Atik
Ble metilèn nan tès laboratwa G6PD: sa koloran an ap fè toutbon
Yon etidyan ap gade de tib apre enkibasyon. Youn pran koulè yo te espere a. Lòt la pa pran l. Etidyan an konkli dezyèm pasyan an gen yon defisyans glikoz-6-fosfat deidwojenaz. Konklizyon sa a ka kòrèk, men rezònman an sote konsèp ki fè tès la mache a. Pa gen anyen nan tib la ki mezire anzim nan dirèkteman. Tib la mezire sa anzim nan pwodui, epi li sèvi ak ble metilèn kòm entèmedyè.
Depi w konprann mezi endirèk sa a, pwosedi a, kontwòl yo ak lis long rezilta ki twonpe yo pa sanble abitrè ankò.
Repons kout la
Ble metilèn nan tès G6PD se yon endikatè oksidorediksyon. Anzim G6PD a pwodui NADPH, epi sistèm ki depann de NADPH yo redui ble metilèn ki gen koulè ble a pou fè l tounen fòm leko li a, ki san koulè (oswa yo sèvi avè l pou transfere elektwon). Yon aktivite anzimatik nòmal bay yon rediksyon efikas. Yon aktivite ki ba bay yon rediksyon ki ralanti oswa ki pa konplè. Se tout siyal la sa.
De metòd istorik sèvi ak menm koloran an, men yo pa gen menm pwen final. Fè diferans ant yo, epi pifò konfizyon an disparèt.
De tès, yon sèl koloran, pwen final diferan
Premye a se tès rediksyon dirèk ble metilèn nan, Sass ak kolèg li yo te dekri epi Gibbs te evalye pi ta. Isit la, pwen final la se koloran an li menm: ble metilèn okside ki gen koulè ble a sibi rediksyon pou l tounen lekoble metilèn san koulè, epi vitès chanjman sa a reflete kapasite pou pwodui NADPH. Atik orijinal sou depistaj la endèkse sou PubMed sou non Sass ak kolèg li yo (1966).
Dezyèm nan se tès rediksyon metemoglobin Brewer la. Nitrit sodyòm okside emoglobin nan an premye pou fè l tounen metemoglobin mawon. Apre sa, ble metilèn aji kòm yon medyatè transfè elektwon: ble metilèn ki redui a pase ekivalan rediktè bay metemoglobin nan, pou fè l tounen emoglobin wouj ankò. Kidonk, pwen final vizib la se mawon kont wouj, se pa ble kont san koulè. Metòd orijinal la te parèt nan Bilten Òganizasyon Mondyal Lasante a (Brewer ak kolèg li yo, 1960).
Rele tès Brewer la yon tès dekolorasyon koloran pa egzak sou plan chimik. Koloran an pase nan yon sik; se emoglobin nan ki chanje koulè. Dyagram ki anba a montre toude chemen yo.
Reyaksyon ki anba pwosesis la
G6PD katalize premye etap oksidatif chemen pentoz fosfat la:
Glucose-6-phosphate + NADP+ becomes 6-phosphogluconolactone + NADPH + H+
Globil wouj ki matirite yo depann anpil de chemen sa a pou jwenn NADPH, jan Luzzatto ak kolèg li yo esplike nan Blood (2020). NADPH kenbe glitasyon nan eta redui epi li pwoteje selil la kont domaj oksidatif. Ble metilèn antre nan sistèm sa a kòm yon akseptè elektwon. Yon kantite G6PD ki sifi bay yon kantite NADPH ki sifi, ki bay yon rediksyon efikas. Lè G6PD ba, chèn nan kase depi nan premye lyen li.
Panse ak koloran an kòm yon endikatè nivo gaz, se pa motè a. Li bay enfòmasyon sou rezèv NADPH la. Nenpòt lòt bagay ki chanje rezèv sa a, oswa fason rezilta a parèt, ka deplase zegwi a san okenn chanjman nan jèn nan.
Kijan pwosedi kalite Brewer la fèt
Fòmil reyaktif yo te varye pandan plizyè dizèn ane, kidonk yon deskripsyon pou ansèyman pa dwe pran pou yon pwotokòl klinik. Chak laboratwa suiv pwòp pwosedi operasyon estanda valide pa l. Avèk prekosyon sa a, metòd klasik ak tib la mache jan sa dekri anba a, nan yon fòm ki dokimante ak twa tib ak yon enkibasyon 3 èdtan nan aplikasyon pibliye sa a:
- Tib pasyan an: san antye ak glikoz, nitrit sodyòm ak ble metilèn. Nitrit la pwodui metemoglobin, glikoz la alimante metabolis globil wouj yo, epi koloran an bay mekanis transfè ki depann de NADPH la.
- Kontwòl okside: san ak nitrit ak glikoz, men san ble metilèn. Li montre pwen final metemoglobin mawon an, ki koresponn ak modèl defisyans lan.
- Kontwòl emoglobin: san ak dlo. Li montre pwen final emoglobin wouj la, ki koresponn ak modèl nòmal la.
- Enkibe tout tib yo toupre 37 C, anjeneral pandan 3 èdtan, pandan w ap melanje yo dousman.
- Dilye yon ti pòsyon mezire nan chak tib nan dlo distile pou kraze selil yo epi fè konparezon koulè a pi fasil pou li.
