Darllen E. coli ac ymddangosiadau cytrefi eraill ar agar EMB

Mae myfyriwr yn stricio sampl anhysbys ar agar eosin a glas methylen, yn ei ddeor dros nos, ac yn dychwelyd at blât o gytrefi tywyll â sglein gwyrdd. Mae'r cofnod yn y llyfr nodiadau yn dweud "E. coli, wedi'i gadarnhau." Mae'r cofnod hwnnw'n honni mwy nag y gall y plât ei gefnogi. Mae'r plât yn dangos ffenoteip twf ac eplesu o dan amodau penodol. Mae hunaniaeth y rhywogaeth yn honiad ar wahân sydd angen tystiolaeth ar wahân.

Mae'r canllaw hwn yn trin canlyniadau agar EMB fel tasg ddehongli. Mae'n esbonio'r syniad sylfaenol, yn mynd drwy atlas enghreifftiol o blatiau gyda rheolyddion, ac yn nodi'r achosion lle mae'r darlun yn y gwerslyfr yn gamarweiniol.

Y syniad y tu ôl i'r plât

Mae agar EMB yn ddetholus ac yn wahaniaethol. Mae'r llifynnau eosin Y a glas methylen yn atal llawer o organebau Gram positif, felly mae'r cyfrwng yn ffafrio twf Gram negatif. Mae'r un llifynnau'n gweithredu fel dangosyddion: pan fydd organeb yn eplesu'r siwgr sydd ar gael ac yn cynhyrchu digon o asid yn lleol, mae'r gytref yn amsugno llawer o liw ac yn troi'n borffor tywyll i lasddu. Pan gynhyrchir asid yn gryf, gall arwyneb y gytref ddangos symudliw gwyrdd metelaidd. Mae protocol ASM ar gyfer platiau agar eosin a glas methylen yn disgrifio'r cyfuniad hwn o ddethol a gwahaniaethu ac yn darparu ffotograffau cyfeirio ar gyfer addysgu.

Mae un manylyn yn bwysig cyn darllen unrhyw ganlyniad: gwiriwch pa fformiwleiddiad sy'n cael ei ddefnyddio. Mae fformiwleiddiad hŷn Holt Harris Teague yn cynnwys lactos a swcros, tra bo EMB Levine yn cynnwys lactos yn unig. Gall organeb sy'n eplesu swcros ond nid lactos, fel llawer o ynysiadau Serratia marcescens, edrych yn wahanol ar y ddau fersiwn. Mae dogfennaeth y gwneuthurwr ar gyfer cyfryngau EMB yn nodi'r gwahaniaeth hwn rhwng y fformiwleiddiadau yn benodol. Cofnodwch y gwneuthurwr a'r fformiwleiddiad yn y llyfr nodiadau ochr yn ochr â'r canlyniad.

Mae agar EMB parod sydd heb ei frechu fel arfer yn gochfrown i borffor cochlyd, weithiau ag arlliw gwyrdd neu waddod mân. Nid twf yw'r lliw cefndir hwnnw. Cymharwch bob darlleniad â phlât heb ei frechu neu'r cyflwr sylfaenol sydd wedi'i ddogfennu, a darllenwch y plât cychwynnol ar ôl tua 18 i 24 awr o ddeori aerobig ar 35 i 37 C oni bai bod y protocol addysgu'n nodi fel arall. Gall deori estynedig newid ymddangosiad eplesu.

Sut i edrych ar y plât

Defnyddiwch ddau fath o olau. Yn gyntaf, archwiliwch y plât o dan olau adlewyrchedig neu letraws a'i ogwyddo: mae'r sglein metelaidd yn symudliw a gall ymddangos neu ddiflannu wrth newid ongl y golwg. Yna archwiliwch ef gyda golau sy'n pasio drwyddo i asesu lliw'r cytrefi a'u canolau tywyll. Gweithiwch o gytrefi sydd wedi'u hynysu'n dda, gan fod gorlenwi a chytrefi cyfagos yn newid y crynhoad lleol o asid ac yn gallu gwanhau neu orliwio'r lliw. Mae set delweddau ASM yn dangos hyn yn uniongyrchol: gall E. coli mewn meithriniad cymysg golli ei sglein disgwyliedig oherwydd bod organebau o'i gwmpas yn newid yr amgylchedd asidig.

