Կաթում մեթիլեն կապույտի վերականգնման փորձը. սկզբունքն ու սահմանափակումները

Ուսանողուհին բարձրացնում է կաթով երկու փորձանոթ։ Մեկը սպիտակել է մեկ ժամում։ Մյուսը հինգ ժամ կապույտ է մնացել։ Նա մատնացույց է անում կապույտը և ասում, որ այդ կաթը խմելու համար անվտանգ է։

Այդ եզրակացությունը բացահայտում է սխալ պատկերացում։ Մեթիլեն կապույտով կաթի փորձը անվտանգություն չի որոշում։ Այն ցույց է տալիս, թե տվյալ փորձանոթի մանրէների պոպուլյացիան որքան արագ է իջեցնում օքսիդավերականգնման պոտենցիալը հաստատուն պայմաններում։ Դանդաղ արդյունքը նշանակում է, որ նմուշում ընդհանուր նյութափոխանակային ակտիվությունը ցածր է։ Այն ոչինչ չի ասում այն մասին, թե որ օրգանիզմներն են առկա, դրանց մեջ կա արդյոք ախտածին, կամ կաթը ճիշտ է պաստերացվել, թե ոչ։

Այս տարբերությունը կարևոր է, քանի որ փորձը համոզիչ է թվում։ Կապույտ գույնը անհետանում է։ Ժամացույցը թիվ է տալիս։ Թվերը դրդում են չափազանց լայն մեկնաբանությունների։ Այս հոդվածը պահպանում է օգտակար մեկնաբանությունը և բացառում վտանգավորը։

Ինչ է իրականում չափում վերականգնումը

Մեթիլեն կապույտը օքսիդացված վիճակում կապույտ է, իսկ լեյկոմեթիլեն կապույտի վերականգնվելիս՝ գրեթե անգույն։ Թարմ կաթը պարունակում է լուծված թթվածին, որը ներկանյութը պահում է կապույտ վիճակում։ Շնչառություն և խմորում իրականացնող բակտերիաները սպառում են այդ թթվածինը և արտազատում վերականգնող միացություններ։ Երբ օքսիդավերականգնման պոտենցիալը բավականաչափ իջնում է, ներկանյութն ընդունում է էլեկտրոններ և կորցնում գույնը։ Գուելֆի համալսարանի կաթի մանրէաբանության ձեռնարկը նկարագրում է նույն հաջորդականությունը՝ թթվածնի հեռացում, որին հաջորդում է վերականգնող նյութերի առաջացումը բակտերիալ նյութափոխանակության ընթացքում։

Journal of Dairy Science ամսագրում հրապարակված դասական աշխատանքը դա ներկայացնում է որպես երկփուլ գործընթաց. միկրոֆլորան նախ սպառում է թթվածինը, ապա կաթի բաղադրիչներն արագ վերականգնում են ներկանյութը։ Ուստի կաթում մեթիլեն կապույտի վերականգնման փորձը ճիշտ է ընկալել որպես համակցված նյութափոխանակային ակտիվության գործառական փորձ, ոչ թե բջիջների հաշվիչ։ Մեթիլեն կապույտի օքսիդավերականգնման վարքը բացատրում է այդ անցման քիմիան։

Թթվածինը շրջում է վերջնակետում տեղի ունեցած փոփոխությունը։ Օդի հետ շփվող վերականգնված լեյկոներկանյութը կրկին օքսիդանում և կապտում է։ Հետևաբար թափահարելը, մի տարայից մյուսը լցնելը, լայն փորձանոթները և հեղուկից վեր մեծ օդային տարածությունը ուշացնում են արդյունքը։ Հաճախ օդի հետ շփվող մակերեսին մնում է բարակ կապույտ օղակ, երբ փորձանոթի հեղուկի հիմնական ծավալն արդեն անգունացել է։ Ստանդարտ ընթացակարգերն այդ օղակը ընդունելի են համարում՝ դրա անհետացմանը սպասելու փոխարեն։

Օրգանիզմների տեսակը ևս մեկ շեղում է առաջացնում։ Կոլիֆորմները և բազմաթիվ կաթնաթթվային մանրէներ արագ են վերականգնում ներկանյութը։ Ցածր ջերմաստիճանում աճող և ջերմամշակմանը դիմակայող շատ օրգանիզմներ այն վերականգնում են դանդաղ կամ գրեթե չեն վերականգնում։ Ագարային թիթեղների վրա նույն հաշվարկված գաղութաքանակն ունեցող կաթի երկու նմուշներում կապույտ գույնը կարող է անհետանալ ժամերի տարբերությամբ։ Միայն այս փաստն արդեն բացառում է ժամանակը գաղութների թվի վերածելը։

Վերահսկվող լաբորատոր ընթացակարգ

Դաշտային պայմանների և դասագրքային տարբերակների մանրամասները տարբերվում են, ուստի արդյունքը վավեր է միայն այն ստանալու համար կիրառված մեթոդի շրջանակում։ Սննդի լաբորատորիայում կիրառվող սովորական տարբերակն ունի հետևյալ ընթացքը.

