Мақала
Месқарын сұйықтығына арналған метилен көгінің тотықсыздану сынағы
Жас маман қолына көк түсті сұйықтық құйылған сынауық ұстап, фермадан қоңырау шалады. Ол он минут бұрын месқарын сұйықтығына метилен көгін қосқан, бірақ көк түс әлі жоғалмаған. Ол сиырға тағы бояғыш беру керек пе деп сұрайды.
Бұл сұрақ сынақтың мәні қате түсінілгенін көрсетеді. Месқарын сұйықтығына арналған метилен көгінің тотықсыздану сынағында бояғыш жануарға емес, тек сынауыққа қосылады. Бүкіл талдау сол сынауықта өтеді. Көк түстің қаншалықты тез жоғалатынын өлшеу жануарға қандай ем қажет екенін емес, сол сынамадағы микробтардың күйін көрсетеді.
Бұл шатасуды түсінуге болады, өйткені метилен көгі ветеринарияда үш бөлек жағдайда қолданылады. Бұл мақала олардың айырмашылығын түсіндіреді және тотықсыздану уақытын pH, қарапайымдылар, сынама алу сапасы мен клиникалық белгілерді қатар ескеріп қалай бағалау керегін көрсетеді.
Сынақ нақты нені өлшейді
Метилен көгі тотыққан күйінде көк, ал тотықсызданған күйінде дерлік түссіз болады. Сау жануардан алынған жаңа месқарын сұйықтығының тотықсыздандыру қабілеті жоғары, өйткені анаэробты бактериялар жемді белсенді ашытады. Мұндай сұйықтыққа аз мөлшерде бояғыш қосқанда, бактериялардың зат алмасуы бірнеше минут ішінде түсті жояды.
Демек, жұмыс қағидасы қарапайым: белсенді анаэробты микрофлора көк түсті тез жояды, ал белсенділігі төмен немесе зақымданған микрофлора оны баяу жояды. Қысқа уақыт сол сынаманың тотықсыздандыру қабілеті жоғары екенін білдіреді. Егер сынама дұрыс алынып, дұрыс өңделсе, уақыттың ұзаруы микробтық белсенділіктің төмендегенін көрсетеді.
Бұл сынақ месқарынның тотығу-тотықсыздану потенциалын тікелей өлшемейді. Ірі қараны зерттеу әдістеріне арналған бір жұмыста тотықсыздану сынағы тікелей милливольттық өлшемдермен салыстырылған. Тотықсыздану уақыты мен өлшенген тотығу-тотықсыздану потенциалы арасында сызықтық байланыс табылмаған, сондықтан оларды бір айнымалының өзара алмастырылатын көрсеткіштері деп қарастыруға болмайды деген қорытынды жасалған. Толық салыстырудың қысқаша мазмұны PubMed сайтында берілген. Тотықсыздану сынағын арзан электрод емес, микробтар популяциясының қызметін бағалайтын талдау деп түсініңіз.
Merck/MSD нұсқаулығындағы күйіс қайыратын жануарлардың қарапайым ас қорыту бұзылысы туралы сипаттамада тотықсыздану уақытының ұзаруы месқарын pH-ының қалыптан ауытқуы және қарапайымдылар санының азаюымен бірге қарастырылады. Бір ғана көрсеткіш диагноз қоюға жеткіліксіз. Диагнозды белгілердің үйлесімі айқындайды.
Жануар жанында жүргізілетін стандартты тәртіп
Оқу орындарындағы хаттамалар аздап ерекшеленеді, сондықтан қолданған нақты көлемдер мен температураны тіркеп, нәтижелерді тек сол хаттама аясында салыстырыңыз. Кеңінен оқытылатын нұсқалардың бірі:
- Сілекейдің араласуын, ауамен жанасуды және салқындауды барынша азайтып, кемінде 10–20 mL жаңа месқарын сұйықтығын алыңыз. Сынақты кідіріссіз жүргізіңіз.
- 0.03 пайыздық метилен көгін дайындаңыз, бұл әр mL-ге 0.3 mg дегенді білдіреді.
