Лёффлердин щелочтуу жана полихромдук метилен көгү менен боёо жөнүндө түшүндүрмө

Боёо үстөлүндө жанаша үч бөтөлкө турушу мүмкүн, алардын ар биринде метилен көгүнүн кандайдыр бир түрү көрсөтүлгөн. Биринде суудагы метилен көгү 1% деп жазылган. Экинчисинде Лёффлердин щелочтуу метилен көгү деп жазылган. Үчүнчүсүндө полихромдук метилен көгү деп жазылган. Иши көп кызматкер эң жакын турганын ала салат. Андан кийин сүртүндү өтө күңүрт, же өтө бирдей көк, же күтүлбөгөн кызгылт көк өңдөрдө боёлот да, натыйжа үчүн үлгү күнөөлөнөт.

Бул үлгүнүн эмес, формуланын көйгөйү. Үч эритменин курамындагы боёктор бири-бирине жакын болгону менен, алардын боёо принциптери башка. Бири — дээрлик нейтралдуу pH шартындагы кадимки катиондук боёк. Экинчиси — щелоч аркылуу таасири күчөтүлгөн ошол эле боёк. Үчүнчүсү болсо бир гана боёк эмес, атайын кычкылдандырылган аралашма. Туура эмесин колдонсоңуз, иш учурунда боёо принциби өзгөрүп кетет.

Кыскача жооп

Кадимки суудагы метилен көгү — баштапкы салыштыруу үлгүсү: сууда болжол менен 1% боёк, бактериялардын морфологиясын жана жалпы микроскопиялык көрүнүштү көрсөтүүчү жөнөкөй катиондук боёк. Лёффлердин щелочтуу метилен көгүндө суу менен суюлтулган спирттик баштапкы эритмеге так өлчөнгөн аз өлчөмдөгү суюлтулган щелоч кошулат. Бул pH көрсөткүчүн жогорулатып, катиондук боёктун бактериялардын кычкылдык түзүлүштөрүнө күчтүүрөөк байланышуусуна шарт түзөт. Полихромдук метилен көгү — щелочто кычкылдандыруу аркылуу атайын жетилтилген метилен көгү. Ошондуктан бөтөлкөдө калган метилен көгү менен катар деметилденген гомологдордун (azure A, azure B, azure C), тиониндин жана метилен кызгылт көгүнүн аралашмасы болот. Бул аралашма ар башка түзүлүштөрдү ар башка өңгө боёйт.

Бир гана сүйлөмдү эстеп калсаңыз: щелочтоо боёонун күчүн өзгөртөт, ал эми полихромдоо боёонун түстөрүн өзгөртөт.

Кадимки суудагы метилен көгү: салыштыруу үчүн негиз

Эң жөнөкөй формула — щелоч кошулбаган жана кычкылдандырылбаган, адатта 1% w/v концентрациясында сууда эритилген метилен көгү. Түс берүүчү бөлүк — каршы иону хлорид болгон метилтиониний катиону. Бул чакан, жалпак фенотиазиндик боёк PubChem'деги метилен көгү тууралуу жазууда метилтиониний хлориди катары сүрөттөлөт. Катион катары ал нуклеин кислоталарынын фосфаттык каркастарына жана бактериялардын клетка дубалдарындагы кычкылдык топторго байланып, ачык фондо клеткаларды көк түскө боёйт.

Анын артыкчылыгы — натыйжасынын алдын ала белгилүү болушу. Ядролор менен бактериялар көк болуп көрүнөт. Контраст анча күчтүү эмес. Начар көрүнгөн микроорганизмдер күңүрт боёлушу мүмкүн; Лёффлер дал ушул чектөөнү жоюуну көздөгөн. Бул эритме кирген бактерияларды жөнөкөй боёо ыкмаларынын кеңири тобу жөнүндө бактерияларды жөнөкөй боёого арналган жалпы серептен караңыз. Бул жерде да заттын атын так аныктоо маанилүү: метил көгү — таптакыр башка молекула. Бул метил көгү менен метилен көгүнүн айырмасы тууралуу макалада түшүндүрүлгөн. Демек, каталогдон түсүнүн аталышы боюнча гана издөө боёктун туура эмес классын тандоого алып келиши мүмкүн.

