Мақала
Қан жағындысының күлгін бояуын кім жасады? Метилен көгі, Малаховский, Романовский және Гимза
Эозин — қызыл. Метилен көгі — көк. Екеуін араластырып, қоспаны кептірілген қан жағындысына жақсаңыз, жағындының кейбір бөліктері күлгін түске боялады.
Бірақ барлық бөлігі емес. Жақсы дайындалған препаратта ақ қан жасушаларының ядролары қызыл-күлгін түске боялады, ал безгек паразитінің ішіндегі хроматин де сол түске енеді. Бұл кезде айналасындағы қызыл қан жасушалары қызғылт, ал цитоплазма сұр-көк болып қалады. Жасуша түрлерін бір-бірінен ажыратуға мүмкіндік беретін — осы күлгін түс.
Екі құтының ешқайсысында күлгін түс жоқ. Ол метилен көгінің белгілі бір ыдырау өнімі заттық әйнек үстінде эозинмен түйіскенде ғана пайда болады. Ал 1880-жылдары және 1890-жылдары ешкім бұл өнімнің бар екенін де, оның не екенін де білмеген. Осы түсті іздеген адамдар қоспалары бар бояғыштармен жеке-жеке жұмыс істеді және сөреде екі ай тұрған құтының ішінде не бар екенін сенімді анықтай алмады.
Сондықтан тақырыптағы сұраққа негіздеуге болатын бірнеше жауап бар және 2011 жылы оның жауабы өзгерді.
Қоспамен бірге өзгерген көрініс
Бұл бояу әдісі бір сәтте ойлап табылған жоқ. Ол біртіндеп қалыптасты. Қоспадағы әр өзгеріс көзге көрінетін дәл бір жаңа мәлімет қосты. Тарихты түсінудің ең айқын жолы — сол мәліметтердің пайда болу ретін қарастыру.
| Жыл | Ыдыста не болды | Нені көруге болатын еді |
|---|---|---|
| 1865 | Пикрин қышқылы — қанға қолданылған алғашқы синтетикалық бояғыш; оны Вильгельм Эрб қолданды | Кейбір қызыл қан жасушаларының ішіндегі шілтер тәрізді өрнек. |
| 1876 | BASF-та Генрих Каро мен Адольф фон Байер жасаған метилен көгі | Роберт Кохтың қолында — туберкулез таяқшалары. Қан жасушалары бір ғана көк реңкте көрінді. |
| 1880 | Метилен көгі мен қышқыл фуксин, Эрлихтің бейтарап бояуы | Қызыл қан жасушалары мен эозинофил түйіршіктері қызыл, ядролар қою көк, лимфоцит цитоплазмасы ашық көк болды; екі бояғышты да сіңірген түйіршіктер қою күлгін түске боялды. Жасушаның нейтрофил деп аталуының себебі осы. Ақ қан жасушаларын түрлері бойынша алғаш рет санау мүмкін болды. |
| 1888 | Метилен көгі мен эозин. Чеслав Хенцинский | Паразиттің өзі: көк түсті түймедақ тәрізді пішіндер (Plasmodium malariae) және орақ тәрізді пішіндер (P. falciparum гаметоциттері). Оның ядросы емес. |
| 1890 | Метилен көгі көбірек, спирт азырақ, оған калий гидроксиді қосылған. Альберт Плен | Түстер ауқымы кеңейіп, реңктері қаныға түсті; қызыл қан жасушалары мен эозинофил түйіршіктерінің раушан-қызғылт түсі де көрінді. Бірақ әлі де тек қызыл мен көк. |
| 1890 | Эозин мен боракс арқылы сілтілендірілген метилен көгі. Эрнст Малаховский | Паразит ішіндегі қызыл-күлгін хроматин, цитоплазмадан ажыратылатын ядро. Әдейі алынған және оның айтуынша, қайталап алуға болатын нәтиже. |