Cynhwyswch reolyddion pryd bynnag y bydd yr ymarfer yn caniatáu hynny. Set addysgu gyffredin yw E. coli ATCC 25922 ar gyfer y ffenoteip glasddu â sglein metelaidd, organeb nad yw'n eplesu fel Salmonella Typhimurium ATCC 14028 neu Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 ar gyfer y ffenoteip di-liw, ac organeb Gram positif fel Enterococcus faecalis neu Staphylococcus aureus fel rheolydd ataliad, fel y rhestrir yn y tablau rheoli ansawdd safonol ar gyfer cyfryngau EMB. Os nad oes sglein ar y rheolydd positif, amheuwch y deori, y gorlenwi, neu'r fformiwleiddiad cyn amau'r sampl anhysbys.

Atlas enghreifftiol o blatiau

Darluniau wedi'u cynhyrchu yw'r platiau isod, nid ffotograffau o feithriniadau go iawn. Maent yn dangos y patrwm i chwilio amdano, nid union arlliw unrhyw straen unigol. Cymharwch nhw â ffotograffau cyfeirio ASM ac â phlatiau go iawn o'r labordy addysgu.

Plât 1: Escherichia coli ar agar EMB, eplesydd lactos cryf

Mae E. coli ar agar EMB fel arfer yn borffor tywyll i lasddu, yn aml â chanol tywyll a sglein gwyrdd metelaidd o ganlyniad i gynhyrchu asid yn gryf. Y sglein yw'r nodwedd enwog y mae myfyrwyr yn chwilio amdani, ond dylid ei thrin fel tystiolaeth ategol yn hytrach na diffiniad. Mae dwyster y sglein yn amrywio yn ôl y straen, yr amser deori, dwysedd y cytrefi, ac ongl y golwg. Nid yw absenoldeb sglein yn diystyru E. coli, ac mae cytref dywyll heb sglein yn awgrymu sawl eplesydd arall. Dewiswch gytref sydd wedi'i hynysu'n dda ar gyfer unrhyw waith dilynol yn hytrach na darllen o ran orlawn o'r plât.

Plât 2: Klebsiella pneumoniae ar agar EMB, eplesydd mwcoid

Mae Klebsiella pneumoniae ar agar EMB fel arfer yn ffurfio cytrefi mawr, disglair, mwcoid mewn arlliwiau pinc-borffor i frown-borffor, yn aml â chanolau tywyll ond fel arfer heb sglein metelaidd cryf. Ceir morffoleg debyg gydag eplesyddion perthynol fel Enterobacter. Mae'r gwead mwcoid a maint y gytref yn rhan o'r darlleniad: mae cytref binc sy'n fach ac yn wastad yn cario pwysau gwahanol i un fawr, gromennog a mwcoid. Fel gydag E. coli, mae'r plât yn awgrymu ffenoteip eplesu, ac mae enwi ar lefel rhywogaeth yn gofyn am y cadarnhad biocemegol a ddisgrifir isod.

Plât 3: Salmonella ar agar EMB ac organebau eraill nad ydynt yn eplesu, cytrefi di-liw

Mae Salmonella ar agar EMB ac organebau perthynol nad ydynt yn eplesu lactos, gan gynnwys Shigella a llawer o ynysiadau Pseudomonas, fel arfer yn tyfu fel cytrefi di-liw i dryloyw neu ambr golau. Mae rhai fformiwleiddiadau ac amodau'n rhoi arlliw pinc gwan, felly nid yw cytref binc golau yn eplesydd yn awtomatig. Nid yw EMB yn gwahaniaethu rhwng Salmonella a Shigella nac organebau eraill nad ydynt yn eplesu; profion diweddarach sy'n gwneud y gwahaniaeth hwnnw. Sylwch hefyd fod straeniau Salmonella lactos-bositif â chytrefi metelaidd tebyg i E. coli wedi'u dogfennu, sy'n un rheswm arall pam na all un plât setlo'r mater.

Plât 4: Serratia marcescens a magl y fformiwleiddiad

Mae Serratia marcescens yn haeddu ei adran ei hun oherwydd bod myfyrwyr yn aml yn disgwyl cytrefi coch ac yna'n camddarllen y plât. Nid yw'r rhan fwyaf o ynysiadau clinigol yn eplesu lactos, felly ar EMB Levine maent yn aml yn ymddangos yn welw neu â lliw gwan. Gan fod llawer o ynysiadau'n eplesu swcros, gall fformiwleiddiad sy'n cynnwys swcros roi adwaith tywyllach neu un sy'n fwy cysylltiedig ag asid. Peidiwch â disgwyl y pigment coch clasurol prodigiosin ar 35 i 37 C chwaith; mae cynhyrchu pigment yn annibynadwy ar dymheredd y deorydd. Pan fydd y protocol yn enwi Serratia marcescens ar agar EMB, gwiriwch pa fformiwleiddiad y mae'r datganiad yn ei dybio. Mae adolygiad o fetaboledd Serratia yn crynhoi'r patrwm lactos-negatif a swcros-amrywiol sydd y tu ôl i'r fagl hon.

