មេទីលែនប្លូក្នុងតេស្ត G6PD នៅមន្ទីរពិសោធន៍៖ តើសារធាតុពណ៌នេះពិតជាកំពុងធ្វើអ្វី

និស្សិតម្នាក់សង្កេតមើលបំពង់ពីរបន្ទាប់ពីការអាំងកម្ដៅ។ បំពង់មួយបានប្រែទៅជាពណ៌ដែលរំពឹងទុក។ បំពង់មួយទៀតមិនបានប្រែពណ៌ទេ។ និស្សិតនោះសន្និដ្ឋានថា អ្នកជំងឺទីពីរមានកង្វះអង់ស៊ីម glucose-6-phosphate dehydrogenase។ សេចក្ដីសន្និដ្ឋាននោះអាចត្រឹមត្រូវ ប៉ុន្តែការគិតនេះរំលងគោលគំនិតដែលធ្វើឱ្យតេស្តនេះដំណើរការ។ គ្មានអ្វីនៅក្នុងបំពង់វាស់អង់ស៊ីមដោយផ្ទាល់ទេ។ បំពង់នេះវាស់អ្វីដែលអង់ស៊ីមផលិត ដោយប្រើមេទីលែនប្លូជាអ្នកសម្របសម្រួល។

នៅពេលយល់ច្បាស់ពីការវាស់ដោយប្រយោលនេះ នីតិវិធី សំណាកត្រួតពិនិត្យ និងបញ្ជីដ៏វែងនៃលទ្ធផលខុស នឹងលែងមើលទៅដូចជាអ្វីដែលកំណត់ឡើងដោយគ្មានមូលហេតុ។

ចម្លើយខ្លី

មេទីលែនប្លូក្នុងតេស្ត G6PD ជាសារធាតុចង្អុលបង្ហាញប្រតិកម្មរេដុក។ អង់ស៊ីម G6PD បង្កើត NADPH ហើយប្រព័ន្ធដែលពឹងផ្អែកលើ NADPH ធ្វើរេដុកម្មមេទីលែនប្លូពណ៌ខៀវឱ្យទៅជាទម្រង់លូកូដែលគ្មានពណ៌របស់វា (ឬប្រើវាដើម្បីផ្ទេរអេឡិចត្រុង)។ សកម្មភាពអង់ស៊ីមធម្មតាធ្វើឱ្យការរេដុកម្មមានប្រសិទ្ធភាព។ សកម្មភាពអង់ស៊ីមដែលខ្វះធ្វើឱ្យការរេដុកម្មយឺត ឬមិនពេញលេញ។ នេះជាសញ្ញាទាំងមូលដែលតេស្តបង្ហាញ។

វិធីសាស្ត្រប្រវត្តិសាស្ត្រពីរប្រើសារធាតុពណ៌ដូចគ្នា ប៉ុន្តែមានចំណុចបញ្ចប់ខុសគ្នា។ បែងចែកវាឱ្យច្បាស់ ហើយភាពច្របូកច្របល់ភាគច្រើននឹងបាត់ទៅ។

តេស្តពីរ សារធាតុពណ៌មួយ ចំណុចបញ្ចប់ខុសគ្នា

វិធីទីមួយគឺតេស្តរេដុកម្មមេទីលែនប្លូដោយផ្ទាល់ ដែលបានពិពណ៌នាដោយ Sass និងសហការី ហើយក្រោយមកបានវាយតម្លៃដោយ Gibbs។ នៅទីនេះ ចំណុចបញ្ចប់គឺសារធាតុពណ៌ផ្ទាល់៖ មេទីលែនប្លូក្នុងទម្រង់អុកស៊ីតកម្មដែលមានពណ៌ខៀវ ត្រូវបានធ្វើរេដុកម្មទៅរកលូកូមេទីលែនប្លូដែលគ្មានពណ៌ ហើយល្បឿននៃការប្រែប្រួលនេះឆ្លុះបញ្ចាំងពីសមត្ថភាពបង្កើត NADPH។ អត្ថបទដើមស្ដីពីតេស្តស្រាវរកនេះត្រូវបានធ្វើលិបិក្រមនៅលើ PubMed ក្រោមឈ្មោះ Sass និងសហការី (1966)។

