ការវាស់ប្រភេទអុកស៊ីសែនសកម្មក្នុងការពិសោធន៍មេទីឡែនប៊្លូ

មន្ទីរពិសោធន៍ពីរធ្វើការពិសោធន៍ដែលមន្ទីរនីមួយៗហៅថា ការពិសោធន៍សកម្មភាពប្រឆាំងអុកស៊ីតកម្មរបស់មេទីឡែនប៊្លូ។ មន្ទីរមួយរាយការណ៍ថា សារធាតុពណ៌នេះទប់ស្កាត់ប្រភេទអុកស៊ីសែនសកម្ម។ មន្ទីរមួយទៀតរាយការណ៍ថា វាបង្កើតប្រភេទទាំងនោះ។ ទាំងពីរបង្ហាញខ្សែកោងទំនាក់ទំនងរវាងបរិមាណ និងការឆ្លើយតបដែលច្បាស់លាស់។ ទាំងពីរធ្វើដោយស្មោះត្រង់។ ភាពខុសគ្នានេះមិនមែនមកពីការក្លែងបន្លំ ឬកង្វះសមត្ថភាពទេ។ វាមកពីក្រុមទាំងពីរវាស់អ្វីផ្សេងគ្នា ក្រោមពន្លឺផ្សេងគ្នា ដោយប្រើសារធាតុស្ទង់ដែលឆ្លើយសំណួរផ្សេងគ្នា ហើយបន្ទាប់មកពណ៌នាចម្លើយទាំងពីរដោយពាក្យតែមួយ៖ ROS។

មេទីឡែនប៊្លូជាម៉ូលេគុលដែលពិបាកវាស់ឱ្យបានជាក់លាក់ ព្រោះវាចូលរួមក្នុងប្រតិកម្មគីមីដែលវាត្រូវបានប្រើដើម្បីសង្កេត។ នៅក្នុងទីងងឹត វាដឹកជញ្ជូនអេឡិចត្រុងរវាងសារធាតុផ្តល់ និងសារធាតុទទួល រួចត្រឡប់ទៅទម្រង់ដើមវិញ ដោយត្រៀមធ្វើវដ្តម្តងទៀត។ ក្រោមពន្លឺ វាក្លាយជាសារធាតុជំរុញប្រតិកម្មដោយពន្លឺ ហើយឈានដល់ស្ថានភាពទ្រីប្លេតរំញោច ដែលអាចផ្ទេរថាមពលទៅអុកស៊ីសែនដើម្បីបង្កើតអុកស៊ីសែនស៊ីងហ្គ្លេត ឬផ្ទេរអេឡិចត្រុងដើម្បីបង្កើតរ៉ាឌីកាល់ និងអ៊ីដ្រូសែនប៉េរ៉ុកស៊ីត។ សារធាតុស្ទង់ណាមួយដែលដាក់ក្នុងប្រព័ន្ធនោះ អាចត្រូវបានអុកស៊ីតកម្ម រេដុកម្ម បាត់ពណ៌ ឬត្រូវបានសារធាតុពណ៌ខ្លួនឯងបាំងសញ្ញាពន្លឺ។ ដូច្នេះ សំណួរដំបូងសម្រាប់លទ្ធផលវាស់ ROS មិនដែលជាសំណួរថាតម្លៃប៉ុន្មាននោះទេ។ វាគឺថា តេស្តវិភាគនោះពិតជារកឃើញអ្វី ហើយសារធាតុពណ៌ធ្វើអ្វីខ្លះចំពោះតេស្តនោះ។

