Ble metilèn nan rechèch sou pwason zèb: aditif pou swen elvaj ak faktè konfizyon eksperimantal

Dlo pou ze pwason zèb souvan gen yon ti koulè ble, epi prèske pèsonn pa note poukisa. Koloran an se ble metilèn, yo ajoute li kont chanpiyon, epi pifò pwotokòl trete li kòm yon eleman ki pa enpòtan. Sa pa bon fason pou wè li. Li pi bon pou konsidere li kòm yon faktè eksperimantal ki pa nan lis la: yon sibstans ki prezan nan resipyan gwoup trete yo epi ki absan nan gwoup kontwòl yo, ki aktif sou plan famakolojik nan konsantrasyon yo itilize yo, epi ki kapab chanje menm paramèt eksperyans lan ap mezire yo.

Se distenksyon sa a ki òganize tout sa ki anba a. Swen elvaj nòmal kont chanpiyon se yon kesyon. Si aditif la net parapò ak tès ou a se yon lòt kesyon. Piblikasyon resan sou pwason zèb yo bay yon repons ki rasiran pou premye a, men ki soulve enkyetid pou dezyèm nan.

Sa direktiv yo preskri toutbon

Pa gen yon sèl estanda, e sa fè pati pwoblèm nan. Direktiv Konsèy Kanadyen pou Swen Bèt la pèmèt 0.5 mg/L, oswa 0.00005%, nan solisyon transpò ze ak lav pou diminye kwasans chanpiyon. Direktiv ewopeyen pou bèt laboratwa yo dekri anbriyon yo kenbe nan yon milye ki souvan gen menm 0.00005% la. Resèt E3 Cold Spring Harbor la presize doub konsantrasyon sa a, 1 mg/L oswa 0.0001%, kòm yon engredyan nan resèt la. Men, gen yon omisyon ki frape: direktiv OECD pou tès toksisite sou anbriyon pwason an presize dlo dilisyon rekonstitye ak sibstans chimik pou teste a, san okenn rekòmandasyon pou ble metilèn, ni nan vèsyon 2013 li a ni nan revizyon ki vin apre a. Konsa, yon laboratwa elve anbriyon pwason zèb ak ble metilèn nan dlo ble depi premye èdtan lavi yo, yon lòt fè tès regilasyon sou anbriyon an nan dlo san koulè, epi toude rele milye yo a nòmal. Nenpòt moun ki konpare rezilta ant laboratwa, oswa ki mete done kontwòl istorik yo ansanm, eritye enkonsistans sa a.

Pou mete konsantrasyon yo nan kontèks, 0.00005% se anviwon 1.56 mikwomolè epi 0.0001% se anviwon 3.13 mikwomolè. Sa yo se ti valè, epi li fasil pou panse yo twò ba pou yo gen enpòtans. Etid ki anba yo teste egzakteman sipozisyon sa a, nan egzakteman konsantrasyon sa yo.

Lektè ki soti nan elvaj pwason olye nan laboratwa rankontre menm molekil la nan yon lòt kontèks, ki prezante nan gid sou ble metilèn nan akwaryòm. Chimi a se menm; diskisyon sou fason koloran an fè elektwon sikile nan selil yo esplike poukisa yon konpoze ki aktif nan reyaksyon oksido-rediksyon kontinye parèt nan piblikasyon sou metabolis. Sa ki vin apre a konsène espesyalman dlo pou ze pwason zèb ki gen ble metilèn.

Metabolis: efè a chanje direksyon selon etap la

Etid ki bay plis enfòmasyon an te ekspoze pwason zèb ki t ap devlope nòmalman depi premye jou lavi yo rive 5 jou apre fekondasyon, epi li te mezire metabolis oksidatif nan chak etap, jan rapò pibliye sou eksperyans metabolis anbriyon yo dekri li. Li enpòtan pou prezante tandans lan avèk presizyon paske li chanje direksyon.

Nan 1 jou apre fekondasyon, konsomasyon oksijèn debaz te ogmante nan anbriyon ki te ekspoze yo nan toude konsantrasyon swen elvaj yo. Nan 2 jou, potansyèl manbràn mitokondri nan kouch sifas lav yo te pi wo pou ekspozisyon a 0.00005%, 0.0001%, ak 0.0003%. Rive nan 4 a 5 jou, apre eklozyon, direksyon an te ranvèse: depans enèji oksidatif te diminye, kit ekspozisyon an te kontinyèl depi fekondasyon, kit li te yon ekspozisyon kout sèlman soti nan jou 3 rive nan jou 4. An paralèl, transkri pou sou-inite konplèks respiratwa mitokondri yo te diminye nan toude 1 ak 4 jou, ansanm ak transkri ki lye ak pwodiksyon estewoyid ak fòmasyon glikoz apati sous ki pa glusid.

