Firwat Methylenblo als Géigefierwung bei der Säurefestfierwung benotzt gëtt

En Techniker ënnersicht e Sputumausstréch no der kompletter Fierwungssequenz. Rout Stäbche stiechen op engem bloe Feld eraus, an am Rapport steet, datt säurefest Bazille gesi goufen. Den Dag drop weist en aneren Objektträger en eenheetlecht blot Feld ouni rout Stäbchen, an de Rapport gëtt als negativ fir Tuberkulos ausgeschafft. Ee vun dëse Rapporte behaapt méi, wéi den Objektträger ënnerstëtzt, an et ass net deen éischten.

D'Verwiesslung ass konzeptuell. Den Techniker huet de bloe Faarfstoff als Deel vun der Detektiounschemie ugesinn, wéi wann Methylenblo hëllefe géif, d'Mykobakterien ze fannen. Dat huet et net gemaach. Wann de Methylenblo den Objektträger beréiert, ass den Test schonn eriwwer. De Faarfstoff faarft nëmmen den Hannergrond, fir datt d'Resultat liesbar ass. Dësen Artikel erkläert den Zweck vu Methylenblo bei der Säurefestfierwung, firwat et blo ass an net eng aner Faarf huet, a wéi eng Schlussfolgerunge rout op blo erlaabt.

Déi kuerz Äntwert

D'Säurefestfierwung ass en Differentialtest, deen op dräi Iddien opbaut. Karbolfuchsin, de primäre Faarfstoff, gëtt an all Zell eragedréckt, och a wuessaarteg Mykobakterien. Säure-Alkohol, d'Entfierwungsmëttel, läscht de roude Faarfstoff aus gewéinlechen Zellen eraus, kann en awer net aus säurefesten Zellen erausléisen. Methylenblo, d'Géigefierwung, faarft duerno alles, aus deem d'Entfierwungsmëttel de Faarfstoff ewechgeholl huet. Doduerch erschéngen net säurefest Zellen, Wiertszellen an Zellreschter blo, wärend säurefest Bazille rout bleiwen. D'Géigefierwung liwwert de Kontrast. Si spillt keng Roll an der Chemie, déi eng Zell säurefest mécht.

Wat all Schrëtt mécht

D'Diagramm hei drënner weist d'Aarbechtsdeelung. Liest et vu lénks no riets als Prozedur, an déi ënnescht Sträif als Erënnerung drun, datt all Fierwungsfamill eng aner Fro stellt.

D'Abrénge kënnt als Éischt. Mykobakterie widderstinn normale waasserbaséierte Faarfstoffer, well hir Zellhüll ongewéinlech hydrophob ass. Dofir forcéiert de Protokoll d'Abrénge vum Faarfstoff. Bei der Ziehl-Neelsen-Method dreift d'Erhëtzen, bis Damp entsteet, de phenolhaltege Karbolfuchsin duerch déi wuessaarteg Zellwand. Bei der kaler Kinyoun-Method gëtt d'Hëtzt duerch eng vill méi staark Formuléierung vum primäre Faarfstoff ersat, an e puer modifizéiert Varianten ouni Hëtzt setzen zousätzlech Tensiden an. D'Protokoller fir d'Säurefestfierwung vun der American Society for Microbiology dokumentéiere béid Formuléierungen niefteneen, an de Konzentratiounsënnerscheed ass opfälleg: ongeféier 0.3 g basescht Fuchsin pro 100 mL fir déi erhëtzt Method géintiwwer ongeféier 4 g fir déi kal Method.

D'Differenzéierung kënnt als Zweet. Säure-Alkohol, normalerweis 3 mL konzentréiert Salzsaier an 97 mL Ethanol vun 95 Prozent, wäscht de roude Faarfstoff aus all Zell eraus, där hir Wand keng besonnesch Resistenz bitt. Zelle mat enger intakter mykobakterieller Lipidhüll behalen de Faarfstoff. Dat ass de Schrëtt, op deem déi ganz Method berout, an deen am empfindlechste géintiwwer der Ausféierungstechnik ass, wéi hei drënner beschwat gëtt.

De Kontrast kënnt zum Schluss. Um Objektträger sinn elo rout säurefest Zellen op engem bal faarflosen Hannergrond vun entfierften Zellen. Methylenblo mat 0.3 Prozent w/v mécht dësen Hannergrond nees siichtbar, an enger Faarf, déi sech esou staark wéi méiglech vu rout ënnerscheet. D'Géigefierwung ass kuerz, typescherweis 20 bis 30 Sekonne bei der erhëtzter Method a bis zu e puer Minutte bei verschiddene Variante vun der kaler Method. D'Dauer hänkt vum Protokoll of an ass keng Eegenschaft vum Faarfstoff selwer.

Firwat dëse Faarfstoff, a firwat blo

Methylenblo ass e kationesche basesche Faarfstoff. Dat heescht, säi faarwegen Ion huet eng positiv Ladung a bënnt sech un déi negativ gelueden Uewerfläche vun entfierfte Bakterien, Wiertszellen an Zellreschter. OpenStax Microbiology beschreift dës Ladungslogik als allgemengt Prinzip hannert basesche Faarfstoffer. Mee Methylenblo ass hei cheemesch net eenzegaarteg. Kristallviolett a Safranin sinn och basesch Faarfstoffer. D'Wiel ass optesch, net cheemesch.

