Malairtí ar Ghorm Meitiléine don Mhicreascópacht

I gcás smeara baictéaraigh shimplí, is féidir vialait chriostail a úsáid in ionad gorm meitiléine nuair is é an aidhm cruth na gceall a fheiceáil. I gcás cealla beo, d’fhéadfadh codarsnacht chéime gan ruaim ar bith a bheith ina malairt níos fearr. Braitheann an rogha ar an mbreathnóireacht atá le déanamh agat.

Samhlaigh go bhfuil beirt ag scrúdú an chultúir bhaictéaraigh chéanna. Tá duine acu ag iarraidh bataí a idirdhealú ó chealla cruinne. Tá an duine eile ag iarraidh a fháil amach an bhfuil na baictéir maraithe ag cóireáil. D’fhéadfadh ruaim a thugann íomhá shoiléir don chéad duine gan aon fhreagra inúsáidte a thabhairt don dara duine.

Sula roghnaíonn tú ionadach, comhlánaigh an abairt seo: “Ní mór dom ___ a bhreathnú in ___, agus ní mór / ní gá do na cealla fanacht beo.” Sainíonn an abairt sin an cúram atá le déanamh ag an ruaim.

Tosaigh leis an eiseamal agus leis an gceist

Ar dtús, socraigh an gá do na cealla fanacht beo, agus ansin sainaithin an ghné atá le breathnú agat:

Ní mór do na cealla fanacht beo: le haghaidh gluaiseachta nó crutha, smaoinigh ar chodarsnacht chéime gan ruaimniú nó DIC; le haghaidh DNA núicléach, smaoinigh ar Hoechst 33342 le fluaraiseacht; le haghaidh sláine scannáin, roghnaigh measúnacht bhailíochtaithe amhail SYTO 9 le hiaidíd phróipidiam.
Ní gá do na cealla fanacht beo: le haghaidh moirfeolaíocht bhaictéarach, smaoinigh ar ruaimniú simplí le vialait chriostail nó ruaimniú diúltach le nigrosin; le haghaidh imoibriú Gram, bain úsáid as an modh iomlán ruaimnithe Gram; le haghaidh DNA núicléach i gcealla fosaithe, smaoinigh ar fhluaraiseacht DAPI. Úsáid an tábla seo chun teorainneacha gach brainse a chur i gcomparáid. Is roghanna modha iad seo, ní treoracha chun buidéil a mhalartú laistigh de phrótacal atá ann cheana.

An rud atá le breathnú agat	Eiseamal agus trealamh	Malairt fhéideartha	Príomhtheorainn
Cruth agus socrú baictéarach	Smeara baictéarach ullmhaithe; réimse geal	Ruaimniú simplí le vialait chriostail	Taispeánann sé moirfeolaíocht; ní dhearbhaíonn sé imoibriú Gram ná inmharthanacht.
Imlínte ceall ar chúlra dorcha	Ullmhúchán baictéareolaíoch; réimse geal	Ruaimniú diúltach le nigrosin	Tá tábhacht leis an ullmhúchán agus leis an bhfoirmliú; ní gá go mbeadh cill gan ruaimniú beo.
Imoibriú Gram	Smeara baictéarach ullmhaithe; réimse geal	Modh iomlán ruaimnithe Gram	Éilíonn sé seicheamh iomlán na n-imoibrithe agus rialuithe.
Gluaiseacht nó athruithe i gcealla beo	Ullmhúchán fliuch comhoiriúnach; codarsnacht chéime nó DIC	Gan ruaim	Éilíonn sé optaic oiriúnach; ní shainaithníonn codarsnacht móilín.
DNA núicléach	Cealla fosaithe; fluaraiseacht	DAPI	Éilíonn sé scagairí comhoiriúnacha spreagtha agus astaíochta.
DNA núicléach i gcealla beo	Cealla beo; fluaraiseacht	Hoechst 33342	Ní chruthaíonn iontráil sa chill go bhfuil na coinníollacha íomháithe neamhdhíobhálach.
Sláine scannáin bhaictéaraigh	Baictéir neamhfhosaithe; fluaraiseacht	SYTO 9 le hiaidíd phróipidiam	Is tomhas indíreach ar inmharthanacht é ruaimniú scannáin.