- Сұйықтық көлемінің 5 пайызына тең мөлшерде бояғыш қосыңыз. Бұл 20 mL сұйықтыққа 1.0 mL бояғыш немесе 10 mL сұйықтыққа 0.5 mL бояғыш деген сөз. Екі жағдайда да сұйықтық пен бояғыштың арақатынасы бірдей — 20:1.
- Түсті салыстыруға арналған бақылау ретінде сол сынамадан алынған, бояғыш қосылмаған сұйықтықты екінші сынауықта сақтаңыз.
- Ақырын араластырып, таймерді бірден іске қосыңыз да, сынауықты дене температурасына жуық температурада, жергілікті хаттамаға қарай шамамен 37–39 градус Цельсийде ұстаңыз.
- Сыналатын сынауықтағы түс бақылау сынауығымен бірдей болғанға дейінгі уақытты тіркеңіз. Ауамен шектесетін бетінде жұқа көк сақина қалуы мүмкін, өйткені ондағы оттегі бояғышты қайта тотықтырады. Сол сақинаның жоғалуын күтпеңіз.
Метилен көгінің тотығу-тотықсыздану химиясы бұл жағдайда оттегінің неліктен маңызды екенін түсіндіреді. Қатты шайқау, аузы кең әрі ашық сынауық немесе ұзақ кідіріс оттегінің енуіне мүмкіндік береді, сондықтан бояғыш месқарындағы жағдайға қарағанда ұзақ уақыт көк болып қалады. Сол себепті месқарын сұйықтығын ластамай алу әдісінің егжей-тегжейлері де маңызды. Сілекей сынаманы сұйылтып, pH-ты жоғарылатады, сондықтан асқазан зондымен алған кезде көптеген клиницистер, көлем жеткілікті болса, алғашқы бөлігін төгіп тастайды.
Әртүрлі бақылаулар нені өлшейді
Тотықсыздану уақыты тек бір сұраққа жауап береді. Төмендегі месқарынды бағалау кестесі жануар жанында жасалатын әрбір бақылаудың қандай мәлімет беретінін көрсетеді. Бір ұяшықты емес, бүкіл жолды ескеріңіз.
| Бақылау | Нені өлшейді | Жануар жанында әдетте байқалатын нәтиже | Нәтижені бұрмалайтын жиі факторлар |
|---|---|---|---|
| Метилен көгінің тотықсыздану уақыты | Сынамадағы анаэробты бактериялардың функционалдық тотықсыздандыру белсенділігі | Ірі қарада көбіне 2–6 минут; қой мен ешкіде жиі жылдамырақ, белсенділіктің жеткіліктілігін бағалауда 6 минут тәжірибелік шек ретінде қолданылады, ал 10 минуттан асатын уақыт айқын қалыптан ауытқу болып саналады | Суық, кешіктірілген, ауамен қаныққан немесе сілекеймен сұйылған сынама; ұзақ уақыт жем жемегеннен кейін субстраттың аз болуы; ауыз арқылы берілетін микробқа қарсы препараттар; бояғыш арақатынасы немесе температурасы әртүрлі сынақтарды салыстыру |
| Месқарын pH-ы | Химиялық орта, қышқылдық немесе сілтілік жүктеме | Ірі азықпен қоректенетін ірі қарада көбіне 6.0–7.2 шамасында; ұсақ күйіс қайыратын жануарлар туралы әдебиетте жиі шамамен 6.5–7.5 көрсетіледі; рацион мен азықтандырғаннан кейін өткен уақыт мәнді өзгертеді | Асқазан зондымен алынған сынамаларға сілекейдің араласуы pH-ты жоғарылатады; сынама алынғаннан кейін көмірқышқыл газының жоғалуы; дәнді азық pH-ты төмендетеді |
| Қарапайымдылардың саны мен қозғалысы | Кірпікшелілер популяциясының, әсіресе өзгерістерге сезімтал ірі түрлерінің сақталуы | Жылы, жаңа тамшыда әртүрлі көлемдегі көптеген ағзалар белсенді әрі бағытталған қозғалыс жасайды | Салқындау қозғалысты баяулатады; ауыр ацидоз қарапайымдыларды жойып жіберуі мүмкін; кідіріс қалыпты сынамадағы ағзалардың қозғалысын баяу етіп көрсетеді |
