັກຖານກ່ຽວກັບການອອກຊິໄດຊ໌ສານກວດວັດແບບບໍ່ຈຳເພາະ ແລະບໍ່ໄດ້ບອກຫຍັງຫຼາຍໄປກວ່ານັ້ນ. ການດັກຈັບສະປິນທີ່ມີຊຸດຄວບຄຸມດ້ວຍສານດັກຈັບອະນຸມູນ ແມ່ນຫຼັກຖານກ່ຽວກັບຊະນິດອະນຸມູນ. ການໃຊ້ອອກຊີເຈນແມ່ນຫຼັກຖານກ່ຽວກັບອັດຕາການໄຫຼ. ປະໂຫຍກທີ່ອ້າງເກີນກວ່າສິ່ງທີ່ການທົດສອບຂອງມັນຮອງຮັບໄດ້ ບໍ່ວ່າຈະຂຽນຢ່າງໝັ້ນໃຈພຽງໃດ ກໍເປັນປະໂຫຍກກ່ຽວກັບສານກວດວັດ ບໍ່ແມ່ນກ່ຽວກັບສານຍ້ອມ. ການອະພິປາຍທີ່ກ່ຽວຂ້ອງເລື່ອງການຂຶ້ນກັບປະລິມານແລະຊ່ວງຮໍມີຊິສ, ການໄຫຼຂອງອິເລັກຕຣອນໃນໄມໂທຄອນເດຣຍ, ການລົບກວນການທົດສອບໃນຕົວຢ່າງທີ່ຍ້ອມສີ ແລະສັນຍານລວງຈາກແສງໃນການໃຊ້ກ້ອງຈຸລະທັດ ຂະຫຍາຍຄວາມແຕ່ລະປະເດັນນີ້ ແລະແຕ່ລະປະເດັນຍັງຄົງໃຊ້ໄດ້ເມື່ອຂໍ້ອ້າງອີງຊົ່ວຄາວຂອງມັນຖືກແທນທີ່ແລ້ວ.