I gcás smeara simplí, cuir an modh in ionad go cúramach

Is rogha phraiticiúil í vialait chriostail nuair is é an cúram radharc aon-datha a fháil ar mhoirfeolaíocht bhaictéarach. Liostaíonn Bacteriological Analytical Manual an FDA dhá fhoirmliú vialait chriostail atá oiriúnach do ruaimniú simplí. Bain úsáid as foirmliú doiciméadaithe agus as a mhodh ullmhúcháin; ní shonraíonn ainm na ruaime amháin imoibrí oibre.

Úsáidtear vialait chriostail i ruaimniú Gram freisin, ach ní chiallaíonn sé sin gur ruaimniú Gram é ruaimniú simplí le vialait chriostail. I bprótacal ruaimnithe Gram ASM, braitheann an toradh difreálach ar vialait chriostail, iaidín, dídhathú agus frithruaimniú ag gníomhú i seicheamh. Má fhágtar na céimeanna sin ar lár, athraítear an méid is féidir leis an íomhá a dhearbhú. Féach ruaimniú simplí i gcomparáid le ruaimniú Gram chun an difríocht sin a thuiscint.

Cuireann nigrosin bealach eile ar fáil chun imlínte a nochtadh: dorchaíonn sé an cúlra agus fanann na cealla baictéaracha measartha geal. Tá mionsonra úsáideach i dtreoracha nigrosin Merck a d’fhéadfadh a bheith in easnamh ó liosta ginearálta ionadach. Tá formaildéad san fhoirmliú oibre sonraithe. Dá bhrí sin, ní féidir leat comhoiriúnacht le cealla beo a thuiscint ó na focail “ruaimniú diúltach,” cé go bhfeictear na cealla féin gan ruaimniú. Seiceáil an fhoirmliú iomlán agus ullmhúchán an eiseamail.

I gcás eiseamal beo, smaoinigh ar an optaic a athrú

Más mian leat cealla a fheiceáil ag gluaiseacht nó ag deighilt, d’fhéadfadh ruaim eile an bhreathnóireacht a dhéanamh níos casta. Mar a mhíníonn Nikon ina threoir maidir le codarsnacht in eiseamail thrédhearcacha, déanann codarsnacht chéime agus codarsnacht trasnaíochta difreálaí, nó DIC, eiseamail infheicthe trí dhifríochtaí ina n-airíonna optúla. Is féidir leo cealla beo gan ruaimniú a nochtadh, ar choinníoll go bhfuil na comhpháirteanna riachtanacha sa mhicreascóp.

Coinníonn an rogha seo an t-ullmhúchán gan ruaimniú, ach athraíonn sé an fhaisnéis atá ar fáil. Is féidir leat teorainn nó gluaiseacht a leanúint gan a fhios a bheith agat cén móilín a chruthaigh an chodarsnacht. Más í logánú móilíneach an cheist, roghnaigh modh lipéadaithe oiriúnach ina ionad.

Maidir le DNA núicléach, déanann comparáid Invitrogen idir ruaimeanna DAPI agus Hoechst idirdhealú idir úsáid choitianta DAPI le cealla fosaithe agus Hoechst 33342, atá níos tréscaoiltí do chealla agus is fearr a oireann do lipéadú ceall beo. Éilíonn an dá cheann trealamh fluaraiseachta. Ní ionad díreach é ceachtar acu ar ruaim dhaite réimse gheal.

Caith le nochtadh don ruaim agus leis an soilsiú mar choinníollacha turgnamhacha. Cuir ullmhúcháin ruaimnithe agus neamhruaimnithe i gcomparáid nuair is é iompar na gceall do thomhas.

