Loeffler seng alkalesch Methylenblo-Fierwung a polychromt Methylenblo erkläert

Dräi Fläsche kënnen op enger Fierwungsaarbechtsplaz nieftenee stoen, all mat enger Variant vu Methylenblo um Etikett. Op enger steet wässerlecht Methylenblo 1%. Op enger steet Loeffler säin alkalescht Methylenblo. Op enger steet polychromt Methylenblo. Eng Persoun, déi vill ze dinn huet, gräift no där Fläsch, déi am nooste steet. Den Ausstréch gëtt dann ze schwaach, ze gläichméisseg blo oder an onerwaarte violetten Téin gefierft, an d'Prouf gëtt fir d'Resultat verantwortlech gemaach.

Dat ass e Problem vun der Formuléierung, net vun der Prouf. Déi dräi Léisungen enthalen änlech Faarfstoffer, berouen awer op verschiddene Fierwungskonzepter. Eng ass en einfache kationesche Faarfstoff bei engem bal neutrale pH. Eng ass dee selwechte Faarfstoff, deem seng Fierwungswierkung duerch Alkali verstäerkt gëtt. Eng ass guer keen eenzele Faarfstoff méi, mee eng bewosst oxidéiert Mëschung. Wann Dir déi falsch benotzt, ännert sech de Fierwungsprinzip ënner Ären Hänn.

Déi kuerz Äntwert

Einfaacht wässerlecht Methylenblo ass d'Basis: ongeféier 1% Faarfstoff am Waasser, eng einfach kationesch Fierwung fir bakteriell Morphologie an allgemeng Mikroskopie. Bei Loeffler sengem alkalesche Methylenblo gëtt eng kleng, ofgemoossen Quantitéit verdënntem Alkali zu enger alkoholescher Stammléisung bäigefüügt, déi am Waasser verdënnt ass. Dat erhéicht de pH a verstäerkt d'Bindung vum kationesche Faarfstoff un déi sauer Strukture vun de Bakterien. Polychromt Methylenblo ass Methylenblo, dat bewosst duerch Oxidatioun an Alkali gereift gouf. D'Fläsch enthält dofir eng Mëschung aus demethyléierten Homologen (azure A, azure B, azure C), Thionin a Methylenviolett nieft dem verbleiwende Methylenblo, an dës Mëschung fierft verschidde Strukturen a verschiddene Faarftéin.

Wann Dir Iech nëmmen ee Saz mierkt: D'Alkaliséierung ännert d'Fierwungsintensitéit, wärend d'Polychroméierung d'Fierwungsfaarwen ännert.

Gewéinlecht wässerlecht Methylenblo: de Referenzpunkt

Déi einfachst Formuléierung ass Methylenblo, dat am Waasser opgeléist ass, meeschtens bei 1% w/v, ouni Alkali an ouni Oxidatioun. Déi faarweg Spezies ass de Methylthioninium-Kation mat engem Chlorid-Géigenion, e klengen, flaache Phenothiazin-Faarfstoff, deen am PubChem-Andrag iwwer Methylenblo als Methylthioniniumchlorid beschriwwe gëtt. Als Kation bindt en un de Phosphat-Réckgrat vun Nukleinsaieren an un déi sauer Gruppen op de bakterielle Zellwänn a fierft d'Zelle blo virun engem hellen Hannergrond.

Säi Virdeel ass d'Viraussehbarkeet. Zellkären a Bakterien erschénge blo. De Kontrast ass moderat. Schwaach siichtbar Organisme kënne nëmme schwaach gefierft ginn, an dat ass genee déi Aschränkung, déi de Loeffler behiewe wollt. Fir déi méi breet Famill vun einfache bakterielle Fierwungen, zu där dës Léisung gehéiert, kuckt en Iwwerbléck iwwer einfach bakteriell Fierwungen. Och hei ass eng genee Identifikatioun wichteg: Methylblo ass eng ganz aner Moleküll, wéi Methylblo am Verglach mat Methylenblo erkläert. Eng Sich am Katalog nëmmen nom Faarfnumm kann dofir déi falsch Faarfstoffklass liwweren.

