EMB અગર પર E. coli અને અન્ય વસાહતોના દેખાવનું અર્થઘટન

એક વિદ્યાર્થી અજ્ઞાત નમૂનાને ઇઓસિન મેથિલીન બ્લુ અગર પર સ્ટ્રીક કરે છે, તેને આખી રાત ઇન્ક્યુબેટ કરે છે અને પાછો આવે ત્યારે પ્લેટ પર લીલી ઝાંયવાળી ઘેરી વસાહતો જુએ છે. તેની નોંધપોથીમાં લખાય છે: "E. coli, પુષ્ટિ થઈ." આ નોંધ પ્લેટથી સમર્થિત થઈ શકે તેના કરતાં વધુ દાવો કરે છે. પ્લેટ ચોક્કસ પરિસ્થિતિઓમાં વૃદ્ધિ અને કિણ્વનનાં દેખીતા લક્ષણો દર્શાવે છે. પ્રજાતિની ઓળખ એક અલગ દાવો છે, જેના માટે અલગ પુરાવા જરૂરી છે.

આ માર્ગદર્શિકા EMB અગરનાં પરિણામોને અર્થઘટનના કાર્ય તરીકે રજૂ કરે છે. તે મૂળભૂત વિચાર સમજાવે છે, નિયંત્રણો સાથે દૃષ્ટાંતરૂપ પ્લેટ એટલસની સમજૂતી આપે છે અને પાઠ્યપુસ્તકમાં દર્શાવેલો દેખાવ કયા કિસ્સાઓમાં ગેરમાર્ગે દોરે છે તે જણાવે છે.

પ્લેટ પાછળનો વિચાર

EMB અગર પસંદગીયુક્ત અને ભેદકારી બંને છે. ઇઓસિન Y અને મેથિલીન બ્લુ રંગકો ઘણા ગ્રામ-પોઝિટિવ જીવાણુઓને દબાવે છે, તેથી આ માધ્યમ ગ્રામ-નેગેટિવ વૃદ્ધિને અનુકૂળ રહે છે. એ જ રંગકો સૂચક તરીકે પણ કામ કરે છે: જ્યારે કોઈ જીવાણુ ઉપલબ્ધ શર્કરાનું કિણ્વન કરીને સ્થાનિક સ્તરે પૂરતો એસિડ ઉત્પન્ન કરે છે, ત્યારે વસાહત મોટા પ્રમાણમાં રંગક ગ્રહણ કરે છે અને ઘેરા જાંબલીથી વાદળી-કાળા રંગની બને છે. પ્રબળ એસિડ ઉત્પાદનથી વસાહતની સપાટી પર ધાતુ જેવી લીલી, જોવાના કોણ પ્રમાણે બદલાતી ચમક દેખાઈ શકે છે. ઇઓસિન મેથિલીન બ્લુ અગર પ્લેટો માટેનો ASM પ્રોટોકોલ પસંદગી અને ભેદીકરણના આ સંયોજનનું વર્ણન કરે છે અને શિક્ષણ માટે સંદર્ભ ફોટોગ્રાફો આપે છે.

કોઈ પણ પરિણામનું અર્થઘટન કરતાં પહેલાં એક વિગત મહત્વની છે: કયું સંયોજન વપરાય છે તે તપાસો. જૂના Holt Harris Teague સંયોજનમાં લેક્ટોઝ સાથે સુક્રોઝ હોય છે, જ્યારે Levine EMB માં ફક્ત લેક્ટોઝ હોય છે. લેક્ટોઝનું નહીં પરંતુ સુક્રોઝનું કિણ્વન કરતો જીવાણુ, જેમ કે Serratia marcescens ના ઘણા આઇસોલેટ, આ બે પ્રકારો પર જુદો દેખાઈ શકે છે. EMB માધ્યમો માટે ઉત્પાદકના દસ્તાવેજો સંયોજનનો આ તફાવત સ્પષ્ટ રીતે જણાવે છે. પરિણામની સાથે નોંધપોથીમાં ઉત્પાદક અને સંયોજન પણ નોંધો.