Plât 5: rheolyddion ac organebau wedi'u hatal

Yn gyffredinol, caiff organebau Gram positif fel Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus, a Bacillus eu hatal neu eu cyfyngu'n sylweddol ar agar EMB, er nad yw'r ataliad yn gyflawn ar gyfer pob straen. Mae panel rheolyddion yn cadw'r dehongliad yn onest: dylai'r rheolydd E. coli ddangos twf da â lliw glasddu a sglein, dylai'r rheolydd nad yw'n eplesu ddangos twf di-liw, a dylai'r rheolydd ataliad ddangos ychydig o dwf neu ddim twf o gwbl. Os yw'r rheolydd ataliad yn tyfu'n dda, mae'r cam detholus wedi methu ac mae pob darlleniad arall ar y swp hwnnw'n amheus. Mae dulliau staenio yn ateb cwestiwn gwahanol i gyfryngau meithrin; ar gyfer agwedd staenio sleidiau'r labordy, gweler yr atlas staenio â glas methylen.

Cymhariaeth â therfynau clir

Mae tair brawddeg yn crynhoi'r ymddangosiadau camarweiniol. Nid yw tywyll yn golygu E. coli, gan fod Klebsiella, Enterobacter, ac eplesyddion eraill yn datblygu canolau tywyll heb sglein. Nid yw pinc yn golygu Klebsiella, gan fod eplesyddion cymedrol neu araf a rhai organebau a ystyrir fel arfer yn rhai nad ydynt yn eplesu yn ymddangos yn binc neu'n lafant. Nid yw sglein yn golygu E. coli yn bendant, gan y gall eplesyddion cryf eraill ei gynhyrchu. Mae'r protocol addysgu a'i ffigurau o feithriniadau cymysg yn dangos pob un o'r achosion hyn lle mae'r dehongliad yn methu.

Terfynau cadarnhau

Mae agar EMB yn dangos ffenoteip, nid rhywogaeth. Gall gwahanol organebau rannu un ymddangosiad cytref, a gall un organeb wyro oddi wrth ei darlun yn y gwerslyfr oherwydd y straen, oedran, gorlenwi, fformiwleiddiad, a deori. Dyna pam mae llifoedd gwaith addysgu a chlinigol yn trin morffoleg EMB fel arwydd rhagdybiol.

Dyma lif gwaith y gall myfyriwr ei gyfiawnhau: disgrifiwch y gytref ynysig (maint, lliw, canol, sglein o dan olau lletraws, nodweddion mwcoid), cofnodwch y fformiwleiddiad, yr amser a'r tymheredd deori, a'r rheolyddion; yna is-feithrinwch gytref sydd wedi'i hynysu'n dda i gael meithriniad pur cyn unrhyw brawf cadarnhau. Mae gwaith dilynol cyffredin yn cynnwys staen Gram ynghyd ag adweithiau IMViC ar gyfer adnabod E. coli a cholifformau yn rhagdybiol, TSI neu KIA a phaneli biocemegol sy'n benodol i'r organeb ar gyfer organebau enterig, gydag adnabod serolegol, MALDI TOF, neu ddull dilysedig arall lle bo'r dasg yn gofyn amdano. I gael cefndir ar sut mae EMB yn cyd-fynd â chyfryngau enterig detholus a gwahaniaethol, gweler cyflwyniadau i gyfryngau meithrin enterig a gwaith dilynol ar ôl staen Gram. Ar gyfer y cwestiwn cysylltiedig ynghylch yr hyn y gall ac na all staen glas ar sleid ei brofi, mae'r atlas staenio â glas methylen yn cadw arsylwad a chasgliad ar wahân yn yr un ysbryd.

Ysgrifennwch yr arsylwad cyn y casgliad. Mae "Cytrefi glasddu tywyll â sglein gwyrdd sy'n dibynnu ar yr ongl ar EMB Levine ar ôl 24 awr, yn gyson ag eplesu lactos cryf" yn ddatganiad y gellir ei gyfiawnhau. Mae "E. coli, wedi'i gadarnhau" yn gofyn am y cam cadarnhau na all y plât ar ei ben ei hun ei ddarparu.