| Иісі, түсі және консистенциясы | Ашу үдерісінің сипаты мен ластану | Аздап хош иісті, жасылдау қоңыр, сәл тұтқыр сұйықтық | Ауыр дисбиоз кезіндегі шірік немесе қышқыл иіс; дұрыс алынбағаннан кейінгі сулы немесе сілекейі көп сұйықтық |
| Месқарынның жиырылуы және тәбет | Тұтас жануар деңгейіндегі алдыңғы қарындардың қызметі мен азық қабылдауы | Сергек жануарда тұрақты жиырылу және бірқалыпты күйіс қайыру | Рационның жақында өзгеруі, ауырсыну, сусыздану, жүйелік ауру |
Негізгі ой осы кестеде. Тотықсыздану уақытының ұзаруы, қарапайымдылар қозғалысының баяулауы, pH-тың қалыптан ауытқуы және әлсіз жиырылулар бірге байқалса, бұл микробтық белсенділіктің шынымен төмендегенін көрсетеді. Ал сергек, күйіс қайырып тұрған, қарапайымдылары белсенді жануарда тек уақыттың ұзаруы байқалса, мәселе месқарында емес, сынамада болуы ықтимал. Әрекет етпес бұрын сынаманы қайта алыңыз.
Уақытты pH және анамнезбен бірге бағалау
Бастапқы деңгейді рацион анықтайды. Концентраттарға бай рацион тез ашиды және бояғыш түсін шамамен бір минутта жоюы мүмкін, ал пішен рационында, тіпті сау жануарларда да, бірнеше минут қажет болуы мүмкін. Сондықтан қысқа уақыттың өзі денсаулықтың жақсырақ екенін дәлелдемейді. Ол ашуға бейім субстраттың белсенді микробтармен әрекеттескенін көрсетеді.
Дәнді азықпен ауыр артық жүктелу бұл қарапайым үрдісті бұзады. Алғашқы кезеңде көмірсулардың ашуы қарқынды болуы мүмкін, содан кейін қышқылдың зақымдаушы әсері қалыпты микрофлора мен қарапайымдыларды тежеп, тотықсыздану уақытын ұзартады. Сол себепті оқытуда қолданылатын бір ереже бойынша, месқарын pH-ы шамамен 5.5-тен төмен болса, сынақ нәтижесі жарамсыз деп саналады. Бұл кезде сыналатын микрофлораның құрамы өзгерген болады.
Белгілер үйлесімін бағалауға арналған тәжірибелік нұсқаулық:
- Қалыпты pH және шамамен 6 минут ішінде тотықсыздану микрофлораның функционалдық тұрғыдан белсенді екенін көрсетеді.
- Қалыпты pH және тотықсыздану уақытының айқын ұзаруы жем жемегендіктен, микробқа қарсы препараттың әсерінен немесе сынама сапасының бұзылуынан болған белсенділік төмендеуін меңзейді.
- Жоғары pH және тотықсызданудың ұзаруы көбіне субстрат азайған ұзақ жем жемеуден кейін байқалады, бірақ зонд арқылы алынған сынамаға сілекей араласуын да ескеріңіз.
- Төмен pH және қарапайымдылар белсенділігінің төмендеуі көмірсуларға байланысты дисбиозға күдік туғызады. Бұл жерде месқарын pH-ын түсіндіру жөніндегі нұсқаулық көмектеседі. 5.5-тен төмен мәндер жануардың жалпы күйінің бәсеңдеуімен қатар байқалса, бұл қарапайым ас қорыту бұзылысынан гөрі дәнді азықпен артық жүктелу мен ауыр ацидозды меңзейді.
Жақында ауыз арқылы берілген тетрациклиндерді, азықтағы ионофорларды, ұзақ қолданылған жүйелік микробқа қарсы препараттарды, рационның күрт өзгеруін, жем жемеу ұзақтығын және су ішу мөлшерін әрдайым тіркеңіз. MSD нұсқаулығы ауыз арқылы берілетін тетрациклиндер месқарын микрофлорасын едәуір тежеуі мүмкін екенін арнайы ескертеді. Ионофорлар бактериялар популяциясын мақсатты түрде өзгертеді. Мұндай анамнезсіз ұзарған уақытты түсіндіру мүмкін емес.
