Gotar
Xwendina xuyaniya koloniyên E. coli û yên din li ser agarê EMB
Xwendekarek nimûneyeke nenas bi rêbaza xêzkirinê li ser agarê eosîn-metîlen şîn diçîne, şevekê di inkubasyonê de dihêle û dema vedigere, li ser plakê koloniyên tarî bi biriqîneke kesk dibîne. Di defterê de dinivîse: "E. coli, hat piştrastkirin." Ev qeyd ji ya ku plak dikare piştgirî bike zêdetir îdia dike. Plak di bin şertên taybet de fenotîpeke mezinbûn û fermentasyonê nîşan dide. Nasnameya cureyê îdiayeke cuda ye ku pêdivî bi delîlên cuda heye.
Ev rêber encamên agarê EMB wekî karekî şîrovekirinê digire dest. Ramana bingehîn rave dike, bi kontrolan re atlaseke nimûneyî ya plakan pêşkêş dike û rewşên ku wêneya pirtûka dersê xapîner dibe destnîşan dike.
Ramana li pişt plakê
Agarê EMB hem bijartî hem jî cudaker e. Boyaxên eosîn Y û metîlen şîn mezinbûna gelek organîzmayên Gram pozîtîv asteng dikin, ji ber vê yekê navîn mezinbûna organîzmayên Gram negatîv pêş dixe. Heman boyax wekî nîşander jî kar dikin: dema organîzmayek şekirê berdest ferment dike û li cihê xwe têra xwe asîd çêdike, kolonî bi giranî boyaxê digire û rengê wê ji binefşê tarî heta şînê reş diguhere. Bi çêkirina asîdê ya xurt, rûyê koloniyê dikare biriqîneke metalî ya kesk nîşan bide ku bi guhertina goşeya dîtinê diguhere. Protokola ASM ya plakên agarê eosîn-metîlen şîn vê yekbûna bijartin û cudakirinê rave dike û ji bo hînkirinê wêneyên referansê pêşkêş dike.
Berî xwendina her encamê, hûrguliyek girîng e: kontrol bikin ka kîjan formulasyon tê bikaranîn. Formulasyona kevintir a Holt Harris Teague laktoz û sukroz dihewîne, lê Levine EMB tenê laktoz dihewîne. Organîzmayeke ku sukrozê ferment dike lê laktozê naferment dike, wekî gelek îzolatên Serratia marcescens, dikare li ser van her du guhertoyan cuda xuya bike. Belgeya hilberîner ji bo navînên EMB vê cudahiya formulasyonê bi eşkere destnîşan dike. Hilberîner û formulasyonê tevî encamê di defterê de qeyd bikin.
Agarê EMB yê amade yê ku hêj nehatî çandin bi gelemperî sor-qehweyî heta binefşê sorî ye, carinan bi tûneke keskî an çökûntûyeke hûr. Ew rengê paşzemînê ne mezinbûn e. Her xwendinê bi plakê neçandî an bi rewşa bingehîn a belgekirî re bidin ber hev û, heta ku protokola hînkirinê tiştekî din nebeje, plakê bingehîn piştî nêzîkî 18 heta 24 saetan inkubasyona aerobî li 35 heta 37 C bixwînin. Dirêjkirina inkubasyonê dikare xuyaniya fermentasyonê biguhere.
Çawa li plakê binêrin
Du cure ronahiyê bi kar bînin. Pêşî plakê di bin ronahiya vegeriyayî an paldayî de vekolin û wê bizivirînin: biriqîna metalî bi goşeya dîtinê diguhere û dikare xuya bibe an winda bibe. Paşê wê bi ronahiya ku di plakê re derbas dibe vekolin da ku rengê koloniyan û navendên tarî binirxînin. Ji koloniyên baş veqetandî dest pê bikin, ji ber ku qerebalixî û koloniyên cîran kombûna asîdê ya herêmî diguherînin û dikarin rengî kêm bikin an zêde xurt bikin. Koma wêneyên ASM vê yekê rasterast nîşan dide: E. coli di çandeke tevlihev de dikare biriqîna xwe ya tê çaverêkirin winda bike, ji ber ku organîzmayên derdorê rewşa asîdê diguherînin.
Her ku temrîn destûr dide, kontrolan jî tê de bi cih bikin. Komeke hînkirinê ya gelemperî E. coli ATCC 25922 ji bo fenotîpa şînê reş û biriqîna metalî, nefermenterek wekî Salmonella Typhimurium ATCC 14028 an Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 ji bo fenotîpa bêreng, û organîzmayeke Gram pozîtîv wekî Enterococcus faecalis an Staphylococcus aureus wekî kontrola astengkirinê dihewîne, wekî ku di tabloyên standard ên QC ji bo navînên EMB de hatine lîstekirin. Heke kontrola pozîtîv biriqînê nîşan nede, berî ku ji nimûneya nenas guman bikin, ji inkubasyonê, qerebalixiyê an formulasyonê guman bikin.
