Atik
Entèprete E. coli ak lòt aparans koloni sou agar EMB
Yon etidyan simen yon echantiyon enkoni an tras sou agar eozin ble metilèn, mete l nan enkibatè pandan lannuit, epi li retounen devan yon bwat ki gen koloni fonse ak yon ekla vèt. Nan kaye a, li ekri "E. coli, konfime." Sa li ekri a deklare plis pase sa bwat la ka pwouve. Bwat la montre yon fenotip kwasans ak fèmantasyon nan kondisyon byen presi. Idantite espès la se yon lòt konklizyon ki mande prèv apa.
Gid sa a trete rezilta agar EMB kòm yon travay entèpretasyon. Li esplike prensip ki dèyè yo, prezante yon atlas ilistrasyon bwat ak kontwòl, epi idantifye ka kote aparans ki nan liv la ka twonpe moun.
Prensip ki dèyè bwat la
Agar EMB se yon mwayen ki selektif epi diferansyèl an menm tan. Koloran eozin Y ak ble metilèn limite kwasans anpil òganis Gram pozitif, kidonk mwayen an favorize kwasans òganis Gram negatif. Menm koloran sa yo sèvi kòm endikatè: lè yon òganis fèmante sik ki disponib la epi li pwodui ase asid lokalman, koloni an absòbe anpil koloran epi li vin mov fonse rive ble-nwa. Lè pwodiksyon asid la fò, sifas koloni an ka montre yon ekla vèt metalik ki chanje selon ang limyè a. Pwotokòl ASM pou bwat agar eozin ble metilèn dekri konbinezon seleksyon ak diferansyasyon sa a epi li bay foto referans pou ansèyman.
Yon detay enpòtan anvan ou entèprete nenpòt rezilta: verifye ki fòmilasyon y ap itilize. Ansyen fòmilasyon Holt Harris Teague la gen laktoz ak sikwoz, tandiske EMB Levine gen laktoz sèlman. Yon òganis ki fèmante sikwoz men ki pa fèmante laktoz, tankou anpil izola Serratia marcescens, ka gen yon aparans diferan sou de vèsyon yo. Dokimantasyon fabrikan an pou mwayen EMB presize diferans fòmilasyon sa a klèman. Ekri non fabrikan an ak fòmilasyon an nan kaye a ansanm ak rezilta a.
Agar EMB ki prepare men ki poko inokile anjeneral gen yon koulè wouj-mawon rive mov-wouj, pafwa ak yon ti tent vèt oswa yon presipite fen. Koulè fon sa a pa kwasans. Konpare chak lekti ak yon bwat ki pa inokile oswa ak aparans debaz ki dokimante a, epi li premye bwat la apre apeprè 18 a 24 èdtan enkibasyon nan kondisyon ayewobik nan 35 a 37 C, sof si pwotokòl ansèyman an presize yon lòt bagay. Yon enkibasyon ki pi long ka chanje aparans fèmantasyon an.
Ki jan pou gade bwat la
Sèvi ak de kalite limyè. Premyèman, egzamine bwat la anba limyè ki reflete oswa ki vini sou kote, epi panche l: ekla metalik la chanje selon ang limyè a epi li ka parèt oswa disparèt selon ang kote w ap gade a. Apre sa, egzamine l ak limyè k ap travèse l pou evalye koulè koloni yo ak sant fonse yo. Travay sou koloni ki byen izole, paske koloni ki kole youn ak lòt oswa ki toupre lòt koloni chanje akimilasyon asid lokal la epi yo ka diminye oswa egzajere koulè a. Seri imaj ASM lan montre sa dirèkteman: E. coli nan yon kilti melanje ka pèdi ekla yo atann nan paske òganis ki antoure l yo chanje anviwònman asid la.
Mete kontwòl chak fwa egzèsis la pèmèt sa. Yon seri yo itilize souvan nan ansèyman se E. coli ATCC 25922 pou fenotip ble-nwa ak ekla metalik la, yon òganis ki pa fèmante tankou Salmonella Typhimurium ATCC 14028 oswa Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 pou fenotip san koulè a, epi yon òganis Gram pozitif tankou Enterococcus faecalis oswa Staphylococcus aureus kòm kontwòl anpèchman kwasans, jan yo site yo nan tablo estanda kontwòl kalite pou mwayen EMB. Si kontwòl pozitif la pa gen ekla, sispèk enkibasyon an, koloni ki twò sere yo, oswa fòmilasyon an anvan ou sispèk echantiyon enkoni an.
