ការបកស្រាយរូបរាងកូឡូនី E. coli និងកូឡូនីផ្សេងទៀតលើអាហ្គារ EMB

និស្សិតម្នាក់បណ្តុះសំណាកមិនស្គាល់អត្តសញ្ញាណដោយអូសជាខ្សែលើអាហ្គារ eosin methylene blue ដាក់វាឱ្យភ្ញាស់ពេញមួយយប់ ហើយត្រឡប់មកឃើញចានបណ្តុះមួយដែលមានកូឡូនីពណ៌ងងឹត និងចាំងពណ៌បៃតង។ កំណត់ត្រាក្នុងសៀវភៅសរសេរថា «E. coli បានបញ្ជាក់»។ កំណត់ត្រានោះអះអាងលើសពីអ្វីដែលចានបណ្តុះអាចគាំទ្របាន។ ចានបណ្តុះបង្ហាញលក្ខណៈនៃការលូតលាស់ និងការធ្វើផ្អាប់ក្រោមលក្ខខណ្ឌជាក់លាក់។ អត្តសញ្ញាណប្រភេទគឺជាការអះអាងដាច់ដោយឡែក ដែលត្រូវការភស្តុតាងដាច់ដោយឡែក។

មគ្គុទ្ទេសក៍នេះចាត់ទុកលទ្ធផលអាហ្គារ EMB ជាកិច្ចការបកស្រាយ។ វាពន្យល់ពីគោលគំនិតមូលដ្ឋាន នាំអ្នកពិនិត្យកម្រងរូបភាពចានបណ្តុះជាមួយសំណាកត្រួតពិនិត្យ ហើយបញ្ជាក់ករណីដែលរូបភាពក្នុងសៀវភៅសិក្សាអាចធ្វើឱ្យយល់ខុស។

គោលគំនិតនៅពីក្រោយចានបណ្តុះ

អាហ្គារ EMB មានទាំងលក្ខណៈជ្រើសរើស និងលក្ខណៈបែងចែកភាពខុសគ្នា។ សារធាតុពណ៌ eosin Y និង methylene blue ទប់ស្កាត់មីក្រូសារពាង្គកាយក្រាមវិជ្ជមានជាច្រើន ដូច្នេះមជ្ឈដ្ឋានបណ្តុះនេះអំណោយផលដល់ការលូតលាស់របស់មីក្រូសារពាង្គកាយក្រាមអវិជ្ជមាន។ សារធាតុពណ៌ដដែលនេះក៏ដើរតួជាសារធាតុចង្អុលបង្ហាញ៖ នៅពេលមីក្រូសារពាង្គកាយធ្វើផ្អាប់ស្ករដែលមាន និងបង្កើតអាស៊ីតគ្រប់គ្រាន់នៅតំបន់នោះ កូឡូនីស្រូបយកសារធាតុពណ៌ច្រើន ហើយប្រែទៅជាពណ៌ស្វាយងងឹតដល់ខៀវខ្មៅ។ នៅពេលផលិតអាស៊ីតខ្លាំង ផ្ទៃកូឡូនីអាចបង្ហាញភាពចាំងពណ៌បៃតងដូចលោហៈ។ ពិធីការរបស់ ASM សម្រាប់ចានអាហ្គារ eosin methylene blue ពិពណ៌នាអំពីការរួមបញ្ចូលលក្ខណៈជ្រើសរើស និងបែងចែកភាពខុសគ្នានេះ ហើយផ្តល់រូបថតយោងសម្រាប់ការបង្រៀន។

មានចំណុចលម្អិតមួយដែលសំខាន់មុនពេលបកស្រាយលទ្ធផលណាមួយ៖ ពិនិត្យថាកំពុងប្រើរូបមន្តណា។ រូបមន្តចាស់ Holt Harris Teague មាន lactose និង sucrose ខណៈ Levine EMB មានតែ lactose ប៉ុណ្ណោះ។ មីក្រូសារពាង្គកាយដែលធ្វើផ្អាប់ sucrose ប៉ុន្តែមិនធ្វើផ្អាប់ lactose ដូចជាមេ Serratia marcescens ជាច្រើនដែលបានញែកដាច់ អាចមានរូបរាងខុសគ្នាលើរូបមន្តទាំងពីរ។ ឯកសាររបស់ក្រុមហ៊ុនផលិតសម្រាប់មជ្ឈដ្ឋានបណ្តុះ EMB បញ្ជាក់ច្បាស់អំពីភាពខុសគ្នានៃរូបមន្តនេះ។ កត់ត្រាឈ្មោះក្រុមហ៊ុនផលិត និងរូបមន្តក្នុងសៀវភៅកំណត់ត្រាជាមួយលទ្ធផល។

