ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕಕ್ಕೆ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಪರ್ಯಾಯಗಳು

ಸರಳ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ ಸ್ಮಿಯರ್‌ನಲ್ಲಿ ಕೋಶದ ಆಕಾರವನ್ನು ನೋಡುವುದೇ ಉದ್ದೇಶವಾಗಿದ್ದರೆ, ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಬದಲಿಗೆ ಕ್ರಿಸ್ಟಲ್ ವೈಯೊಲೆಟ್ ಬಳಸಬಹುದು. ಜೀವಂತ ಕೋಶಗಳಿಗಾಗಿ, ಯಾವುದೇ ಬಣ್ಣವಿಲ್ಲದ ಫೇಸ್ ಕಾಂಟ್ರಾಸ್ಟ್ ಉತ್ತಮ ಪರ್ಯಾಯವಾಗಿರಬಹುದು. ನೀವು ಮಾಡಬೇಕಾದ ವೀಕ್ಷಣೆಯೇ ಆಯ್ಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುತ್ತದೆ.

ಇಬ್ಬರು ಒಂದೇ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ ಕಲ್ಚರ್ ಅನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸುತ್ತಿದ್ದಾರೆಂದು ಊಹಿಸಿ. ಒಬ್ಬರು ದಂಡಾಕಾರದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ವೃತ್ತಾಕಾರದ ಕೋಶಗಳಿಂದ ಬೇರ್ಪಡಿಸಿ ನೋಡಲು ಬಯಸುತ್ತಾರೆ. ಇನ್ನೊಬ್ಬರು ಯಾವುದಾದರೂ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾಗಳನ್ನು ಕೊಂದಿದೆಯೇ ಎಂದು ತಿಳಿಯಲು ಬಯಸುತ್ತಾರೆ. ಮೊದಲ ವ್ಯಕ್ತಿಗೆ ಸ್ಪಷ್ಟ ಚಿತ್ರ ನೀಡುವ ಬಣ್ಣವು ಎರಡನೇ ವ್ಯಕ್ತಿಗೆ ಉಪಯುಕ್ತ ಉತ್ತರವೇ ನೀಡದಿರಬಹುದು.

ಪರ್ಯಾಯವನ್ನು ಆಯ್ಕೆಮಾಡುವ ಮೊದಲು ಈ ವಾಕ್ಯವನ್ನು ಪೂರ್ಣಗೊಳಿಸಿ: “ನಾನು ___ ಅನ್ನು ___ ನಲ್ಲಿ ವೀಕ್ಷಿಸಬೇಕು, ಮತ್ತು ಕೋಶಗಳು ಜೀವಂತವಾಗಿಯೇ ಉಳಿಯಬೇಕು / ಉಳಿಯಬೇಕಿಲ್ಲ.” ಈ ವಾಕ್ಯವೇ ಬಣ್ಣವು ಮಾಡಬೇಕಾದ ಕೆಲಸವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುತ್ತದೆ.

ಮೊದಲು ನಮೂನೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಶ್ನೆಯಿಂದ ಪ್ರಾರಂಭಿಸಿ

ಮೊದಲು ಕೋಶಗಳು ಜೀವಂತವಾಗಿಯೇ ಉಳಿಯಬೇಕೇ ಎಂದು ನಿರ್ಧರಿಸಿ, ನಂತರ ನೀವು ವೀಕ್ಷಿಸಬೇಕಾದ ಲಕ್ಷಣವನ್ನು ಗುರುತಿಸಿ:

ಕೋಶಗಳು ಜೀವಂತವಾಗಿಯೇ ಉಳಿಯಬೇಕು: ಚಲನೆ ಅಥವಾ ಆಕಾರಕ್ಕಾಗಿ ಬಣ್ಣಿಸದ ಫೇಸ್ ಕಾಂಟ್ರಾಸ್ಟ್ ಅಥವಾ DIC ಪರಿಗಣಿಸಿ; ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯರ್ DNAಗಾಗಿ ಫ್ಲೂರಸೆನ್ಸ್‌ನೊಂದಿಗೆ Hoechst 33342 ಪರಿಗಣಿಸಿ; ಝಿಲೆಯ ಸಮಗ್ರತಿಗಾಗಿ SYTO 9 ಜೊತೆಗೆ propidium iodide ಮುಂತಾದ ಮಾನ್ಯೀಕರಿಸಿದ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿ.
ಕೋಶಗಳು ಜೀವಂತವಾಗಿಯೇ ಉಳಿಯಬೇಕಿಲ್ಲ: ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ ಆಕಾರಶಾಸ್ತ್ರಕ್ಕಾಗಿ ಕ್ರಿಸ್ಟಲ್-ವೈಯೊಲೆಟ್ ಸರಳ ಬಣ್ಣಿಸುವಿಕೆ ಅಥವಾ ನೈಗ್ರೋಸಿನ್ ನೆಗಟಿವ್ ಸ್ಟೇನ್ ಪರಿಗಣಿಸಿ; Gram ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗೆ ಸಂಪೂರ್ಣ Gram-stain ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಿ; ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸಿದ ಕೋಶಗಳ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯರ್ DNAಗಾಗಿ DAPI ಫ್ಲೂರಸೆನ್ಸ್ ಪರಿಗಣಿಸಿ.

ಪ್ರತಿ ಶಾಖೆಯ ಮಿತಿಗಳನ್ನು ಹೋಲಿಸಲು ಈ ಪಟ್ಟಿಕೆಯನ್ನು ಬಳಸಿ. ಇವು ವಿಧಾನಗಳ ಆಯ್ಕೆಗಳು; ಈಗಿರುವ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್‌ನಲ್ಲಿ ಒಂದು ಬಾಟಲಿಯ ಬದಲು ಮತ್ತೊಂದು ಬಾಟಲಿ ಬಳಸುವ ಸೂಚನೆಗಳಲ್ಲ.

ನೀವು ವೀಕ್ಷಿಸಬೇಕಾದುದು	ನಮೂನೆ ಮತ್ತು ಉಪಕರಣ	ಪರಿಗಣಿಸಬಹುದಾದ ಪರ್ಯಾಯ	ಮುಖ್ಯ ಮಿತಿ
ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಆಕಾರ ಮತ್ತು ವಿನ್ಯಾಸ	ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಿದ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ ಸ್ಮಿಯರ್; brightfield	ಕ್ರಿಸ್ಟಲ್ ವೈಯೊಲೆಟ್ ಸರಳ ಬಣ್ಣಿಸುವಿಕೆ	ಆಕಾರಶಾಸ್ತ್ರವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ; Gram ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಅಥವಾ ಜೀವಂತಿಕೆಯನ್ನು ಸ್ಥಾಪಿಸುವುದಿಲ್ಲ.
ಗಾಢ ಹಿನ್ನೆಲೆಯ ವಿರುದ್ಧ ಕೋಶಗಳ ಹೊರರೇಖೆಗಳು	ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾಲಜಿಕಲ್ ತಯಾರಿ; brightfield	ನೈಗ್ರೋಸಿನ್ ನೆಗಟಿವ್ ಸ್ಟೇನ್	ತಯಾರಿ ಮತ್ತು ಸಂಯೋಜನೆ ಮುಖ್ಯ; ಬಣ್ಣಿಸದ ಕೋಶ ಜೀವಂತವಾಗಿದೆ ಎಂದರ್ಥವಲ್ಲ.
Gram ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ	ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಿದ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ ಸ್ಮಿಯರ್; brightfield	ಸಂಪೂರ್ಣ Gram-stain ವಿಧಾನ	ಸಂಪೂರ್ಣ ರಿಯಾಜೆಂಟ್ ಕ್ರಮ ಮತ್ತು ನಿಯಂತ್ರಣಗಳು ಅಗತ್ಯ.
ಜೀವಂತ ಕೋಶಗಳ ಚಲನೆ ಅಥವಾ ಬದಲಾವಣೆಗಳು	ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುವ ತೇವ ತಯಾರಿ; phase contrast ಅಥವಾ DIC	ಬಣ್ಣವಿಲ್ಲ	ಸೂಕ್ತ ಆಪ್ಟಿಕ್ಸ್ ಅಗತ್ಯ; ಕಾಂಟ್ರಾಸ್ಟ್ ಯಾವುದೇ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಅಣುವನ್ನು ಗುರುತಿಸುವುದಿಲ್ಲ.
ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯರ್ DNA	ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸಿದ ಕೋಶಗಳು; fluorescence	DAPI	ಹೊಂದುವ excitation ಮತ್ತು emission ಫಿಲ್ಟರ್‌ಗಳು ಅಗತ್ಯ.
ಜೀವಂತ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯರ್ DNA	ಜೀವಂತ ಕೋಶಗಳು; fluorescence	Hoechst 33342	ಕೋಶದೊಳಗೆ ಪ್ರವೇಶಿಸುವುದು ಮಾತ್ರದಿಂದ ಚಿತ್ರಣದ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು ಹಾನಿರಹಿತವೆಂದು ಸ್ಥಾಪಿಸಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ.
ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಝಿಲೆಯ ಸಮಗ್ರತೆ	ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸದ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ; fluorescence	SYTO 9 ಜೊತೆಗೆ propidium iodide	ಝಿಲೆ ಬಣ್ಣಿಸುವಿಕೆ ಜೀವಂತಿಕೆಯ ಪರೋಕ್ಷ ಮಾಪನವಾಗಿದೆ.