| 1891 | Эозин мен екі айдан астам тұрған, көгерген құтыдағы метилен көгі. Дмитрий Романовский | Дәл сол күлгін түс, бірақ бір рет қана; басқалар қайталай алмаған әдіспен алынған. |
| 1898 жылдан 1902 жылға дейін | Хлороформмен экстракцияланған полихромды бояғыш (Нохт); метанол (Дженнер); тұнбаны спиртте қайта еріту (Лейшман, Рейтер, Райт); глицерин қосылған, мөлшері өлшенген бояғыштар (Гимза) | Күлгін түсті қажет кезде алу және басқа зертханада да бірдей нәтиже беретін өнім. Полихромданған бояғышсыз Дженнер нұсқасы күлгін түс бермеді. |
| 1940 жылдан 1943 жылға дейін | Лилли, Роу және Уилкокс компоненттерді бөліп алып, әрқайсысын жеке сынады | Күлгін түсті қоспаның өзі емес, оның Azure B компоненті тудырады. |
Соңғы бағандағы заңдылық маңызды. Әр жетістік түстер ауқымын кеңейтті, ал әр кеңею тағы бір құрылымды көруге мүмкіндік берді. Күлгін түс — әдісті әсемдеу үшін қосылған нәрсе емес; ол паразиттің бар екенін көру мен оның неден тұратынын көрудің арасындағы айырмашылық. Бояғыштың BASF бояу зауытынан медицинаға дейінгі жолы — өз құжаттары бар ұзағырақ тарих. Жоғарыдағы толық тізбек, әр тармақтың дереккөзімен бірге, дереккөздерге сілтемелері бар үлес қосушылар хронологиясында сақталған.
Сурет: сол алты қоспа ыдыста не болғанын және одан қандай нәтиже шыққанын көрсететін түрде берілген. Шеңберлер бояғыштарды, ал астындағы блоктар сол бояғыштардың қан жағындысында бере алатын түстерін көрсетеді. 1890 жылға дейін қызыл-күлгін блок жоқ, ал одан кейінгі нұсқалардың ешқайсысында ол түсіп қалмаған.
Бораксты әдейі қолданған адам
Эрнст Малаховский Бреслауда, қазіргі Вроцлавта, дәрігер болған. Ол бүкіл еңбек жолында жеке дәрігерлік тәжірибемен және әріптесімен бірге басқарған шағын клиникада жұмыс істеп, зертханалық істермен бос уақытында айналысқан. Ол 1857 жылғы 12 наурызда Стшельнода дүниеге келген, Бреслау университетінде медицина оқыған және 1882 жылдан 1887 жылға дейін сол кездегі Германияның екінші ірі ауруханасы — Барлық Әулиелер ауруханасының ішкі аурулар бөлімінде ассистент болып жұмыс істеген.
Ол 1888 жылы Хенцинский мен Пленнің қос бояу әдісінен бастады. 1889 жылы дайындалған бір препаратта плазмодий ядросының хроматині цитоплазмадан өзгеше боялғанын көрді, бірақ кейін бұл нәтижені қайталай алмады. Метилен көгін қышқылдандырып көрді — жағдай нашарлады. Боракспен сілтілендіріп көрді — бұл әр жолы нәтиже берді. Ол әдісті 1890 жылғы 15 маусымда көпшілікке көрсетті, ал 1891 жылғы тамызда бораксты қолдану нұсқаулығын қоса отырып, толығырақ сипаттамасын жариялады. Бояу жиырма төрт сағатқа созылатынын және нәтижелерді оңай қайталауға болатынын атап өтті.
Диагностикалық зертхана үшін жиырма төрт сағат — ұзақ уақыт. Оның мақаласында паразит ядросының күлгін-қызыл түсіне де ерекше назар аударылмаған. Себебі қандай болса да, Нохт 1898 жылы оны қайта қолданғанға дейін ешкім метилен көгін әдейі сілтілендіру әдісін жалғастырмады. Малаховский қан бояу туралы бұдан кейін ештеңе жазған жоқ.
