Метилен көгү анаэробдук шарттардын жана кычкылтектин индикатору катары: түстүн өзгөрүшү эмнени далилдейт

Лаборатория кызматкери анаэробдук банканы герметикалык жаап, капкагы аркылуу метилен көгү индикатор тилкесин текшерет да, күткөн көрүнүшүн көрөт. Тилке көк түстөн ак түскө өткөн. Ал бул иштетүү циклин анаэробдук деп журналга белгилеп, ишин улантат. Эки күндөн кийин бир табакчада эч нерсе өспөйт, ал эми ошол эле банканын ичиндеги жабык сорпо пробиркасында кычкылтектин таасирине кабылган белгилер байкалат. Тилке чындыкты көрсөткөн. Кызматкер андан туура эмес суроого жооп күткөн.

Бул түшүнүктөрдү чаташтыруудан келип чыгат. Метилен көгү анаэробдук индикатору стерилдүүлүккө же бүтүндөй системаны валидациялоого эмес, редокс абалга байланыштуу. Бул айырма так болгондо, тилке өзүнүн тар милдетин так жана ишенимдүү аткарган аспапка айланат.

Негизги түшүнүк: кайтымдуу редокс жуп

Эриген метилен көгү эки абалда болот. Кычкылданган формасы — бизге тааныш көк катион. Лейкометилен көгү деп аталган калыбына келген формасы түссүз болот. Нейтралга жакын pH шартында жөнөкөйлөштүрүлгөн жарым реакция мындай: бир көк катионго бир протон жана эки электрон кошулганда, бир түссүз лейко-молекула пайда болот. pH 7 шартында стандарттык суутек электродуна салыштырмалуу формалдык потенциал болжол менен плюс 11 милливольтту түзөт. Бул аны көптөгөн калыбына келтирүүчү системалар жетише алган жана кычкылтек кайра тескери бура алган диапазонго жайгаштырат.

Калыбына келүү үчүн жергиликтүү редокс-потенциал төмөн болушу керек. Кычкылтекти гана алып салуу дайыма эле жетиштүү эмес. Анаэробдук шарттар боюнча алгачкы иштерде кадимки кычкылтексиз сууда метилен көгү калыбына келтирүүчү зат жок болсо түсүн сактап калары аныкталган. Ошондой эле болжол менен 0.01 пайыз боёк кошулган декстрозалуу сорпо аралашмалары 37 C шартында оңой түссүздөнгөн, ал эми ошол эле аралашма 4 C шартында бир күн бою көк бойдон калган. Бул жаңы алынган ткань жана анаэробдук өстүрүү шарттары боюнча тажрыйбаларда баяндалган. Температура, pH, глюкоза, аскорбат, тиогликоллат жана микроорганизмдердин калыбына келтирүүчү активдүүлүгү электрондордун жеткиликтүүлүгүн аныктайт.

Кайра кычкылдануу үчүн кычкылтек гана керек. Лейко-формага аба жеткенде, ал кайра көк түскө өтөт. Азыркы атайын иштелип чыккан индикаторлор дал ушул циклди колдонушат: боёк, калыбына келтиргич жана турукташтыруучу матрица кычкылтек аз болгондо түссүз болуп, аба тийгенде кайра көгөрөт. Бул боёк, калыбына келтиргич, беттик-активдүү зат жана чопо негизиндеги гибриддик метилен көгү кычкылтек индикаторунда көрсөтүлгөн. Ал прототипте pH 11 шартында 0.01 миллимолярдык боёк жана 2.0 миллимолярдык аскорбат же глюкоза колдонулган. Ал кычкылтектин көлөмдүк үлүшү болжол менен 0.5 пайыз болгондо түссүздөнүп, сыноо камерасында кычкылтектин 0.1 пайыздан төмөн жана 0.5 пайыздан жогору деңгээлдерин айырмалаган.

Демек, иштөө принциби жөнөкөй. Көк түс индикатор аймагынын кычкылданганын билдирет. Түссүз абал индикатор аймагында калыбына келтирүүчү, кычкылтеги аз шарттар түзүлгөнүн билдирет. Бул өзгөрүү кайтымдуу, жергиликтүү жана химиялык мүнөздө. Ал өзүнчө микробдор тууралуу эч нерсе айтпайт.