ಸರಳ ಸ್ಮಿಯರ್‌ಗಾಗಿ ವಿಧಾನವನ್ನು ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ಬದಲಿಸಿ

ಕಾರ್ಯವು ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಆಕಾರಶಾಸ್ತ್ರವನ್ನು ಒಂದೇ ಬಣ್ಣದಲ್ಲಿ ನೋಡುವುದಾಗಿದ್ದರೆ ಕ್ರಿಸ್ಟಲ್ ವೈಯೊಲೆಟ್ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಆಯ್ಕೆಯಾಗಿದೆ. FDAಯ Bacteriological Analytical Manual ಸರಳ ಬಣ್ಣಿಸುವಿಕೆಗೆ ಸೂಕ್ತವಾದ ಎರಡು ಕ್ರಿಸ್ಟಲ್-ವೈಯೊಲೆಟ್ ಸಂಯೋಜನೆಗಳನ್ನು ಪಟ್ಟಿಮಾಡುತ್ತದೆ. ದಾಖಲಿಸಲಾದ ಸಂಯೋಜನೆ ಮತ್ತು ಅದರ ತಯಾರಿ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಿ; ಬಣ್ಣದ ಹೆಸರು ಮಾತ್ರದಿಂದ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುವ ರಿಯಾಜೆಂಟ್‌ನ ವಿವರ ಸಿಗುವುದಿಲ್ಲ.

ಕ್ರಿಸ್ಟಲ್ ವೈಯೊಲೆಟ್ Gram staining‌ನಲ್ಲಿಯೂ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಅದರಿಂದ ಕ್ರಿಸ್ಟಲ್-ವೈಯೊಲೆಟ್ ಸರಳ ಬಣ್ಣಿಸುವಿಕೆ Gram stain ಆಗುವುದಿಲ್ಲ. ASM Gram-stain protocol ನಲ್ಲಿ ವಿಭೇದಕ ಫಲಿತಾಂಶವು ಕ್ರಿಸ್ಟಲ್ ವೈಯೊಲೆಟ್, iodine, decolorization ಮತ್ತು counterstaining ಕ್ರಮಬದ್ಧವಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುವುದರ ಮೇಲೆ ಅವಲಂಬಿತವಾಗಿದೆ. ಆ ಹಂತಗಳನ್ನು ಬಿಟ್ಟರೆ ಚಿತ್ರದಿಂದ ಸ್ಥಾಪಿಸಬಹುದಾದ ಅರ್ಥವೇ ಬದಲಾಗುತ್ತದೆ. ಈ ವ್ಯತ್ಯಾಸಕ್ಕಾಗಿ ಸರಳ ಬಣ್ಣಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು Gram staining ನಡುವಿನ ಹೋಲಿಕೆ ನೋಡಿ.

ನೈಗ್ರೋಸಿನ್ ಹೊರರೇಖೆಗಳನ್ನು ಗೋಚರಿಸುವಂತೆ ಮಾಡಲು ಬೇರೆ ವಿಧಾನವನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ: ಇದು ಹಿನ್ನೆಲೆಯನ್ನು ಗಾಢಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ, ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ ಕೋಶಗಳು ಹೋಲಿಕೆಯಲ್ಲಿ ತೆಳುವಾಗಿಯೇ ಕಾಣುತ್ತವೆ. ಸಾಮಾನ್ಯ ಪರ್ಯಾಯಗಳ ಪಟ್ಟಿಯಲ್ಲಿ ತಪ್ಪಿಹೋಗಬಹುದಾದ ಉಪಯುಕ್ತ ವಿವರವು Merckನ ನೈಗ್ರೋಸಿನ್ ಸೂಚನೆಗಳಲ್ಲಿ ಇದೆ. ಅದರ ಸೂಚಿಸಲಾದ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಣಾ ಸಂಯೋಜನೆಯಲ್ಲಿ formaldehyde ಸೇರಿದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ ಕೋಶಗಳು ಸ್ವತಃ ಬಣ್ಣಿಸದಂತೆ ಕಾಣಿಸಿದರೂ “negative stain” ಎಂಬ ಪದಗಳಿಂದ ಜೀವಂತ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ. ಸಂಪೂರ್ಣ ಸಂಯೋಜನೆ ಮತ್ತು ನಮೂನೆ ತಯಾರಿಕೆಯನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಿ.