Жақын уақытқа дейін ол туралы мәліметтің аз болуы жұмбақтан емес, мұрағат жағдайынан туындады. Медициналық әдебиетте оның өмірінің ізі дерлік сақталмаған, ал сақталған деректер бір ғана жолмен жеткен. Қызы Мари 1939 жылы Германиядан Лондонға кетіп, Британ армиясында қызмет атқарған, кейін Канадаға қоныстанған. Оның отбасылық құжаттар жинағы ақырында Нью-Йорктегі Лео Бек институтына түскен. Оның ағасы Лео Бірінші дүниежүзілік соғыста қаза тапқан. Әпкесі Ева 1942 жылғы сәуірде Бреслаудан Избица транзиттік лагеріне жер аударылып, қайтып оралмаған. Анасы Хедвиг дәл сондай жер аударуды күтпей, 1942 жылғы 22 сәуірде өз өмірін қиған. Малаховскийдің өзі мұның бәріне дейін, 1934 жылы қайтыс болған.
Осылай аяқталған отбасы тарихына сілтеме жасауды да доғарады. Малаховскийді бояу әдісінің даму тарихына қайта енгізген екі мақала да 2011 жылы жарық көрді. Олар Познань мен Вроцлавтағы мұрағат құжаттары және Нью-Йорктегі Маридің қағаздары негізінде дайындалды.
Көгерген құты және жолы болған орыс зерттеушісі
Дмитрий Романовский Санкт-Петербургтегі Әскери-медицина академиясында медицина оқып, еңбек жолының басым бөлігін безгекті зерттеуге арнаған. 1890 жылы ол қағаз жүзінде Хенцинский әдісімен бірдей дерлік әдісті жариялады: өзгертілмеген метилен көгі мен эозин, тек эозині сәл көбірек.
1891 жылғы қыркүйекте ол өз атын танытқан әдісті жариялады, ал шешуші жайт нұсқаулықтың арасында елеусіз қалған еді. Ең жақсы нәтижені оған қорда тұрған метилен ерітіндісі, яғни екі айдан астам тұрып, бетіне зең өскен метилен көгінің ерітіндісі берген. Зең мен ұзақ тұру уақыты бояғышты ішінара деметилдендірген. Романовский мұны білмеді және басқара алмады, ал оның әдісін сынаған басқа зерттеушілер күлгін түсті ала алмады. Оның диссертациясы Санкт-Петербургте 1891 жылғы маусымда тапсырылғандықтан, қалыптасқан баяндауда жаңалық ашылған жыл ретінде 1891 жыл алынады.
Малаховский әдісін 1890 жылғы маусымда, бір жылдан астам уақыт бұрын көрсеткен және оның әдісі кездейсоқ емес, әдейі нәтиже берген.
Неліктен әдіс басқа адамның атымен аталды
Малаховскийдің басымдығын негіздейтін дәлелдерді Кристин Крафтс, Эрнст Хемпельман және Барбара Олексын жинақтаған. Олар төрт нәрсеге сүйенеді. Біріншісі — көпшілікке көрсету күні: 1890 жылғы маусым мен 1891 жылғы қыркүйек. Екіншісі — әдейі және кездейсоқ сәттілікпен деген сөздердің айырмасы. Үшіншісі — Малаховский бораксты қоса алғанда, әдісін толық жариялаған, ал Романовскийдің әдісі бақыланбайтын айнымалыға тәуелді болған. Төртіншісі — плазмодий ядросының сипаттамасы оны айқындаған күлгін түспен бірге әдебиеттен жеті жылға жуық жоғалып кеткен, өйткені кездейсоқ алынған нұсқаны ешкім қайталай алмаған.
Олардың қорытындысы анық айтылған. Өмірбаяндық мақалада олар авторлықтың осылай берілуін «әділетсіз бұрмалау» деп атайды және 1978 жылы «бәлкім, бұл бояулар тобын Малаховский бояулары деп атауымыз керек» деп жазған Ральф Лиллиден дәйексөз келтіреді.