Amplex Red៖ តេស្តអ៊ីដ្រូសែនប៉េរ៉ុកស៊ីតដែលបានក្រិតតម្រូវ

ការប្រើ មេទីឡែនប៊្លូជាមួយ Amplex Red គឺជាការផ្គូផ្គងដែលមានមូលដ្ឋានគាំទ្ររឹងមាំបំផុតក្នុងឯកសារស្រាវជ្រាវនេះ ប្រសិនបើរៀបចំបានត្រឹមត្រូវ។ ប្រតិកម្មគីមីនេះមានភាពជាក់លាក់៖ អង់ស៊ីម horseradish peroxidase ប្រើអ៊ីដ្រូសែនប៉េរ៉ុកស៊ីតដើម្បីអុកស៊ីតកម្មស្រទាប់រង Amplex ទៅជាផលិតផលបញ្ចេញពន្លឺហ្វ្លុយអូរ៉េសង់ឈ្មោះ resorufin ក្នុងសមាមាត្រស្តូអ៊ីគីយ៉ូម៉ែត្រប្រហែលមួយទល់នឹងមួយ។ ប៉េរ៉ុកស៊ីតពីសំណាកក្លាយជាពន្លឺហ្វ្លុយអូរ៉េសង់ក្នុងឧបករណ៍ចាប់សញ្ញា។ គ្មានសមាជិកផ្សេងទៀតក្នុងក្រុម ROS ដែលទទួលស្គាល់ជាទូទៅ ជំរុញប្រតិកម្មនេះដោយផ្ទាល់ឡើយ។

អត្ថប្រយោជន៍សំខាន់បំផុតគឺការក្រិតតម្រូវ។ អ្នកពិសោធន៍ដែលប្រុងប្រយ័ត្នធ្វើតេស្តស្តង់ដារប៉េរ៉ុកស៊ីតដែលមានបរិមាណដឹងច្បាស់ ក្នុងសូលុយស្យុងប៊ូហ្វ័រដូចគ្នា ជាមួយកំហាប់ peroxidase និងស្រទាប់រងដូចគ្នា រយៈពេលទុកឱ្យប្រតិកម្មដូចគ្នា និងការកំណត់ប្រព័ន្ធអុបទិកដូចគ្នា រួចប្រៀបធៀបលទ្ធផលសំណាកនឹងខ្សែកោងនោះ។ ក្នុងការសិក្សាលើមីតូកុងឌ្រីខួរក្បាលដែលបានញែកចេញ ដែលជាមូលដ្ឋានរបស់វិធីនេះ អ្នកនិពន្ធបានធ្វើដូច្នោះមែន ដោយបន្ថែមប៉េរ៉ុកស៊ីតក្នុងបរិមាណដឹងច្បាស់នៅចុងបញ្ចប់នៃការវាស់នីមួយៗ ហើយរាយការណ៍តម្លៃជាអត្រាគិតជា ពីកូម៉ូលក្នុងមួយនាទីក្នុងមួយមីលីក្រាមប្រូតេអ៊ីន ជំនួសឱ្យឯកតាហ្វ្លុយអូរ៉េសង់តាមការកំណត់។ នេះហើយជាអ្វីដែលបម្លែងពន្លឺភ្លឺទៅជាការវាស់បរិមាណ។

ចំណុចលម្អិតបីពីការសិក្សានោះគួរត្រូវបានអនុវត្តតាម។ ទីមួយ អ្នកនិពន្ធបានផ្ទៀងផ្ទាត់សញ្ញាដោយប្រើ catalase ដែលបំបែកប៉េរ៉ុកស៊ីត។ ការកើនឡើងនៃពន្លឺហ្វ្លុយអូរ៉េសង់ដែលបង្កឡើងដោយមេទីឡែនប៊្លូបានឈប់ នៅពេលបន្ថែម catalase ដែលបញ្ជាក់ថាសញ្ញានោះមកពីប៉េរ៉ុកស៊ីត មិនមែនជាសញ្ញាក្លែងក្លាយផ្នែកអុបទិកទេ។ ទីពីរ ពួកគេបានសាកល្បងឥទ្ធិពលនៃពន្លឺដោយផ្ទាល់ ដោយបិទបើកធ្នឹមពន្លឺរំញោច ឱ្យសំណាកទទួលពន្លឺត្រឹមមួយភាគប្រាំបីនៃបរិមាណធម្មតា ហើយសញ្ញាបានថយចុះត្រឹមប្រាំបួនភាគរយ។ ប៉េរ៉ុកស៊ីតជាងកៅសិបភាគរយដែលពួកគេរាយការណ៍ មិនអាស្រ័យលើពន្លឺដែលប្រើសម្រាប់ការវាស់ទេ។ ទីបី ពួកគេបានវាស់ការកម្ចាត់ប៉េរ៉ុកស៊ីតដោយឡែក ដោយប្រើអេឡិចត្រូត ហើយរកឃើញថា សារធាតុពណ៌នេះទាំងបង្កើនការផលិត និងបន្ថយល្បឿននៃការកម្ចាត់។ សារធាតុស្ទង់ដែលរាយការណ៍តែពន្លឺហ្វ្លុយអូរ៉េសង់សុទ្ធ នឹងច្រឡំឥទ្ធិពលទាំងពីរនេះចូលគ្នា។

