Avakirina kurba kalîbrasyonê ya şîna metîlenê: nimûneyên vala, navber û xêzîbûn

Du analîst heman şûşeya çareseriya stok a şîna metîlenê bi kar tînin û her yek kurbeke kalîbrasyonê çêdike. Ya yekem xêzeke rast a di xalê sifirê re derbas dibe bi dest dixe û bi bawerî nimûneyên bi konsantrasyona nenas dipîve. Ya duyem xêzeke ku li jor ditewe, nirxeke birîna eksenê ku nêzî sifirê nabe, û encamên nimûneyan ku bi tenikkirinê diguherin bi dest dixe. Heman boyax, heman amûr, heman dirêjahiya pêlê. Cudahî ne di jêhatîbûnê de ye. Di sêwiranê de ye: çi ket nav nimûneya vala, kîjan konsantrasyon hatin hilbijartin, û gelo navbera kontrolkirî di herêma ku modelek hêsan hîn derbasdar e de ma an na.

Kurba kalîbrasyonê peymaneke di navbera bersiva amûrê û konsantrasyonê de ye; tenê di şertên ku tê de hatiye avakirin de derbasdar e. Ji bo şîna metîlenê, xalek lawaz a vê peymanê tê zanîn. Boyax di avê de bi xwe re kom dibe, lewma cureya ku ronahiyê diêşîne bi konsantrasyonê re diguhere. Kurba ku li seranserê vê guhertinê tê avakirin rast nabe, û tu analîza statîstîkî nikare wê sererast bike. Ev gotar nîşan dide ka çawa kurbê sêwiran bikin da ku xêz watedar be: nimûneya vala ya rast hilbijêrin, navberê di rejîma monomerê de bihêlin, dubareyan bi rastî çêbikin, û tewandinê wek agahî bixwînin, ne wek dengê pîvanê.

Bi nimûneya vala dest pê bikin, ne bi standardan

Nimûneya vala sifirê diyar dike, û ji bo şîna metîlenê divê ji bilî boyaxê her tiştî bihewîne. Heman dereceya avê, heman tampon û pH, heman xwê, heman rêjeya hev-şînerê, heman germahî. Çareseriyên kalîbrasyonê di wê matrîsa yekسان de amade bikin. Sedem kîmyewî ye, ne burokratîk. Xwê û şîner hevsengiya di navbera monomer, dîmer û agregatên mezintir de diguherînin; ev jî spektrumê li dirêjahiya pêla pîvanê diguherîne. Nimûneya vala ya ku tenê av e nikare guhertina dabeşbûna cureyên kîmyewî ya ji ber matrîsê sererast bike. Analîza giştî ya spektrumên şîna metîlenê di avê de, ku bi tomara wê ya gihîştina vekirî berdest e, klorîda sodyûmê ji 0 heta 0.15 M guhert, tam ji ber ku hêza îyonî hevsengiyê diguherîne; kombûn jî bi zêdebûna xwê re zêde bû.

Encameke pratîkî: qet di ava bêîyon de kalîbrasyonê nekin û piştre nimûneyan di tampona fosfatê an filtrata ava qirêj de nepîvin. Dema ku matrîseke bê analît tune be, zêdekirina standardê rasterast li nimûneyê ji kurbeke derveyî ya ne lihevhatî baştir e. Rêberiya têkildar a ji bo pîvanên di avê de yên pêbawer di nîqaşa matrîs û destwerdanan de heye, û prensîbên giştî yên pîvanên mîqdarî yên boyaxê di nihêrîna giştî ya sêwirana pîvanê de hatine vegotin.

Navberekê hilbijêrin ku cureyek tê de serdest be

Diyarkirina mîqdarê li banda dirêjahiya pêla dirêj a nêzî 664 nm li ser wê texmînê ye ku piraniya boyaxê di forma monomerê de ye. Di ava sade de ev texmîn tenê dema ku çareserî tenik dimînin derbasdar e, bi qasî herêma konsantrasyonên mîkromolar ên kêm. Meylên ezmûnî yên weşandî sînorê nîşan didin: kalîbrasyonên ku di hucreyên 1 cm de li bin nêzî 7 mîkromolar têne girtin meyleke nêzî 82,000 M-1 cm-1 didin, lê kalîbrasyona ku heta nêzî 37 mîkromolar tê dirêjkirin dadikeve nêzî 67,100, ji ber ku standardên jorîn êdî mîqdareke berçav a dîmerê dihewînin. Her koefîsyenta ku li vir tê gotin bi şertên xwe di referansa spektral a şîna metîlenê de hatiye nîşankirin; ew cihê rast e ji bo berawirdkirina hejmaran. Ev gotar wan tenê ji bo diyarkirina navberê bi kar tîne.

