Artikel
Maca tampilan E. coli lan koloni liyane ing agar EMB
Sawijining siswa nggoresake sampel sing durung dingerteni menyang agar eosin biru metilena, nginkubasi sewengi, banjur bali lan nemokake cawan isi koloni peteng kanthi kilap ijo. Cathetan ing buku tulise muni "E. coli, wis dikonfirmasi." Cathetan kuwi nyatakake luwih akeh tinimbang sing bisa didhukung dening cawan kasebut. Cawan nuduhake fenotipe pertumbuhan lan fermentasi ing kahanan tartamtu. Identitas spesies iku pratelan kapisah sing mbutuhake bukti kapisah.
Pandhuan iki nganggep asil agar EMB minangka tugas interpretasi. Pandhuan iki nerangake gagasan dhasare, nuntun pamaca liwat atlas ilustrasi cawan kanthi kontrol, lan nyebutake kahanan nalika gambaran ing buku ajar bisa nyasarke.
Gagasan ing mburi cawan
Agar EMB nduweni sipat selektif lan diferensial. Zat warna eosin Y lan biru metilena nyandhet akeh organisme Gram positif, mula medium iki luwih nyengkuyung pertumbuhan Gram negatif. Zat warna sing padha uga tumindak minangka indikator: nalika organisme ngfermentasi gula sing kasedhiya lan ngasilake cukup asam ing wilayah sakupenge, koloni nyerep akeh zat warna lan dadi wungu peteng nganti biru ireng. Nalika produksi asam kuwat, lumahing koloni bisa nuduhake kilap metalik ijo sing owah miturut sudut pandeleng. Protokol ASM kanggo cawan agar eosin biru metilena njlentrehake gabungan seleksi lan diferensiasi iki lan nyedhiyakake foto rujukan kanggo piwulangan.
Ana siji rincian sing penting sadurunge maca asil apa wae: priksa formulasi sing digunakake. Formulasi Holt Harris Teague sing luwih lawas ngemot laktosa lan sukrosa, dene Levine EMB mung ngemot laktosa. Organisme sing ngfermentasi sukrosa nanging ora laktosa, kayata akeh isolat Serratia marcescens, bisa katon beda ing rong versi kasebut. Dokumentasi pabrikan kanggo medium EMB nyatakake bedane formulasi iki kanthi cetha. Catheten pabrikan lan formulasi ing buku cathetan bebarengan karo asile.
Agar EMB sing wis disiapake nanging durung diinokulasi biasane nduweni warna abang coklat nganti wungu semu abang, kadhangkala kanthi semburat ijo utawa endhepan alus. Warna latar kasebut dudu pertumbuhan. Bandhingake saben asil pangamatan karo cawan sing durung diinokulasi utawa kondisi dhasar sing wis didokumentasikake, lan wacanen cawan utama sawise kira-kira 18 nganti 24 jam inkubasi aerobik ing 35 nganti 37 C, kajaba protokol piwulangan nemtokake liya. Inkubasi sing luwih suwe bisa ngowahi tampilan fermentasi.
Cara ngamati cawan
Gunakna rong jinis cahya. Pisanan, priksa cawan ing cahya pantulan utawa cahya miring lan miringake cawane: kilap metalik owah miturut sudut pandeleng lan bisa katon utawa ilang nalika sudute ganti. Banjur priksa nganggo cahya sing nembus cawan kanggo ngevaluasi warna koloni lan bagean tengah sing peteng. Gunakna koloni sing kapisah kanthi apik, amarga koloni sing sesek lan koloni ing sacedhake ngowahi akumulasi asam lokal lan bisa nyuda utawa nguwatake warna. Kumpulan gambar ASM nuduhake iki kanthi langsung: E. coli ing kultur campuran bisa kelangan kilap sing dikarepake amarga organisme ing sakupenge ngowahi lingkungan asam.
Lebokna kontrol saben latihan ngidini. Set sing umum kanggo piwulangan yaiku E. coli ATCC 25922 kanggo fenotipe biru ireng lan kilap metalik, nonfermenter kayata Salmonella Typhimurium ATCC 14028 utawa Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 kanggo fenotipe tanpa warna, lan organisme Gram positif kayata Enterococcus faecalis utawa Staphylococcus aureus minangka kontrol inhibisi, kaya sing kacathet ing tabel QC standar kanggo medium EMB. Yen kontrol positif ora nuduhake kilap, curiga marang inkubasi, koloni sing sesek, utawa formulasi luwih dhisik sadurunge curiga marang sampel sing durung dingerteni.