Loeffler säin alkalescht Methylenblo: dee selwechte Faarfstoff mat verstäerkter Wierkung

Dat klassescht Loeffler-Rezept kombinéiert eng alkoholescht Methylenblo-Stammléisung mat verdënntem Alkali am Waasser. Léierbuchversioune gesinn 0.3 g Faarfstoff an 30 mL 95% Ethanol plus 100 mL 0.01% wässerlecht Kaliumhydroxid vir (oder gläichwäerteg 30 mL gesättegt alkoholescht Methylenblo, 100 mL destilléiert Waasser an 1 mL 1% KOH). Dat ergëtt eng Aarbechtsléisung mat ongeféier 0.3% Faarfstoff bei engem däitlech alkalesche pH. Kommerziell Versioune follegen deem selwechte Prinzip, an de Thermo Fisher-Katalog fir mikrobiologesch Fierwungen féiert Loeffler säin alkalescht Methylenblo nieft polychromen a wässerleche Varianten als separat Katalogartikele mat ënnerschiddleche virgesinnen Uwendungen op.

Den entscheedende Prinzip ass den Alkali. D'Erhéijung vum pH deprotonéiert Karboxyl- a Phosphatgruppen um Präparat an erhéicht domat d'Dicht vun negativ geluedene Bindungsplazen. Gläichzäiteg hält déi alkoholescht Stammléisung de Faarfstoff komplett opgeléist, sou datt en dës Plazen a monomerer Form erreecht. D'Resultat ass eng méi séier a méi intensiv Fierwung vun de Bakterien, wéi en neutrale wässerleche Faarfstoff se liwwert, mat de bekannten déifbloe Stäbchen a Kokken aus engem routineméissege bakteriologeschen Ausstréch. D'Fierwungszäit läit typescherweis bei enger bis dräi Minutten, duerno gëtt mat Waasser gespullt.

Déi klassesch Uwendung ass Corynebacterium diphtheriae, dat op Loeffler-Serummedium gezillt gëtt: schlank, dacks keulefërmeg Stäbche mat staark gefierfte metachromatesche Babes-Ernst-Granula aus gespäichertem Polyphosphat. D'Kombinatioun vu Medium a Fierwung ass historesch; béid ginn deem selwechte Bakteriolog zougeschriwwen, an de Kontrast vun de Granula ass den diagnostesche Virdeel. Nieft der Aarbecht mat Diphtherie déngt d'Fierwung als allgemeng bakteriologesch Fierwung fir Ausstrécher aus Kulturen, fir d'Morphologie vun Neisseria a klineschen Ausstrécher an iwwerall do, wou eng Gram-Fierwung net néideg ass, awer einfacht wässerlecht Blo ze schwaach bleift. Et ass eng monochrom Fierwung. Alles, wat sauer ass, kritt e bloen Toun. Wann e Protokoll eng Differenzéierung duerch Faarwen verlaangt, kann Alkali eleng dat net liwweren.

Eng praktesch Virsiichtsmoossnam: Alkalesch Faarfstoffléisunge verschlechtere sech a bilden Nidderschléi bei der Lagerung an duerch d'Opnam vu Kuelendioxid. Laboratoirë preparéieren dofir entweder kleng Quantitéiten oder kafen d'Katalogléisung a respektéieren hir Haltbarkeet, amplaz eng al Fläsch weiderzebenotzen, déi mëttlerweil op all Objektträger Sediment hannerléisst.

Polychromt Methylenblo: een Numm, méi Faarfstoffer

Polychromt Methylenblo geet vum selwechte Faarfstoff aus, ënnerwërft en awer enger kontrolléierter Oxidatioun an Alkali, déi historesch als Reifung oder Polychroméierung bezeechent gouf. Alkalesch Alterung, Erhëtze mat Karbonat oder Oxidatioun mat Mëttele wéi Dichromat läisen d'Methylgruppe schrëttweis vun den Dimethylamino-Substituenten of. D'Produkt ass eng Mëschung: verbleiwend Methylenblo plus azure B (eng Methylgrupp manner), azure A an azure C (weider Demethyléierung), Thionin (komplett demethyléiert) an oxidativ Nieweprodukter aus der Methylenviolett-Famill. All Bestanddeel huet säin eegene Faarftoun a seng eege Gewëssaffinitéit, sou datt d'Mëschung metachromatesch fierft: Zellkären, Granula, Muzinen a Knorpel huele jeeweils ënnerschiddlech blo bis routviolett Téin un.