តេស្តនេះនៅតែមានចំណុចដែលអាចធ្វើឱ្យលទ្ធផលខុស ហើយមេទីឡែនប៊្លូអាចបង្កបញ្ហាមួយចំនួនក្នុងចំណោមនោះ។ សារធាតុពណ៌នេះស្រូបពន្លឺយ៉ាងទូលំទូលាយក្នុងតំបន់ពណ៌ក្រហមដូចគ្នាដែល resorufin បញ្ចេញពន្លឺ ដូច្នេះនៅកំហាប់សារធាតុពណ៌ខ្ពស់ សំណាកអាចបាំងសញ្ញារបស់ខ្លួនតាមរយៈឥទ្ធិពលតម្រងខាងក្នុង។ ហេតុនេះ សំណាកស្តង់ដារគួរមានកំហាប់សារធាតុពណ៌ដូចគ្នានឹងសំណាកដែលត្រូវវាស់។ Amplex Red ក៏អាចកើតអុកស៊ីតកម្មដោយពន្លឺដោយខ្លួនឯង ហើយផលិតផល resorufin របស់វាអាចចូលក្នុងវដ្តអុកស៊ីតកម្ម-រេដុកម្មដោយពន្លឺ ដែលបង្កើតស៊ុបពែរអុកស៊ីត និងប៉េរ៉ុកស៊ីត។ ចំណុចនេះសំខាន់ខ្លាំង នៅពេលការពិសោធន៍ក៏បញ្ចាំងពន្លឺលើសារធាតុជំរុញប្រតិកម្មដោយពន្លឺផងដែរ។ ដំណោះស្រាយជាក់ស្តែងគឺ បញ្ចាំងពន្លឺលើសំណាកមេទីឡែនប៊្លូជាមុន រួចយកចំណែកសំណាកទៅធ្វើតេស្តជាមួយសារធាតុប្រតិកម្ម Amplex ក្នុងទីងងឹត ជំនួសឱ្យការបញ្ចាំងពន្លឺលើសារធាតុពណ៌ និងសារធាតុស្ទង់រួមគ្នា។ ចុងក្រោយ superoxide dismutase មិនមែនគ្រាន់តែទប់ស្កាត់សញ្ញា Amplex ទេ៖ ការបម្លែងស៊ុបពែរអុកស៊ីតទៅជាប៉េរ៉ុកស៊ីតអាចបង្កើនសញ្ញានោះ។ ការត្រួតពិនិត្យដោយ SOD ដែលបង្កើនពន្លឺហ្វ្លុយអូរ៉េសង់ មិនមែនបរាជ័យទេ។ វាបានកំណត់ថាស៊ុបពែរអុកស៊ីតជាសារធាតុនៅដំណាក់កាលមុនក្នុងលំដាប់ប្រតិកម្ម។