Rout Stäbche brauchen en Hannergrond an engem kontrastéierende Faarftoun, a blo bitt fir d'Hellfeldmikroskopie de nëtzlechste Géigesaz zu rout. Safranin wier eng schlecht Géigefierwung, well säi rosa-rouden Endfaarftoun ze no beim zeréckbehale Karbolfuchsin läit an esou genee deen Ënnerscheed ophieft, deen d'Prozedur geschaf huet. Kristallviolett géif en donkelvioletten Hannergrond erginn, dee mat den dënne roude Bazillen ëm d'Opmierksamkeet konkurréiert. De stäerksten Hiweis drop, datt d'Aufgab de Kontrast an net d'Chemie ass, ass d'Austauschbarkeet: gréng Géigefierwunge wéi Malachitgréng a Brillantgréng ginn a verschiddene veterinären a modifizéierte Protokoller benotzt, an den Test funktionéiert weiderhin, well all kloer anere Faarftoun déi selwecht Aufgab erfëllt.

Doraus erginn sech zwou praktesch Konsequenzen. Éischtens gesäit d'Standardrezept keng pH-Upassung vir; verwiesselt dës einfach waasserbaséiert Léisung vun 0.3 Prozent net mat alkalesche Formuléierunge wéi dem Loeffler säi Methylenblo, déi zu engem anere Fierwungskonzept gehéieren. Zweetens ass ze vill Géigefierwung schiedlech. D'Histologieliteratur warnt ausdrécklech, datt en ze dicht bloen Hannergrond vereenzelt Bazille verdecke kann. Den Objektträger méi laang mam Faarfstoff bedeckt ze loossen, wéi de Protokoll erlaabt, verschlechtert also d'Liesbarkeet ouni Virdeel.

D'Chemie vun der Zellwand, déi den Test méiglech mécht

De Grond, firwat Säure-Alkohol ënnerscheet, läit an der mykobakterieller Zellhüll. Hire strukturelle Kär ass de Mycolyl-Arabinogalaktan-Peptidoglykan-Komplex: Peptidoglykan ass mat Arabinogalaktan verbonnen, deem seng baussenzeg Enner Mykolsaiere mat ganz laange Ketten droen. Dës bilden eng lipidräich baussenzeg Mykomembran mat ongewéinlech gerénger Permeabilitéit. Den Iwwersiichtsartikel iwwer déi baussenzeg Membran vu Mykobakterien beschreift dës Architektur am Detail. D'Barriär wierkt a béid Richtungen. Si widdersteet dem Abrénge vum Faarfstoff, dofir brauch et Hëtzt oder e verstäerkte primäre Faarfstoff. Si widdersteet och dem Erausléise vum Faarfstoff, dofir kann de Säure-Alkohol de Karbolfuchsin net ewechhuelen, wann en eng Kéier bannen ass. Gewéinlech Bakterien hunn dës Zellhüll net a verléieren de Faarfstoff. Säurefestegkeet ass deemno am beschten als Phänomeen vun enger Lipidbarriär ze verstoen, net als cheemesch Bindung vu Fuchsin u Mykolsaier.

Dës Chemie erkläert och e verbreet Rätsel: Mykobakterie loosse sech mat der Gram-Method schlecht an onberechenbar fierwen a gesinn heiansdo aus wéi schwaach gefierfte Forme mat perleschnouerähnlecher Struktur oder wéi ongefierfte Geeschterzellen. Hir hydrophob Zellwand begrenzt d'Abrénge vu Kristallviolett. D'Säurefestfierwung ass keng modifizéiert Gram-Fierwung. Et ass en anert Differentialprinzip, dat op enger anerer Eegenschaft vun der Zellwand opbaut, wéi de Verglach vun der einfacher Fierwung mat der Gram-Fierwung fir déi aner zwou Methode weist.

Dräi Methoden, dräi Froen

Fir déi méi breet Famill vu Methode mat engem eenzege Faarfstoff fir Bakterien, kuckt den Atlas vun de Fierwunge fir d'Mikroskopie.

Wat rout op blo net beweise kann

Rout Stäbche bedeiten, datt d'Organismen de Karbolfuchsin trotz der Behandlung mat Säure-Alkohol zeréckbehalen hunn. Dëse Befund ass mat Mycobacterium tuberculosis vereinbar, mee d'CDC-Richtlinne fir d'Tuberkulosdiagnostik weisen ausdrécklech drop hin, datt och aner Mykobakterie säurefest sinn. Dofir erfuerdert d'Aartenidentifikatioun eng Kultur an Nukleinsaier-Tester, net eng Faarf.