អាហ្គារ EMB ដែលបានរៀបចំហើយ ប៉ុន្តែមិនទាន់បញ្ចូលមេ ជាទូទៅមានពណ៌ក្រហមត្នោតដល់ស្វាយលាយក្រហម ហើយពេលខ្លះមានពណ៌បៃតងស្រាល ឬកករល្អិតៗ។ ពណ៌ផ្ទៃខាងក្រោយនោះមិនមែនជាការលូតលាស់ទេ។ ប្រៀបធៀបរាល់ការបកស្រាយជាមួយចានដែលមិនទាន់បញ្ចូលមេ ឬសភាពមូលដ្ឋានដែលបានកត់ត្រា ហើយបកស្រាយចានបណ្តុះដំបូងបន្ទាប់ពីភ្ញាស់ក្នុងលក្ខខណ្ឌមានអុកស៊ីសែនប្រហែល 18 ដល់ 24 ម៉ោង នៅ 35 ដល់ 37 C លុះត្រាតែពិធីការបង្រៀនកំណត់ផ្សេងពីនេះ។ ការភ្ញាស់យូរជាងនេះអាចផ្លាស់ប្តូររូបរាងដែលបណ្តាលពីការធ្វើផ្អាប់។

របៀបពិនិត្យចានបណ្តុះ

ប្រើពន្លឺពីរប្រភេទ។ ដំបូងពិនិត្យចានក្រោមពន្លឺឆ្លុះ ឬពន្លឺចាំងពីចំហៀង ហើយផ្អៀងចាន៖ ភាពភ្លឺរលោងដូចលោហៈមានលក្ខណៈចាំងប្រែពណ៌ ហើយអាចលេចឡើង ឬបាត់ទៅតាមមុំមើល។ បន្ទាប់មកពិនិត្យវាដោយប្រើពន្លឺឆ្លងកាត់ ដើម្បីវាយតម្លៃពណ៌កូឡូនី និងផ្នែកកណ្តាលពណ៌ងងឹត។ ពិនិត្យកូឡូនីដែលនៅដាច់ពីគ្នាច្បាស់ ព្រោះការដុះជិតគ្នាខ្លាំង និងកូឡូនីជិតខាងផ្លាស់ប្តូរការប្រមូលផ្តុំអាស៊ីតនៅតំបន់នោះ ហើយអាចបន្ថយ ឬធ្វើឱ្យពណ៌កាន់តែខ្លាំង។ កម្រងរូបភាពរបស់ ASM បង្ហាញចំណុចនេះដោយផ្ទាល់៖ E. coli ក្នុងការបណ្តុះចម្រុះអាចបាត់ភាពភ្លឺរលោងដែលរំពឹងទុក ដោយសារមីក្រូសារពាង្គកាយនៅជុំវិញផ្លាស់ប្តូរបរិស្ថានអាស៊ីត។

ដាក់សំណាកត្រួតពិនិត្យបញ្ចូលផង នៅពេលលំហាត់អនុញ្ញាត។ សំណុំដែលគេប្រើញឹកញាប់សម្រាប់ការបង្រៀនគឺ E. coli ATCC 25922 សម្រាប់លក្ខណៈពណ៌ខៀវខ្មៅ និងភាពភ្លឺរលោងដូចលោហៈ មីក្រូសារពាង្គកាយមិនធ្វើផ្អាប់ដូចជា Salmonella Typhimurium ATCC 14028 ឬ Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 សម្រាប់លក្ខណៈគ្មានពណ៌ និងមីក្រូសារពាង្គកាយក្រាមវិជ្ជមានដូចជា Enterococcus faecalis ឬ Staphylococcus aureus ជាសំណាកត្រួតពិនិត្យការទប់ស្កាត់ ដូចដែលបានរាយក្នុង តារាងត្រួតពិនិត្យគុណភាពស្តង់ដារសម្រាប់មជ្ឈដ្ឋានបណ្តុះ EMB។ ប្រសិនបើសំណាកត្រួតពិនិត្យវិជ្ជមានគ្មានភាពភ្លឺរលោង ត្រូវសង្ស័យការភ្ញាស់ ការដុះជិតគ្នាខ្លាំង ឬរូបមន្ត មុននឹងសង្ស័យសំណាកមិនស្គាល់អត្តសញ្ញាណ។