તૈયાર કરેલું, જેમાં જીવાણુ ન ઉમેરાયા હોય તેવું EMB અગર સામાન્ય રીતે લાલ-ભૂરાથી લાલાશ પડતું જાંબલી હોય છે; ક્યારેક તેમાં લીલાશની ઝાંય અથવા બારીક અવક્ષેપ હોય છે. આ પૃષ્ઠભૂમિનો રંગ વૃદ્ધિ નથી. દરેક અવલોકનની સરખામણી જીવાણુ ન ઉમેરેલી પ્લેટ અથવા દસ્તાવેજિત મૂળ સ્થિતિ સાથે કરો, અને શિક્ષણ પ્રોટોકોલમાં અન્યથા જણાવાયું ન હોય તો પ્રાથમિક પ્લેટનું અર્થઘટન 35 થી 37 C પર આશરે 18 થી 24 કલાકના વાયુસહિત ઇન્ક્યુબેશન પછી કરો. લાંબા સમયનું ઇન્ક્યુબેશન કિણ્વનનો દેખાવ બદલી શકે છે.

પ્લેટ કેવી રીતે જોવી

બે પ્રકારના પ્રકાશનો ઉપયોગ કરો. પહેલાં પરાવર્તિત અથવા ત્રાંસા પ્રકાશમાં પ્લેટ તપાસો અને તેને નમાવો: ધાતુ જેવી ચમક જોવાના કોણ પ્રમાણે બદલાય છે અને દેખાઈ કે અદૃશ્ય થઈ શકે છે. પછી વસાહતનો રંગ અને ઘેરા કેન્દ્રોનું મૂલ્યાંકન કરવા આરપાર પસાર થતા પ્રકાશમાં તેને તપાસો. સારી રીતે અલગ પડેલી વસાહતો પરથી કામ કરો, કારણ કે ગીચતા અને પડોશી વસાહતો સ્થાનિક એસિડ સંચયને બદલે છે અને રંગને દબાવી કે વધુ તીવ્ર બનાવી શકે છે. ASM ચિત્રસંગ્રહ આ સીધું દર્શાવે છે: મિશ્ર સંવર્ધનમાં E. coli ની અપેક્ષિત ચમક ગાયબ થઈ શકે છે, કારણ કે આસપાસના જીવાણુઓ એસિડનું વાતાવરણ બદલે છે.

અભ્યાસમાં શક્ય હોય ત્યારે નિયંત્રણો સામેલ કરો. શિક્ષણ માટેના એક સામાન્ય સમૂહમાં વાદળી-કાળા રંગ અને ધાતુ જેવી ચમકનાં લક્ષણો માટે E. coli ATCC 25922, રંગહીન દેખાવ માટે Salmonella Typhimurium ATCC 14028 અથવા Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 જેવા કિણ્વન ન કરતા જીવાણુ, અને નિરોધ નિયંત્રણ તરીકે Enterococcus faecalis અથવા Staphylococcus aureus જેવા ગ્રામ-પોઝિટિવ જીવાણુનો સમાવેશ થાય છે, જેમ કે EMB માધ્યમો માટેનાં પ્રમાણભૂત QC કોષ્ટકોમાં સૂચવાયું છે. પોઝિટિવ નિયંત્રણમાં ચમક ન હોય તો અજ્ઞાત નમૂના પર શંકા કરતાં પહેલાં ઇન્ક્યુબેશન, ગીચતા અથવા સંયોજન પર શંકા કરો.

દૃષ્ટાંતરૂપ પ્લેટ એટલસ

નીચેની પ્લેટો બનાવેલાં દૃષ્ટાંતચિત્રો છે, વાસ્તવિક સંવર્ધનોના ફોટોગ્રાફો નથી. તે કઈ રચના શોધવી તે દર્શાવે છે, કોઈ એક સ્ટ્રેઇનની ચોક્કસ રંગછટા નહીં. તેમની સરખામણી ASM સંદર્ભ ફોટોગ્રાફો અને શિક્ષણ પ્રયોગશાળાની વાસ્તવિક પ્લેટો સાથે કરો.