Technesch Feeler triede virun allem bei den zwee Wäschschrëtt op. Ze schwaach Entfierwung léisst Hannergrondmaterial rout a begënschtegt falsch positiv Bewäertungen. Ze staark Entfierwung läscht schwaach zeréckbehale primäre Faarfstoff eraus a dréit zu falsch negative Resultater bäi. Eng ze staark applizéiert Géigefierwung verstoppt vereenzelt Bazillen am Bloen. Déck Ausstrécher, ausgefällte Reagenzien a kontaminéiert Spullwaasser bréngen zousätzlech eege Artefakte mat sech.

D'Sensibilitéit ass duerch d'Zuel vun den Organisme begrenzt, egal wéi propper d'Technik ass. Konventionell Ausstréchmikroskopie brauch ongeféier 5,000 bis 10,000 Bazille pro Milliliter Sputum, an eeler Evidenziwwersiichte vun der CDC hunn d'Sensibilitéit vun Ausstrécher bei duerch Kultur bestätegte pulmonale Fäll op ongeféier 45 bis 80 Prozent ageschat. En negativen Ausstréch schléisst Tuberkulos dofir ni aus. Déi aktuell CDC-Richtlinne behalen d'Kultur nieft all Ausstréch bäi a recommandéieren en Nukleinsaier-Amplifikatiounstest op op d'mannst enger Otemweeërprouf, wann eng pulmonal Tuberkulos a Betruecht gezu gëtt an d'Resultat dat weidert Virgoe géif änneren.

Praktesch Aarbecht gehéiert an autoriséiert Protokoller

Beschreiwunge fir Léierzwecker, dorënner dësen Artikel, autoriséiere keng klinesch Aarbecht. Fir d'praktesch Laboraarbecht sollt Dir der validéierter Standardaarbechtsprozedur vum Laboratoire follegen, déi mat den aktuellen Dokumenter vun CDC, APHL oder CLSI ofgestëmmt ass; d'CDC-Referenz fir d'Säurefestfierwung am Stacks-Archiv weist, wéi esou Prozeduren d'Reagenzien an d'Resultatauswäertung festleeën. D'Aarbecht mat Tuberkulosprouwe erfuerdert Ofschiermung: Ausstrécher ginn an enger biologescher Sécherheetswierkbänk preparéiert, well d'Preparatioun Aerosolen a Sprëtzer erzeugt. D'CDC-Richtlinne fir d'Laborsécherheet halen fest, datt och hëtzefixéiert Ausstrécher liewensfäeg Tuberkelbazillen enthale kënnen an nach ëmmer als kontaminéiert behandelt musse ginn. Den Andrag an der CDC Public Health Image Library iwwer en Ausstréch mat Karbolfuchsin a Methylenblo, deen op M. leprae ënnersicht gouf, ass eng nëtzlech Erënnerung un den Asazberäich vun der Method iwwer Tuberkulos eraus: dee selwechte Rout-op-Blo-Kontrast déngt iwwerall do, wou no säurefesten Organisme gesicht gëtt, an eng suergfälteg negativ Bewäertung ass selwer e Resultat, dat dokumentéiert soll ginn.

De fäerdegen Objektträger auswäerten

D'Géigefierwung beweist hiren Notze beim Duerchsichen. Eng Persoun, déi mikroskopéiert, benotzt beim Duerchsichen ënner gerénger Vergréisserung als Éischt de bloen Hannergrond, fir d'Qualitéit vum Ausstréch ze beurteelen: gläichméisseg Zellverdeelung, intakt Wiertszelle fir d'Fokusséieren, kee staarkt Präzipitat. Rout Kandidaten zéien dann d'Opmierksamkeet op sech, genee well näischt anescht um Objektträger rout ass. D'Bestätegung geschitt ënner Uelegimmersioun, wou richteg Bazillen déi erwaart dënn, heiansdo liicht gekrëmmten oder perleschnouerähnlech Stäbche weisen, amplaz vun eenheetleche Faarfstoffreschter.

D'Hannergrondfierwung bestëmmt och d'Wuertwahl am Rapport. Bei engem Objektträger mat roude Bazille steet am Rapport, datt säurefest Bazille gesi goufen, dacks mat enger semiquantitativer Andeelung no der Skala vum Laboratoire. Bei engem Objektträger ouni rout Organisme steet am Rapport, datt keng säurefest Bazille gesi goufen, ni datt en negativ fir Tuberkulos ass. Den Ënnerscheed ass wichteg, well dat blot Feld beweist, datt d'Fierwung funktionéiert huet, d'Zellen d'Géigefierwung opgeholl hunn an d'Optik adequat war. Et seet awer näischt iwwer Organismen ënner der Detektiounsgrenz aus. E blot Feld ouni rout Stäbchen ass e valabelt Resultat iwwer den Objektträger, keen Uerteel iwwer de Patient.

Wann Dir d'Aarbechtsdeelung am Kapp behält, ergëtt sech d'Formuléierung vun de Rapporte vum selwen. Karbolfuchsin mécht Kandidaten erkennbar. Säure-Alkohol féiert den Test duerch. Methylenblo mécht d'Äntwert nëmme liesbar: rout huet de Faarfstoff géintiwwer der Saier zeréckbehalen, blo huet en verluer. Alles anescht — Aart, Organismelaascht a klinesch Bedeitung — kënnt aus Aarbecht, déi iwwer den Objektträger erausgeet.