- Konpare tib pasyan an ak de kontwòl yo. Yon retou nan direksyon wouj montre yon kapasite rediksyon enpòtan. Si koulè a rete nan direksyon mawon, sa sijere yon defisyans pwononse.
Yon fòmil istorik te sèvi ak anviwon 1 mL san ansanm ak reyaktif ki te toupre 180 mM nitrit sodyòm, 280 mM dekstwoz ak 0.4 mM ble metilèn. Konsidere chif sa yo kòm yon egzanp ki soti nan literati a, se pa kòm yon espesifikasyon inivèsèl.
Li rezilta a
| Modèl | Aparans nan tès Brewer la | Siyifikasyon |
|---|---|---|
| Nòmal | Tib pasyan an pwoche koulè kontwòl emoglobin wouj la | Kapasite rediksyon pi wo pase papòt depistaj la |
| Defisyans | Tib pasyan an rete mawon, toupre kontwòl metemoglobin nan | Depistaj la sijere yon defisyans G6PD pwononse |
| Entèmedyè | Koulè a tonbe ant de kontwòl yo | Pa bay yon fenotip; mezire aktivite a yon fason kantitatif |
Yon tès depistaj kalitatif fè diferans pi byen alantou 30 a 40 pousan aktivite nòmal la, jan sa diskite nan revizyon Malaria Journal sa a sou lakin nan deteksyon G6PD. Kidonk, yon rezilta depistaj nòmal vle di tès la pa t detekte yon defisyans grav. Li pa sètifye aktivite a konplètman nòmal.
Poukisa depistaj ka twonpe
Retikilositoz apre emoliz se kòz klasik yon fo rezilta nòmal. Jenn globil wouj ak retikilosit gen plis G6PD pase ansyen selil yo. Pandan yon epizòd emoliz egi, selil ki pi ansyen yo, ki gen pi gwo defisyans lan, ka deja detwi, sa ki kite yon popilasyon jenn selil ki bay yon aktivite nòmal nan tès la. Menm fenomèn byolojik la twonpe tès kantitatif yo tou, se pa sèlman tès depistaj ak koloran yo.
Yon transfizyon resan kache defisyans lan paske globil wouj donatè a pote pwòp anzim pa yo nan echantiyon an. Mayo Clinic Laboratories mete transfizyon pami kòz rezilta anzimatik ki pa fyab, ansanm ak retikilositoz ak entèferans lekosit.
Fi etewozigòt yo se ka ki pi difisil la. Inaktivasyon owaza kwomozòm X la pwodui yon melanj globil wouj nòmal ak globil wouj ki gen defisyans, epi aktivite total la ka tonbe nenpòt kote ant yon defisyans grav ak yon aktivite ki sanble nòmal. Tès depistaj kalitatif yo souvan pa detekte fenotip entèmedyè yo. Dokimantasyon OMS sou tès G6PD diskite limit sa a an detay.
Laj echantiyon an, tanperati depo a, jijman sibjektif sou pwen final vizyèl la, ematokrit la ak kalite reyaktif yo ajoute varyasyon analitik sou efè byolojik sa yo.
Depistaj pa dyagnostik
Yon rezilta depistaj ki montre defisyans, ki entèmedyè, oswa ki pa mache ak tablo klinik la mande yon tès kantitatif aktivite anzim G6PD. OMS konsidere espektwofotometri kantitatif ak tanperati kontwole kòm metòd referans lan. Nan tès sa a, yo ajoute glikoz-6-fosfat ak NADP+ nan yon emoliza globil wouj, epi yo suiv NADPH ki fòme a atravè ogmantasyon absòbans nan 340 nm. Vitès chanjman an pwopòsyonèl ak aktivite anzim nan, ki anjeneral rapòte ak kantite emoglobin nan kòm inite pa gram. Pratik aktyèl laboratwa klinik yo rezime nan fich katalòg tès Mayo a pou aktivite G6PD.
Entèpretasyon an sèvi ak entèval referans laboratwa a valide a, ki souvan defini an rapò ak aktivite nòmal nan popilasyon an. Yo souvan diskite defisyans toupre papòt 30 pousan an, ak aktivite entèmedyè ki pi wo pase papòt sa a. Pwofil pwodwi sib OMS pou tès G6PD (2022) prezante kad dyagnostik sa a. Si yon emoliz oswa yon transfizyon resan fè detèminasyon fenotip la pa fyab, refè tès la apre popilasyon globil wouj la retounen nan ekilib; tès molekilè ka ajoute enfòmasyon san li pa ranplase mezi anzim nan.
Yon distenksyon ki merite rete klè
Ble metilèn nan tès sa yo se yon reyaktif laboratwa ex vivo. Sa fè pati yon diskisyon diferan de kesyon sekirite lè yo bay yon pasyan ble metilèn, ki abòde nan gid sou kontrendikasyon ble metilèn. Byochimi a konekte de sijè yo, paske medikaman an depann tou de rediksyon ki depann de NADPH, men yon koloran nan yon tib tès se pa yon dòz nan sikilasyon san an. Pou jwenn kontèks sou fason koloran an aji nan tachaj nan yon lòt anviwònman, gade prensip tachaj ak ble metilèn; epi pou fanmi chimik li fè pati a, gade koloran oksidorediksyon nan laboratwa.
Depistaj mande si kapasite rediksyon an sanble entak. Konfimasyon mande ki kantite anzim ki la toutbon. Koloran an reponn premye kesyon an byen, depi pèsonn pa mande l reponn dezyèm nan.