Сынама алу сапасына да соншалықты мән беру керек. Бақыланатын зерттеуде бір жануарлардан асқазан зондымен алынған сынамаларда канюла арқылы алынған сынамаларға қарағанда pH жоғары, ал ұшпа май қышқылдарының мөлшері төмен болған; мұның негізгі себебі — сілекей. Сынама алынғаннан кейін 60 минут өткенде тексерілген барлық көлемдерде тотықсыздану уақыты едәуір ұзарған, ең көп өзгеріс шағын сынамаларда байқалған. Кемінде 10 mL алыңыз, 30 минут ішінде тексеріңіз, тотықсыздану сынағын алғашқы кезекте жүргізіңіз, сынаманы жылы ұстаңыз және ауамен жанасуын барынша азайтыңыз.
Шатастыруға болмайтын үш қолданылу жағдайы
Бояғыш бірдей, ал жүйелер үшеу.
Біріншісі — осында сипатталған месқарын сұйықтығының талдауы. Зерттеу материалы — алынған месқарын сұйықтығы. Бояғыш in vitro жағдайында 0.03 пайыздық түрде қосылады. Соңғы көрсеткіш — түссізденуге дейінгі уақыт. Мақсаты — микробтардың тотықсыздандыру белсенділігін бағалау.
Екіншісі — тірі күйіс қайыратын жануарға метилен көгін беру. Қалыптасқан мысал — метгемоглобинемиямен қатар жүретін нитрат немесе нитрит токсикозында көктамырішілік ем; мұнда препарат гемоглобиннің қызметін қалпына келтіреді. Дозаға, препарат түріне, қалдықтарға және өнімді пайдалануға дейінгі күту мерзіміне қатысты ережелер қолданылады. Бұл шешімнің сынауықтағы уақытты өлшеуге еш қатысы жоқ. Егер нақты бір рәсімде бояғыш in vivo маркері ретінде қолданылса, негізгі қағида месқарын микробтарының оны қаншалықты тез тотықсыздандыратыны емес, бояғыштың қайда таралатыны болады.
Үшіншісі — сүттің тотықсыздану сынағы. Зерттеу материалы — сүт. Бояғыш сүт сынамасына қосылады. Көк түстің тез жоғалуы әдетте микробтық белсенділіктің жоғары және сақтау сапасының төмен екенін көрсетеді, ал баяу тотықсыздану сапаның жақсырақ екенін білдіреді. Бұл месқарын медицинасына емес, тағам микробиологиясына және сүт сапасын тексеруге жатады әрі бактерия санын есептеу әдісі емес.
Атауларды нақты ажырату қатені болдырмайды: месқарын сұйықтығының тотықсыздану уақыты, метилен көгін жүйелік ем немесе маркер ретінде қолдану және сүттің тотықсыздану сынағы. Қауіпсіздік ережесін бір сөйлеммен айтуға болады. Месқарын талдауына арналған бояғыш зертханалық сынауықта қалады, ал сол сынауық кейін жойылады. Сынақты орындау үшін бояғыш ешқашан жануарға берілмейді.
Фермадан келген қоңырауға арналған қысқа ереже
Бояғышты 0.03 пайыздық концентрацияда және бояғыштың 1 бөлігіне сұйықтықтың 20 бөлігі қатынасында стандарттаңыз, жаңа сұйықтықты дене температурасына жуық жағдайда бояғыш қосылмаған бақылаумен салыстырып тексеріңіз, ал минуттарды pH, қарапайымдылардың қозғалысы, сынама алу сапасы, рацион, препараттар, жиырылулар, тәбет, нәжіс және ағзаның сумен қамтамасыз етілу күйімен бірге бағалаңыз. Жеке алынған сан ешқашан ас қорыту бұзылысына диагноз қоймайды. Диагнозды өзара үйлесетін белгілер жиынтығы айқындайды.