Atlasa nimûneyî ya plakan
Plakên li jêr wêneyên nimûneyî yên çêkirî ne, ne wêneyên çandên rastîn in. Ew şêwaza ku divê lê bigerin nîşan didin, ne tona rast a rengê her cureyeke taybet. Wan bi wêneyên referansê yên ASM û bi plakên rastîn ên laboratûvara hînkirinê re bidin ber hev.
Plak 1: Escherichia coli li ser agarê EMB, fermentera xurt a laktozê
E. coli li ser agarê EMB bi gelemperî binefşê tarî heta şînê reş e, gelek caran bi navendeke tarî û biriqîneke metalî ya kesk ji çêkirina xurt a asîdê. Biriqîn ew nîşana navdar e ku xwendekar lê digerin, lê wê wekî delîleke piştgirîker bibînin, ne wekî pênaseyekê. Xurtiya biriqînê li gorî strainê, dema inkubasyonê, çiriya koloniyan û goşeya dîtinê diguhere. Nebûna biriqînê E. coli ji ihtîmalan dernaxe, û koloniyeke tarî ya bê biriqîn dikare nîşana çend fermenterên din be. Ji bo her karekî şopandinê, li şûna xwendina ji beşeke qerebalix, koloniyeke baş veqetandî hilbijêrin.
Plak 2: Klebsiella pneumoniae li ser agarê EMB, fermentera mukoid
Klebsiella pneumoniae li ser agarê EMB bi gelemperî koloniyên mezin, biriqok û mukoid bi tonên pembe-binefş heta qehweyî-binefş çêdike, gelek caran bi navendên tarî lê bi gelemperî bê biriqîneke metalî ya xurt. Morfolojiya bi vî rengî di fermenterên xizm de, wekî Enterobacter, jî tê dîtin. Pêkhateya mukoid û mezinahiya koloniyê beşek ji xwendinê ne: girîngiya koloniyeke pembe ya biçûk û xûz ji ya koloniyeke mezin, qubeşekl û mukoid cuda ye. Wekî E. coli, plak fenotîpeke fermentasyonê pêşniyar dike, û navlêkirina di asta cureyê de pêdivî bi piştrastkirina biyokîmyayî ya li jêr tê ravekirin heye.
Plak 3: Salmonella li ser agarê EMB û nefermenterên din, koloniyên bêreng
Salmonella li ser agarê EMB û nefermenterên laktozê yên xizm, di nav de Shigella û gelek îzolatên Pseudomonas, bi gelemperî wekî koloniyên bêreng heta nîvşefaf an kehrîbarê sivik mezin dibin. Hin formulasyon û şert tûneke pembe ya sivik didin, ji ber vê yekê koloniyeke pembe ya sivik bixwe ne delîleke fermenterê ye. EMB Salmonella ji Shigella an ji nefermenterên din cuda nake; ew cudakirin bi testên paşê tê kirin. Herwiha bala xwe bidin ku strainên Salmonella yên laktoz-pozîtîv bi koloniyên metalî yên mîna E. coli hatine belgekirin; ev sedemeke din e ku tenê plakek nikare biryara dawî bide.
Plak 4: Serratia marcescens û xefika formulasyonê
Serratia marcescens beşeke taybet heq dike, ji ber ku xwendekar gelek caran koloniyên sor çaverê dikin û paşê plakê şaş dixwînin. Piraniya îzolatên klînîkî laktozê naferment dikin, ji ber vê yekê li ser Levine EMB bi gelemperî sivik an bi rengekî lawaz xuya dikin. Ji ber ku gelek îzolat sukrozê ferment dikin, formulasyoneke ku sukroz dihewîne dikare reaksiyoneke tarîtir an bi asîdê re girêdayîtir bide. Li 35 heta 37 C pigmenta sor a klasîk a prodigiosin jî çaverê nekin; çêkirina pigmentê li germahiya inkubatorê ne pêbawer e. Dema protokol navê Serratia marcescens li ser agarê EMB dide, kontrol bikin ka gotin kîjan formulasyonê esas digire. Nirxandineke metabolîzma Serratia şêwaza laktoz-negatîv û sukroz-guherbar a li pişt vê xefikê kurt dike.
Plak 5: kontrol û organîzmayên astengkirî
Organîzmayên Gram pozîtîv wekî Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus û Bacillus bi gelemperî li ser agarê EMB têne astengkirin an mezinbûna wan pir tê kêmkirin, herçiqas astengkirin ji bo her strainê mutleq nîne. Komeke kontrolan xwendinê rast û pêbawer dike: kontrola E. coli divê mezinbûneke baş bi rengê şînê reş û biriqînê nîşan bide, kontrola nefermenter divê mezinbûneke bêreng nîşan bide, û kontrola astengkirinê divê mezinbûneke kêm an tu mezinbûnê nîşan nede. Heke kontrola astengkirinê baş mezin bibe, gava bijartinê têk çûye û her xwendina din a wê partiyê cihê gumanê ye. Rêbazên boyaxkirinê bersiva pirseke cuda ji navînên çandinê didin; ji bo aliyê boyaxkirina lamê yê laboratûvarê, li atlasa boyaxkirinê bi metîlen şîn binêrin.