កម្រងរូបភាពចានបណ្តុះសម្រាប់បង្ហាញ

ចានបណ្តុះខាងក្រោមគឺជារូបភាពដែលបានបង្កើតឡើង មិនមែនជារូបថតនៃការបណ្តុះពិតទេ។ វាបង្ហាញលំនាំដែលត្រូវរកមើល មិនមែនកម្រិតពណ៌ជាក់លាក់របស់ពូជណាមួយទេ។ ប្រៀបធៀបវាជាមួយ រូបថតយោងរបស់ ASM និងចានបណ្តុះពិតពីមន្ទីរពិសោធន៍បង្រៀន។

ចាន 1៖ Escherichia coli លើអាហ្គារ EMB ដែលធ្វើផ្អាប់ lactose ខ្លាំង

E. coli លើអាហ្គារ EMB ជាទូទៅមានពណ៌ស្វាយងងឹតដល់ខៀវខ្មៅ ជាញឹកញាប់មានផ្នែកកណ្តាលពណ៌ងងឹត និងភាពភ្លឺរលោងពណ៌បៃតងដូចលោហៈ ដោយសារការផលិតអាស៊ីតខ្លាំង។ ភាពភ្លឺរលោងគឺជាសញ្ញាល្បីដែលនិស្សិតស្វែងរក ប៉ុន្តែត្រូវចាត់ទុកវាជាភស្តុតាងគាំទ្រ មិនមែនជាលក្ខណៈកំណត់អត្តសញ្ញាណទេ។ កម្រិតនៃភាពភ្លឺរលោងប្រែប្រួលតាមពូជ រយៈពេលភ្ញាស់ ដង់ស៊ីតេកូឡូនី និងមុំមើល។ ការគ្មានភាពភ្លឺរលោងមិនអាចបដិសេធថាមិនមែនជា E. coli ទេ ហើយកូឡូនីពណ៌ងងឹតដែលគ្មានភាពភ្លឺរលោងអាចសំដៅលើមីក្រូសារពាង្គកាយធ្វើផ្អាប់ផ្សេងទៀតជាច្រើន។ ជ្រើសរើសកូឡូនីដែលនៅដាច់ពីគ្នាច្បាស់សម្រាប់ការងារបន្តណាមួយ ជាជាងបកស្រាយពីតំបន់ដែលដុះជិតគ្នាខ្លាំង។

ចាន 2៖ Klebsiella pneumoniae លើអាហ្គារ EMB ដែលធ្វើផ្អាប់ និងមានសភាពស្លេស្ម

Klebsiella pneumoniae លើអាហ្គារ EMB ជាទូទៅបង្កើតកូឡូនីធំ ភ្លឺរលោង និងមានសភាពស្លេស្ម ក្នុងកម្រិតពណ៌ផ្កាឈូកស្វាយដល់ត្នោតស្វាយ ជាញឹកញាប់មានផ្នែកកណ្តាលពណ៌ងងឹត ប៉ុន្តែជាទូទៅគ្មានភាពភ្លឺរលោងដូចលោហៈខ្លាំងទេ។ រូបរាងស្រដៀងគ្នាក៏កើតមានលើមីក្រូសារពាង្គកាយធ្វើផ្អាប់ដែលពាក់ព័ន្ធ ដូចជា Enterobacter។ សភាពស្លេស្ម និងទំហំកូឡូនីគឺជាផ្នែកមួយនៃការបកស្រាយ៖ កូឡូនីពណ៌ផ្កាឈូកដែលតូច និងរាបស្មើមានទម្ងន់ក្នុងការបកស្រាយខុសពីកូឡូនីធំ ប៉ោង និងមានសភាពស្លេស្ម។ ដូចគ្នានឹង E. coli ចានបណ្តុះបង្ហាញពីលក្ខណៈនៃការធ្វើផ្អាប់ ហើយការដាក់ឈ្មោះដល់កម្រិតប្រភេទត្រូវការការបញ្ជាក់តាមតេស្តជីវគីមី ដែលពិពណ៌នាខាងក្រោម។