પ્લેટ 1: EMB અગર પર Escherichia coli, પ્રબળ લેક્ટોઝ કિણ્વન કરનાર જીવાણુ

EMB અગર પર E. coli સામાન્ય રીતે ઘેરા જાંબલીથી વાદળી-કાળા રંગની હોય છે, ઘણી વાર ઘેરા કેન્દ્ર અને પ્રબળ એસિડ ઉત્પાદનને કારણે ધાતુ જેવી લીલી ચમક સાથે. આ ચમક એ જાણીતું લક્ષણ છે જેને વિદ્યાર્થીઓ શોધે છે, પરંતુ તેને વ્યાખ્યા નહીં, સહાયક પુરાવા તરીકે લો. ચમકની તીવ્રતા સ્ટ્રેઇન, ઇન્ક્યુબેશનનો સમય, વસાહતોની ઘનતા અને જોવાના કોણ પ્રમાણે બદલાય છે. ચમકનો અભાવ E. coli ને નકારી કાઢતો નથી, અને ચમક વિનાની ઘેરી વસાહત બીજા ઘણા કિણ્વન કરનારા જીવાણુઓ તરફ પણ સૂચવે છે. આગળના કોઈ પણ કામ માટે ગીચ ભાગ પરથી અર્થઘટન કરવાને બદલે સારી રીતે અલગ પડેલી વસાહત પસંદ કરો.

પ્લેટ 2: EMB અગર પર Klebsiella pneumoniae, શ્લેષ્મસદૃશ કિણ્વન કરનાર જીવાણુ

EMB અગર પર Klebsiella pneumoniae સામાન્ય રીતે ગુલાબી-જાંબલીથી ભૂરી-જાંબલી રંગછટાવાળી મોટી, ચળકતી, શ્લેષ્મસદૃશ વસાહતો બનાવે છે. ઘણી વાર તેમાં ઘેરા કેન્દ્ર હોય છે, પરંતુ સામાન્ય રીતે તીવ્ર ધાતુ જેવી ચમક હોતી નથી. Enterobacter જેવા સંબંધિત કિણ્વન કરનારા જીવાણુઓમાં પણ આવો આકાર દેખાય છે. શ્લેષ્મસદૃશ રચના અને વસાહતનું કદ અર્થઘટનનો ભાગ છે: નાની અને સપાટ ગુલાબી વસાહતનું અર્થઘટનમાં મહત્ત્વ મોટી, ગુંબજાકાર, શ્લેષ્મસદૃશ વસાહતથી જુદું હોય છે. E. coli ની જેમ, આ પ્લેટ પણ કિણ્વનનાં લક્ષણો સૂચવે છે, અને પ્રજાતિ સ્તરે નામ આપવા માટે નીચે વર્ણવેલી જૈવરાસાયણિક પુષ્ટિ જરૂરી છે.

પ્લેટ 3: EMB અગર પર Salmonella અને અન્ય કિણ્વન ન કરનારા જીવાણુઓ, રંગહીન વસાહતો

EMB અગર પર Salmonella અને લેક્ટોઝનું કિણ્વન ન કરનારા સંબંધિત જીવાણુઓ, જેમાં Shigella અને Pseudomonas ના ઘણા આઇસોલેટનો સમાવેશ થાય છે, સામાન્ય રીતે રંગહીનથી અર્ધપારદર્શક અથવા આછા અંબર રંગની વસાહતો તરીકે વધે છે. કેટલાક સંયોજનો અને પરિસ્થિતિઓમાં આછી ગુલાબી ઝાંય દેખાય છે, તેથી આછી ગુલાબી વસાહત આપમેળે કિણ્વન કરનાર જીવાણુની ગણાતી નથી. EMB, Salmonella ને Shigella અથવા કિણ્વન ન કરતા અન્ય જીવાણુઓથી અલગ પાડતું નથી; એ ભેદ પછીનાં પરીક્ષણોથી થાય છે. એ પણ નોંધો કે E. coli જેવી ધાતુની ચમકવાળી વસાહતો બનાવતી લેક્ટોઝ-પોઝિટિવ Salmonella સ્ટ્રેઇન દસ્તાવેજિત થઈ છે, જે એક જ પ્લેટથી અંતિમ નિષ્કર્ષ પર ન પહોંચવાનું વધુ એક કારણ છે.

