Şîniya Metîlenê di Testên Laboratuwarî yên G6PD de

Xwendekarek piştî înkubasyonê li du lûleyan dinêre. Yek bûye rengê tê hêvîkirin. Ya din nebûye. Xwendekar digihîje encama ku di nexweşê duyem de kêmasiya glukoz-6-fosfat dehîdrogenazê heye. Dibe ku ev encam rast be, lê ev awayê fikirînê têgeha ku testê dide xebitandin derbas dike. Di lûleyê de tiştek enzîmê rasterast napîve. Lûle tiştê ku enzîm hilberîne dipîve û şîniya metîlenê wek navbeynkar bi kar tîne.

Gava ev mekanîzmaya nerasterast zelal dibe, pêvajoya testê, kontrol û lîsteya dirêj a encamên şaş êdî ne wek tiştên keyfî xuya dikin.

Bersiva kurt

Şîniya metîlenê di testkirina G6PD de nîşandereke redoksê ye. Enzîma G6PD NADPH hilberîne û pergalên girêdayî NADPH şîniya metîlenê ya şîn redûk dikin û vediguherînin forma wê ya leuko ya bêreng (an wê ji bo veguhastina elektronan bi kar tînin). Çalakiya normal a enzîmê redûksiyoneke bi bandor pêk tîne. Çalakiya kêm redûksiyoneke hêdî an netemam pêk tîne. Hemû sînyal ev e.

Du rêbazên dîrokî heman rengkerê bi kar tînin, lê di xala dawî de ji hev cuda ne. Wan ji hev cuda bigirin û piraniya tevliheviyê ji holê radibe.

Du test, yek rengker, xalên dawî yên cuda

Ya yekem testa redûksiyona rasterast a şîniya metîlenê ye, ku Sass û hevkarên wî rave kirine û paşê Gibbs nirxandiye. Li vir xala dawî rengker bi xwe ye: şîniya metîlenê ya oksîdkirî û şîn ber bi leukometîlen şîna bêreng ve tê redûkkirin û leza vê guhertinê kapasîteya hilberandina NADPH nîşan dide. Gotara bingehîn a pêştespîtê li PubMed di bin navê Sass û hevkarên wî (1966) de hatiye îndekskirin.

Ya duyem testa redûksiyona methemoglobînê ya Brewer e. Nîtrîta sodyûmê pêşî hemoglobînê oksîd dike û vediguherîne methemoglobîna qehweyî. Paşê şîniya metîlenê wek navbeynkarek ji bo veguhastina elektronan dixebite: şîniya metîlenê ya redûkkirî ekvîvalentên redûkker dide methemoglobînê û wê dîsa vediguherîne hemoglobîna sor. Ji ber vê yekê, xala dawî ya ku tê dîtin qehweyî li hember sor e, ne şîn li hember bêreng. Rêbaza orîjînal di Bultena Rêxistina Tenduristiyê ya Cîhanê (Brewer û hevkarên wî, 1960) de hate weşandin.

Ji aliyê kîmyayî ve ne tam rast e ku testa Brewer wek testa bêrengkirina rengkerê were binavkirin. Rengker di çerxê de digere; hemoglobîn reng diguherîne. Şemaya jêrîn her du rêçikan nîşan dide.

Şemaya rêçika testê: G6PD NADPH hilberîne, ku şîniya metîlenê redûk dike; di guhertoya Brewer de, rengkerê redûkkirî methemoglobîna qehweyî vediguherîne hemoglobîna sor

Reaksiyona bingehîn

G6PD gava yekem a oksîdatîf a rêçika pentoz-fosfatê katalîz dike:

Glucose-6-phosphate + NADP+ becomes 6-phosphogluconolactone + NADPH + H+

Şaneyên sor ên xwînê yên gihîştî ji bo NADPH bi giranî girêdayî vê rêçikê ne, wek ku di nirxandina Luzzatto û hevkarên wî de di Blood (2020) de hatiye ravekirin. NADPH glutatyonê di rewşa redûkkirî de dihêle û şaneyê li dijî zirara oksîdatîf diparêze. Şîniya metîlenê wek qebûlkarekî elektronan dikeve vê pergalê. G6PD ya têr NADPH ya têr dide, ku redûksiyoneke bi bandor pêk tîne. G6PD ya kêm zincîrê di girêka wê ya yekem de dişikîne.