ចាន 3៖ Salmonella លើអាហ្គារ EMB និងមីក្រូសារពាង្គកាយមិនធ្វើផ្អាប់ផ្សេងទៀត ដែលមានកូឡូនីគ្មានពណ៌

Salmonella លើអាហ្គារ EMB និងមីក្រូសារពាង្គកាយពាក់ព័ន្ធដែលមិនធ្វើផ្អាប់ lactose រួមមាន Shigella និងមេ Pseudomonas ជាច្រើនដែលបានញែកដាច់ ជាទូទៅលូតលាស់ជាកូឡូនីគ្មានពណ៌ដល់ថ្លាស្រអាប់ ឬពណ៌លឿងទុំស្រាល។ រូបមន្ត និងលក្ខខណ្ឌខ្លះអាចផ្តល់ពណ៌ផ្កាឈូកស្រាល ដូច្នេះកូឡូនីពណ៌ផ្កាឈូកស្រាលមិនមែនសុទ្ធតែជាមីក្រូសារពាង្គកាយធ្វើផ្អាប់ទេ។ EMB មិនអាចបែងចែក Salmonella ពី Shigella ឬពីមីក្រូសារពាង្គកាយមិនធ្វើផ្អាប់ផ្សេងទៀតបានទេ។ ការបែងចែកនោះត្រូវធ្វើដោយតេស្តបន្ទាប់។ សូមកត់សម្គាល់ផងដែរថា មានឯកសាររាយការណ៍ពីពូជ Salmonella ដែលធ្វើផ្អាប់ lactose និងមានកូឡូនីភ្លឺរលោងដូចលោហៈស្រដៀង E. coli ដែលជាមូលហេតុមួយទៀតបង្ហាញថាចានបណ្តុះតែមួយមិនអាចផ្តល់សេចក្តីសន្និដ្ឋានចុងក្រោយបានទេ។

ចាន 4៖ Serratia marcescens និងចំណុចងាយយល់ខុសអំពីរូបមន្ត

Serratia marcescens ត្រូវមានផ្នែកពន្យល់ដាច់ដោយឡែក ព្រោះនិស្សិតជាញឹកញាប់រំពឹងថានឹងឃើញកូឡូនីពណ៌ក្រហម ហើយបន្ទាប់មកបកស្រាយចានខុស។ មេភាគច្រើនដែលបានញែកដាច់ពីសំណាកគ្លីនិកមិនធ្វើផ្អាប់ lactose ទេ ដូច្នេះលើ Levine EMB វាជាទូទៅមានពណ៌ស្រាល ឬមានពណ៌តិចតួច។ ដោយសារមេជាច្រើនដែលបានញែកដាច់ធ្វើផ្អាប់ sucrose រូបមន្តដែលមាន sucrose អាចផ្តល់ប្រតិកម្មពណ៌ងងឹតជាង ឬប្រតិកម្មពាក់ព័ន្ធនឹងអាស៊ីតខ្លាំងជាង។ ក៏មិនត្រូវរំពឹងថានឹងឃើញសារធាតុពណ៌ក្រហម prodigiosin ដែលគេស្គាល់ជាទូទៅនៅ 35 ដល់ 37 C ដែរ ព្រោះការផលិតសារធាតុពណ៌មិនថេរនៅសីតុណ្ហភាពទូភ្ញាស់។ នៅពេលពិធីការលើកឡើងពី Serratia marcescens លើអាហ្គារ EMB ត្រូវពិនិត្យថាសេចក្តីពណ៌នានោះផ្អែកលើរូបមន្តណា។ អត្ថបទពិនិត្យសង្ខេបអំពីមេតាបូលីសរបស់ Serratia សង្ខេបលំនាំនៃការមិនធ្វើផ្អាប់ lactose និងការធ្វើផ្អាប់ sucrose ដែលប្រែប្រួល ដែលជាមូលហេតុនៃការយល់ខុសនេះ។