ಜೀವಂತ ನಮೂನೆಗಳಿಗೆ ಆಪ್ಟಿಕ್ಸ್ ಬದಲಿಸುವುದನ್ನು ಪರಿಗಣಿಸಿ

ಕೋಶಗಳು ಚಲಿಸುವುದನ್ನು ಅಥವಾ ವಿಭಜಿಸುವುದನ್ನು ಗಮನಿಸಲು ಬಯಸಿದರೆ, ಮತ್ತೊಂದು ಬಣ್ಣವನ್ನು ಸೇರಿಸುವುದು ವೀಕ್ಷಣೆಯನ್ನು ಸಂಕೀರ್ಣಗೊಳಿಸಬಹುದು. Nikon ತನ್ನ ಪಾರದರ್ಶಕ ನಮೂನೆಗಳಲ್ಲಿನ ಕಾಂಟ್ರಾಸ್ಟ್ ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿಯಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸುವಂತೆ, phase contrast ಮತ್ತು differential interference contrast, ಅಂದರೆ DIC, ನಮೂನೆಗಳ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳ ಮೂಲಕ ಅವುಗಳನ್ನು ಗೋಚರವಾಗಿಸುತ್ತವೆ. ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದಲ್ಲಿ ಅಗತ್ಯ ಘಟಕಗಳು ಇದ್ದರೆ, ಇವು ಜೀವಂತ ಮತ್ತು ಬಣ್ಣಿಸದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ತೋರಿಸಬಹುದು.

ಈ ಆಯ್ಕೆ ಬಣ್ಣಿಸದ ತಯಾರಿಯನ್ನು ಉಳಿಸುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಲಭ್ಯವಾಗುವ ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು ಬದಲಿಸುತ್ತದೆ. ಯಾವ ಅಣು ಕಾಂಟ್ರಾಸ್ಟ್ ಉಂಟುಮಾಡಿತು ಎಂಬುದು ತಿಳಿಯದೆ ನೀವು ಗಡಿ ಅಥವಾ ಚಲನೆಯನ್ನು ಅನುಸರಿಸಬಹುದು. ಪ್ರಶ್ನೆ ಅಣುವಿನ ಸ್ಥಳೀಕರಣದ ಬಗ್ಗೆ ಇದ್ದರೆ, ಅದರ ಬದಲು ಸೂಕ್ತ ಲೇಬಲಿಂಗ್ ವಿಧಾನವನ್ನು ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿ.

ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯರ್ DNAಗಾಗಿ Invitrogenನ DAPI ಮತ್ತು Hoechst ಬಣ್ಣಗಳ ಹೋಲಿಕೆ DAPIಯನ್ನು ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸಿದ ಕೋಶಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವುದನ್ನು, ಹೆಚ್ಚು ಕೋಶ-ಪಾರಗಮ್ಯವಾದ Hoechst 33342 ಅನ್ನು ಜೀವಂತ ಕೋಶ ಲೇಬಲಿಂಗ್‌ಗೆ ಆದ್ಯತೆ ನೀಡುವುದರಿಂದ ವಿಭೇದಿಸುತ್ತದೆ. ಎರಡಕ್ಕೂ fluorescence ಉಪಕರಣ ಅಗತ್ಯ. ಇವೆರಡೂ ಬಣ್ಣದ brightfield stain‌ಗೆ ನೇರ ಪರ್ಯಾಯಗಳಲ್ಲ.