Біріншілікке қатысты тұжырымдар әдетте даулы болады, бұл тұжырым да солай. Дауды шешкеннен гөрі, оның мәнін түсіндірген жөн. Біріншілік туралы пікірталас алдымен жаңалықтың нақты не болғанын анықтауы керек. Егер жаңалық күлгін түс болса, Малаховскийдің оны ертерек көрсеткені құжатталған. Егер жаңалық жарияланған әдіс болса, екеуі де 1891 жылы жариялаған, ал әдіске Романовскийдің аты берілген. Егер жаңалық түсіндірме болса, екеуі де оған үміткер бола алмайды: екеуі де бояғыштың жетілуі деметилдену екенін білмеген және түстің неліктен пайда болатынын түсіндіре алмаған. Көпшілікке арналған баяндаулар көбіне осы соңғы жайтты аттап өтеді. Белсенді компонент ешкім анықтамаған қоспа еді. Түсті алғаш әдейі алған адам бұған рецепттің не істейтінін түсіну арқылы емес, қайталауға болатын эмпирикалық рецепт арқылы қол жеткізген.
2011 жылғы екі мақала — Малаховскийдің басымдығын негіздейтін дәлелдердің жарияланған ең толық баяны. Екеуін де PubMed арқылы тегін оқуға болады: кең шолу — PMID 21235291, өмірбаяндық мақала — PMID 21660627. Шолудың PubMed жазбасында сол журналда сол жылдың кейінгі бөлігінде 86(5):366 бетінде жарияланған түсініктеме де көрсетілген. Бұл тұжырым жарық көрген бойда-ақ баспасөзде талас тудырғанын еске салады.
Бұл дау химияға қатысты келіспеушілік емес. Қатысушылардың бәрі күлгін түстің не екені және оны қандай компоненттер тудыратыны жөнінде келіседі. Келіспеушілік оған кім бірінші жеткеніне және ешкім қайталай алмаған кездейсоқ нәтижені жетістік деп санауға бола ма деген сұраққа қатысты.
Кейінгі есімдер қандай үлес қосты
Егер күлгін түсті алғаш Малаховский алған болса, неліктен бояу әдісі Романовский, Райт және Гимза есімдерімен аталады?
Өйткені оны жасаған адамның қолында бір рет қана нәтиже берген бояу әлі реагент емес. Кейінгі жұмыстар құбылмалы қоспаны басқа елдегі зертханашы кез келген сейсенбіде қолдана алатын өнімге айналдырды.
Нохт бұған пайымдау арқылы жетті. Қарапайым бейтарап бояғыштан тұрақты нәтиже ала алмаған соң, ол күлгін түс метилен көгінің ішіндегі, бірақ метилен көгінің өзі емес басқа заттан туындауы керек деген қорытындыға келіп, соны іздеді. Унна бұған дейін ескірген метилен көгі ерітінділері мес жасушаларының түйіршіктерін қызыл түске бояйтынын байқаған және бояғыш жетілген сайын жаңа зат түзіледі деп болжаған. Бернтсен 1885 жылы сілтілі ортада метилен көгінен метил топтары ажырайтынын және сол өнімдер қазір азурлар деп аталатынын көрсеткен. Нохт белсенді фракцияны хлороформмен экстракциялап, оны тек метилен көгінен алынған қызыл деп атай алды; Михаэлис 1901 жылы оған азур I атауын берді. Дженнер қолдану мен сақтаудың практикалық мәселесін шешті. Метилен көгі мен эозин тұнбасын абсолютті метанолда қайта еріту жағындыны бояумен қатар бекітетін біртұтас тұрақты ерітінді берді және қыздырып бекітуді қажетсіз етті. Лейшман мен Рейтер полихромданған бояғышты спирттік еріткішпен біріктіріп, тұрақтылық пен күлгін түсті қатар алды. Райт 65 °C-та он екі сағат инкубациялау мен он күн тұрудың орнына ағынды буда бір сағат өңдеуді енгізді. Гимза кездейсоқ жетілген ерітіндіге сүйенуді мүлде доғарды: өнім тропиктік ыстыққа төзуі үшін белгілі бояғыштардың өлшенген мөлшерін метанолдағы глицеринмен қолданды. Ол таза метилен азурын қалай жасағанын ешқашан жарияламады. Оны Лейпцигтегі доктор Грюблердің зертханасына сатты; зертхана өнімді азур I деген атпен нарыққа шығарып, тек өз нұсқасын ғана түпнұсқа Гимза бояуы деп мәлімдеді.