ចាន 5៖ សំណាកត្រួតពិនិត្យ និងមីក្រូសារពាង្គកាយដែលត្រូវបានទប់ស្កាត់

មីក្រូសារពាង្គកាយក្រាមវិជ្ជមានដូចជា Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus និង Bacillus ជាទូទៅត្រូវបានទប់ស្កាត់ ឬកាត់បន្ថយការលូតលាស់យ៉ាងខ្លាំងលើអាហ្គារ EMB ទោះបីការទប់ស្កាត់មិនពេញលេញចំពោះគ្រប់ពូជក៏ដោយ។ សំណុំសំណាកត្រួតពិនិត្យធ្វើឱ្យការបកស្រាយមានមូលដ្ឋានត្រឹមត្រូវ៖ សំណាកត្រួតពិនិត្យ E. coli គួរបង្ហាញការលូតលាស់ល្អ ជាមួយពណ៌ខៀវខ្មៅ និងភាពភ្លឺរលោង សំណាកត្រួតពិនិត្យមីក្រូសារពាង្គកាយមិនធ្វើផ្អាប់គួរបង្ហាញការលូតលាស់គ្មានពណ៌ ហើយសំណាកត្រួតពិនិត្យការទប់ស្កាត់គួរមានការលូតលាស់តិចតួច ឬគ្មានការលូតលាស់។ ប្រសិនបើសំណាកត្រួតពិនិត្យការទប់ស្កាត់លូតលាស់ល្អ នោះលក្ខណៈជ្រើសរើសបានបរាជ័យ ហើយការបកស្រាយផ្សេងទៀតទាំងអស់លើអាហ្គារក្នុងបាច់នោះគួរឱ្យសង្ស័យ។ វិធីសាស្ត្រជ្រលក់ពណ៌ឆ្លើយសំណួរខុសពីមជ្ឈដ្ឋានបណ្តុះ។ សម្រាប់ផ្នែកជ្រលក់ពណ៌ស្លាយក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ សូមមើល កម្រងរូបភាពការជ្រលក់ពណ៌ដោយ methylene blue។

ការប្រៀបធៀបដោយមានដែនកំណត់

ប្រយោគបីសង្ខេបរូបរាងដែលអាចធ្វើឱ្យយល់ខុស។ ពណ៌ងងឹតមិនស្មើនឹង E. coli ទេ ព្រោះ Klebsiella, Enterobacter និងមីក្រូសារពាង្គកាយធ្វើផ្អាប់ផ្សេងទៀតបង្កើតផ្នែកកណ្តាលពណ៌ងងឹតដោយគ្មានភាពភ្លឺរលោង។ ពណ៌ផ្កាឈូកមិនស្មើនឹង Klebsiella ទេ ព្រោះមីក្រូសារពាង្គកាយដែលធ្វើផ្អាប់កម្រិតមធ្យម ឬយឺត និងមីក្រូសារពាង្គកាយខ្លះដែលត្រូវបានចាត់ជាមីក្រូសារពាង្គកាយមិនធ្វើផ្អាប់ អាចមានពណ៌ផ្កាឈូក ឬស្វាយស្រាល។ ភាពភ្លឺរលោងមិនស្មើនឹងការបញ្ជាក់ជាដាច់ខាតថាជា E. coli ទេ ព្រោះមីក្រូសារពាង្គកាយធ្វើផ្អាប់ខ្លាំងផ្សេងទៀតក៏អាចបង្កើតវាបាន។ ពិធីការបង្រៀន និងរូបភាពការបណ្តុះចម្រុះរបស់វា បង្ហាញឧទាហរណ៍នៃការយល់ខុសនីមួយៗនេះ។