Лёффлердин щелочтуу метилен көгү: ошол эле боёк, күчтүүрөөк таасир

Лёффлердин классикалык рецепти метилен көгүнүн спирттик баштапкы эритмесин суудагы суюлтулган щелоч менен айкалыштырат. Окуу китептериндеги варианттарда 30 mL 95% этанолдо 0.3 g боёк жана 100 mL 0.01% суудагы калий гидроксиди көрсөтүлөт. Буга теңдеш вариант — 30 mL каныккан спирттик метилен көгү, 100 mL дистилденген суу жана 1 mL 1% KOH. Натыйжада боёктун концентрациясы болжол менен 0.3% болгон, pH көрсөткүчү ачык щелочтуу жумушчу эритме алынат. Коммерциялык варианттар да ушул принципти карманат. Thermo Fisher'дин микробиологиялык боёктор каталогу Лёффлердин щелочтуу метилен көгүн полихромдук жана суудагы варианттар менен катар өзүнчө колдонуу максаттары бар өзүнчө каталогдук товарлар катары көрсөтөт.

Негизги роль щелочко таандык. pH жогорулаганда үлгүдөгү карбоксил жана фосфат топтору протондорун жоготуп, терс заряддуу орундардын тыгыздыгы көбөйөт. Ошол эле учурда спирттик баштапкы эритме боёкту толук эриген абалда кармап, анын бул орундарга мономердик формада жетишин камсыздайт. Натыйжада бактериялар нейтралдуу суудагы боёкко караганда тезирээк жана күчтүүрөөк боёлот; кадимки бактериологиялык сүртүндүдө тааныш кочкул көк таякчалар менен кокктор көрүнөт. Боёо адатта бирден үч мүнөткө чейин созулуп, андан кийин суу менен чайкалат.

Классикалык колдонулушу — Лёффлердин сары суу чөйрөсүндө өстүрүлгөн Corynebacterium diphtheriae: ичке, көбүнчө учтары жоонойгон таякчалар жана топтолгон полифосфаттан турган, күчтүү боёлгон метахроматикалык Бабеш–Эрнст гранулалары. Чөйрө менен боёктун мындай айкалышы тарыхтан калган: экөө тең бир эле бактериологго таандык деп эсептелет, ал эми гранулалардын контрасттуу көрүнүшү диагностикалык артыкчылык берет. Дифтерияга байланыштуу иштерден тышкары, бул боёк культуралардан алынган сүртүндүлөр үчүн жалпы бактериологиялык боёк катары, клиникалык сүртүндүлөрдө Neisseria морфологиясын көрсөтүүдө жана Грам боюнча боёо талап кылынбаган, бирок кадимки суудагы көк боёк өтө күңүрт натыйжа берген учурларда колдонулат. Бул — бир түстүү боёк. Кычкылдык касиети бар бардык нерсе көктүн кандайдыр бир өңүнө боёлот. Протокол түстөр аркылуу айырмалоону талап кылса, щелочтун өзү эле муну камсыздай албайт.

Практикалык бир эскертүү: щелочтуу боёк эритмелери сактоодо жана көмүр кычкыл газын сиңиргенде бузулуп, чөкмө пайда кылат. Лабораториялар ар бир предметтик айнекке чөкмө түшүрө баштаган эски бөтөлкөнү эптеп колдонуп жүргөндүн ордуна, аз көлөмдө эритме даярдашат же каталогдогу даяр эритмени сатып алып, анын жарактуулук мөөнөтүн сакташат.

Полихромдук метилен көгү: бир аталыш, бир нече боёк

Полихромдук метилен көгү ошол эле боёктон алынат, бирок щелочто көзөмөлдөнгөн кычкылданууга дуушар кылынат. Бул процесс тарыхта жетилтүү же полихромдоо деп аталган. Щелочтуу шартта кармоо, карбонат менен ысытуу же дихромат сыяктуу агенттер менен кычкылдандыруу диметиламино орун басарларынан метил топторун баскыч-баскыч алып салат. Натыйжада аралашма пайда болот: калган метилен көгү, azure B (бир метил тобу алынган), azure A жана azure C (андан ары деметилденген), тионин (толук деметилденген) жана метилен кызгылт көгү тобунун кычкылдануудан пайда болгон кошумча продуктулары. Ар бир компоненттин өзүнүн өңү жана ткандарга жакындыгы бар. Ошондуктан аралашма метахроматикалык түрдө боёйт: ядролор, гранулалар, муциндер жана кемирчек көктөн кызыл-кызгылт көккө чейинки өзүнчө өңдөрдү алышат.