វិធីទីពីរគឺតេស្តរេដុកម្មមេតអេម៉ូក្លូប៊ីនរបស់ Brewer។ ដំបូង សូដ្យូមនីទ្រីតធ្វើអុកស៊ីតកម្មអេម៉ូក្លូប៊ីនឱ្យទៅជាមេតអេម៉ូក្លូប៊ីនពណ៌ត្នោត។ បន្ទាប់មក មេទីលែនប្លូដើរតួជាសារធាតុសម្របសម្រួលការផ្ទេរអេឡិចត្រុង៖ មេទីលែនប្លូដែលបានធ្វើរេដុកម្ម ផ្ទេរអេឡិចត្រុងសម្រាប់រេដុកម្មទៅមេតអេម៉ូក្លូប៊ីន ដោយបម្លែងវាឱ្យត្រឡប់ទៅជាអេម៉ូក្លូប៊ីនពណ៌ក្រហមវិញ។ ដូច្នេះ ចំណុចបញ្ចប់ដែលមើលឃើញគឺពណ៌ត្នោតធៀបនឹងពណ៌ក្រហម មិនមែនពណ៌ខៀវធៀបនឹងគ្មានពណ៌ទេ។ វិធីសាស្ត្រដើមបានចេញផ្សាយក្នុង ព្រឹត្តិបត្ររបស់អង្គការសុខភាពពិភពលោក (Brewer និងសហការី, 1960)។

ការហៅតេស្ត Brewer ថាជាតេស្តបំបាត់ពណ៌សារធាតុពណ៌ គឺមិនច្បាស់លាស់តាមផ្នែកគីមីទេ។ សារធាតុពណ៌ឆ្លងកាត់វដ្ដប្រតិកម្ម ចំណែកអេម៉ូក្លូប៊ីនជាអ្នកប្រែពណ៌។ ដ្យាក្រាមខាងក្រោមបង្ហាញផ្លូវប្រតិកម្មទាំងពីរ។

ប្រតិកម្មដែលជាមូលដ្ឋាន

G6PD ជំរុញជំហានអុកស៊ីតកម្មដំបូងនៃផ្លូវមេតាបូលីសប៉ង់តូសផូស្វាត៖

Glucose-6-phosphate + NADP+ becomes 6-phosphogluconolactone + NADPH + H+

កោសិកាឈាមក្រហមពេញវ័យពឹងផ្អែកយ៉ាងខ្លាំងលើផ្លូវនេះសម្រាប់ NADPH ដូចដែលបានពិនិត្យឡើងវិញនៅក្នុង ទស្សនាវដ្ដី Blood ដោយ Luzzatto និងសហការី (2020)។ NADPH រក្សាគ្លូតាធីអូនឱ្យនៅក្នុងទម្រង់រេដុកម្ម និងការពារកោសិកាពីការខូចខាតដោយអុកស៊ីតកម្ម។ មេទីលែនប្លូចូលរួមក្នុងប្រព័ន្ធនេះក្នុងនាមជាសារធាតុទទួលអេឡិចត្រុង។ G6PD គ្រប់គ្រាន់ផ្ដល់ NADPH គ្រប់គ្រាន់ ដែលធ្វើឱ្យការរេដុកម្មមានប្រសិទ្ធភាព។ កម្រិត G6PD ទាបធ្វើឱ្យខ្សែដំណើរការនេះដាច់តាំងពីតំណដំបូង។

គិតពីសារធាតុពណ៌នេះថាជារង្វាស់ប្រេងឥន្ធនៈ មិនមែនជាម៉ាស៊ីនទេ។ វារាយការណ៍អំពីការផ្គត់ផ្គង់ NADPH។ អ្វីផ្សេងទៀតដែលផ្លាស់ប្ដូរការផ្គត់ផ្គង់នោះ ឬការអានលទ្ធផល អាចធ្វើឱ្យទ្រនិចរង្វាស់ផ្លាស់ទី ដោយគ្មានការប្រែប្រួលណាមួយនៅក្នុងហ្សែន។