DCFDA៖ សូចនាករអុកស៊ីតកម្មមិនជាក់លាក់

ការប្រើ មេទីឡែនប៊្លូជាមួយ DCFDA គឺជាប្រភពនៃភាពច្របូកច្របល់ភាគច្រើន។ DCFH-DA ជាសារធាតុមុនដែលប្រើសម្រាប់នាំសារធាតុស្ទង់ចូលកោសិកា។ អង់ស៊ីម esterase ក្នុងកោសិកាដកក្រុមអាសេតាតរបស់វាចេញ ដោយទុកជា DCFH ដែលមិនបញ្ចេញពន្លឺហ្វ្លុយអូរ៉េសង់ ហើយអុកស៊ីតកម្មរបស់ DCFH បង្កើត DCF ដែលបញ្ចេញពន្លឺហ្វ្លុយអូរ៉េសង់។ សារធាតុដែលអាចអុកស៊ីតកម្មវាមានបញ្ជីវែង៖ រ៉ាឌីកាល់អ៊ីដ្រូស៊ីល សារធាតុកណ្ដាលនៃប្រតិកម្ម peroxidase និង heme នីត្រូសែនឌីអុកស៊ីត អាស៊ីតហ៊ីប៉ូក្លរ៉ូស និងរ៉ាឌីកាល់ដែលកើតពី peroxynitrite។ អ៊ីដ្រូសែនប៉េរ៉ុកស៊ីតតែឯងមិនអុកស៊ីតកម្មវាដោយផ្ទាល់ក្នុងអត្រាដែលមានប្រយោជន៍សម្រាប់ការវាស់ឡើយ។ ជាទូទៅ ពន្លឺហ្វ្លុយអូរ៉េសង់ដែលអាស្រ័យលើប៉េរ៉ុកស៊ីត ត្រូវការដែក ប្រូតេអ៊ីន heme ឬប្រតិកម្មគីមី peroxidase ចូលរួមក្នុងដំណើរការ។

ការវិភាគរិះគន់ដែលផ្នែកវិធីសាស្ត្រនីមួយៗគួរយោង គឺមកពីការវិភាគ DCFH ជាសារធាតុស្ទង់ ដោយ Kalyanaraman និងសហការី ដូចដែលបានសង្ខេបក្នុង ការសិក្សាលើមីតូកុងឌ្រីខួរក្បាលដែលបដិសេធ DCFDA ដោយសារមូលហេតុនេះ។ ពួកគេបានបង្ហាញថា សារធាតុពណ៌នេះប្រតិកម្មយឺត មានស្តូអ៊ីគីយ៉ូម៉ែត្រដែលមិនទាន់កំណត់ច្បាស់ គ្មានការក្រិតតម្រូវដែលមានសុពលភាព និងប្រតិកម្មជាមួយសមាសធាតុដែលមិនមែនជា ROS។ សារធាតុស្ទង់នេះក៏បង្កើនអ្វីដែលវាវាស់ផងដែរ៖ អុកស៊ីតកម្ម DCFH ដោយការបាត់បង់អេឡិចត្រុងមួយ បង្កើតរ៉ាឌីកាល់ DCF ដែលប្រតិកម្មជាមួយអុកស៊ីសែនដើម្បីបង្កើតស៊ុបពែរអុកស៊ីត ហើយស៊ុបពែរអុកស៊ីតនោះឆ្លងប្រតិកម្មឌីសម្យូតកម្មទៅជាប៉េរ៉ុកស៊ីតបន្ថែម។ ដូច្នេះ ដំណើរការវាស់ខ្លួនឯងបង្កើតផ្នែកមួយនៃប្រតិកម្មគីមីដែលវារាយការណ៍។