Бул — белгилүү кан боёкторунун негизинде жаткан ошол эле химия. Алгачкы изилдөөчүлөр щелочтолгон метилен көгү безгек паразитинин ядролорун кызгылт көк өңдөргө боёрун байкашкан, бирок алардын суудагы жетилтилген эритмелери туруксуз болуп, бир нече күндүн ичинде чөкмө пайда кылган. Кызгылт көк кан боёгу кандай ойлоп табылганы тууралуу серепте Малаховский менен Романовский 1891-жылы бул таасирди бири-биринен көз карандысыз кантип колдонгону, боёктун чөкмөсүн турукташтыруу жана сүртүндүлөрдү ысытпай фиксациялоо үчүн метанол кантип киргизилгени, ошондой эле Гимза кийинчерээк так өлчөнгөн azure B менен эозиндин негизиндеги аралашманы глицерин менен турукташтырып кантип стандартташтырганы баяндалат. Азыркы Гимза тибиндеги боёктор түздөн-түз полихромдук метилен көгү менен эозиндин айкалышынан келип чыккан; дал ушул айкалыш Романовский эффектин жаратат. Эозин менен айкалышы жана azure B компоненти тууралуу кеңири маалыматты Романовский тибиндеги боёктор жана azure B менен эозиндин өз ара аракеттенүүсү тууралуу макаладан караңыз.

Аралашма болгондуктан, полихромдук метилен көгү табиятынан ушул үчөөнүн ичинен эң аз стандартташтырылганы. Анын өңдөрүнүн так тең салмагы кычкылдандыруу жолуна жана даражасына жараша болот. Ошондуктан гистологиялык материалдарды жеткирүүчүлөр аны эскирген Лёффлер эритмеси катары эмес, өзүнчө иштөө сапаты текшерилген өзүнчө продукт катары сатышат. Кадимки колдонулушуна маст клеткаларынын гранулаларын, муциндерди жана кемирчекти метахроматикалык түрдө көрсөтүү, плазмалык клеткалардын майда түзүлүштөрүн көрсөтүү жана ткандардын кесиндилеринде Helicobacter pylori'ни Гудпасчер тибиндеги полихромдук ыкмалар менен көрсөтүү кирет. Максат түстөр аркылуу айырмалоо болгондо бул туура тандоо, ал эми протокол бактериялардын так, бир түстүү контурун күтсө, туура эмес тандоо болот.

Формулаларды жана максаттарды салыштыруу

Таблицаны чечим кабыл алуу тартиби катары окуңуз. Эгер үлгү өтө күңүрт боёлсо, pH боюнча ыкманы өзгөртүп, Лёффлер боёгун тандаңыз. Эгер баары боёлуп, бирок эч нерсе бири-биринен айырмаланбаса, боёктун түрүн өзгөртүп, полихромдук боёкту тандаңыз. Эгер Лёффлер менен боёлгон сүртүндүдө гранулалар сонун көрүнүп, бирок жетекчи ядролор менен цитоплазма эмне үчүн бирдей көк экенин сураса, жооп мындай: эч бир щелочтуу бир түстүү боёк аларды ар башка түскө боёй албайт. Бул маселе полихромдук боёктор тобуна жана анын кан боёочу туундуларына тиешелүү.

Көп кездешкен чаташуулардан сактануу

Чаташуулардын көбү эки катадан келип чыгат. Биринчиси — бөтөлкөдө экөө тең көк көрүнгөндүктөн, Лёффлер боёгун кадимки метилен көгү менен алмаштырууга болот деп эсептөө. Алар pH көрсөткүчү жана боёо күчү боюнча айырмаланат. Лёффлер боёгу көрсөтүлгөн жерде нейтралдуу боёкту колдонуу протоколдо атайын көздөлгөн гранулалардын контрастын жоготот. Экинчиси — кандайдыр бир эски же кокусунан эскирип калган щелочтуу көк боёкту полихромдук деп эсептөө. Көзөмөлсүз эскирүү концентрациясы белгисиз, курамы белгисиз аралашманы пайда кылат. Чыныгы полихромдук эритмелер болсо аныкталган кычкылдандыруу жолдору менен даярдалат жана кан боёкторунун тармагында так өлчөнгөн эозин менен айкалыштырылат. Тарых бул жерде сабак берет: 1890-жылдардагы суудагы туруксуз жетилтилген эритмелер метанол менен турукташтырылган формулаларга орун берген, анткени көзөмөлсүз аралашмаларды кайра так кайталап алуу мүмкүн эмес болгон. Жашы белгисиз бөтөлкөдөн диагностикалык препаратты боёодон мурун ушул сабакты эстөө зарыл.

Аталыштарды тактоо маселени жыйынтыктайт. Түсүнө карап божомолдобой, этикеткадан каталогдук товардын түрүн (суудагы, Лёффлер же полихромдук), боёктун курамын жана арналган колдонулушун текшериңиз. Үч формуланын хромофордук негизи бир. Бирок максаты бир эмес.