ಬಣ್ಣದ ಸಂಪರ್ಕ ಮತ್ತು ಬೆಳಕು ನೀಡುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರಯೋಗಾತ್ಮಕ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಿ. ಕೋಶಗಳ ವರ್ತನೆಯೇ ನಿಮ್ಮ ಮಾಪನವಾಗಿದ್ದರೆ ಬಣ್ಣಿಸಿದ ಮತ್ತು ಬಣ್ಣಿಸದ ತಯಾರಿಗಳನ್ನು ಹೋಲಿಸಿ.

ಕೆಂಪು ಕೋಶ ಎಂದರೆ ಸ್ವಯಂಚಾಲಿತವಾಗಿ ಸತ್ತ ಕೋಶ ಎಂದಲ್ಲ

ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಝಿಲೆಯ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ಅಳೆಯಲು SYTO 9 ಮತ್ತು propidium iodide ಅನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಜೋಡಿಯಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. BacLight manual ಸಮಗ್ರ ಝಿಲೆಗಳನ್ನು ಹಸಿರು ಬಣ್ಣಿಸುವಿಕೆಯೊಂದಿಗೆ ಮತ್ತು ಹಾನಿಗೊಂಡ ಝಿಲೆಗಳನ್ನು ಕೆಂಪು ಬಣ್ಣಿಸುವಿಕೆಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ. ಆ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನವನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ನಮೂನೆಗೆ ಮಾನ್ಯೀಕರಿಸಬೇಕು.

Rosenberg ಮತ್ತು ಸಹೋದ್ಯೋಗಿಗಳ 2019ರ ಅಧ್ಯಯನ ಸಮಸ್ಯೆಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. phosphate-buffered salineನಲ್ಲಿ ಗಾಜಿನ ಮೇಲಿದ್ದ 24-hour E. coli biofilmsಗಳಲ್ಲಿ, ಸುಮಾರು 96% ಕೋಶಗಳು in situ propidium-iodide-positive ಆಗಿ ಕಾಣಿಸಿಕೊಂಡವು. ಆದರೆ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿದ ನಂತರ 82% ಬೆಳೆಸಬಹುದಾದವು ಎಂದು ಲೇಖಕರು ಅಂದಾಜಿಸಿದರು. Confocal ಚಿತ್ರಗಳಲ್ಲಿ ಕೆಂಪಾಗಿ ಬಣ್ಣಿಸಿದ ಪದಾರ್ಥದ ಕೆಳಗೆ ಹಸಿರು ಒಳಭಾಗವಿದ್ದ ಕೋಶಗಳು ಕಾಣಿಸಿಕೊಂಡವು; ಇದರಿಂದ extracellular nucleic acids ತಪ್ಪುದಾರಿ ಹಿಡಿಸುವ signalಗೆ ಕಾರಣವಾಗಿರಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸಲಾಯಿತು.

ಆ ಶೇಕಡಾವಾರುಗಳು ಅಧ್ಯಯನದ ತಯಾರಿಗಳ ಮೇಲೆ ಮಾಡಲಾದ ವಿಭಿನ್ನ ಮಾಪನಗಳನ್ನು ವಿವರಿಸುತ್ತವೆ; ಅವು ಸಾರ್ವತ್ರಿಕ ತಿದ್ದುಪಡಿ ಗುಣಾಂಕವಲ್ಲ. signal ಅನ್ನು ಏನು ಉಂಟುಮಾಡಿತು ಎಂಬುದನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸುವುದೇ ಉಪಯುಕ್ತ ಪಾಠ. biofilmನಲ್ಲಿ nucleic-acid dye ಹಾನಿಗೊಂಡ ಕೋಶಗಳ ಒಳಗಿನ ಪದಾರ್ಥದ ಜೊತೆಗೆ ಕೋಶಗಳ ಹೊರಗಿನ ಪದಾರ್ಥವನ್ನೂ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದು. ಜೀವಂತಿಕೆ ಕುರಿತು ನಿರ್ಣಯಕ್ಕೆ, ಪ್ರತಿ ವಿಧಾನಕ್ಕೂ ಮಿತಿಗಳಿವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಒಪ್ಪಿಕೊಂಡೇ cultivation ಅಥವಾ metabolic activity ಮುಂತಾದ ಪೂರಕ ಮಾಪನಗಳನ್ನು ಸಂಶೋಧಕರು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡುತ್ತಾರೆ.