Rengkerê wek pîvana sotemeniyê bibînin, ne wek motorê. Ew rewşa peydakirina NADPH nîşan dide. Her tiştê din ê ku vê peydakirina NADPH an xwendina encamê biguherîne, dikare derziyê bilivîne bêyî ku guhertinek di genê de hebe.

Pêvajoya testa bi şêwaza Brewer çawa dimeşe

Formûlên reaktîfan di dehsalan de guherîne; ji ber vê yekê divê ravekirineke perwerdehiyê bi protokoleke klînîkî neyê tevlihevkirin. Her laboratuwar pêvajoya xebatê ya standard û pejirandî ya xwe dişopîne. Bi vê hişyariyê, sazkirina klasîk a lûleyan wiha dimeşe; ev şêwaz bi sê lûleyan û înkubasyona 3 saetan di vê sepandina weşandî de hatiye belgekirin:

Lûleya nexweş: xwîna tevahî bi glukoz, nîtrîta sodyûmê û şîniya metîlenê re. Nîtrît methemoglobînê çêdike, glukoz metabolîzmaya şaneyên sor xwedî dike û rengker navbeynkariya veguhastinê ya girêdayî NADPH peyda dike.
Kontrola oksîdkirî: xwîn bi nîtrît û glukozê re, lê bê şîniya metîlenê. Ew xala dawî ya methemoglobîna qehweyî, ango şêwaza kêmasiyê, nîşan dide.
Kontrola hemoglobînê: xwîn bi avê re. Ew xala dawî ya hemoglobîna sor, ango şêwaza normal, nîşan dide.
Hemû lûleyan li nêzî 37 C înkube bikin, bi gelemperî ji bo 3 saetan, û bi nermî tevlihev bikin.
Beşeke biçûk ji her lûleyê di ava distîlekirî de tenik bikin da ku şane bişikên û berawirdkirina rengê were xwendin.
Lûleya nexweş bi her du kontrolan re berawird bikin. Vegera ber bi sor ve kapasîteyeke redûkker a berbiçav nîşan dide. Man li aliyê qehweyî kêmasiyeke eşkere dide pêşniyarkirin.

Formûlek dîrokî nêzî 1 mL xwîn bi reaktîfên li nêzî 180 mM nîtrîta sodyûmê, 280 mM dekstroz û 0.4 mM şîniya metîlenê bi kar anî. Van hejmaran wek mînakek ji lîteraturê bibînin, ne wek taybetmendiyeke gerdûnî.

Xwendina encamê

Şêwaz	Xuyaniya Brewer	Wate
Normal	Lûleya nexweş nêzî kontrola hemoglobîna sor dibe	Kapasîteya redûkker li ser sînorê pêştespîtê ye
Kêmasî	Lûleya nexweş qehweyî dimîne, nêzî kontrola methemoglobînê	Pêştespît kêmasiyeke eşkere ya G6PD dide pêşniyarkirin
Navîn	Reng di navbera kontrolan de ye	Fenotîpek diyar nekin; çalakiyê bi awayekî mîqdarî bipîvin

Pêştespîteke kalîtatîf herî baş li dora 30 heta 40 ji sedî ya çalakiya normal cudahiyê dide xuyakirin, wek ku di vê nirxandina Malaria Journal de li ser valahiyên tesbîtkirina G6PD tê nîqaşkirin. Ji ber vê yekê, encameke normal a pêştespîtê tê wê wateyê ku testê kêmasiyeke giran tesbît nekiriye. Ew çalakiya bi tevahî normal piştrast nake.

Çima pêştespît şaş dike

Retîkulosîtoz piştî hemolîzê sedema klasîk a encama normal a derewîn e. Şaneyên sor ên ciwan û retîkulosît ji şaneyên kevn bêtir G6PD hildigirin. Di dema bûyereke hemolîtîk a akût de, dibe ku şaneyên herî kevn û yên herî kêm G6PD jixwe hatibin hilweşandin û tenê komeke şaneyên ciwan mabin ku çalakiya wan di testê de normal derdikeve. Heman biyolojî ne tenê pêştespîtên bi rengkerê, lê testên mîqdarî jî şaş dike.