ចំណុចទាំងនេះមិនធ្វើឱ្យ DCFDA គ្មានប្រយោជន៍ទេ។ វាធ្វើឱ្យ DCFDA ជាឧបករណ៍សម្រាប់ពិនិត្យបឋម មិនមែនសម្រាប់កំណត់អត្តសញ្ញាណ។ ការកើនឡើងនៃពន្លឺហ្វ្លុយអូរ៉េសង់ DCF មានន័យថា អុកស៊ីតកម្មរបស់សារធាតុស្ទង់ដែលអាស្រ័យលើសារធាតុអុកស៊ីតកម្មបានកើនឡើង។ វាមិនមានន័យថាប៉េរ៉ុកស៊ីតកើនឡើងទេ ហើយពិតជាមិនមានន័យថា ROS សរុបកើនឡើងឡើយ ព្រោះគ្មានសារធាតុស្ទង់តែមួយណាវាស់បរិមាណនោះបានទេ។ ការស្រាវជ្រាវមេទីឡែនប៊្លូមុនៗដែលពឹងផ្អែកលើអុកស៊ីតកម្ម DCF នៅកំហាប់លើសមួយមីក្រូម៉ូលក្នុងមួយលីត្រ បានរាយការណ៍ពីឥទ្ធិពលបង្កើនអុកស៊ីតកម្ម ខណៈប្រព័ន្ធផ្សេងទៀតក្នុងសម័យដូចគ្នា រាយការណ៍ពីការការពារប្រឆាំងការស្លាប់កោសិកាដែលបង្កឡើងដោយប៉េរ៉ុកស៊ីត។ ការសង្កេតទាំងពីរអាចជាការពិតសម្រាប់សារធាតុពណ៌ដូចគ្នា ក្នុងបរិបទអុកស៊ីតកម្ម-រេដុកម្មផ្សេងគ្នា ហើយលទ្ធផល DCF តែឯងមិនអាចប្រាប់បានថា សារធាតុអុកស៊ីតកម្មណាជាអ្នកបង្កើតសញ្ញា។ សារៈសំខាន់នៃការស្រាវជ្រាវមីតូកុងឌ្រីខួរក្បាលមុននោះ គឺវាបានជំនួសការពិនិត្យបឋមនេះដោយការវាស់ប៉េរ៉ុកស៊ីតដែលបានក្រិតតម្រូវ ហើយរកឃើញបរិមាណប៉េរ៉ុកស៊ីតដោយផ្ទាល់៖ សូម្បីតែសារធាតុពណ៌កំហាប់មួយរយណាណូម៉ូលក្នុងមួយលីត្រ ក៏បង្កើនការបញ្ចេញប៉េរ៉ុកស៊ីតច្រើនដង នៅគ្រប់ស្រទាប់រង និងស្ថានភាពដង្ហើមកោសិកាដែលបានសាកល្បង។

DCFDA មានចំណុចដែលអាចនាំឱ្យយល់ច្រឡំមួយទៀត ដែលជាក់លាក់ចំពោះមេទីឡែនប៊្លូ។ សារធាតុពណ៌នេះមានពណ៌ខ្លាំង និងមានសកម្មភាពអុកស៊ីតកម្ម-រេដុកម្ម ដូច្នេះវាអាចធ្វើឱ្យពន្លឺហ្វ្លុយអូរ៉េសង់សាបរលាប បន្ថយការបញ្ចេញពន្លឺ ឬអុកស៊ីតកម្មសារធាតុស្ទង់ ដោយមិនពាក់ព័ន្ធនឹង ROS ក្នុងកោសិកា។ ការត្រួតពិនិត្យក្នុងប្រព័ន្ធគ្មានកោសិកា ដែលមានសារធាតុពណ៌បូកសារធាតុស្ទង់ និងគ្មានកោសិកា មិនមែនជាការបន្ថែមតុបតែងដែលអាចធ្វើឬមិនធ្វើក៏បានទេ។ វាជាការពិសោធន៍ដែលប្រាប់អ្នកថា សារធាតុពណ៌មានអន្តរកម្មជាមួយសារធាតុស្ទង់ឬអត់។

ការចាប់ស្ពីន និងការស្រូបយកអុកស៊ីសែន៖ អត្តសញ្ញាណ និងលំហូរប្រតិកម្ម

ខណៈសារធាតុស្ទង់ហ្វ្លុយអូរ៉េសង់រាយការណ៍ថា មានអ្វីមួយដែលអាចត្រូវបានអុកស៊ីតកម្មលេចឡើង អនុភាពស្ពីនអេឡិចត្រុងជាមួយសារធាតុចាប់ស្ពីន ផ្តល់លទ្ធផលដែលខិតជិតទៅនឹងការកំណត់ថាវាជាអ្វី។ ការសិក្សាគីមីពន្លឺដ៏សំខាន់ដំបូងមួយលើមេទីឡែនប៊្លូ បានប្រើ ESR ដើម្បីរកឃើញរ៉ាឌីកាល់អាស្ក័របាតពីសារធាតុពណ៌ អាស្ក័របាត និងពន្លឺ បន្ទាប់មកបង្ហាញពីការកកើតប៉េរ៉ុកស៊ីតក្នុងការពិសោធន៍ស្រូបយកអុកស៊ីសែន និងការកកើតរ៉ាឌីកាល់អ៊ីដ្រូស៊ីលដែលកាតាលីករដោយដែក ក្នុងការពិសោធន៍ចាប់ស្ពីន។ បច្ចេកទេសនីមួយៗបានឆ្លើយសំណួរដែលបច្ចេកទេសផ្សេងទៀតមិនអាចឆ្លើយបាន៖ ESR ផ្តល់អត្តសញ្ញាណរ៉ាឌីកាល់ ការស្រូបយកអុកស៊ីសែនផ្តល់លំហូរប្រតិកម្មដោយមិនអាស្រ័យលើសារធាតុស្ទង់ហ្វ្លុយអូរ៉េសង់ណាមួយ ហើយការរួមបញ្ចូលគ្នាបង្ហាញថា ទាំងផ្លូវប្រតិកម្មអុកស៊ីសែនស៊ីងហ្គ្លេត និងផ្លូវប្រតិកម្មរ៉ាឌីកាល់ ដំណើរការក្នុងប្រព័ន្ធដែលទទួលពន្លឺដូចគ្នា។