Анаэробдук банкадагы метилен көгү индикатор тилкеси кандай иштейт

Анаэробдук банка үчүн метилен көгү индикатор тилкеси — идишти ачпай көрүүгө мүмкүн болгон, банканын газ чөйрөсүнө жайгаштырылган чакан реакция аймагы. Коммерциялык түрлөрү айырмаланат: кагаз тилкелер, даярдоо учурунда эритилген же нымдалган таблеткалар жана жаңы гибриддик кагаздар. Айрымдарынын реакция аймагын активдештирүү үчүн бир тамчы дистилденген суу талап кылынат. Башкалары кургак бойдон калышы керек болгон кургак форматтагы түзүлүштөр. Белгилүү өнүмдүн нускама барагы негизги көрсөтмө болуп саналат, анткени нымдоо, жайгаштыруу жана көрсөткүчтү окуу убактысы химиялык процесстин бир бөлүгү.

Иш жүзүндө көрсөткүч эки абалдын бири катары чечмеленет. Көк түс тилке турган жерде кычкылтек бар экенин же калыбына келтирүүчү шарттар жетишсиз экенин билдирет. Ак же түссүз абал тилке турган жерде анаэробдук редокс шарттар түзүлгөнүн билдирет. Айрым коммерциялык кагаздарга кызыл фондук пигмент кошулат, ошондуктан алардын калыбына келген акыркы абалы ак эмес, кызгылт болуп көрүнөт. Баа берүүдөн мурун өнүмүңүз кайсы акыркы түскө өтүшү керектигин билип алыңыз.

Убакыт системага жараша өзгөрөт. GasPak тибиндеги бир түзүлүштө түс болжол менен бир сааттын ичинде өчө баштап, бир нече саатта толук жоголгон. Ал эми бөлмө температурасындагы көзөмөлдөнгөн салыштырууда метилен көгүнө алты сааттан ашык убакыт талап кылынган. Ошол иште чөйрөлөрдүн редокс-потенциалы боёк толук өзгөрө электе эле, 60тан 100 мүнөткө чейин болжол менен минус 100 милливольтко жеткен. Тилке толук түссүз болгон учурда ал минус 200 милливольттон кыйла төмөн болгон. Индикатор газ чөйрөсүндөгү өзгөрүүдөн кечигет. Биринчи сааттагы көк тилке иштин ийгиликсиз болгонун далилдебейт, ал эми алтынчы сааттагы ак тилке тилкенин алтынчы сааттагы абалын гана сүрөттөйт.

Ошол эле себептен жайгаштыруу да маанилүү. Тилкени банканын үстүңкү газ мейкиндигинде, капкак аркылуу көрүнгөндөй кылып, агар беттеринен жана өстүрүү чөйрөлөрүнөн алысыраак кармаңыз. Ал өзүнүн түздөн-түз айланасындагы шарттарды көрсөтөт. Аны муздак дубалга жабыштырып коюңуз, табакчалардын астына катып салыңыз же конденсатка чылатып алыңыз — анда ал банканын жалпы абалын эмес, ошол микрочөйрөнү көрсөтөт.

Тилке эмнени көрсөтөт жана эмнени көрсөтпөйт

Анаэробдук банкадагы метилен көгү индикаторун бир жерде турган бир сенсор катары караңыз. Ал өзүнүн реакция аймагындагы жергиликтүү редокс жана кычкылтек шарттарын аныктайт. Аралашуу жана тең салмакка келүү жетиштүү болсо, бул шарттар жалпысынан үстүңкү газ мейкиндигине мүнөздүү болот. Андан тышкары айтылгандын баары — тыянак, ал эми тыянакка өзүнчө далил керек.

Түссүз тилке стерилдүүлүктү аныктабайт. Стерилдүүлүк — жашоого жөндөмдүү организмдердин жоктугу; ал валидацияланган стерилдөө жана өстүрүүнү валидациялоочу контролдор аркылуу далилденет. Банка толугу менен анаэробдук болуп, ошол эле учурда булганган болушу мүмкүн же толугу менен стерилдүү болуп, бирок аэробдук бойдон калышы мүмкүн.