Atlas ilustrasi cawan
Cawan ing ngisor iki arupa ilustrasi sing digawe, dudu foto kultur nyata. Ilustrasi iki nuduhake pola sing kudu digoleki, dudu nuansa warna sing persis saka galur tartamtu. Bandhingake karo foto rujukan ASM lan cawan nyata saka laboratorium piwulangan.
Cawan 1: Escherichia coli ing agar EMB, fermenter laktosa sing kuwat
E. coli ing agar EMB biasane wungu peteng nganti biru ireng, asring kanthi bagean tengah peteng lan kilap metalik ijo saka produksi asam sing kuwat. Kilap iki minangka tandha kondhang sing digoleki siswa, nanging anggepen minangka bukti panyengkuyung, dudu definisi. Kakuwatan kilap beda-beda miturut galur, wektu inkubasi, kapadhetan koloni, lan sudut pandeleng. Ora anane kilap ora nyingkirake kemungkinan E. coli, lan koloni peteng tanpa kilap bisa nuduhake sawetara fermenter liyane. Pilihen koloni sing kapisah kanthi apik kanggo pakaryan tindak lanjut, tinimbang maca saka bagean sing koloni-kolonine sesek.
Cawan 2: Klebsiella pneumoniae ing agar EMB, fermenter mukoid
Klebsiella pneumoniae ing agar EMB biasane mbentuk koloni gedhe, mengkilap, lan mukoid kanthi warna jambon wungu nganti coklat wungu, asring kanthi bagean tengah peteng nanging biasane tanpa kilap metalik sing kuwat. Morfologi sing padha uga ana ing fermenter sing gegayutan kayata Enterobacter. Tekstur mukoid lan ukuran koloni kalebu bagean saka pangamatan: koloni jambon sing cilik lan rata nduweni bobot interpretasi sing beda karo koloni mukoid gedhe sing wujude kaya kubah. Kaya E. coli, cawan iki menehi pitunjuk babagan fenotipe fermentasi, lan panetepan jeneng ing tingkat spesies mbutuhake konfirmasi biokimia sing diterangake ing ngisor iki.
Cawan 3: Salmonella ing agar EMB lan nonfermenter liyane, koloni tanpa warna
Salmonella ing agar EMB lan organisme liyane sing ora ngfermentasi laktosa, kalebu Shigella lan akeh isolat Pseudomonas, biasane tuwuh minangka koloni tanpa warna nganti tembus cahya utawa warna amber pucet. Sawetara formulasi lan kahanan menehi semburat jambon tipis, mula koloni jambon pucet ora kanthi otomatis ateges fermenter. EMB ora mbedakake Salmonella saka Shigella utawa saka nonfermenter liyane; pambedaan kasebut dadi tugas tes sabanjure. Elinga uga yen galur Salmonella positif laktosa kanthi koloni metalik kaya E. coli wis didokumentasikake, lan iki dadi alesan maneh manawa siji cawan ora bisa ngrampungake panetepan identitas.
Cawan 4: Serratia marcescens lan jebakan formulasi
Serratia marcescens entuk bagean dhewe amarga siswa asring ngarepake koloni abang lan banjur salah maca cawan. Umume isolat klinis ora ngfermentasi laktosa, mula ing Levine EMB biasane katon pucet nganti mung rada ana warnane. Amarga akeh isolat ngfermentasi sukrosa, formulasi sing ngemot sukrosa bisa menehi reaksi sing luwih peteng utawa luwih gegayutan karo asam. Uga aja ngarepake pigmen abang prodigiosin sing khas ing 35 nganti 37 C; produksi pigmen ora bisa diandelake ing suhu inkubator. Nalika protokol nyebut Serratia marcescens ing agar EMB, priksa formulasi endi sing dadi dhasar pratelan kasebut. Tinjauan metabolisme Serratia ngringkes pola laktosa negatif lan sukrosa sing beda-beda sing njalari jebakan iki.