របៀបអនុវត្តនីតិវិធីប្រភេទ Brewer

រូបមន្តសារធាតុប្រតិកម្មបានប្រែប្រួលតាមទសវត្សរ៍ ដូច្នេះការពិពណ៌នាសម្រាប់ការបង្រៀនមិនត្រូវយល់ច្រឡំថាជាពិធីការគ្លីនិកទេ។ មន្ទីរពិសោធន៍នីមួយៗអនុវត្តតាមនីតិវិធីប្រតិបត្តិស្តង់ដាររបស់ខ្លួនដែលបានផ្ទៀងផ្ទាត់សុពលភាព។ ដោយចងចាំការប្រុងប្រយ័ត្ននេះ ការរៀបចំបំពង់បែបបុរាណដំណើរការដូចខាងក្រោម ក្នុងទម្រង់ដែលបានកត់ត្រាដោយប្រើបំពង់បី និងការអាំងកម្ដៅរយៈពេល 3 ម៉ោងនៅក្នុង ការអនុវត្តដែលបានចេញផ្សាយនេះ៖

1. បំពង់អ្នកជំងឺ៖ ឈាមទាំងមូលបន្ថែមគ្លុយកូស សូដ្យូមនីទ្រីត និងមេទីលែនប្លូ។ នីទ្រីតបង្កើតមេតអេម៉ូក្លូប៊ីន គ្លុយកូសផ្គត់ផ្គង់សម្រាប់មេតាបូលីសរបស់កោសិកាឈាមក្រហម ហើយសារធាតុពណ៌ផ្ដល់មធ្យោបាយផ្ទេរអេឡិចត្រុងដែលពឹងផ្អែកលើ NADPH។
2. សំណាកត្រួតពិនិត្យអុកស៊ីតកម្ម៖ ឈាមបន្ថែមនីទ្រីត និងគ្លុយកូស ប៉ុន្តែគ្មានមេទីលែនប្លូ។ វាបង្ហាញចំណុចបញ្ចប់ជាមេតអេម៉ូក្លូប៊ីនពណ៌ត្នោត ដែលជាលំនាំបង្ហាញកង្វះ។
3. សំណាកត្រួតពិនិត្យអេម៉ូក្លូប៊ីន៖ ឈាមបន្ថែមទឹក។ វាបង្ហាញចំណុចបញ្ចប់ជាអេម៉ូក្លូប៊ីនពណ៌ក្រហម ដែលជាលំនាំធម្មតា។
4. អាំងកម្ដៅ បំពង់ទាំងអស់នៅជិត 37 C ជាទូទៅរយៈពេល 3 ម៉ោង ដោយលាយថ្នមៗ។
5. ពង្រាវ ចំណែកតូចមួយដែលយកពីបំពង់នីមួយៗទៅក្នុងទឹកចម្រោះ ដើម្បីបំបែកកោសិកា និងធ្វើឱ្យការប្រៀបធៀបពណ៌អាចអានបានច្បាស់។
6. ប្រៀបធៀប បំពង់អ្នកជំងឺជាមួយសំណាកត្រួតពិនិត្យទាំងពីរ។ ការត្រឡប់ទៅរកពណ៌ក្រហមបង្ហាញថាមានសមត្ថភាពរេដុកម្មច្រើនគួរសម។ ការនៅតែមានពណ៌ត្នោតបង្ហាញថាអាចមានកង្វះខ្លាំង។

រូបមន្តមួយក្នុងប្រវត្តិសាស្ត្របានប្រើឈាមប្រហែល 1 mL ជាមួយសារធាតុប្រតិកម្មដែលមានសូដ្យូមនីទ្រីតប្រហែល 180 mM ដិចស្ត្រូស 280 mM និងមេទីលែនប្លូ 0.4 mM។ ចាត់ទុកលេខទាំងនេះជាឧទាហរណ៍ពីឯកសារស្រាវជ្រាវ មិនមែនជាលក្ខណៈកំណត់សកលទេ។

ការអានលទ្ធផល

តេស្តស្រាវរកបែបគុណភាពអាចបែងចែកបានល្អបំផុតនៅជុំវិញ 30 ទៅ 40 ភាគរយនៃសកម្មភាពធម្មតា ដូចដែលបានពិភាក្សានៅក្នុង អត្ថបទពិនិត្យឡើងវិញរបស់ Malaria Journal នេះអំពីចន្លោះខ្វះខាតក្នុងការរកឃើញ G6PD។ ដូច្នេះ លទ្ធផលតេស្តស្រាវរកធម្មតាមានន័យថា តេស្តមិនបានរកឃើញកង្វះធ្ងន់ធ្ងរទេ។ វាមិនបញ្ជាក់ថាសកម្មភាពមានកម្រិតធម្មតាពេញលេញឡើយ។