Ал өстүрүү системасынын ар бир бөлүгүн валидациялабайт. Жабык пробирканын ичиндеги эриген кычкылтек, агардын тереңинде камалып калган кычкылтек, жык толгон банкадагы градиенттер жана көрсөткүч окулгандан кийин пайда болгон агып кирүү — мунун баары бир тилкенин көзөмөлүнөн тышкары калат. Мейкиндик боюнча тажрыйбаларда бир эле идиштин ичинде жанаша турган көк жана түссүз аймактар көрсөтүлгөн: аларда кычкылтектин кириши менен калыбына келтирүүчү активдүүлүктүн тең салмагы ар башка болгон. Бир чекит бүтүндөй көлөмдү ырастай албайт.

Ал анаэробдук шарттардын үзгүлтүксүз сакталышын далилдебейт. Даярдоо маалында бир жолу окулган тилке жыйырманчы саат тууралуу эч нерсе айтпайт. Анаэробдук шарттардын сапаты боюнча акыркы иштер химиялык индикаторлор газ чөйрөсүн көрсөткүч окулган учурга карата гана сүрөттөрүн жана аз өлчөмдөгү калдык кычкылтек бар болсо да канааттандырарлык көрүнүшү мүмкүн экенин эскертет. Тилкенин көрсөткүчүн инкубация менен байланыштырган нерсе — акыркы абалга бир жолу көз жүгүртүү эмес, үзгүлтүксүз же белгиленген текшерүү учурларындагы документтештирүү.

Түстүн өзгөрүшүнүн артындагы химия жөнүндө метилен көгүнүн кычкылданган жана калыбына келген абалдардын ортосунда кандай айланарын караңыз. Кычкылтек үлгүлөр менен иштөөгө жалпы кандай таасир этерин билүү үчүн микроскопия жана өстүрүү иштериндеги кычкылтекти көзөмөлдөө темасын караңыз.

Банканын жанында кармоого ылайыктуу схема

Төмөнкү сүрөт макаланы лабораториялык үстөл үчүн бир маалымдамага топтойт. Анда бир эле тилкенин үч абалы, реакциянын эки багыты жана индикатордун далили менен системаны валидациялоонун ортосундагы чек көрсөтүлгөн.

Тилкени көк бойдон калтырган же жалган ишеним жараткан мүчүлүштүктөр

Мүчүлүштүктөрдүн көбү беш топко кирет. Ар биринин өзүнө мүнөздүү белгиси бар.

Герметикалуулугу бузулган банка же баштык реакция аймагына кычкылтекти үзгүлтүксүз өткөрүп турат. Тилке көк бойдон калат же түсү өчкөндөн кийин кайра көгөрөт. Химияны күнөөлөөдөн мурун капкакты, тыгыздоочу шакекти, кыскычтарды жана герметикалуулукту камсыздаган беттерди текшериңиз.

Түгөнгөн же туура эмес активдештирилген газ генератору кычкылтекти таптакыр чыгарбайт. Мурунку суу менен активдештирилүүчү системаларда болжол менен 10дон 15 мүнөткө чейин конденсаттын пайда болбошу жана 20дан 40 мүнөткө чейин капкактын жылыбашы ошол система үчүн эрте эскертүү белгилери болгон. Ашыкча жүктөлгөн банкадагы кубаттуулугу жетишсиз пакет да ушундай эле натыйжа берет.

Катализатордун ууланып активдүүлүгүн жоготушу суутек менен палладий колдонулган мурунку системаларга гана тиешелүү; аларда палладий суутек менен кычкылтекти сууга бириктирет. Ным жана күкүрттүү суутек анын активдүүлүгүн начарлатат. Азыркы көптөгөн пакеттерде палладий таптакыр жок, андыктан бул оңдоо чарасын тиешеси жок жерде колдонбоңуз.