1. Հավաքեք հում կաթը՝ նվազագույնի հասցնելով օդի հետ խառնումը, և անմիջապես սառեցրեք։ Նմուշառելուց առաջ խառնեք՝ տարան մեղմորեն շրջելով։
2. Ստերիլ փորձանոթի մեջ լցրեք 10 mL կաթ և 1 mL ներկանյութի աշխատանքային լուծույթ։ Լայնորեն կիրառվող աշխատանքային կոնցենտրացիաներից մեկը ներկանյութի 0.005 տոկոսն է՝ կաթի և ներկանյութի 10-ը 1-ի հարաբերակցությամբ։
3. Փորձանոթը փակեք խցանով, երկու անգամ մեղմորեն շրջեք և մի քանի րոպեի ընթացքում տեղադրեք ջրային բաղնիքում։ Ինկուբացիայի սովորական ջերմաստիճանը Ցելսիուսի 35-ից 38 աստիճան է՝ կախված կիրառվող ստանդարտից։ Գրանցեք, թե որ ստանդարտին եք հետևում։
4. Ինկուբացիայի ընթացքում փորձանոթները պաշտպանեք լույսից, քանի որ լույսն արագացնում է վերականգնումը։
5. Արդյունքը կարդացեք 30 րոպե անց, ապա՝ հաստատուն ընդմիջումներով։ Վերջնակետն այն պահն է, երբ փորձանոթի գույնը համապատասխանում է եռացրած կաթի համեմատական նմուշին կամ հասնում է ընթացակարգով սահմանված անգունացման աստիճանին։
6. Եթե մեթոդը պահանջում է տեսողական հսկիչ նմուշ, նույն կաթից պահեք չմշակված փորձանոթ։

FAO-ի կաթի փորձարկման ձեռնարկը տալիս է այս հաջորդականության հստակ տարբերակը դաշտային պայմանների համար՝ 10 mL կաթի և 1 mL ներկանյութի խառնում, խցանում, մեղմ շրջում, ինկուբացիա մոտ 37-ից 38 աստիճանում և արդյունքի ընթերցում յուրաքանչյուր 30 րոպեն մեկ։ Դրա հսկիչ փորձանոթներում օգտագործվում է եռացրած կաթ՝ բնական վերականգնող համակարգը քայքայելու և գունային համեմատության հիմք ապահովելու համար։

Վերևի սխեման սահմանում է վերահսկվող պայմանների շրջանակը։ Նույն ծավալները, նույն ներկանյութը, նույն ջերմաստիճանը, նույն խառնումը, լույսից նույն պաշտպանությունը, վերջնակետի նույն կանոնը։ Դրանցից որևէ մեկը փոխելիս փոխվում է նաև չափվող ժամանակը։ Այդ պատճառով ներկանյութի կամայական կոնցենտրացիա օգտագործող տնային տարբերակները համեմատելի չեն լաբորատոր գնահատականների հետ։

Ինչ է ցույց տալիս վերականգնման ժամանակը

Ավելի երկար ժամանակը նշանակում է ավելի ցածր ընդհանուր ակտիվություն նշված պայմաններում։ Ավելի կարճ ժամանակը նշանակում է ավելի բարձր ընդհանուր ակտիվություն։ Կաթնագործության ուսումնական աղյուսակներն այդ ժամանակներին մոտավոր գնահատականներ են վերագրում. օրինակ՝ BIS-ից բխող սխեմաներից մեկում 5 կամ ավելի ժամը գնահատվում է որպես շատ լավ, իսկ 30 րոպեից պակասը՝ վատ։

Գնահատականների տարբերությունն ինքնին կարևոր դաս է։ 5 ժամ տևած արդյունքը համընդհանուր գնահատական չունի։ Այն պատկանում է այն սահմանած ընթացակարգին։ Հետևաբար արդյունքի ներկայացման հիմնավոր ձևաչափն այսպիսին է.

MBRT-ն հավասար է X ժամի՝ նշված մեթոդով, և համապատասխանում է այդ մեթոդի գնահատականին։

Այն երբեք չի նշանակում, որ MBRT-ն հավասար է X գաղութ առաջացնող միավորի՝ մեկ mL-ում։ Standard Methods-ից բխող ուղեցույցը նշում է, որ ներկանյութի վերականգնման արդյունքները չպետք է ներկայացվեն որպես բակտերիաների թվաքանակ։ Մեթիլեն կապույտով պարզ ներկման ընթացակարգը նույնպես այլ հարցի է պատասխանում, քանի որ այն մանրադիտակով ցույց է տալիս բջիջների ձևը, այլ ոչ թե փորձանոթում ընդհանուր ակտիվությունը։