Ní chiallaíonn cill dhearg go huathoibríoch gur cill mharbh í

Is minic a úsáidtear SYTO 9 agus iaidíd phróipidiam le chéile chun sláine scannáin bhaictéaraigh a mheas. Nascann lámhleabhar BacLight scannáin shlána le ruaimniú glas agus scannáin dhamáistithe le ruaimniú dearg. Ní mór an léirmhíniú sin a bhailíochtú don eiseamal.

Léiríonn staidéar 2019 le Rosenberg agus comhghleacaithe an fhadhb. I mbithscannáin 24-hour E. coli ar ghloine i dtuaslagán salanda maolánaithe le fosfáit, bhí cuma dhearfach d’iaidíd phróipidiam ar thart ar 96% de na cealla in situ. Ach mheas na húdair go raibh 82% díobh insaothraithe tar éis a mbailithe. Léirigh íomhánna confocal cealla le taobh istigh glas faoi ábhar ruaimnithe dearg, rud a thug le fios go raibh aigéid núicléacha eischeallacha bainteach leis an gcomhartha míthreorach.

Déanann na céatadáin sin cur síos ar thomhais éagsúla ar ullmhúcháin an staidéir, ní ar fhachtóir ceartúcháin uilíoch. Is é an ceacht úsáideach ná seiceáil cad a ghin an comhartha. I mbithscannán, is féidir le ruaim aigéid núicléasaigh ábhar lasmuigh de na cealla a bhrath chomh maith le hábhar laistigh de chealla damáistithe. Chun conclúid a bhaint as inmharthanacht, molann na taighdeoirí tomhais chomhlántacha, amhail saothrú nó gníomhaíocht mheitibileach, agus iad ag admháil go bhfuil teorainneacha ag gach ceann acu.

Seiceáil cad atá sa mhalairt i ndáiríre

D’fhéadfadh gorm meitiléine a bheith i modh malartach ruaimnithe fós. Is sampla é Giemsa: déanann Merck cur síos ar a tháirge mar thuairisc azure-eosin-methylene-blue, atá beartaithe d’fheidhmchláir lena n-áirítear smeartha fola agus smeartha smeara. D’fhéadfadh sé a bheith ina mhodh difriúil d’eiseamal difriúil, ach ní chomhlíonann sé riachtanas chun gorm meitiléine a eisiamh.

Má tá eisiamh comhdhúil mar chuid den turgnamh, seiceáil céannacht agus foirmliú an imoibrí sula gcuirtear íomhánna i gcomparáid. Pléann an treoir maidir le methyl blue, methylene blue agus ruaimeanna a bhfuil ainmneacha comhchosúla orthu na difríochtaí ainmniúcháin.

Fíoraigh an t-ionadú sula n-úsáideann tú an toradh

I gcás modh nua, déan comparáid bheag ag úsáid eiseamal ionadaíoch agus rialú oiriúnach. Coinnigh socruithe an mhicreascóip inchomparáide nuair is féidir. Taifead foirmliú an imoibrí, ullmhúchán an eiseamail, an nochtadh agus na coinníollacha íomháithe ionas gur féidir íomhá a bhfuil cuma níos fearr uirthi a fhiosrú seachas í a roghnú gan tuilleadh anailíse.

Meas an rath i gcoinne na ceiste bunaidh. Maidir le moirfeolaíocht, meas an bhfanann teorainneacha agus socrú na gceall soléirmhínithe. Maidir le lipéadú núicléach, meas suíomh an chomhartha agus an cúlra. Maidir le hinmharthanacht, éiligh fianaise sa bhreis ar dheighilt dathanna mhealltach. Míníonn an treoir níos leithne maidir le ruaimniú le gorm meitiléine agus feidhmeanna saotharlainne conas a oireann an bhreathnóireacht agus an t-ullmhúchán dá chéile.

Roghnaigh an mhalairt a chaomhnaíonn an tomhas atá uait. Níl sa dath ach airí amháin den íomhá a eascraíonn as.