De lòt obsèvasyon rann sitiyasyon an pi klè. Eklozyon te fèt yon ti jan pi bonè nan konsantrasyon swen elvaj ki pi wo a: anbriyon ki te ekspoze yo te an avans nan 2 jou, epi gwoup kontwòl yo te ratrape yo rive nan jou 3. Epi aks estrès la li menm te sanble rete entak: lè yo te soumèt lav ki te gen 5 jou yo a yon mouvman toubiyon pou pwovoke estrès, kortizòl nan tout kò a te ogmante nòmalman nan toude gwoup yo. Donk, koloran an pa yon pwazon jeneral pou devlopman nan dòz sa yo, epi li pa etenn tout repons fizyolojik. Li chanje metabolis enèji selon etap la: li ogmante li anvan eklozyon epi diminye li apre.

Konpòtman: poukisa de etid pa dakò, epi poukisa toude ka gen rezon

Piblikasyon sou konpòtman yo sanble kontradiktwa jiskaske yo mete plan ekspozisyon yo youn bò kote lòt. Yon etid sou sekirite pou devlopman ak konpòtman te ekspoze anbriyon depi anviwon 6 èdtan apre fekondasyon a konsantrasyon ki rive jiska 10 mikwomolè, renouvle solisyon yo chak jou jiska jou 4, epi deplase lav yo nan yon milye san koloran pou jou 5 ak 6, epi teste lokomosyon yo nan yon tès limyè-fènwa nan jou 6. Rezilta a: pa t gen efè siyifikatif sou mòtalite, eklozyon oswa mòfoloji, epi pa t gen efè tretman an sou lokomosyon. Otè yo te rekòmande, yon fason rezonab, 10 mikwomolè kòm limit siperyè nan kondisyon yo te itilize yo.

Yon dezyèm gwoup, ki te gen kèk nan menm otè ak etid sou metabolis la, te fè ekspozisyon an jan swen elvaj fèt toutbon: koloran an te prezan depi 2 a 3 èdtan apre fekondasyon, ak renouvèlman pasyèl chak jou, epi yo te mezire konpòtman pandan ekspozisyon an t ap kontinye oswa te fèk fini. Nan menm konsantrasyon nòmal yo, lav yo te montre mwens lokomosyon nan yon tès 24 èdtan, yon rezilta yo te kapab repwodui atravè diferan liy jenetik ak laboratwa. Etid sou konfizyon nan mezi konpòtman te lye efè a ak nivo aktivite sistèm serotonin lan, sa ki ann akò ak kapasite koloran an genyen, jan yo deja konnen, pou anpeche monoamin oksidaz. Sa ki pi revelatè a, milye anbriyon ki te gen ble metilèn te kache repons lokomotè yo te atann ak fluoxetine, yon SSRI. Kidonk, yon tès depistaj ki fèt nan dlo ble ka rate yon efè medikaman dlo san koulè ta revele.

Pa gen kontradiksyon toutbon. Yon konpoze ka pa kite okenn efè rezidyèl ki detektab de jou apre yo retire li nan yon tès, epi li ka toujou aktif pandan li prezan nan yon lòt. Entèpretasyon pratik la se ke rezilta san efè a jistifye yon limit siperyè pou konsantrasyon, pa yon deklarasyon ke sibstans lan net. Rezilta ki montre efè a, bò pa li, dekri risk ki enpòtan an: ekspozisyon aktif pandan peryòd mezi a, nan egzakteman kondisyon pifò laboratwa itilize yo.

Yon koloran oksido-rediksyon nan yon tès oksido-rediksyon

Gen yon lòt pyèj ki merite pwòp paragraf li paske li defòme zouti mezi a olye li aji sou bèt la. Tès depans enèji Alamar Blue a se li menm yon reyaksyon oksido-rediksyon: rezazirin redui pou vin rezorifin fliyoresan. Ble metilèn patisipe nan reyaksyon oksido-rediksyon tou. Nan kontwòl san selil yo, toude konsantrasyon swen elvaj yo te diminye fliyoresans Alamar Blue yon ti kras, men yon fason siyifikatif, apre 24 èdtan. Nan eksperyans sou bèt yo, yo te lave anbriyon ki te ekspoze yo omwen twa fwa nan yon milye san koloran anvan tès la, epi efè byolojik nan lav ki te kale yo te depase entèferans san selil la. Donk, toude bagay yo vre: bèt yo lave yo toujou montre yon vrè efè metabolik, epi koloran yo pa lave a ajoute yon atifak chimik dirèk sou efè sa a. Kontwòl yo dwe separe de efè yo, sinon okenn nan chif yo pa gen sans. Konsèy jeneral sou entèpretasyon rezilta tès ki baze sou koloran gen yon enpòtans patikilye isit la.