Atlas ilistrasyon bwat
Bwat ki anba yo se ilistrasyon yo kreye, se pa foto kilti reyèl. Yo montre modèl pou chèche a, pa koulè egzak nenpòt souch patikilye. Konpare yo ak foto referans ASM yo epi ak bwat reyèl nan laboratwa ansèyman an.
Bwat 1: Escherichia coli sou agar EMB, ki fèmante laktoz avèk fòs
E. coli sou agar EMB anjeneral gen yon koulè mov fonse rive ble-nwa, souvan ak yon sant fonse ak yon ekla vèt metalik ki soti nan gwo pwodiksyon asid. Ekla a se siy byen koni etidyan yo ap chèche a, men konsidere l kòm yon prèv ki apiye entèpretasyon an olye de yon definisyon. Entansite ekla a varye selon souch la, tan enkibasyon an, dansite koloni yo, ak ang kote w ap gade a. Absans ekla pa elimine E. coli kòm posiblite, epi yon koloni fonse ki pa gen ekla ka endike plizyè lòt òganis ki fèmante. Chwazi yon koloni ki byen izole pou nenpòt travay apre sa olye ou baze lekti a sou yon sektè kote koloni yo twò sere.
Bwat 2: Klebsiella pneumoniae sou agar EMB, yon òganis mikez ki fèmante
Klebsiella pneumoniae sou agar EMB anjeneral fòme gwo koloni briyan ki mikez, ak koulè woz-mov rive mawon-mov, souvan ak sant fonse men anjeneral san yon gwo ekla metalik. Òganis ki fèmante epi ki pwòch li, tankou Enterobacter, ka gen yon mòfoloji menm jan an. Teksti mikez la ak gwosè koloni an fè pati lekti a: yon ti koloni woz ki plat pa gen menm pwa nan entèpretasyon an ak yon gwo koloni mikez ki gonfle tankou yon dòm. Menm jan ak E. coli, bwat la sijere yon fenotip fèmantasyon, epi pou bay non espès la, fòk gen konfimasyon byochimik ki dekri pi ba a.
Bwat 3: Salmonella sou agar EMB ak lòt òganis ki pa fèmante, koloni san koulè
Salmonella sou agar EMB ak lòt òganis ki pa fèmante laktoz ki pwòch li, tankou Shigella ak anpil izola Pseudomonas, anjeneral grandi kòm koloni san koulè, translisid, oswa koulè anm pal. Kèk fòmilasyon ak kondisyon bay yon ti tent woz, kidonk yon koloni woz pal pa otomatikman yon òganis ki fèmante. EMB pa fè diferans ant Salmonella ak Shigella oswa lòt òganis ki pa fèmante; se tès ki fèt apre yo ki fè distenksyon sa a. Remake tou gen souch Salmonella ki fèmante laktoz epi ki fòme koloni metalik tankou E. coli ki deja dokimante, sa ki se yon lòt rezon ankò ki fè yon sèl bwat pa ka bay yon konklizyon definitif.
Bwat 4: Serratia marcescens ak pyèj fòmilasyon an
Serratia marcescens merite yon seksyon pa li paske etidyan yo souvan atann koloni wouj epi yo mal entèprete bwat la. Pifò izola klinik yo pa fèmante laktoz, kidonk sou EMB Levine yo souvan parèt pal oswa yo gen yon koulè ki fèb. Paske anpil izola fèmante sikwoz, yon fòmilasyon ki gen sikwoz ka bay yon reyaksyon ki pi fonse oswa ki plis asosye ak asid. Pa atann pigman wouj prodijyozin klasik la nan 35 a 37 C nonplis; pwodiksyon pigman an pa fyab nan tanperati enkibatè a. Lè pwotokòl la mansyone Serratia marcescens sou agar EMB, verifye ki fòmilasyon deklarasyon an sipoze yo itilize. Yon revizyon sou metabolis Serratia rezime modèl ki dèyè pyèj sa a: li pa fèmante laktoz, epi kapasite li pou fèmante sikwoz varye.