Dës Chimie ass déiselwecht, déi hannert de bekannte Bluttfierwunge steet. Fréi Fuerscher hunn erausfonnt, datt alkaliséiert Methylenblo d'Käre vu Malariaparasitten a violetten Téin gefierft huet. Hir wässerlech gereift Léisunge waren awer onstabil an hunn innerhalb vun Deeg Nidderschléi gebilt. Den Iwwerbléck iwwer d'Entstoe vun der violetter Bluttfierwung beschreift, wéi de Malachowski an de Romanowsky dësen Effekt 1891 onofhängeg vunenee genotzt hunn, wéi Methanol agefouert gouf, fir de Faarfstoffnidderschlag ze stabiliséieren an Ausstrécher ouni Hëtzt ze fixéieren, a wéi de Giemsa d'Mëschung spéider op der Basis vun ofgemoossenem azure B plus Eosin mat Glycerol-Stabiliséierung standardiséiert huet. Modern Fierwunge vum Giemsa-Typ stamen direkt vu polychromem Methylenblo plus Eosin of, där Kombinatioun, déi de Romanowsky-Effekt ervirbréngt. Fir Detailer iwwer d'Kombinatioun mat Eosin an den azure B-Bestanddeel, kuckt Fierwunge vum Romanowsky-Typ an d'Interaktioun tëscht azure B an Eosin.

Well et eng Mëschung ass, ass polychromt Methylenblo vu sech aus déi am mannste standardiséiert vun den dräi Formuléierungen. Dat geneet Gläichgewiicht vun de Faarftéin hänkt vum Oxidatiounswee a vum Ausmooss vun der Oxidatioun of. Dofir verkafen Histologie-Liwweranten et als eegestännegt Produkt mat eegene Leeschtungstester an net als gealtert Loeffler-Léisung. Typesch Uwendunge sinn de metachromateschen Noweis vu Mastzellgranula, Muzinen a Knorpel, d'Duerstellung vun Detailer vu Plasmazellen an den Noweis vun Helicobacter pylori a Gewësschnëtter mat polychrome Methode vum Goodpasture-Typ. Et ass déi richteg Wiel, wann et ëm Differenzéierung duerch Faarwe geet, an déi falsch Wiel, wann de Protokoll eng kloer monochrom bakteriell Silhouette erwaart.

Verglach vu Formuléierung an Zweck

Liest d'Tabell als Entscheedungshëllef. Wann d'Präparat ze schwaach gefierft gëtt, ännert de pH-Konzept a gräift no Loeffler senger Léisung. Wann alles gefierft gëtt, awer näischt sech ofhieft, ännert de Faarfstoffkonzept a gräift no polychromem Methylenblo. Wann e Loeffler-Ausstréch d'Granula ganz gutt weist, awer déi verantwortlech Persoun freet, firwat Zellkären an Zytoplasma dee selwechte bloen Toun hunn, ass d'Äntwert, datt keng alkalesch monochrom Fierwung dës Aufgab erfëlle kann. Déi Fro gehéiert bei d'polychrom Famill an hir Bluttfierwungsderivater.

Déi typesch Verwiesslunge vermeiden

Zwéi Feeler erklären de gréissten Deel vun der Verwiesslung. Deen éischten ass, Loeffler seng Léisung als austauschbar mat einfachem Methylenblo ze behandelen, well béid an der Fläsch blo ausgesinn. Si ënnerscheede sech am pH an an der Intensitéit. Wann een neutrale Faarfstoff do benotzt, wou Loeffler virgeschriwwen ass, verléiert een genee dee Granulakontrast, op deem de Protokoll opgebaut gouf. Deen zweeten ass, all al oder zoufälleg gealtert alkalesch blo Léisung als polychrom ze behandelen. Onkontrolléiert Alterung produzéiert eng onbekannt Mëschung mat onbekannter Stäerkt. Richteg polychrom Léisunge ginn dogéint iwwer definéiert Oxidatiounsweeër preparéiert an, an der Entwécklungslinn vun de Bluttfierwungen, mat ofgemoossenem Eosin kombinéiert. D'Geschicht ass hei léierräich: Déi onstabil wässerlech gereift Léisunge vun den 1890er Jore goufen duerch methanolesch stabiliséiert Formuléierungen ersat, genee well onkontrolléiert Mëschungen net reproduzéierbar waren. Et ass derwäert, sech un dës Lektioun ze erënneren, éier een en diagnostescht Präparat mat enger Léisung aus enger Fläsch vun ongewëssem Alter fierft.

Eng genee Benennung mécht de Krees zou. Bestätegt de Katalogartikel (wässerlecht Methylenblo, Loeffler oder polychromt Methylenblo), de Faarfstoffgehalt an déi virgesinn Uwendung um Etikett, amplaz se aus der Faarf ofzeleeden. Déi dräi Formuléierungen hunn e gemeinsame Virleefer mat deem selwechte Chromophor. Si hunn net dee selwechten Zweck.