પ્લેટ 4: Serratia marcescens અને સંયોજનને કારણે થતી ગેરસમજ

Serratia marcescens માટે અલગ વિભાગ જરૂરી છે, કારણ કે વિદ્યાર્થીઓ ઘણી વાર લાલ વસાહતોની અપેક્ષા રાખે છે અને પછી પ્લેટનું ખોટું અર્થઘટન કરે છે. મોટા ભાગના ક્લિનિકલ આઇસોલેટ લેક્ટોઝનું કિણ્વન કરતા નથી, તેથી Levine EMB પર તેઓ સામાન્ય રીતે આછા અથવા થોડો જ રંગ ધરાવતા દેખાય છે. ઘણા આઇસોલેટ સુક્રોઝનું કિણ્વન કરતા હોવાથી, સુક્રોઝ ધરાવતું સંયોજન વધુ ઘેરી અથવા એસિડ સાથે વધુ સંબંધિત પ્રતિક્રિયા આપી શકે છે. 35 થી 37 C પર લાક્ષણિક લાલ પ્રોડિજિઓસિન રંગદ્રવ્યની પણ અપેક્ષા ન રાખો; ઇન્ક્યુબેટરના તાપમાને રંગદ્રવ્યનું ઉત્પાદન વિશ્વસનીય નથી. જ્યારે પ્રોટોકોલમાં EMB અગર પર Serratia marcescens નો ઉલ્લેખ હોય, ત્યારે તે નિવેદન કયા સંયોજનને આધારે છે તે તપાસો. Serratia ના ચયાપચયની સમીક્ષા આ ગેરસમજ પાછળ રહેલી લેક્ટોઝ-નેગેટિવ અને સુક્રોઝ માટે પરિવર્તનશીલ કિણ્વનની રીતનો સાર આપે છે.

પ્લેટ 5: નિયંત્રણો અને નિરોધિત જીવાણુઓ

Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus અને Bacillus જેવા ગ્રામ-પોઝિટિવ જીવાણુઓ સામાન્ય રીતે EMB અગર પર નિરોધિત થાય છે અથવા તેમની વૃદ્ધિ નોંધપાત્ર રીતે દબાય છે, જોકે દરેક સ્ટ્રેઇન માટે નિરોધ સંપૂર્ણ નથી. નિયંત્રણોનો સમૂહ અર્થઘટનને વિશ્વસનીય બનાવે છે: E. coli નિયંત્રણમાં વાદળી-કાળા રંગ અને ચમક સાથે સારી વૃદ્ધિ દેખાવી જોઈએ, કિણ્વન ન કરનાર નિયંત્રણમાં રંગહીન વૃદ્ધિ દેખાવી જોઈએ, અને નિરોધ નિયંત્રણમાં બહુ ઓછી અથવા કોઈ વૃદ્ધિ ન દેખાવી જોઈએ. નિરોધ નિયંત્રણમાં સારી વૃદ્ધિ થાય તો પસંદગીયુક્ત તબક્કો નિષ્ફળ ગયો છે અને તે બેચનાં બીજાં બધાં અર્થઘટનો શંકાસ્પદ છે. અભિરંજન પદ્ધતિઓ સંવર્ધન માધ્યમોથી જુદા પ્રશ્નનો જવાબ આપે છે; પ્રયોગશાળામાં સ્લાઇડના અભિરંજન વિશે જાણવા મેથિલીન બ્લુ અભિરંજન એટલસ જુઓ.