Rêzikên sêwiranê rasterast ji vê yekê derdikevin:

1. Standarda herî bilind têra xwe tenik bihêlin da ku teşeya spektrumê sabît bimîne. Di dema pêşxistinê de, ji bo her astê tevahiya navbera xuyangê (nêzî 550 heta 750 nm) bişopînin, li şûna ku tenê dirêjahiya pêleke yekane bixwînin. Ger spektrumên normalîzekirî bi konsantrasyonê re teşe biguherînin, kîmya diguhere û navber pir fireh e.
2. Li seranserê astan rêjeya absorbansa nêzî 610 nm li absorbansa nêzî 665 nm bişopînin. Rêjeyeke ku bi konsantrasyonê re bilind dibe tê wê wateyê ku milê banda dîmerê mezin dibe û modela monomerê êdî derbasdar nîne. Ev nîşaneya teşxîsê di rêbera bandorên kombûn û konsantrasyonê de bêtir tê ravekirin.
3. Ji bo xebata bi konsantrasyonên mîkromolar ên kêm hucreyeke 1 cm bi kar bînin. Bi meyleke nêzî 82,000, 5 mîkromolar absorbansa nêzî 0.41 dide û 10 mîkromolar nêzî 0.82 dide; her du jî ji bo piraniya amûran guncaw in.
4. Ji bo çareseriyên stok ên konsantre, li şûna pejirandina absorbansa pir li ser 1, rêya optîkî kurt bikin; lê ji bîr nekin ku rêya kurt fotometriyê sererast dike, ne kîmyayê. Kombûn bi konsantrasyonê ve girêdayî ye, ne bi dirêjahiya rêyê, lewma çareseriyeke stok a konsantre hîn jî hewceyê nirxandineke taybet e ku dabeşbûna cureyên kîmyewî li ber çavan digire, ne kurbeke tenik a monomerê.

Lihevhatina modela giştî ya ku bingeha beşeke mezin a vê wêneyê ye, 224 spektrum ji 1.1 mîkromolar heta 3.4 mîlîmolar dihewand û dît ku nîşaneya tetramerê jixwe li bin 34 mîkromolar dikare were tespîtkirin. Ev dîtin hişyariyekê dide: pencereya xêzî ji ya ku meriv bi hestê xwe texmîn dike tengtir e, lewma wê piştrast bikin, ne ku tenê hebûna wê texmîn bikin.

Ast, dubare û rêz

Kurbeke bi sê xalan tu tiştî îspat nake. Rêberiya piştrastkirinê ya ICH Q2(R2) ji bo nirxandina xêzîbûnê herî kêm pênc konsantrasyonan dixwaze, û şeş heta heşt astên ne-sifir kurbeke xebatê ya bawerkerتر didin, bi taybetî nêzî sînorê jorîn ku kombûn dest pê dike. Astan wisa belav bikin ku navbera armanc a nimûneyan bigirin û li cihê ku tewandin herî muhtemel e bêtir ast hebin; ne di rêzeke geometrîk de ku tenê ji bo hêsaniyê hatiye hilbijartin.

Her astê du an sê caran bipîvin, bi amadekirinên serbixwe, ne bi sê caran xwendina heman balonê. Dubareyên serbixwe xeletiya amadekirinê derdixin holê; xwendinên dubare yên heman balonê tenê dengê amûrê derdixin holê. Lêkolîna giştî ya 2020 her çareserî sê caran pîva, ku hîn jî hilbijartineke destpêkê ya baş e. Rêza xwendinan tesadufî bikin da ku guhertina hêdî ya pîvanê, adsorbsiyona li ser camê an guhertina germahiyê wek tewandinê xuya neke. Lêkolîneke kûveta kuartsê dît ku di 10 deqeyan de nêzî 3 ji sed a boyaxê ji çareseriyeke 34 mîkromolar li ser rûyê kûvetê adsorbe dibe; lewma dema têkiliyê, kûvet, paqijkirin û rêzê di tevahiya rêza pîvanan de yekسان bihêlin.

Mînaka çareserkirî ya raveker (ne daneyên pîvandî)

Hejmarên li jêr ji bo nîşandana hesabê hatine çêkirin. Ew ne pîvanên laboratuvarê ne û divê wek daneyên şîna metîlenê neyên referanskirin. Ya girîng şêwaza kontrolên li dora wan e.

Bifikirin ku şeş standard di tampona lihevhatî de, bi rêya 1 cm, li 665 nm li hember nimûneya vala ya lihevhatî têne xwendin:

Lihevhatina xêzeke rast a navîniya absorbansê li hember konsantrasyonê meyleke nêzî 0.0805 yekîneyên absorbansê ji bo her mîkromolar û nirxeke birîna eksenê ku tenê çend yekîneyên mîlîabsorbansê ji sifirê dûr e dide. Dabeşkirina meylê bi dirêjahiya rêyê wê vediguherîne koefîsyenta absorbansê ya xuya: 0.0805 ji bo her mîkromolar bi qasî 80,500 M-1 cm-1 ye, ku bi navbereke di avê de ya ku monomer tê de serdest e re lihevhatî ye. Kontrolên girîng ne R çargoşe ye, ku di her rewşê de dê pir baş xuya bike. Ew nirxa birîna eksenê ya nêzî sifirê, rêjeya sabît a A610/A665 ji S2 heta S5, û bermayiyên belavbûyî yên bê meyl in. Bilindbûna rêjeyê li S6 nîşaneya rast e ku an wê astê derxin, an 7 mîkromolar wek sînorê jorîn ê demkî yê vê berhevoka matrîs û amûrê nîşan bikin.