លទ្ធផលក្នុងឆ្នាំ 1984 នោះ នៅតែមានអត្ថន័យដូចជាស្លាកព្រមាន។ នៅពេលមានពន្លឺ និងសារធាតុរេដុកម្ម សារធាតុពណ៌បានបង្កើតប៉េរ៉ុកស៊ីត ហើយនៅពេលមានដែក ប្រព័ន្ធបានបង្កើតរ៉ាឌីកាល់អ៊ីដ្រូស៊ីល ដែលជាប្រភេទមានប្រតិកម្មខ្លាំងបំផុតក្នុងក្រុមនេះ។ អ្នកនិពន្ធបានភ្ជាប់ចំណុចនេះទៅនឹងអាស្ក័របាតក្នុងភ្នែក ហើយបានចោទសំណួរអំពីការប្រើប្រាស់ក្នុងផ្នែកចក្ខុពេទ្យដោយមិនប្រុងប្រយ័ត្ន។ អ្នកអានសម័យបច្ចុប្បន្នគួរកត់សម្គាល់លក្ខខណ្ឌ៖ ពន្លឺ បូកសារធាតុរេដុកម្ម បូកដែក។ ដកចេញមួយណាក៏ដោយ ផ្លូវប្រតិកម្មនោះនឹងចុះខ្សោយ ឬបាត់ទៅ។

អេឡិចត្រូតអុកស៊ីសែនមានតម្លៃតាមរបៀបផ្សេង។ អេឡិចត្រូតប្រភេទ Clark វាស់ការប្រើប្រាស់អុកស៊ីសែនសុទ្ធ ដែលបញ្ជាក់ថា ប្រតិកម្មអុកស៊ីតកម្ម-រេដុកម្មដែលជំរុញដោយសារធាតុពណ៌កំពុងប្រើប្រាស់អុកស៊ីសែនម៉ូលេគុល ហើយផ្តល់ទិន្នន័យចលនវិទ្យាដែលសញ្ញាហ្វ្លុយអូរ៉េសង់ក្លែងក្លាយមិនអាចបង្កើតបាន។ វាមិនកំណត់អត្តសញ្ញាណផលិតផលទេ។ ការកកើតប៉េរ៉ុកស៊ីត ស៊ុបពែរអុកស៊ីត ទឹក និងការបាត់បង់ស្ថានភាពរំញោចរបស់អុកស៊ីសែនស៊ីងហ្គ្លេត សុទ្ធតែប្រើប្រាស់អុកស៊ីសែន។ លំហូរប្រតិកម្មដែលគ្មានអត្តសញ្ញាណ មិនពេញលេញដូចអត្តសញ្ញាណដែលគ្មានលំហូរប្រតិកម្មដែរ។ ហេតុនេះហើយ ទើបអត្ថបទស្រាវជ្រាវដែលមានមូលដ្ឋានរឹងមាំ ផ្គូផ្គងអេឡិចត្រូតជាមួយតេស្តប៉េរ៉ុកស៊ីតដែលបានក្រិតតម្រូវ ឬសារធាតុចាប់រ៉ាឌីកាល់។