Bwat 5: kontwòl ak òganis ki gen kwasans yo bloke
Òganis Gram pozitif tankou Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus, ak Bacillus anjeneral gen kwasans yo bloke oswa limite anpil sou agar EMB, menm si blokaj la pa total pou tout souch. Yon seri kontwòl pèmèt yon lekti ki fyab: kontwòl E. coli a ta dwe montre bon kwasans ak koulè ble-nwa ak ekla, kontwòl òganis ki pa fèmante a ta dwe montre kwasans san koulè, epi kontwòl anpèchman kwasans lan ta dwe montre ti kwasans oswa pa gen kwasans ditou. Si kontwòl anpèchman an grandi byen, etap selektif la echwe epi tout lòt lekti sou lo sa a vin sispèk. Metòd koloran yo reponn yon kesyon diferan de mwayen kilti yo; pou aspè laboratwa a ki konsène koloran sou lam, gade atlas koloran ble metilèn lan.
Konparezon ak limit li yo
| Obsèvasyon sou agar EMB | Sa li ka vle di | Sa li pa etabli |
|---|---|---|
| Koloni ble-nwa fonse ak ekla vèt anba limyè ki vini sou kote | Gwo fèmantasyon, E. coli se youn nan kandida prensipal yo | Idantite espès la; lòt òganis ki fèmante avèk fòs ka gen ekla |
| Gwo koloni mikez woz-mov, san ekla | Òganis ki fèmante epi ki gen karakteristik kapsil, Klebsiella se yon kandida | Klebsiella pneumoniae espesyalman; Enterobacter gen yon aparans menm jan |
| Koloni san koulè oswa translisid | Òganis ki pa fèmante laktoz, pa egzanp Salmonella, Shigella, Pseudomonas | Ki òganis ki pa fèmante li ye; diferans ant Salmonella ak Shigella mande lòt tès |
| Koloni pal kote yo te atann wouj | Petèt Serratia sou EMB ki gen laktoz sèlman nan 37 C | Absans Serratia; verifye fòmilasyon an ak tanperati a |
| Pa gen kwasans oswa gen ti koloni ki gen kwasans yo limite | Petèt anpèchman kwasans òganis Gram pozitif | Esterilite oswa idantite; kèk souch chape anba anpèchman an |
Twa fraz rezime aparans ki ka twonpe moun yo. Fonse pa vle di E. coli, paske Klebsiella, Enterobacter, ak lòt òganis ki fèmante devlope sant fonse san ekla. Woz pa vle di Klebsiella, paske òganis ki fèmante modere oswa dousman ak kèk òganis yo konsidere kòm sa ki pa fèmante parèt woz oswa mov pal. Ekla pa vle di E. coli definitivman, paske lòt òganis ki fèmante avèk fòs ka pwodui l. Pwotokòl ansèyman an ak imaj kilti melanje li yo montre chak nan ka kote siy sa yo pa sifi.
Limit konfimasyon
Agar EMB montre yon fenotip, pa yon espès. Òganis diferan ka gen menm aparans koloni, epi yon òganis ka pa sanble ak imaj li nan liv la selon souch la, laj li, jan koloni yo sere, fòmilasyon an, ak enkibasyon an. Se poutèt sa pwosedi ansèyman ak pwosedi klinik yo trete mòfoloji sou EMB kòm yon endikasyon preliminè.
Yon pwosedi etidyan ka jistifye se: dekri koloni izole a (gwosè, koulè, sant, ekla anba limyè ki vini sou kote, karakteristik mikez), note fòmilasyon an, tan ak tanperati enkibasyon an, ansanm ak kontwòl yo; apre sa, repike yon koloni ki byen izole pou jwenn yon kilti pi anvan nenpòt tès konfimasyon. Tès yo fè souvan apre sa gen ladan koloran Gram ansanm ak reyaksyon IMViC pou idantifikasyon preliminè E. coli ak kolifòm, TSI oswa KIA ak seri tès byochimik espesifik pou òganis entesten yo, ansanm ak idantifikasyon sewolojik, MALDI TOF, oswa lòt metòd valide lè travay la mande sa. Pou konprann plas EMB pami mwayen selektif ak diferansyèl pou òganis entesten yo, gade entwodiksyon sou mwayen kilti pou òganis entesten ak tès apre koloran Gram. Pou kesyon ki gen rapò ak sa yon koloran ble sou lam ka pwouve oswa pa ka pwouve, atlas koloran ble metilèn lan kenbe obsèvasyon ak konklizyon apa nan menm lespri a.
Ekri obsèvasyon an anvan konklizyon an. "Koloni ble-nwa fonse ak ekla vèt ki depann de ang kote w ap gade a sou EMB Levine apre 24 èdtan, ki ann akò ak yon gwo fèmantasyon laktoz" se yon deklarasyon ou ka jistifye. "E. coli, konfime" mande etap konfimasyon bwat la poukont li pa ka bay la.