ಪರ್ಯಾಯದಲ್ಲಿ ನಿಜವಾಗಿ ಏನು ಇದೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಿ

ಪರ್ಯಾಯ ಬಣ್ಣಿಸುವ ವಿಧಾನದಲ್ಲಿಯೂ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಇರಬಹುದು. Giemsa ಒಂದು ಉದಾಹರಣೆ: Merck ತನ್ನ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ರಕ್ತ ಮತ್ತು bone-marrow smears ಸೇರಿದಂತೆ ಅನ್ವಯಿಕೆಗಳಿಗೆ ಉದ್ದೇಶಿಸಿದ azure-eosin-methylene-blue solution ಎಂದು ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ. ಬೇರೆ ನಮೂನೆಗೆ ಇದು ಬೇರೆ ವಿಧಾನವಾಗಬಹುದು, ಆದರೆ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಅನ್ನು ಹೊರಗಿಡಬೇಕೆಂಬ ಅಗತ್ಯವನ್ನು ಇದು ಪೂರೈಸುವುದಿಲ್ಲ.

ಯಾವುದಾದರೂ ಸಂಯೋಗವನ್ನು ಹೊರಗಿಡುವುದು ಪ್ರಯೋಗದ ಭಾಗವಾಗಿದ್ದರೆ, ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಹೋಲಿಸುವ ಮೊದಲು ರಿಯಾಜೆಂಟ್‌ನ ಗುರುತು ಮತ್ತು ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಿ. methyl blue, methylene blue ಮತ್ತು ಹೋಲುವ ಹೆಸರುಗಳ ಬಣ್ಣಗಳ ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿ ಹೆಸರಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ.

ಫಲಿತಾಂಶವನ್ನು ಬಳಸುವ ಮೊದಲು ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಿ

ಹೊಸ ವಿಧಾನಕ್ಕಾಗಿ ಪ್ರತಿನಿಧಿಕ ನಮೂನೆಗಳು ಮತ್ತು ಸೂಕ್ತ ನಿಯಂತ್ರಣವನ್ನು ಬಳಸಿ ಸಣ್ಣ ಹೋಲಿಕೆಯನ್ನು ಮಾಡಿ. ಸಾಧ್ಯವಾದಲ್ಲಿ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಸೆಟ್ಟಿಂಗ್‌ಗಳನ್ನು ಹೋಲಿಸಬಹುದಾದಂತೆ ಇಡಿ. ರಿಯಾಜೆಂಟ್ ಸಂಯೋಜನೆ, ನಮೂನೆ ತಯಾರಿ, exposure ಮತ್ತು imaging conditions ಅನ್ನು ದಾಖಲಿಸಿ; ಹೀಗಾಗಿ ಉತ್ತಮವಾಗಿ ಕಾಣುವ ಚಿತ್ರವನ್ನು ಕೇವಲ ಮೆಚ್ಚುವುದಕ್ಕಿಂತ ಅದರ ಕಾರಣವನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಬಹುದು.

ಯಶಸ್ಸನ್ನು ಮೂಲ ಪ್ರಶ್ನೆಯ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಿ. ಆಕಾರಶಾಸ್ತ್ರಕ್ಕಾಗಿ ಕೋಶದ ಗಡಿಗಳು ಮತ್ತು ವಿನ್ಯಾಸ ಇನ್ನೂ ಅರ್ಥೈಸಬಹುದೇ ಎಂದು ಪರಿಶೀಲಿಸಿ. ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯರ್ ಲೇಬಲಿಂಗ್‌ಗಾಗಿ signal ಸ್ಥಳ ಮತ್ತು background ಅನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಿ. ಜೀವಂತಿಕೆಗಾಗಿ ಆಕರ್ಷಕವಾದ ಬಣ್ಣ ವಿಭಜನೆಯಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಕ್ಷ್ಯವನ್ನು ಬೇಡಿ. ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಬಣ್ಣಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಯೋಗಾಲಯ ಅನ್ವಯಿಕೆಗಳ ವಿಶಾಲ ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿ ವೀಕ್ಷಣೆ ಮತ್ತು ತಯಾರಿ ಹೇಗೆ ಪರಸ್ಪರ ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ.

ನಿಮಗೆ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಮಾಪನವನ್ನು ಉಳಿಸುವ ಪರ್ಯಾಯವನ್ನು ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿ. ಬಣ್ಣವು ಅಂತಿಮ ಚಿತ್ರದ ಕೇವಲ ಒಂದು ಗುಣಲಕ್ಷಣ.