ហេតុអ្វីតេស្តស្រាវរកអាចធ្វើឱ្យយល់ច្រឡំ

ការកើនឡើងនៃរេទីគុយឡូស៊ីតក្រោយការបែកកោសិកាឈាមក្រហម ជាមូលហេតុដែលគេស្គាល់ច្បាស់នៃលទ្ធផលធម្មតាក្លែងក្លាយ។ កោសិកាឈាមក្រហមវ័យក្មេង និងរេទីគុយឡូស៊ីតមាន G6PD ច្រើនជាងកោសិកាចាស់។ ក្នុងអំឡុងពេលកើតការបែកកោសិកាឈាមក្រហមស្រួចស្រាវ កោសិកាដែលចាស់បំផុត និងមានកង្វះខ្លាំងបំផុតអាចត្រូវបានបំផ្លាញរួចទៅហើយ ដោយបន្សល់ទុកក្រុមកោសិកាវ័យក្មេងដែលផ្ដល់លទ្ធផលសកម្មភាពធម្មតាក្នុងតេស្ត។ បាតុភូតជីវសាស្ត្រដូចគ្នានេះក៏ធ្វើឱ្យតេស្តបរិមាណផ្ដល់លទ្ធផលបំភាន់ដែរ មិនមែនតែតេស្តស្រាវរកដោយសារធាតុពណ៌ប៉ុណ្ណោះទេ។

ការបញ្ចូលឈាមនាពេលថ្មីៗ លាក់បាំងកង្វះ ព្រោះកោសិកាឈាមក្រហមរបស់អ្នកបរិច្ចាគនាំអង់ស៊ីមរបស់ខ្លួនចូលក្នុងសំណាក។ Mayo Clinic Laboratories រាយបញ្ជីការបញ្ចូលឈាម ក្នុងចំណោមមូលហេតុដែលធ្វើឱ្យលទ្ធផលអង់ស៊ីមមិនអាចទុកចិត្តបាន រួមជាមួយការកើនឡើងនៃរេទីគុយឡូស៊ីត និងការរំខានពីកោសិកាឈាមស។

ស្ត្រីដែលមានអាលែលខុសគ្នាពីរ ជាករណីពិបាកបំផុត។ ការបិទសកម្មភាពក្រូម៉ូសូម X ដោយចៃដន្យបង្កើតល្បាយកោសិកាឈាមក្រហមធម្មតា និងកោសិកាដែលមានកង្វះ ហើយសកម្មភាពសរុបអាចស្ថិតនៅកម្រិតណាមួយ ចាប់ពីកង្វះធ្ងន់ធ្ងររហូតដល់ហាក់ដូចជាធម្មតា។ តេស្តស្រាវរកបែបគុណភាពជាញឹកញាប់មិនរកឃើញផេណូទីបកម្រិតមធ្យម។ ឯកសាររបស់ WHO ស្ដីពីតេស្ត G6PD ពិភាក្សាអំពីដែនកំណត់នេះយ៉ាងលម្អិត។

អាយុកាលសំណាក សីតុណ្ហភាពរក្សាទុក ភាពអាស្រ័យលើការវិនិច្ឆ័យផ្ទាល់ខ្លួនក្នុងការកំណត់ចំណុចបញ្ចប់ដោយមើលពណ៌ ហេម៉ាតូគ្រីត និងគុណភាពសារធាតុប្រតិកម្ម បន្ថែមភាពប្រែប្រួលក្នុងការវិភាគពីលើឥទ្ធិពលជីវសាស្ត្រទាំងនេះ។

ការធ្វើតេស្តស្រាវរកមិនមែនជាការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យទេ