Бузулган же туура эмес колдонулган тилке байкалбай иштен чыгат. Сактоо маалында боёк менен калыбына келтиргич кайтымдуулугун жоготот. Гибриддик курамдардын жарыктан түсүнүн өчүшүнө жана сактоо учурундагы касиеттеринин жоголушуна туруштук берүү үчүн иштелип чыгышынын себептеринин бири ушул. Мөөнөтү өткөн, баштапкы түсү адаттан тыш болгон запастарды, ошондой эле кургак болушу керек кезде нымдалган же нымдоо талап кылынганда кургак калган тилкелерди колдонбоңуз.

Градиент же кечигүү химияны эмес, көрсөткүчтү окуган адамды адаштырат. Начар аралашкан үстүңкү газ мейкиндиги, эриген кычкылтеги бар жабык пробиркалар жана жарым катуу чөйрөлөр ар бири өз шарттарын тилке көрсөткөндөн узагыраак сактайт. Резазурин тилкелери кызгылт абал аркылуу түссүз абалга өтөт жана көп учурда тезирээк иштейт деп сатылат. Бирок алардын босого маанилери өз курамына тиешелүү жана метилен көгүнө колдонулбайт.

Контролдор жана колдонууга татыктуу окуу протоколу

Эки арзан контрол туура эмес чечмелөөлөрдүн көбүн аныктайт. Иштетүү цикли менен катар бөлмө абасында жаңы контролдук тилкени кармаңыз. Иштеген метилен көгү тилкеси ал жерде көк бойдон калат. Таңгакталган айрым индикаторлор башында кубарган болуп, ачылганда көгөрөт; бул өзү эле иштөө жөндөмүнүн текшерүүсү. Ошондой эле мезгил-мезгили менен жаңы тилкени мурда валидацияланган анаэробдук түзүлүшкө салыңыз. Ал өнүм үчүн белгиленген убакыттын ичинде валидацияланган калыбына келген акыркы абалга жетиши керек. Эгер контролдордун кайсы бири күтүлгөндөй иштебесе, банкадагы көрсөткүчтөргө ишенүүдөн мурун партияны алмаштырыңыз.

Окуу протоколу иштөө механизминен келип чыгат. Тилкени банканы ачпай үстүңкү газ мейкиндигинде көрүүгө мүмкүн болгон жерге жайгаштырыңыз; дубалга тийгизүү жана нымдоо боюнча өнүмдүн нускама барагын аткарыңыз. Баштапкы түстү, банканын герметикалык жабылган убактысын жана өнүмдө көрсөтүлгөн текшерүү учурундагы түстү жазыңыз. Идиштин түзүлүшү мүмкүнчүлүк берсе, инкубация учурунда белгиленген текшерүү учурларында индикатордун калыбына келген абалда калганын каттаңыз. Ачардын алдында дароо акыркы түстү жазыңыз. Ачканга чейинки ошол түс — бул иштетүү циклинин акыркы көрсөткүчү. Ачкандан кийин кайра көгөрүшү күтүлөт; анын мурдагы жазууну өзгөртүшүнө жол бербеңиз.

Эгер тилке белгиленген убакыттан кийин да көк бойдон калса, анаэробдук шарттарды ырасталган эмес деп эсептеңиз. Текшерүүнү ирети менен жүргүзүңүз: герметикалуулук, пакет, бар болсо катализатор, индикатордун нымдалышы жана жарактуулук мөөнөтү, андан кийин абадагы контрол менен салыштырып индикатордун иштеши. Газ чөйрөсү ырасталгандан кийин гана өсүү же өсүүнүн жоктугу чечмелениши керек; мында колдонууга ылайыкташтырылган анаэробдук өстүрүү түзүлүшүн жана организмдер боюнча контролдорду колдонуңуз.

Өз чөйрөсүндө акыркы сөздү тилке айтууга татыктуу. Көк болобу же түссүз болобу, ал бир убакытта бир жер тууралуу бир суроого жооп берет. Ошол суроону график боюнча, жанындагы контролдор менен бирге берсеңиз, ал ишенимдүү жооп берет. Ал эми бир эле көз жүгүртүү менен андан стерилдүүлүк, ар бир пробирка же бүтүндөй инкубация тууралуу жооп күтсөңүз, индикатордун эч кандай химиясы мындай чечмелөөнү туура кыла албайт.