Veguhastina xwînê ya nû kêmasiyê veşêre, ji ber ku şaneyên sor ên xwîndêr enzîma xwe li nimûneyê zêde dikin. Mayo Clinic Laboratories veguhastina xwînê di nav sedemên encamên enzîmê yên nebawer de rêz dike, ligel retîkulosîtoz û mudaxeleya leukosîtan.

Jinên heterozîgot rewşa herî dijwar in. Bêçalakkirina tesadufî ya kromozoma X tevliheviyeke şaneyên sor ên normal û yên bi kêmasî çêdike û çalakiya giştî dikare li her astekê, ji kêmasiya giran heta ya ku normal xuya dike, be. Pêştespîtên kalîtatîf bi gelemperî fenotîpên navîn ji dest didin. Belgeyên WHO li ser testkirina G6PD vê sînordariyê bi hûrgulî nîqaş dikin.

Temenê nimûneyê, germahiya hilanînê, subjektîvîtiya nirxandina xala dawî ya dîtbar, hematokrît û kalîteya reaktîfan li ser van bandorên biyolojîk tevliheviya analîtîk jî zêde dikin.

Pêştespît ne teşxîs e

Encameke pêştespîtê ku kêmasiyê nîşan dide, navîn e an bi rewşa klînîkî re li hev nayê, testeke mîqdarî ya enzîma G6PD pêwîst dike. WHO spektrofotometriya mîqdarî ya bi germahiya kontrolkirî wek rêbaza referansê dibîne. Di wê testê de, glukoz-6-fosfat û NADP+ li hemolîzata şaneyên sor tên zêdekirin û NADPH ya ku çêdibe bi zêdebûna absorbansê li 340 nm tê şopandin. Leza guhertinê bi çalakiya enzîmê re rêjeyî ye û bi gelemperî li gorî hemoglobînê wek yekîne li ser her gramê tê standardkirin. Pratîka heyî ya laboratuwarên klînîkî di tomara kataloga testên Mayo ya ji bo çalakiya G6PD de hatiye kurtkirin.

Şîrovekirin qada referansê ya ku laboratuwarê pejirandiye bi kar tîne; ev bi gelemperî li gorî çalakiya normal a nifûsê tê diyarkirin, û kêmasî bi gelemperî li nêzî sînorê 30 ji sedî û çalakiya navîn li jorê wê tê nîqaşkirin. Profîlên hilberên hedef ên WHO ji bo testên G6PD (2022) vê çarçoveya teşxîsê diyar dikin. Heke hemolîza nû an veguhastina xwînê fenotîpkirinê nebawer bike, piştî ku koma şaneyên sor dîsa dikeve hevsengiyê testê dubare bikin; testkirina molekuler dikare bêyî ku şûna pîvandina enzîmê bigire, agahiyên zêdetir peyda bike.

Sînorek ku hêjayî parastinê ye

Şîniya metîlenê di van testan de reaktîfeke laboratuwarî ya ex vivo ye. Ev rastî mijareke cuda ye ji ewlehiya dayîna şîniya metîlenê ji nexweşek re, ku di rêberiya li ser rewşên ku şîniya metîlenê divê neyê bikaranîn de tê ravekirin. Biyokîmya wan bi hev ve girê dide, ji ber ku derman jî girêdayî redûksiyona bi NADPH ye, lê rengkerek di lûleya testê de ne dozek di gera xwînê de ye. Ji bo zanîna ka rengker di qadeke din de wek rengkereke boyaxkirinê çawa tevdigere, li prensîpên boyaxkirina bi şîniya metîlenê binêrin; ji bo malbata kîmyayî ya ku ew jê ye jî, li rengkerên redoksê di laboratuwarê de binêrin.

Pêştespît dipirse ka kapasîteya redûkker sax xuya dike an na. Piştrastkirin dipirse ka bi rastî çiqas enzîm heye. Rengker baş bersiva pirsa yekem dide, bi şertê ku kes jê nexwaze bersiva ya duyem bide.