លទ្ធផលតេស្តស្រាវរកដែលបង្ហាញកង្វះ កម្រិតមធ្យម ឬមិនស្របនឹងស្ថានភាពគ្លីនិក ត្រូវការធ្វើ តេស្តអង់ស៊ីម G6PD បែបបរិមាណ។ WHO ចាត់ទុកការវាស់បរិមាណដោយស្ប៉ិចត្រូហ្វូតូម៉ែត្រដែលគ្រប់គ្រងសីតុណ្ហភាព ជាវិធីសាស្ត្រយោង។ ក្នុងតេស្តនោះ សំណាកដែលបានបំបែកកោសិកាឈាមក្រហមទទួល glucose-6-phosphate និង NADP+ ហើយ NADPH ដែលបង្កើតឡើងត្រូវបានតាមដានតាមរយៈការកើនឡើងនៃការស្រូបពន្លឺនៅ 340 nm។ អត្រានៃការប្រែប្រួលសមាមាត្រនឹងសកម្មភាពអង់ស៊ីម ហើយជាទូទៅត្រូវបានគណនាធៀបនឹងអេម៉ូក្លូប៊ីនជាឯកតាក្នុងមួយក្រាម។ ការអនុវត្តបច្ចុប្បន្ននៅមន្ទីរពិសោធន៍គ្លីនិកត្រូវបានសង្ខេបនៅក្នុង បញ្ជីតេស្ត Mayo សម្រាប់សកម្មភាព G6PD។

ការបកស្រាយប្រើជួរតម្លៃយោងដែលមន្ទីរពិសោធន៍បានផ្ទៀងផ្ទាត់សុពលភាព ជាញឹកញាប់កំណត់ដោយធៀបនឹងសកម្មភាពធម្មតារបស់ប្រជាជន ដោយកង្វះត្រូវបានពិភាក្សាជាទូទៅនៅជិតកម្រិតកាត់ 30 ភាគរយ ហើយសកម្មភាពកម្រិតមធ្យមស្ថិតនៅខ្ពស់ជាងនោះ។ ទម្រង់លក្ខណៈផលិតផលគោលដៅរបស់ WHO សម្រាប់តេស្ត G6PD (2022) កំណត់ក្របខណ្ឌរោគវិនិច្ឆ័យនោះ។ ប្រសិនបើការបែកកោសិកាឈាមក្រហម ឬការបញ្ចូលឈាមនាពេលថ្មីៗធ្វើឱ្យការកំណត់ផេណូទីបមិនអាចទុកចិត្តបាន ត្រូវធ្វើតេស្តម្ដងទៀតក្រោយពេលក្រុមកោសិកាឈាមក្រហមមានតុល្យភាពឡើងវិញ ហើយតេស្តម៉ូលេគុលអាចផ្ដល់ព័ត៌មានបន្ថែមដោយមិនជំនួសការវាស់អង់ស៊ីម។

ព្រំដែនដែលគួររក្សាឱ្យច្បាស់

មេទីលែនប្លូក្នុងតេស្តទាំងនេះគឺជា សារធាតុប្រតិកម្មមន្ទីរពិសោធន៍សម្រាប់ប្រើក្រៅរាងកាយ។ ការពិតនេះជាប្រធានបទដាច់ដោយឡែកពីសុវត្ថិភាពនៃការផ្ដល់មេទីលែនប្លូដល់អ្នកជំងឺ ដែលត្រូវបានពិភាក្សានៅក្នុង ការណែនាំអំពីករណីហាមប្រើមេទីលែនប្លូ។ ជីវគីមីភ្ជាប់ប្រធានបទទាំងពីរនេះ ព្រោះឱសថនេះក៏ពឹងផ្អែកលើការរេដុកម្មដែលអាស្រ័យលើ NADPH ដែរ ប៉ុន្តែសារធាតុពណ៌ក្នុងបំពង់តេស្តមិនមែនជាដូសក្នុងចរន្តឈាមទេ។ សម្រាប់បរិបទអំពីរបៀបដែលសារធាតុពណ៌នេះដើរតួជាសារធាតុជ្រលក់ពណ៌ក្នុងបរិបទផ្សេង សូមមើល គោលការណ៍ជ្រលក់ពណ៌ដោយមេទីលែនប្លូ ហើយសម្រាប់ក្រុមគីមីដែលវាស្ថិតនៅ គឺសារធាតុពណ៌រេដុកក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍។

ការធ្វើតេស្តស្រាវរកសួរថា តើសមត្ថភាពរេដុកម្មមើលទៅនៅដំណើរការល្អដែរឬទេ។ ការធ្វើតេស្តបញ្ជាក់សួរថា តើពិតជាមានអង់ស៊ីមប៉ុន្មាន។ សារធាតុពណ៌ឆ្លើយសំណួរទីមួយបានល្អ ដរាបណាគ្មាននរណាសុំឱ្យវាឆ្លើយសំណួរទីពីរ។