Մեկնաբանության և սահմանափակումների աղյուսակ

Այս աղյուսակը հոդվածի համար կազմված սկզբնական տեղեկատուն է։ Կարդացեք ամբողջ տողը։ Ոչ մի առանձին բջիջ չի կարող մեկնաբանվել մյուսներից անկախ։

Աճի վրա հիմնված ստուգումները, օրինակ՝ բակտերիաների աճեցումը սննդային միջավայրերում, շարունակում են մնալ քանակական հաշվարկի և առանձնացման միջոցը։ Վերականգնման փորձանոթը նախնական ստուգում է կատարում։ Ագարային թիթեղը նույնականացնում և հաշվում է։

Ինչ չի կարող փորձն ապացուցել անվտանգության մասին

Դանդաղ արդյունքը չի կարող ապացուցել ախտածինների բացակայությունը։ Բժշկական առումով նշանակալի քանակով առկա ախտածինը կարող է քիչ նպաստել ընդհանուր թթվածնասպառմանը։ Ախտածինների հայտնաբերումը պահանջում է կոնկրետ օրգանիզմին ուղղված մեթոդներ, որոնք Standard Methods-ի ներկայիս տարբերակը դիտարկում է որպես ընդհանուր որակի նախնական ստուգումից առանձին ոլորտ։

Այն չի կարող հաստատել պաստերացումը։ Codex-ի կաթնամթերքի հիգիենայի ուղեցույցի համաձայն՝ ջերմամշակման հաստատման համար կիրառվում է հիմնային ֆոսֆատազի փորձը կամ այլ վավերացված մեթոդ։ Սպիտակ կամ կապույտ փորձանոթը ոչինչ չի ասում խմբաքանակի ժամանակաջերմաստիճանային պատմության մասին։

Այն չի կարող հավաստել սննդի անվտանգությունը։ Անվտանգությունը կախված է ախտածիններից, արդեն գոյացած թույներից, դեղերի մնացորդներից, քիմիական աղտոտիչներից, սառը շղթայի պատմությունից և նմուշառումից հետո տեղի ունեցած աղտոտումից։ Codex-ը կաթնամթերքի անվտանգությունը դիտարկում է որպես վերահսկողության միջոցառումների շղթա, այլ ոչ թե նախնական ստուգման մեկ արդյունք։

Սննդի լաբորատորիայի պայմանները նույնը չեն, ինչ տնային փորձարկումը

Կաթնամթերքի լաբորատորիայում այս փորձն օգտագործվում է ընդունվող կաթի նախնական ստուգման, ժամանակի ընթացքում մատակարարների համեմատության կամ հսկողության ներքո օքսիդավերականգնման մանրէաբանություն ուսուցանելու համար։ Նմուշները հետագծելի են։ Ռեագենտները ստանդարտացված են։ Ջերմաստիճանները գրանցվում են։ Թափոններն ուղարկվում են լաբորատոր վնասազերծման։

Տնային փորձարկումը չունի այս ամենը։ Խոհանոցում ծավալները մոտավոր են։ Առցանց վաճառվող ներկանյութերի կոնցենտրացիաները մեծապես տարբերվում են։ Ինկուբացիան հաճախ կատարվում է տաք սենյակում, ոչ թե տրամաչափված ջրային բաղնիքում։ Գույնի փոփոխությունը, այնուամենայնիվ, տեղի է ունենում, ինչի պատճառով արդյունքը վստահելի է թվում, մինչդեռ բացակայում են այն իմաստավորող բոլոր վերահսկվող պայմանները։

Ավելի լուրջ ռիսկը վարքագծային է։ Տանը կապույտ մնացած փորձանոթը խրախուսում է խմել հում կաթ, որը լաբորատորիան դեռ կուղարկեր ագարային թիթեղների վրա գաղութների հաշվարկի, ախտածինների հայտնաբերման և մնացորդների ստուգման։ Մեթիլեն կապույտով կաթի փորձը նախատեսվել է հում կաթի ընդունման ժամանակ որակը գնահատելու համար, ոչ թե կաթի օգտագործումը թույլատրելու։ Ռեզազուրինով ավելի արագ նախնական ստուգումն ունի նույն սահմանափակումը. գույնն ավելի արագ է ընթերցվում, բայց ախտածինների մասին պատասխան դեռ չի տրվում։

Հակիրճ կանոն լաբորատոր աշխատանքի համար

Ստանդարտացրեք ներկանյութը, հարաբերակցությունը, ջերմաստիճանը, խառնումը, լուսավորությունը և վերջնակետը։ Ժամանակը ներկայացրեք մեթոդի անվան և գնահատականի հետ միասին։ Րոպեները մեկնաբանեք՝ հաշվի առնելով պահպանման պատմությունը, միկրոֆլորայի տեսակը, մնացորդները և նմուշառման որակը։ Կարճ ժամանակը մատնանշում է հետազոտման արժանի ակտիվություն։ Երկար ժամանակը երբեք չի հավաստում անվտանգությունը։