メチレンブルーとBartonella：研究結果と臨床エビデンスの限界

培養皿と患者は「感染」という言葉を共有していますが、同じ概念ではありません。培養皿では、感染とは寒天上のコロニー数です。患者では、細胞や血管内に存在する細菌、血液や組織を移動する薬剤、そして一部の役割を担う免疫系が関係します。この2つを混同すると、印象的な実験室の数値が治療法のように見えてしまいます。両者を分けて考えると、同じ数値は本来の意味になります。それは、次の実験を行う理由です。

この区別こそが、メチレンブルーとBartonellaに関する本レビュー全体の目的です。同一研究グループによる2つの実験室研究では、非増殖状態のBartonella henselaeに対するメチレンブルーの効果が検証されました。どちらもガラスおよびプラスチック上で強い活性を報告しました。しかし、どちらも人を対象に試験していません。

なぜ研究者は休止期を検証するのか

多くの抗菌薬試験では、増殖中の細胞が使用されます。このモデルでは、より難しいケース、つまり分裂を停止し、増殖中の仲間を殺す薬剤に耐える細胞を見逃します。

Bartonellaは体内で持続する可能性があり、赤血球や内皮細胞内にも存在します。そのため研究グループは、B. henselaeが休止期に入った後にどの承認薬がそれを殺せるかを調べました。増殖細胞に対する低いMICは、休止期細胞の殺菌効果を予測しませんでした。リファンピンは非常に低いMICを示しましたが休止細胞への効果は低く、一方でMIC値が高い化合物が高い殺菌効果を示しました。この種の論文を読む一般的な方法を知りたい読者は、メチレンブルー研究の読み方ガイドで確認できます。

最初のスクリーニング：Liら、2019年

2019年のAntibiotics掲載の休止期スクリーニングでは、Schneider培地に10％ウシ胎児血清を加え、37 C、5％CO2条件で培養した単一株B. henselae JK53を使用しました。1日培養では主に分散した分裂中の細胞でした。5日培養では、約10の8乗コロニー形成単位/mLで休止期とみなされ、目視可能な凝集体が含まれていました。

アッセイにはSYBR Green Iとヨウ化プロピジウムが使用され、生細胞とイソプロパノール処理で死滅させた細胞の混合物を基準として調整されました。メチレンブルーは強い色を持つため、陽性結果は顕微鏡観察で確認され、その後、より厳格な評価基準である血液寒天上のコロニーカウントで確認されました。

50マイクロモル濃度で1,581種類の承認薬を調べた結果、メチレンブルーではプレートリーダー測定で16％、顕微鏡測定で25％の生存率が残りました。ダプトマイシンは21％、複数のアゾール系薬剤は22〜27％、ゲンタマイシンは32％、エリスロマイシンは66％、シプロフロキサシンは74％でした。ピルビニウムパモエートはリーダー測定ではより強い結果を示しましたが、固有の蛍光のため顕微鏡では評価できませんでした。

増殖中のB. henselaeに対するメチレンブルーのMICは0.08〜0.16マイクログラム/mLでした。5日間休止状態にした細胞に対し、5マイクログラム/mLで1日曝露すると、コロニー数は検出不能なレベルまで低下し、試験濃度におけるダプトマイシンおよびピルビニウムパモエートと同等でした。別の時間経過試験では10マイクログラム/mLが使用されました。これらは実験室での曝露濃度であり、用量ではありません。論文でもそのように記載されています。論文内で引用されたヒトの最高血漿濃度約3.9マイクログラム/mLは、背景情報としてのみ示されています。メチレンブルーの薬物動態概要では、血漿中の数値を組織内の数値として解釈できない理由を説明しています。

論文では2つの限界が明示されています。バイオフィルムモデルはなく、メチレンブルーの併用試験もありませんでした。5日間培養された凝集体は、休止状態の液体培養中の集合体であり、検証済みのバイオフィルム実験ではありません。著者らは、動物試験、併用研究、バイオフィルム研究、および他のBartonella種での検証を求めました。

（本文続きは元の翻訳本文と同一）