Berawirdkirina bi sînor
| Çavdêrî li ser agarê EMB | Wateya muhtemel | Çi piştrast nake |
|---|---|---|
| Koloniya şînê reş a tarî bi biriqîna kesk di ronahiya paldayî de | Fermentasyona xurt, E. coli berendamekî sereke ye | Nasnameya cureyê; fermenterên din ên xurt dikarin biriqînê nîşan bidin |
| Koloniya mezin a mukoid a pembe-binefş, bê biriqîn | Fermenterek bi taybetmendiya kapsulê, Klebsiella berendamek e | Bi taybetî Klebsiella pneumoniae; Enterobacter bi vî rengî xuya dike |
| Koloniya bêreng an nîvşefaf | Nefermentera laktozê, bo nimûne Salmonella, Shigella, Pseudomonas | Kîjan nefermenter e; cudakirina Salmonella ji Shigella pêdivî bi testên din heye |
| Koloniya bi rengê sivik li cihê ku sor dihat çaverêkirin | Dibe ku Serratia be li ser EMB ya ku tenê laktoz dihewîne li 37 C | Nebûna Serratia; formulasyon û germahiyê kontrol bikin |
| Mezinbûn tune ye an koloniyên pir biçûk ên astengkirî hene | Dibe ku astengkirina Gram pozîtîv be | Sterîlbûn an nasname; hin strain ji astengkirinê derbas dibin |
Sê hevok xuyaniyên xapîner kurt dikin. Tarî nayê wateya E. coli, ji ber ku Klebsiella, Enterobacter û fermenterên din navendên tarî yên bê biriqîn çêdikin. Pembe nayê wateya Klebsiella, ji ber ku fermenterên navîn an hêdî û hin organîzmayên ku wekî nefermenter têne binavkirin pembe an binefşê sivik xuya dikin. Biriqîn nayê wateya E. coli ya teqez, ji ber ku fermenterên din ên xurt jî dikarin wê çêkin. Protokola hînkirinê û wêneyên wê yên çanda tevlihev her yek ji van şaşiyan nîşan didin.
Sînorên piştrastkirinê
Agarê EMB fenotîpekê nîşan dide, ne cureyekê. Organîzmayên cuda dikarin heman xuyaniya koloniyê hebin, û organîzmayek dikare li gorî strainê, temenê, qerebalixiyê, formulasyonê û inkubasyonê ji wêneya xwe ya pirtûka dersê dûr bikeve. Ji ber vê yekê pêvajoyên hînkirinê û klînîkî morfolojiya EMB wekî nîşaneyeke pêşwext dibînin, ne wekî piştrastkirineke teqez.
Pêvajoyeke xwendekar a ku dikare were parastin ev e: koloniya veqetandî şirove bikin (mezinahî, reng, navend, biriqîn di bin ronahiya paldayî de, taybetmendiya mukoid), formulasyon, dema inkubasyonê û germahî, û kontrolan qeyd bikin; paşê, berî her testa piştrastkirinê, koloniyeke baş veqetandî ji nû ve biçînin da ku çandeke saf bi dest bixin. Şopandina gelemperî boyaxkirina Gram û reaksiyonên IMViC ji bo nasandina pêşwext a E. coli û kolîforman, TSI an KIA û komên testên biyokîmyayî yên taybet bi organîzmayê ji bo organîzmayên rûvî dihewîne; dema kar pêdivî dike, nasandin bi rêbazên serolojîk, MALDI TOF an rêbazên din ên pejirandî tê kirin. Ji bo agahiyên bingehîn li ser cihê EMB di nav navînên rûvî yên bijartî û cudaker de, li danasînên navînên çandina rûvî û şopandina boyaxkirina Gram binêrin. Ji bo pirsa têkildar a ku boyaxkirina şîn a lamekê çi dikare û çi nikare îspat bike, atlasa boyaxkirinê bi metîlen şîn bi heman nêrînê çavdêrî û encamê ji hev cuda dihêle.
Berî encamê, çavdêriyê binivîsin. "Koloniyên şînê reş ên tarî bi biriqîna kesk a girêdayî goşeya dîtinê li ser Levine EMB piştî 24 saetan, lihevhatî bi fermentasyona xurt a laktozê" gotineke ku dikare were parastin e. "E. coli, hat piştrastkirin" pêdivî bi gava piştrastkirinê heye ku plak bi tena serê xwe nikare peyda bike.