Cawan 5: kontrol lan organisme sing kasandhet
Organisme Gram positif kayata Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus, lan Bacillus umume kasandhet utawa pertumbuhane ditekan banget ing agar EMB, sanajan inhibisi ora mutlak kanggo saben galur. Panel kontrol ndadekake interpretasi luwih jujur: kontrol E. coli kudune nuduhake pertumbuhan sing apik kanthi warna biru ireng lan kilap, kontrol nonfermenter kudune nuduhake pertumbuhan tanpa warna, lan kontrol inhibisi kudune nuduhake pertumbuhan sithik utawa ora ana babar pisan. Yen kontrol inhibisi tuwuh kanthi apik, tahap selektif gagal lan kabeh asil pangamatan liyane saka batch kasebut kudu diragokake. Cara pewarnaan mangsuli pitakon sing beda karo medium kultur; kanggo pewarnaan preparat ing laboratorium, delengen atlas pewarnaan biru metilena.
Perbandhingan kanthi wates sing cetha
| Pangamatan ing agar EMB | Makna sing mungkin | Bab sing ora bisa dipesthekake |
|---|---|---|
| Koloni biru ireng peteng kanthi kilap ijo ing cahya miring | Fermentasi kuwat, E. coli minangka kandidat utama | Identitas spesies; fermenter kuwat liyane bisa nuduhake kilap |
| Koloni mukoid gedhe warna jambon wungu, tanpa kilap | Fermenter kanthi ciri kapsul, Klebsiella minangka kandidat | Klebsiella pneumoniae kanthi spesifik; Enterobacter katon padha |
| Koloni tanpa warna utawa tembus cahya | Organisme sing ora ngfermentasi laktosa, contone Salmonella, Shigella, Pseudomonas | Nonfermenter endi; mbedakake Salmonella lan Shigella mbutuhake tes liyane |
| Koloni pucet nalika sing dikarepake abang | Bisa uga Serratia ing EMB sing mung ngemot laktosa ing 37 C | Ora anane Serratia; priksa formulasi lan suhu |
| Ora ana pertumbuhan utawa koloni cilik banget sing kasandhet | Bisa uga inhibisi Gram positif | Sterilitas utawa identitas; sawetara galur bisa lolos saka inhibisi |
Telung ukara ngringkes tampilan sing nyasarke iki. Peteng ora ateges E. coli, amarga Klebsiella, Enterobacter, lan fermenter liyane mbentuk bagean tengah peteng tanpa kilap. Jambon ora ateges Klebsiella, amarga fermenter kanthi aktivitas sedheng utawa alon lan sawetara organisme sing dianggep nonfermenter katon jambon utawa wungu lavender. Kilap ora ateges E. coli wis dipesthekake, amarga fermenter kuwat liyane bisa ngasilake kilap kasebut. Protokol piwulangan lan gambar kultur campurane nggambarake saben kekeliruan iki.
Wates konfirmasi
Agar EMB nuduhake fenotipe, dudu spesies. Organisme sing beda bisa nduweni tampilan koloni sing padha, lan siji organisme bisa nyimpang saka gambaran ing buku ajar amarga galur, umur, koloni sing sesek, formulasi, lan inkubasi. Mula alur kerja piwulangan lan klinis nganggep morfologi EMB minangka pitunjuk sauntara.
Alur kerja siswa sing bisa dipertanggungjawabake yaiku: jlentrehna koloni sing kapisah (ukuran, warna, bagean tengah, kilap ing cahya miring, sipat mukoid), catheten formulasi, wektu lan suhu inkubasi, lan kontrol; banjur subkultur koloni sing kapisah kanthi apik nganti entuk kultur murni sadurunge tes konfirmasi apa wae. Tindak lanjut sing umum kalebu pewarnaan Gram lan reaksi IMViC kanggo identifikasi sauntara E. coli lan koliform, TSI utawa KIA lan panel biokimia khusus organisme kanggo organisme enterik, kanthi identifikasi serologis, MALDI TOF, utawa cara liyane sing wis divalidasi yen tugas kasebut mbutuhake. Kanggo latar mburi babagan panggonane EMB ing antarane medium enterik selektif lan diferensial, delengen pambuka medium kultur enterik lan tindak lanjut pewarnaan Gram. Kanggo pitakon sing gegayutan babagan apa sing bisa lan ora bisa dibuktekake dening pewarnaan biru ing preparat, atlas pewarnaan biru metilena uga misahake pangamatan lan kesimpulan kanthi prinsip sing padha.
Tulisen pangamatan sadurunge kesimpulan. "Koloni biru ireng peteng kanthi kilap ijo sing gumantung marang sudut pandeleng ing Levine EMB ing 24 jam, cocog karo fermentasi laktosa sing kuwat" bisa dipertanggungjawabake. "E. coli, wis dikonfirmasi" mbutuhake tahap konfirmasi sing ora bisa diwenehake dening cawan wae.