ដែនកំណត់នៃការបញ្ជាក់

អាហ្គារ EMB បង្ហាញលក្ខណៈដែលសង្កេតឃើញ មិនមែនអត្តសញ្ញាណប្រភេទទេ។ មីក្រូសារពាង្គកាយផ្សេងគ្នាអាចមានរូបរាងកូឡូនីដូចគ្នា ហើយមីក្រូសារពាង្គកាយមួយអាចមានរូបរាងខុសពីសៀវភៅសិក្សា ដោយសារពូជ អាយុ ការដុះជិតគ្នាខ្លាំង រូបមន្ត និងការភ្ញាស់។ នេះជាមូលហេតុដែលលំហូរការងារក្នុងការបង្រៀន និងក្នុងគ្លីនិកចាត់ទុករូបរាងកូឡូនីលើ EMB ជាសញ្ញាសម្រាប់ការសន្និដ្ឋានបឋម។

លំហូរការងារសម្រាប់និស្សិតដែលមានមូលដ្ឋានគាំទ្រគឺ៖ ពិពណ៌នាកូឡូនីដែលនៅដាច់ពីគ្នា (ទំហំ ពណ៌ ផ្នែកកណ្តាល ភាពភ្លឺរលោងក្រោមពន្លឺចាំងពីចំហៀង និងសភាពស្លេស្ម) កត់ត្រារូបមន្ត រយៈពេល និងសីតុណ្ហភាពភ្ញាស់ ព្រមទាំងសំណាកត្រួតពិនិត្យ; បន្ទាប់មកបណ្តុះបន្តពីកូឡូនីដែលនៅដាច់ពីគ្នាច្បាស់ ដើម្បីទទួលបានមេបរិសុទ្ធ មុនធ្វើតេស្តបញ្ជាក់ណាមួយ។ ការពិនិត្យបន្តដែលប្រើញឹកញាប់រួមមានការជ្រលក់ពណ៌ក្រាម និងប្រតិកម្ម IMViC សម្រាប់ការកំណត់អត្តសញ្ញាណបឋមរបស់ E. coli និងបាក់តេរីក្រុម coliform, TSI ឬ KIA និងសំណុំតេស្តជីវគីមីជាក់លាក់តាមមីក្រូសារពាង្គកាយសម្រាប់មីក្រូសារពាង្គកាយពោះវៀន រួមជាមួយការកំណត់អត្តសញ្ញាណតាមសេរ៉ូឡូស៊ី MALDI TOF ឬវិធីសាស្ត្រផ្សេងទៀតដែលបានផ្ទៀងផ្ទាត់ នៅពេលកិច្ចការតម្រូវ។ សម្រាប់ព័ត៌មានមូលដ្ឋានអំពីតួនាទីរបស់ EMB ក្នុងចំណោមមជ្ឈដ្ឋានបណ្តុះមីក្រូសារពាង្គកាយពោះវៀនដែលមានលក្ខណៈជ្រើសរើស និងបែងចែកភាពខុសគ្នា សូមមើលសេចក្តីណែនាំអំពីមជ្ឈដ្ឋានបណ្តុះមីក្រូសារពាង្គកាយពោះវៀន និង ការពិនិត្យបន្តដោយការជ្រលក់ពណ៌ក្រាម។ ចំពោះសំណួរពាក់ព័ន្ធអំពីអ្វីដែលការជ្រលក់ពណ៌ស្លាយដោយពណ៌ខៀវអាច និងមិនអាចបញ្ជាក់បាន កម្រងរូបភាពការជ្រលក់ពណ៌ដោយ methylene blue ក៏បែងចែកការសង្កេត និងសេចក្តីសន្និដ្ឋានដាច់ពីគ្នាតាមគោលការណ៍ដូចគ្នា។

សរសេរការសង្កេតមុនសេចក្តីសន្និដ្ឋាន។ «កូឡូនីពណ៌ខៀវខ្មៅងងឹត មានភាពភ្លឺរលោងពណ៌បៃតងដែលប្រែប្រួលតាមមុំមើលលើ Levine EMB នៅ 24 ម៉ោង ស្របនឹងការធ្វើផ្អាប់ lactose ខ្លាំង» គឺជាសេចក្តីពណ៌នាដែលមានមូលដ្ឋានគាំទ្រ។ «E. coli បានបញ្ជាក់» ត្រូវការជំហានបញ្ជាក់ដែលចានបណ្តុះតែឯងមិនអាចផ្តល់បាន។