Nimûneyeke bi konsantrasyona nenas ku di şertên yekسان de 0.245 tê xwendin rasterast tê veguhertin: 0.245 dabeşî 0.0805 ji bo her mîkromolar nêzî 3.0 mîkromolar dide, berî ku faktora tenikkirina nimûneyê were sepandin. Encamê bi şertên wê re rapor bikin: dirêjahiya pêlê, rêya optîkî, matrîsa nimûneya vala, navbera kalîbrasyonê û dîrok.

Fişa karê ya kalîbrasyonê ya dagirtinê

Ji bo her matrîseke nû vê şablonê li tomara laboratuvarê kopî bikin. Matrîsek, fişek, kurbek.

Rêza forma reagentê bi sedemekê li vir e. Şîna metîlenê ya bazirganî dikare xwêya bêav an hîdratek wek trîhîdratê be, û girseya molar a şaş bêyî ku were dîtin hemû konsantrasyonên nominal ber bi aliyekê ve dixe. Kontrolên paqijî û taybetmendiyên madeya destpêkê di rêbera kalîte û dereceyê de hatine vegotin.

Bi standardeke kontrolê ya serbixwe piştrast bikin

Kurba kalîbrasyonê divê qet xebata xwe bixwe nenirxîne. Piştî lihevhatina modelê, standardeke kontrolê ji çareseriyeke stok a ku bi girseyeke cuda pîvandî hatiye amadekirin çêbikin, bi konsantrasyoneke nêzî navenda navbera pejirandî, û wê wek nimûneyeke nenas bixwînin. Lihevhatina di nav çend ji sed de zincîra amadekirinê piştrast dike; cudahiyeke derveyî vê sînorê çareseriya stok an tenikkirinan dixe bin gumanê, ne amûrê. Bi her koma nimûneyan re standarda kontrolê dubare bikin. Ger encama wê biguhere lê kurb neguhere, berî ku gumanê ji nimûneyan bikin, ji çareseriyên xebatê an kûvetê bikin. Ev adeta yekane piraniya xeletiyên veşartî digire: girseya molar a hîdratê ku ji bo şûşeyeke bêav tê bikaranîn, mîkropîpeteke ji kalîbrasyonê derketî, tamponeke bi hêza îyonî ya şaş hatî amadekirin. Rêjeya vegerandina standarda kontrolê li ser fişa karê li kêleka meylê tomar bikin, da ku kesek ku paşê dixwîne bibîne ku xêz hatiye ceribandin, ne tenê xêzkirin.

Xwendina nexêzîbûnê wek teşxîs

Dema ku kurb ditewe, teşeya kêmasiyê sedemê nîşan dide. Tewandina ber bi jêr ve li absorbansa bilind, tevî ku teşeya spektral naguherê, amûrê nîşan dide; pir caran ronahiya belavbûyî absorbansên bilind ji nirxa rast kêmtir nîşan dide. Tewandina ku bi bilindbûna milê banda 610 nm re tê dîtin kîmyayê nîşan dide: dîmer û agregatên mezintir ronahiyê bi awayekî cuda ji monomerê diêşînin. Nimûneyeke vala ku sifir nabe, an standardên ku nirxên wan bi demê re dadikevin, firaxê nîşan didin: adsorbsiyona li ser cam an kûvetan, bi taybetî ger demên têkiliyê di rêza pîvanan de cuda bûbin. Û xêzeke paqij a di xalan re derbas dibe lê dîsa encamên nimûneyan ên şaş dide matrîsê nîşan dide: nimûne ji çareseriyên kalîbrasyonê cuda ne, lewma kurbê di matrîsa nimûneyê de ji nû ve ava bikin an derbasî rêbaza zêdekirina standardê bibin. Di her rewşê de bermayiyan li hember konsantrasyonê li ser grafîkê nîşan bikin. Belavbûneke tesadufî modela xêza rast piştgirî dike; teşeyeke wek ken an rûqermiçandin wê ji her sînoreke R çargoşe pêbawertir red dike, û rêberiya piştrastkirinê jî vê xalê bi eşkere piştgirî dike.

Şîna metîlenê bersiva baş dide vê rêkûpêkiyê. Banda monomerê ya wê xurt e, kîmyaya wê baş hatiye lêkolînkirin, û şêwazên kêmasiyên wê xwe di spektrumê de nîşan didin berî ku hejmaran xerab bikin. Kurbê di navbereke teng de ava bikin, nimûneya vala ya rast bi kar bînin, dubareyan serbixwe amade bikin, û bihêlin teşeya spektruman navberê diyar bike. Xêza encamê kurt e, lê her xala li ser wê rast e.

Hesabên raveker ên vê gotarê hejmarên çêkirî bi kar tînin da ku rêbazê nîşan bidin. Koefîsyentên referansê yên pîvandî bi hemû şertên wan di referansa spektral a girêdayî de hene, û lêkolîna kombûnê ya bingehîn li PMID 33251415 hatiye tomarkirin.