Kalandriye etap devlopman yo

Materyèl orijinal pou atik sa a. Konsantrasyon yo se de valè estanda pou swen elvaj yo, 0.00005% ak 0.0001%, sof kote yo presize yon lòt valè.

Tandans pou sonje a se yon ogmantasyon bonè epi yon diminisyon pita nan paramèt metabolik yo, ak efè sou konpòtman ki prezan pandan ekspozisyon an epi ki pa detektab apre eliminasyon koloran an nan sèl tès ki te egzamine sa.

Lis verifikasyon pou konsepsyon kontwòl yo

Dezyèm materyèl orijinal la. Sèvi avè l lè pwotokòl ble metilèn pou pwason zèb antre nan yon eksperyans.

1. Rapòte koloran an kòm yon reyaktif, pa kòm dlo. Bay konsantrasyon an ni an pousantaj ni an mikwomolè, kòmansman ak fen ekspozisyon an an èdtan oswa jou apre fekondasyon, orè renouvèlman an, ak entèval san koloran an anvan chak mezi.
2. Fè kontwòl yo koresponn ak kesyon an. Yon etid sou sibstans chimik pou teste a bezwen kontwòl san koloran; yon etid sou swen elvaj bezwen gwoup san koloran kont gwoup ak koloran, ak rezilta kont chanpiyon yo anrejistre, paske okenn nan de etid yo site yo pa t mezire efikasite kont chanpiyon.
3. Lave anvan tès oksido-rediksyon yo, epi verifye. Rense omwen twa fwa nan yon milye san koloran epi fè yon kontwòl san selil ki gen koloran ak reyaktif ansanm an paralèl, paske koloran an diminye siyal Alamar Blue a dirèkteman.
4. Konsidere paramèt konpòtman ak monoamin yo kòm paramèt ki gen gwo risk. Etid sou lokomosyon, reyaksyon sote, konpòtman ki sanble ak enkyetid, antidepresè, ak inibitè MAO ta dwe evite koloran an pandan mezi yo oswa demontre li net pou paramèt espesifik la; yon peryòd youn a de jou san koloran te retire yon efè lokomotè, men sa pa pwouve pou lòt modèl eksperimantal.
5. Konsidere paramèt metabolik ak mitokondri yo kòm paramèt ki gen gwo risk nan chak etap. Konsomasyon oksijèn, depans enèji, potansyèl manbràn, ak transkri chèn respiratwa a chanje nan konsantrasyon swen elvaj yo, nan direksyon opoze anvan ak apre eklozyon.
6. Pa sipoze netralite yon plan eksperimantal valab pou yon lòt. Yon rezilta san efè apre yon peryòd san koloran pa valab pou ekspozisyon k ap kontinye; yon rezilta san efè sou mòfoloji pa valab pou metabolis oswa entèraksyon ak medikaman; yon rezilta nan yon liy jenetik, yon tanperati, oswa yon dire tès pa valab pou lòt yo.
7. Presize direktiv ou te swiv la ak lòt opsyon an. Site konsantrasyon CCAC, direktiv ewopeyen yo, oswa Cold Spring Harbor klèman, epi note kote tès anbriyon OECD a pa enkli koloran an, pou lektè a ka konprann nan ki kondisyon bèt ou yo te ye.

Okenn nan sa pa vle di yo pa ta dwe itilize koloran an pou kenbe ze yo vivan. Sa vle di yo pa ta dwe kite yon chwa swen elvaj antre nan done yo san yo pa egzamine li. Koulè ble nan resipyan an se yon molekil ki gen pwòp pwopriyete famakolojik li, epi eksperyans ki gen plis chans pou rezilta yo defòme se egzakteman tès depistaj metabolik ak newokonpòtman ki fèt an gwo kantite yo, kote yo prefere itilize jèn pwason zèb kounye a. Anrejistre li, kontwole li, retire li anvan ou mezire, epi verifye tès kote li ka ap patisipe san w pa remake.