ហេតុអ្វីលទ្ធផលប្រឆាំងអុកស៊ីតកម្មផ្ទុយគ្នា

នៅពេលដាក់លទ្ធផលវាស់ទាំងបីប្រៀបធៀបគ្នា ភាពផ្ទុយគ្នាដែលមើលទៅមានក្នុងឯកសារស្រាវជ្រាវមេទីឡែនប៊្លូ អាចពន្យល់បានដោយភាពខុសគ្នានៃវិធីសាស្ត្រ បូកនឹងការពិតជីវសាស្ត្របីយ៉ាង។

ទីមួយ សារធាតុពណ៌នេះជាទាំងសារធាតុដឹកជញ្ជូនអេឡិចត្រុង និងប្រភពប៉េរ៉ុកស៊ីត។ តាមរយៈការបង្វែរអេឡិចត្រុងចេញពីទីតាំងដង្ហើមកោសិកា ដែលអុកស៊ីសែននឹងក្លាយជាស៊ុបពែរអុកស៊ីតបើគ្មានការបង្វែរនោះ វាអាចបន្ថយ ROS មួយប្រភេទ ខណៈទម្រង់ដែលត្រូវបានរេដុកម្មរបស់វា រេដុកម្មអុកស៊ីសែនដោយផ្ទាល់ទៅជាប៉េរ៉ុកស៊ីត ហើយបង្កើនប្រភេទមួយទៀត។ ដូច្នេះ មន្ទីរពិសោធន៍ដែលសិក្សា គីមីអុកស៊ីតកម្ម-រេដុកម្មក្នុងមីតូកុងឌ្រី និងតួនាទីផ្លូវវាងរបស់មេទីឡែនប៊្លូ គួររំពឹងថាចម្លើយនឹងអាស្រ័យលើសារធាតុស្ទង់៖ លទ្ធផលវាស់ដែលឆ្លើយតបនឹងស៊ុបពែរអុកស៊ីតថយចុះ ខណៈលទ្ធផលវាស់ប៉េរ៉ុកស៊ីតកើនឡើងក្នុងគុយវ៉ែតតែមួយ។

ទីពីរ ប៉េរ៉ុកស៊ីតក្នុងបរិមាណទាបជាសញ្ញាមួយ មិនមែនគ្រាន់តែជាប្រភពនៃការខូចខាតទេ។ ការសិក្សាមីតូកុងឌ្រីខួរក្បាលកណ្ដុរដែលធ្វើបន្តពីការស្រាវជ្រាវមុន បានរកឃើញ ការបង្កើតប៉េរ៉ុកស៊ីតពីសារធាតុពណ៌កំហាប់ទាបត្រឹមហាសិបណាណូម៉ូលក្នុងមួយលីត្រ ដោយគ្មានការខូចខាត DNA មីតូកុងឌ្រីនៅកម្រិតប្រើសម្រាប់ការព្យាបាល ហើយឃើញការការពារប្រឆាំងការខូចខាតដែលបង្កឡើងដោយ rotenone បន្ទាប់ពីការដាក់សារធាតុពណ៌ជាមុន។ មានតែនៅកំហាប់មួយរយមីក្រូម៉ូលក្នុងមួយលីត្រ ដែលខ្ពស់ជាងជួរកម្រិតប្រើសម្រាប់ការព្យាបាលឆ្ងាយ ទើបសារធាតុពណ៌ធ្វើឱ្យខូចបំណែក DNA មួយចំនួនដែលបានជ្រើសរើស។ ពន្លឺក្រហមបូកសារធាតុពណ៌កំហាប់ម្ភៃមីក្រូម៉ូលក្នុងមួយលីត្រ បានបង្កើតអុកស៊ីសែនស៊ីងហ្គ្លេតដែលធ្វើឱ្យខូចបំណែកទាំងអស់ដែលបានសាកល្បង។ យន្តការដែលបានស្នើឡើងគឺអ័រមេស៊ីស៖ ការផលិតប៉េរ៉ុកស៊ីតតិចតួចជំរុញប្រព័ន្ធការពារប្រឆាំងអុកស៊ីតកម្មដែលពាក់ព័ន្ធនឹង Nrf2 និងការបង្កើតមីតូកុងឌ្រីថ្មី ដូច្នេះលទ្ធផលវាស់ដែលបង្ហាញការបង្កើនអុកស៊ីតកម្មក្នុងរយៈពេលខ្លី កើតឡើងមុនលទ្ធផលប្រឆាំងអុកស៊ីតកម្មក្នុងរយៈពេលវែង។ តេស្តដែលអានលទ្ធផលនៅមួយម៉ោង និងតេស្តដែលអានលទ្ធផលនៅមួយថ្ងៃ អាចមិនស្របគ្នា ព្រោះជីវសាស្ត្របានផ្លាស់ប្តូរនៅចន្លោះពេលទាំងនោះ។