મર્યાદાઓ સાથેની સરખામણી

ત્રણ વાક્યો ભ્રામક દેખાવનો સાર આપે છે. ઘેરો રંગ એટલે E. coli નહીં, કારણ કે Klebsiella, Enterobacter અને અન્ય કિણ્વન કરનારા જીવાણુઓ ચમક વિના ઘેરા કેન્દ્ર વિકસાવે છે. ગુલાબી રંગ એટલે Klebsiella નહીં, કારણ કે મધ્યમ અથવા ધીમું કિણ્વન કરનારા જીવાણુઓ અને કિણ્વન ન કરનાર ગણાતા કેટલાક જીવાણુઓ ગુલાબી અથવા આછા જાંબલી દેખાય છે. ચમક એટલે નિશ્ચિત E. coli નહીં, કારણ કે અન્ય પ્રબળ કિણ્વન કરનારા જીવાણુઓ પણ તે ઉત્પન્ન કરી શકે છે. શિક્ષણ પ્રોટોકોલ અને તેમાંનાં મિશ્ર સંવર્ધનનાં ચિત્રો આ દરેક ખોટા નિષ્કર્ષનું ઉદાહરણ આપે છે.

પુષ્ટિની મર્યાદાઓ

EMB અગર દેખીતાં લક્ષણો દર્શાવે છે, પ્રજાતિ નહીં. જુદા જીવાણુઓની વસાહતોનો દેખાવ એકસરખો હોઈ શકે છે, અને એક જીવાણુ સ્ટ્રેઇન, ઉંમર, ગીચતા, સંયોજન અને ઇન્ક્યુબેશનને કારણે તેના પાઠ્યપુસ્તકીય દેખાવથી જુદો દેખાઈ શકે છે. તેથી શિક્ષણ અને ક્લિનિકલ કાર્યપ્રવાહોમાં EMB પરની આકારલક્ષી ઓળખને પ્રાથમિક અનુમાન તરીકે લેવામાં આવે છે.

વિદ્યાર્થી માટે પુરાવાથી સમર્થિત કાર્યપ્રવાહ આ છે: અલગ પડેલી વસાહતનું વર્ણન કરો (કદ, રંગ, કેન્દ્ર, ત્રાંસા પ્રકાશમાં ચમક, શ્લેષ્મસદૃશ લક્ષણ), સંયોજન, ઇન્ક્યુબેશનનો સમય અને તાપમાન તથા નિયંત્રણો નોંધો; પછી કોઈ પણ પુષ્ટિકારક પરીક્ષણ પહેલાં સારી રીતે અલગ પડેલી વસાહતનું ઉપસંવર્ધન કરીને શુદ્ધ સંવર્ધન મેળવો. સામાન્ય અનુવર્તી પરીક્ષણોમાં અનુમાનિત E. coli અને કોલિફોર્મ ઓળખ માટે ગ્રામ અભિરંજન સાથે IMViC પ્રતિક્રિયાઓ, આંતરડાસંબંધિત જીવાણુઓ માટે TSI અથવા KIA અને જીવાણુ-વિશિષ્ટ જૈવરાસાયણિક પરીક્ષણ સમૂહોનો સમાવેશ થાય છે. કાર્યની જરૂરિયાત મુજબ સીરોલોજીકલ, MALDI TOF અથવા અન્ય માન્ય ઓળખ પદ્ધતિઓ પણ વપરાય છે. પસંદગીયુક્ત અને ભેદકારી આંતરડાસંબંધિત સંવર્ધન માધ્યમોમાં EMB નું સ્થાન સમજવા માટે આવા માધ્યમોના પરિચયો અને ગ્રામ અભિરંજન પછીનાં અનુવર્તી પગલાં જુઓ. વાદળી સ્લાઇડ અભિરંજન શું સાબિત કરી શકે અને શું નહીં, તે સંબંધિત પ્રશ્ન માટે મેથિલીન બ્લુ અભિરંજન એટલસ પણ આ જ અભિગમથી અવલોકન અને નિષ્કર્ષને અલગ રાખે છે.

નિષ્કર્ષ પહેલાં અવલોકન લખો. "Levine EMB પર 24 કલાકે જોવાના કોણ પ્રમાણે બદલાતી લીલી ચમકવાળી ઘેરી વાદળી-કાળી વસાહતો, પ્રબળ લેક્ટોઝ કિણ્વન સાથે સુસંગત" એ પુરાવાથી સમર્થિત નિવેદન છે. "E. coli, પુષ્ટિ થઈ" માટે પુષ્ટિનું એ પગલું જરૂરી છે જે એકલી પ્લેટ પૂરું પાડી શકતી નથી.