Бұл азурдың нақты құрамы туралы пікірталас әлі жалғасуда. Біреулер оны жай ғана полихромданған метилен көгі деп санайды, басқалар оның құрамында Azure B көп болған дейді. Жауап соғыс кезінде табылды. Неміс бояғыштарын алу мүмкін болмай қалған кезде, Америка Құрама Штаттарының Қоғамдық денсаулық сақтау қызметінің тобы — Ральф Лилли, Морис Роу және Эме Уилкокс — ең жақсы бояуды үш бөлек компонент беретінін анықтады: өзгертілмеген метилен көгі, оның деметилденген ыдырау өнімі Azure B және эозин. Azure B қолжетімсіз болған азур I-дің орнын басты. Осы үш компонент бүгін де безгекті диагностикалауға қолданылатын бояудың негізін құрайды.
Бұл үш компоненттің заттық әйнекте қалай әрекеттесетінінің химиясы — бөлек сұрақ және бөлек бетте қарастырылады. Романовский типті бояулардағы бояғыштардың рөлі мен химиясы Azure B мен эозиннің әрқайсысы не істейтінін және неліктен олардың жұбы жеке-жеке бере алмайтын түсті тудыратынын түсіндіреді. Ал микроскопия және зертханалық қолдану беті практикалық жағын қамтиды: белгілі бір препарат нені көрсетеді және нақты өнімнің қолданғыңыз келетін әдіске жарамдылығын қалай бағалауға болады.
Тарихтың әлі де өзекті бөлігі
Бұл оқиғаның бір жайтынан 1902 жылдан кейін де ештеңе өзгерген жоқ. Шамамен елу жыл бойы әлемдегі стандартты безгек бояуының ең маңызды компоненті атауы жоқ қоспа болып келді. Ол кездейсоқ пайда болды, мөлшері құтыдан құтыға өзгерді, біраз уақыт оның нақты құрамы коммерциялық құпия болды, ал үлесі туралы дау 1940-жылдарға дейін жалғасты. Бояуды қолданған адамдар ұқыпсыз болған жоқ. Олардың құтыда не бар екенін білуге мүмкіндігі болмады.
Осы мәселенің қазіргі нұсқасы — материалдың тек бір бөлігін ғана сипаттайтын спецификация. USP талаптарына сәйкестік — нарық ұсынатын ең жоғары тазалыққа қол жеткізу жолы, өйткені ол бір ғана өлшем емес, толық жарияланған стандарт: сәйкестендіру, тазалық, азур бояғыштарын қоса алғанда органикалық қоспалар, қалдық еріткіштер, элементтік қоспалар, күйдіруден қалған қалдық, микробиологиялық шектер және бактериялық эндотоксиндер. Blupreme метилен көгін фармацевтикалық өндірушіден алады және толық талдау сертификатын жариялайды. Осылайша бұл тізімдегі әр тармақты жай мәлімдеме ретінде қабылдамай, тексеруге болады. Ауыр металдар бойынша бір нәтижені ғана көрсетіп, оны USP талаптарына сәйкестік деп атайтын сертификат — «жетілген метилен көгі» деген жазуы бар құтының қазіргі баламасы: ол жақсы реагент болуы мүмкін, бірақ заттаңба ішінде не бар екенін айтпайды.