ទីបី ពន្លឺកំណត់សូម្បីតែថាម៉ូលេគុលណាមានវត្តមាន។ ការបញ្ចាំងពន្លឺដកក្រុមមេទីលចេញពីសារធាតុពណ៌ បម្លែងវាទៅជា Azure B និងផលិតផលពាក់ព័ន្ធ ហើយពន្លឺចង្កៀងមីក្រូទស្សន៍នៅលើចានសំណាកក៏គ្រប់គ្រាន់ដើម្បីធ្វើឱ្យវាជំរុញប្រតិកម្មដោយពន្លឺ។ ការពិសោធន៍ក្នុងទីងងឹត និងការពិសោធន៍ក្រោមពន្លឺ គឺជាការពិសោធន៍ផ្សេងគ្នា ហើយផ្នែក ការត្រួតពិនិត្យពន្លឺ និងការចាត់ចែងសារធាតុពណ៌ នៃពិធីការណាមួយ គួរចាត់ទុកវាតាមរបៀបនោះ។

សំណុំការត្រួតពិនិត្យអប្បបរមា និងរបៀបអានការអះអាងណាមួយ

តារាងប្រៀបធៀបខាងក្រោមជាឯកសារយោងដើមសម្រាប់អត្ថបទនេះ។ មុនទទួលយកលទ្ធផល ROS របស់មេទីឡែនប៊្លូណាមួយ សូមពិនិត្យថាអ្នកនិពន្ធបានអនុវត្តជួរណាខ្លះ ហើយរំលងជួរណាខ្លះ។

ពីនេះ អាចកំណត់គោលការណ៍ជាក់ស្តែងសម្រាប់ការអានបាន។ Amplex ជាមួយ peroxidase ដែលបានក្រិតតម្រូវ និងបានផ្ទៀងផ្ទាត់ដោយ catalase គឺជាភស្តុតាងអំពីប៉េរ៉ុកស៊ីត។ DCFDA ជាភស្តុតាងអំពីអុកស៊ីតកម្មមិនជាក់លាក់របស់សារធាតុស្ទង់ ហើយមិនលើសពីនេះទេ។ ការចាប់ស្ពីនជាមួយការត្រួតពិនិត្យដោយសារធាតុកម្ចាត់រ៉ាឌីកាល់ ជាភស្តុតាងអំពីអត្តសញ្ញាណរ៉ាឌីកាល់។ ការស្រូបយកអុកស៊ីសែនជាភស្តុតាងអំពីលំហូរប្រតិកម្ម។ ប្រយោគដែលអះអាងលើសពីអ្វីដែលតេស្តរបស់វាអាចគាំទ្របាន ទោះសរសេរដោយទំនុកចិត្តប៉ុណ្ណាក៏ដោយ គឺជាប្រយោគអំពីសារធាតុស្ទង់ មិនមែនអំពីសារធាតុពណ៌ទេ។ ការពិភាក្សាពាក់ព័ន្ធអំពីការអាស្រ័យលើបរិមាណ និងជួរអ័រមេស៊ីស លំហូរអេឡិចត្រុងក្នុងមីតូកុងឌ្រី ការរំខានតេស្តវិភាគក្នុងសំណាកដែលបានជ្រលក់ពណ៌ និងសញ្ញាក្លែងក្លាយពីពន្លឺមីក្រូទស្សន៍ ពង្រីកចំណុចនីមួយៗនេះ ហើយចំណុចនីមួយៗនៅតែមានសុពលភាព នៅពេលឯកសារយោងបណ្ដោះអាសន្នរបស់វាត្រូវបានជំនួស។